汉防己甲素预防椎板切除术后硬膜外粘连

目的：观察汉防己甲素对预防椎板切除术后硬膜周围瘢痕粘连的作用。方法：实验于2005—08／10在贵阳医学院动物实验中心完成动物实验，光镜观察完成于贵州省人民医院病理科，电镜观察在贵州师范大学电镜中心完成。①30g/L汉防己甲素制备：用0．1mol／L的HCl30mL将3．0g980g／L汉防己甲素（杭州中香化学有限公司）充分溶解，再以0．1mol／L的NaOH反滴定至pH值5．5，最后以生理盐水（pH=5．5）定容至100mL，4℃保存备用。②40只成年大白兔采用随机数字法分为4组，每组10只。将兔行L3节段椎板切除术，形成一处10mm&;#215;5mm的硬脊膜裸露区。生理盐水组：予0．5mL生理盐水覆盖；明胶海绵组：予明胶海绵覆盖；汉防己甲素组：予0．5mL汉防己甲素覆盖；汉防己甲素＋明胶海绵组：予浸湿汉防己甲素的明胶海绵覆盖。③术后2，4，8周取材作大体、光镜、透射电镜观察；8周行硬膜外粘连分级及计算机图像分析。结果：40只大白兔全部进入结果分析。①瘢痕生长情况：大体、光镜、电镜观察生理盐水组及明胶海绵组硬膜外瘢痕粘连日趋明显。汉防己甲素组及汉防己甲素＋明胶海绵组炎性细胞渗出较少，成纤维细胞较少，胶原纤维形成较少，硬膜外瘢痕无粘连。②瘢痕面积和粘连长度／硬膜周长比值测定：生理盐水组两项指标均大于汉防己甲素组、汉防己甲素＋明胶海绵组[（0.237&;#177;0．004），（0.087&;#177;0.004），（0.099&;#177;0．006）mm。；0．201&;#177;0．006，0．059&;#177;0．024，0．063&;#177;0．008；P〈0.01]；明胶海绵组上述两指标也大于汉防己甲素组、汉防己甲素＋明胶海绵组（P〈0．01）；而生理盐水组和明胶海绵组，汉防己甲素组和汉防己甲素＋明胶海绵组间则差异无显著性（P〉0．05）。结论：汉防己甲素可以有效地预防椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连的形成。     

汉防己甲素诱导HL-60细胞分化

目的:探讨汉防己甲素(Tetrandrine)靶向黏蛋白1(MUC1)诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化。方法:以HL-60细胞株作为研究对象,选取对数生长期细胞,分为空白对照、ATRA、汉防己甲素和ATRA+汉防己甲素,共4组。显微镜下观察各组细胞形态的变化;用NBT还原实验分析细胞分化能力的变化;采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b表达的变化;采用Western blot检测MUC1表达的变化。结果:汉防己甲素可以诱导HL-60细胞分化;ATRA+汉防己甲素组NBT还原阳性率明显高于ATRA和汉防己甲素组(P<0.05);ATRA+汉防己甲素组CD11b+细胞百分率(43.62%±1.38%)明显高于汉防己甲素(15.25%±2.11%)、ATRA(21.84%±7.53%)和空白对照组(8.16%±1.01%)(P<0.05);汉防己甲素组MUC1蛋白量明显低于空白对照组和ATRA组(P<0.05)。结论:汉防己甲素体外能协同ATRA使HL-60细胞分化成熟,其作用机制可能与调控MUC1的表达有关。     

聚-DL-乳酸可吸收生物膜联合丹参注射液预防硬膜外粘连的实验研究

目的探讨聚-DL-乳酸（poly-DL-lacticacid,PDLI_A）可吸收生物膜联合丹参注射液预防腰椎全椎板切除术后硬膜外粘连的效果。方法将60只新西兰大白兔按随机数字表法分为5组：实验1组（明胶海绵片组）、实验2组（明胶海绵片＋丹参注射液组）、实验3组（PDLLA可吸收生物膜组）、实验4组（明胶海绵片＋丹参注射液＋PDLLA可吸收生物膜组）和空白对照组,每组12只。5组以行腰椎（L5-7）全椎板切除术来建立动物模型。模型建立成功后,实验1组、实验2组、实验3组和实验4组分别在椎板缺损处覆盖明胶海绵片、明胶海绵片＋丹参注射液（将丹参注射液0.5mL倒入明胶海绵片中）、PDUA可吸收生物膜及明胶海绵片＋丹参注射液＋PDLLA可吸收生物膜（将丹参注射液0.5mL倒人明胶海绵片中,上面再覆盖PDUA可吸收生物膜）。空白对照组不作任何处理。采用Rydell肉眼评判标准和改良Nussbaum组织学评判标准对5组术后2、4、8及12周大体标本及光学显微镜下组织学变化的情况进行观察、评判（肉眼观察和病理学观察）。结果实验4组的硬膜外光滑、无增厚,有硬膜外腔隙纤维组织增生、粘连;实验1组、空白对照组的硬膜外纤维组织增生或粘连明显,硬膜外腔隙基本消失。实验2组、实验3组和实验4组术后Rydell评级为0、Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ级瘢痕粘连的例数均显著少于实验1组和空白对照组（均P〈0.01）,实验3组、实验4组术后Rydell评级为0、Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ级瘢痕粘连的例数与实验2组比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）。实验2组、实验3组和实验4组术后改良Nussbaum组织学评级为0、0.5及1级瘢痕粘连的例数均显著少于实验l组和空白对照组（均P〈0.01）,实验3组、实验4组术后改良Nussbaum组织学评级为0、0.5及1级瘢痕粘连的例数与实验2组比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论明胶海绵片＋丹参注射液＋PDLLA可吸收生物膜具有良好的防止硬膜外瘢痕粘连作用。是一种临床上预防术后硬膜外粘连较为理想的材料。     

干扰素/聚乳酸-羟基乙酸共聚物及壳聚糖/聚乳酸-羟基乙酸共聚物复合膜防止椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连的实验

背景: 应用硬膜外阻隔材料是预防椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连的一种方法,而制备既有机械阻隔能力,又有抑制成纤维细胞的能力的复合膜是其研究方向.目的: 制备壳聚糖/聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly (lactic-co-glycolic acid), FLGA]与干扰素/PLGA复合膜,观察其防止椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连的作用.设计、时间及地点: 2005-05/2007-04在中科院长春应用化学研究所完成材料制备,随机对照动物实验在解放军第〇八医院实验动物室完成.材料: PLGA膜、壳聚糖/PLGA及干扰素/PLGA复合膜由中科院长春应用化学研究所制备.方法: 大耳白兔120只行L2及L4椎板切除,随机分为6组,每组20只,于椎板缺损区处理如下:①空白对照组:硬膜外不放任何物质.②自体游离脂肪组:取皮下脂肪贴于硬膜表面.③透明质酸钠组:透明质酸钠1mL涂于硬膜外.④PLGA膜组、壳聚糖/PLGA及干扰素/PLGA复合膜组:分别将各种膜修剪成合适大小植于硬膜外.主要观察指标: 术后2,4,6,8周处死动物,观察L2手术区硬膜外瘢痕形成及粘连程度并评分,然后完整取下L4节段脊柱,行苏木精-伊红染色及Masson染色,光镜下观察并行组织学评分.结果: 随着时间的延长,空白对照组形成较广泛的瘢痕;自体游离脂肪组和PLGA膜组的瘢痕量少于对照组,前两者比较差异无显著性;透明质酸组早期瘢痕形成量明显少于自体游离脂肪组和PLGA膜组,后期差异无显著性,但仍优于空白对照组:壳聚糖/PLGA膜组与干扰素/PLGA膜组硬膜外瘢痕的形成量最少,与硬膜无或轻微粘连,明显优于其他各组,两种复合膜组间差异不明显.结论: 壳聚糖/PLGA与干扰素/PLGA复合膜均可预防椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连,效果相近.     

汉防己甲素影响糖尿病大鼠各组织葡萄糖转运蛋白4蛋白表达的意义

目的:观察汉防己甲素是否能够提高链脲菌素-糖尿病大鼠各组织葡萄糖转运蛋白4的蛋白表达,并与治疗糖尿病有已知疗效的药物二甲双胍作为对比,分析汉防己甲素对糖尿病的治疗作用。方法:实验于2004-10/2005-03在国家重点实验室国家人类基因组计划北方中心诺赛基因完成。①选用8～10周龄雄性(SPF级)Wistar大鼠28只。于大鼠静脉注射链脲佐菌素60.0mg/kg,当大鼠血浆葡萄糖浓度≥20mmol/L并且有多尿等其他糖尿病特征时,为糖尿病模型造模成功(n=28)。②将其造模成功大鼠按随机抽签法分为4组(每组7只):模型组,汉防己甲素组,二甲双胍组,二甲双胍 汉防己甲素组。汉防己甲素组:每8小时尾静脉注射1.0mg/kg汉防己甲素(浙江金华制药厂产品,2mL/支),3次/d;二甲双胍组:灌胃100mg/穴kg·d雪二甲双胍(丹东医创药业有限责任公司,2mL/支)混悬液;二甲双胍 汉防己甲素组:每8小时尾静脉注射1.0mg/kg汉防己甲素,3次/d,同时灌胃100mg/穴kg·d雪二甲双胍混悬液。模型组:饲以普通饲料喂养。每组干预1周。③在用药1周后将4组大鼠处死,立即解剖大鼠分别取出肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织放入-80℃保存,用电泳及Westernblot检测肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面/细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达。④计量资料差异比较采用t检验。结果:大鼠28只均进入结果分析。汉防己甲素组肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面/细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达明显高于模型组,是模型组的两三倍(P<0.05～0.01),尤其在肝脏和脂肪细胞中表达更高。二甲双胍组肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面/细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达也明显高于模型组,是模型组的一两倍(P<0.05),不如前者明显。二甲双胍 汉防己甲素组肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面/细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达也明显高于模型组,是模型组的2～3.5倍(P<0.05～0.01),尤其在脂肪细胞中最高。结论:汉防己甲素可以提高糖尿病大鼠外周组织葡萄糖转运蛋白4蛋白表达,提高对葡萄糖的利用率。该作用与二甲双胍基本相当,两者合用的效果并不特别明显。     

几丁糖-钛网联合运用防治椎板切除术后的瘢痕粘连

背景:对椎板切除术后硬膜外瘢痕与神经根粘连的预防目前多采用术中局部放置各种隔离材料或术后应用药物控制炎性反应。目的:观察几丁糖-钛网联合运用对防治硬膜外瘢痕粘连形成的作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-06/12在贵阳医学院完成。材料:成年家兔80只,体质量(2.0±0.2)kg,用于制作椎板切除模型;几丁糖为上海其胜生物制剂实业公司产品;钛网由贵州科伦药业有限公司提供。方法:将80只成年兔随机摸球法分为4组,对照组:予生理盐水覆盖(0.5mL);钛网组:用1.0cm×0.8cm钛网模拟椎板成型后覆盖于椎板缺损处,缝合固定于上下锥体棘突与两侧肌肉及软组织上;几丁糖组:植入2mL医用几丁糖;几丁糖 钛网组:联合运用钛网和几丁糖凝胶。分别在术后第2,4周处死6只,8周时取8只家兔做标本。主要观察指标:动物瘢痕形态学的改变。结果:对照组瘢痕日趋明显;钛网组可减轻硬膜周围的瘢痕包裹,有效的隔绝周围瘢痕组织与硬脊膜;几丁糖组有明确的抗瘢痕粘连、抑制炎症反应的作用;几丁糖 钛网组能有效抑制硬膜周围瘢痕的增生。结论:几丁糖-钛网联合运用能有效抑制椎板切除术后硬膜周围的瘢痕粘连。     

汉防己甲素对增生性瘢痕成纤维细胞基质金属蛋白酶I合成的影响

目的:基质金属蛋白酶I(matrixmetalloproteinaseI,MMP-1)在增生性瘢痕的形成过程中起重要作用,观察汉防己甲素对成纤维细胞MMP-1合成的影响,探讨汉防己甲素对增生性瘢痕的治疗作用。方法:实验于2003-03/12在沈阳军区总医院医学实验科完成。培养增生性瘢痕来源的成纤维细胞,然后分别加入浓度为1,5,10mg/L汉防己甲素,继续培养24h,通过ELISA方法检测培养细胞的上清夜中MMP-1的含量。结果:在汉防己甲素的作用下,成纤维细胞合成MMP-1的量增加,其中对照组是(11.34±1.15)μg/L,加入1,5,10mg/L的汉防己甲素后MMP-1分别为(23.65±1.41),(29.74±1.92)及(37.12±1.75)μg/L。结论:汉防己甲素可以促进增生性瘢痕来源的成纤维细胞合成MMP-1因此其可能对增生性瘢痕具有预防及治疗作用。     

汉防己甲素对增生性瘢痕中成纤维细胞增殖和活力的影响

目的 :观察汉防己甲素对成纤维细胞的生物学作用。方法 :通过对增生性瘢痕中的成纤维细胞进行培养 ,然后加入不同浓度的汉防己甲素 ,继续培养后观察成纤维细胞增殖和活力的变化。结果 :当汉防已甲素的浓度达到100mg/L时 ,抑制率达到了89.4 % ,细胞的活力也下降到对照组的38.5%。结论 :汉防己甲素可能对增生性瘢痕具有预防和治疗作用     

川芎嗪与自体骨膜植入预防椎板切除术后硬膜外粘连的实验研究

目的观察椎板切除术后用川芎嗪并在椎板缺损处植入自体骨膜预防硬膜外粘连的效果。方法48只SD大鼠随机分成A、B、C、D4组,制作L2板损伤模型。A组硬膜外涂布生理盐水,B组硬膜外涂布川芎嗪,C组硬膜外覆盖自体骨膜,D组硬膜外涂布川芎嗪的同时加自体骨膜覆盖。术后12周对椎板切除部位进行大体观察、组织学观察、生化检查比较组间瘢痕形成和粘连情况。结果B、C、D组的改良Rydell-Balazs粘连韧度评分、胶原含量、改良Nussvuaum组织学评分均明显优于A组(P0.01),D组优于B组与C组(P0.05)。结论联合运用川芎嗪和自体骨膜能有效预防硬膜外瘢痕粘连和形成,比单独应用川芎嗪和自体骨膜预防效果好。     

汉防己甲素干预急性损伤脊髓神经元凋亡及bcl-2和bax表达:与甲基强的松龙的比较

背景:研究证实汉防己甲素对急性脊髓损伤有保护作用,但其具体机制尚不清楚.目的:观察汉防己甲素对急性脊髓损伤大鼠的神经保护作用,并从细胞凋亡通路探讨其作用机制.方法:将100只成年大鼠随机分为4组.采用加速压迫型Allen's打击法制备脊髓损伤模型.甲强龙组和汉防己甲素组分别于造模前和造模后24,48 h经尾静脉注射甲基强的松龙和汉防己甲素.假手术组与模型组注射等量生理盐水.造模后8 h,1,3,7,14 d采用BBB评分评估大鼠的运动功能,苏木精-伊红染色观察损伤脊髓组织的形态改变,免疫组织化学染色检测bcl-2和bax的表达.结果与结论:伤后7,14 d,甲强龙组和汉防己甲素组大鼠的BBB评分显著高于模型组(P<0.05),各时间点甲强龙组和汉防己甲素组间BBB评分差异无显著性意义(P>0.05).伤后3～7 d,脊髓组织损伤最为严重,甲强龙组和汉防己甲素组的损伤程度较模型组轻,同时bax表达较模型组少,而bcl-2表达较模型组多(P<0.01).说明汉防己甲素可通过增加bcl-2表达、降低bax表达,抑制急性脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡,促进大鼠运动功能恢复,其作用不逊于甲基强的松龙.