由抗独特型抗体的SAG2内影像引起的小鼠抗弓形虫的保护性免疫[英]／Yang CD，Chang GN，Chao D／／Parasitol Res

Yang等试图通过独特型和抗独特型抗体相互作用的免疫调节来呈现SAG2表位，这种类型的抗独特型抗体即是结构与抗原表位类似的内影像，它可成为刺激特异性免疫应答的潜在性独特型疫苗，且不会使宿主接触致病性抗原，而特异性免疫应答针对的就是这些疫苗模拟的最初抗原，并为制备无潜在危险的抗传染病的疫苗提供了一个可靠的方法。     

弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫小鼠诱导体液免疫应答及保护性的初步观察

目的观察弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫BALB/c小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用. 方法重组质粒pBK-P30用生理盐水稀释后,肌注免疫BALB/c小鼠.分别于免疫后5周和10周,ELISA测定IgG抗体滴度;取免疫鼠的血液、肺、心脏、肝脏、脾、肾脏及肌肉PCR扩增P30基因;免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染.结果两次检测,均可测到特异性IgG抗体,且抗体的滴度随免疫时间的延长而增高;免疫后5周,免疫鼠的上述组织均可扩增出P30基因条带,但免疫后10周仅血液扩增出特异P30基因条带;弓形虫速殖子腹腔攻击感染,免疫组鼠的平均存活时间较对照组鼠延长,但统计学差异不显著(P＞0.05). 结论弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗能诱导BALB/c小鼠产生特异性体液免疫应答及部分抗虫免疫保护作用.     

抗弓形虫表膜抗原P30单克隆抗体的制备与鉴定

为制备抗弓形虫主要表膜抗原P30单克隆抗体并进行鉴定,进而为弓形虫病诊断、抗原的提纯及亚单位疫苗的制备等提供可靠依据。用弓形虫速殖子膜蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选出能够稳定分泌高滴度抗P30单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并测定单克隆抗体免疫球蛋白亚类和抗体效价,用IFAT进行单抗识别的抗原定位,并通过SDS-PAGE和Western-Blot分析鉴定。结果获得了两株抗P30抗原的杂交瘤细胞株E3和G2,其分泌的抗体与肺孢子虫、隐孢子虫等抗原均不发生交叉反应。2株单抗均属IgG1亚类,且识别的抗原定位于速殖子表膜。结果表明,制备的抗P30抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和特异性的单克隆抗体。     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫速殖子可溶性抗原对BALB/c小鼠免疫所得脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,获分泌抗弓形虫抗体阳性杂交瘤11个,阳性率为5.1％。选择强阳性杂交瘤1个进行克隆化培养,获得1株稳定分泌特异单克隆抗体杂交瘤细胞株。ELISA测试该株杂交瘤细胞接种BALB/c小鼠诱生腹水抗体效价为1:51,200。此株分泌抗弓形虫单克隆抗体鉴定属IgG_(2a)亚型。     

在细粒棘球蚴感染小鼠中抗独特型抗体的调节

此项工作的目的是研究用抗独特型抗体(Ab_2)免疫后能否调节抗寄生虫的抗体反应。为此,作者比较观察了经Ab_2和人包虫囊液抗原免疫的小鼠对感染的抗体反应。 将具有高抗体滴度和能识别多抗原组分的一包虫病病人的血清(Ab_1)用包虫囊液抗原(HCFA)亲和纯化,作为独特型抗原免疫兔。经吸附去除非抗独特型抗体及类风湿因子后的兔免疫血清即为抗独特型抗体Ab_2。作者分析了通过Ab_2处理后对细粒棘球绦虫抗原的抗体应答的调节。     

多发性骨髓瘤MUC1-2VNTR基因疫苗诱导小鼠免疫应答的实验研究

目的观察黏蛋白1两串联重复区（MUC1-2VNTR）基因疫苗诱导BALB／c小鼠体液及细胞免疫应答的效果。方法将含MUC12VNTR的重组质粒peDNA3．1-2VNTR／myc-hisB免疫小鼠,免疫后采用ELISA动态检测血清中抗VNTR特异性抗体的水平,乳酸脱氢酶法检测细胞毒性T细胞（CTL）反应活性,MTS法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果重组质粒免疫组小鼠血清中检出了MUC1-2VNTR抗原特异性抗体。用重组质粒免疫BALB／c小鼠后,在效靶比为80：1时可显著地诱导特异性CTL应答。在MUC1-2VNTR抗原肽的刺激下,免疫小鼠脾淋巴细胞得到增殖;与空质粒对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论MUC1-2VNTR基因疫苗可诱导小鼠产生特异性细胞及体液免疫应答,对多发性骨髓瘤的疫苗治疗有重要意义。     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

马立克氏病毒单克隆抗独特型抗体间接ELISA方法的建立

目的用马立克氏病毒(Marak's Disease Virus-MDV)阳性鸡血清提纯IgG和MDV制备抗原,免疫BALB/c鼠,建立间接ELISA法检测MDV抗独特型抗体的方法.方法采集琼扩检出MDV羽囊阳性鸡血清,提纯制备IgG抗原和用MDV制备的抗原,免疫接种6～8周龄BALB/c小鼠,不同时期采集血样,用间接酶联免疫吸附试验和竞争抑制试验方法进行动态血清学观测.结果各个时段都出现MDV抗独特型抗体效价,效价可达10 000×以上.结论建立了MDV抗独特型抗体的间接ELISA方法.     

抗人膀胱癌抗独特型抗体佐剂疫苗的动物实验研究

目的 探讨抗独特型抗体佐剂疫苗对膀胱癌的免疫治疗作用。方法 用抗人膀胱癌抗独特型抗体佐剂疫苗(Ab2 SAF)免疫BALB／C小鼠，即实验组；对照组用生理盐水，方法同实验组。免疫3次后，于末次免疫后1w，将新鲜人膀胱移行细胞癌组织移植于小鼠肾包度下，分别于移植后第2、4、6、8和10天处死小鼠，取血清进行抗抗独特型抗体(Ab3)分析。移植瘤行组织学检查，观察宿主淋巴细胞浸润情况及瘤细胞可见率。结果 实验组小鼠肾脏包膜下人膀胱癌细胞系很快受到排斥，在移植后第6天，淋巴细胞浸润即达高峰，而对照组在第10天才达高峰；癌细胞可见率，在移植后第6天即明显降低，而对照组呈逐渐下降。实验组Ab3为阳性，而对照组阴性。结论 Ab2作为抗原免疫小鼠后，通过诱发或激活对人膀胱癌特异性体液和细胞免疫反应，排斥癌细胞并抑制其生长。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的建株及初步鉴定

用感染8条日本血吸虫尾蚴,时间长达一年半的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用兔抗日本血吸虫肠相关抗原和兔抗可溶性虫卵抗原免疫血清与细胞培养上清进行ELISA筛选阳性克隆,最终建立了分泌单克隆抗独特型抗体细胞株NP30。作者用一系列试验证明,NP-30是日本血吸虫肠相关抗原的内影象抗独特型抗体,有替代日本血吸虫虫源性抗原用于血清学诊断的可能性。     

弓形虫P30抗原诱导小鼠抗弓形虫感染免疫保护的研究

目的 探讨弓形虫主要表膜p30抗原免疫小鼠后的抗感染保护作用。方法 用单克隆抗体分离纯化的p30抗原免疫小鼠，然后用RH株速殖子和Fukaya株包囊攻击感染，观察急性感染后小鼠死亡时间及慢性感染脑包囊形成的影响，并观察感染后不同时间抗体水平、细胞因子和T细胞亚群的变化。结果 p30抗原免疫小鼠后对攻击感染表现为，在一定程度上延长感染小鼠的存活时间，减少脑包裹的形成数量。血清中特异性抗体水平及IFN—γ、IL—2水平均高于同期对照组，而且免疫鼠脾CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞在感染早期升高较快，第4周达高峰，CD4^ ／CD8^ 比值随感染时间的延长而逐渐下降。结论 p30抗原免疫小鼠对攻击感染能特异性刺激小鼠产生体液和细胞免疫应答，具有明显的抗感染作用。