高浓度葡萄糖对培养兔角膜上皮细胞增殖活性的影响

目的 研究高浓度葡萄糖对体外培养兔角膜上皮细胞增殖活性的影响,建立糖尿病性兔角膜上皮细胞培养模型.方法 按照析因设计方法将葡萄糖浓度(25、40、60 mmol/L)和培养时间(24、48、72 h)进行全面组合,应用SunBioTM Am-Blue细胞增殖与活性检测试剂检测兔角膜上皮细胞增殖活性,倒置显微镜观察细胞形...     

高浓度葡萄糖对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的观察高浓度葡萄糖刺激下牙周膜干细胞(PDLSCs)的增殖能力和成骨分化能力。方法组织块法体外培养非糖尿病患者PDLSCs,分别用0mg/L(正常对照组)、1100mg/L(低糖组)、4500mg/L(高糖组)浓度葡萄糖刺激,MTT法检测PDLSCs增殖能力,矿化诱导后茜素红染色观察矿化结节形成,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runt相关转录因子2(Runx-2)、碱性磷酸酶(ALP)和I型胶原(Col-1)成骨相关基因表达。结果 MTT法检测显示高糖组OD值较低糖组和正常对照组低(P0.05);21天成骨诱导后,高糖组矿化结节面积少于低糖组和正常对照组(P0.05,P0.01);成骨诱导期间,高糖组ALP、Runx2和Col-1诱导前后相对倍增数低于低糖组和正常对照组(P0.05,P0.01)。结论高浓度葡萄糖抑制PDLSCs增殖能力和成骨分化能力。     

表皮生长因子与碱性成纤维生长因子对人牙髓干细胞增殖的影响

目的：探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs)增殖能力的影响。方法：采用噻唑蓝（MTT）比色法分别测定不同浓度EGF和bFGF在不同时间,单独或联合应用对hDPSCs增殖能力的影响。结果：50 ng/ml EGF和20 ng/ml bFGF促hDPSCs增殖能力最强。以50ng/ml EGF、20ng/ml bFGF单独或联合作用,其促hDPSCs增殖能力均具有时间依赖性,第3 d、5 d、7 d, EGF、bFGF促hDPSCs增殖作用显著增强,二种生长因子联合作用,促增殖作用显著高于其单独作用效果,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：生长因子EGF和bFGF最大效应浓度分别为：50 ng/ml、20 ng/ml。EGF和bFGF单独作用均能显著促进hDPSCs的增殖,二者联合作用对hDPSCs的增殖有一定的协同作用。     

表皮生长因子对大鼠胚胎神经干细胞增殖分化的影响

目的：建立神经干细胞分离、培养的技术方法,探讨表皮生长因子(EGF)对大鼠胚胎神经干细胞增殖、分化的影响。方法：从大鼠胚胎大脑组织中分离、培养神经干细胞,并用EGF和血清诱导其分化,采用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞增殖和分化的神经样细胞。结果：大鼠胚胎神经干细胞在无细胞因子和血清的培养基中无新生细胞形成,但能在EGF和血清的诱导下产生nestin和BrdU阳性细胞,细胞贴壁后分化为神经元和星形胶质样细胞。结论：EGF和血清能促进神经干细胞增殖,并诱导其向神经元样和星形胶质样细胞分化。     

表皮干细胞对角质形成细胞增殖的影响

目的:研究表皮干细胞对角质形成细胞增殖的影响.方法:体外培养角质形成细胞时比较有无表皮干细胞时对角质形成细胞生长曲线的不同.结果:有表皮干细胞时角质形成细胞增殖速度快,且实验组在第2天即可见到散在的细胞集落,而对照组在第3天才看得到集落,实验组形成的集落大而多,对照组则少而小.结论:表皮干细胞对角质形成细胞的增殖有正性作用,表皮干细胞可能通过分泌某种"表皮干细胞因子"对角质形成细胞发挥作用.     

不同葡萄糖浓度对小鼠胰岛β细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨不同葡萄糖浓度对小鼠胰岛β细胞株MIN-6细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度葡萄糖培养MIN-6细胞72h,MTT法观察不同浓度葡萄糖作用后MIN-6的细胞活性增殖率,Annexin V-FITC染色流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果低浓度（5.6mmol/L、11.1mmol/L）及高浓度葡萄糖（33.3mmol/L）作用72h后可抑制MIN-6细胞的生长;5.6mmol/L、11.1mmol/L、33.3mmol/L组处理72h后,细胞凋亡明显（P〈0.05）。结论低浓度（5.6mmol/L）及高浓度（33.3mmol/L）葡萄糖均可抑制小鼠MIN-6细胞增殖并使其凋亡增加。     

神经生长因子对神经干细胞增殖的影响

目的:观察不同剂量神经生长因子(NGF)对体外培养的神经干细胞(NSCs)增殖的影响.方法:取人胚胎组织脑室区/脑室下区(VZ/SVZ)组织分离神经干细胞,培养于DMEM/F12 B27细胞基础培养液中,加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为阳性对照组;实验组培养液中分别加入NGF至终浓度的50μg/L、20μg/L、10μg/L、5μg/L、2μg/L;培养液无添加成分作为阴性对照组.用MTT比色分析法测定细胞增殖能力,倒置显微镜下观察细胞增殖情况.结果:3 d MTT比色显示,50μg/L NGF组细胞增殖较其他各组低(P＜0.05);培养10 d时细胞活力测定表明各组细胞均有一定程度的增殖,10μg/L NGF组与阳性对照组比较差异无统计学意义,与阴性对照组比较差异有统计学意义.结论:在一定浓度范围内NGF能明显促进神经干细胞的增殖.     

皮肤软组织扩张术对大鼠表皮细胞增殖分化的影响

目的观察皮肤软组织扩张术对大鼠表皮细胞增殖分化的影响。方法36只Wistar大鼠分为干预侧和假手术侧,制作皮肤扩张动物模型,利用表皮干细胞表达角蛋白（keratin 19,K19）、短暂扩充细胞表达K14及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen。PCNA）的特点,采用免疫组织化学PowerVision^TM二步法检测扩张皮肤表皮干细胞和短暂扩充细胞的分布特征。结果扩张皮肤的表皮层明显增厚,不仅其基底层K19、K14和PCNA阳性细胞的数量明显增多。而且在棘层和颗粒层也可见K19、K14及PCNA阳性细胞的表达。结论皮肤软组织扩张术的应力能诱导大鼠表皮干细胞的增殖与分化,其可能是皮肤软组织扩张术的重要生物学基础。     

不同浓度EGF对人脐血间充质干细胞增殖的研究

目的探索不同浓度表皮生长因子（EGF）对人脐血间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）增殖的影响。方法无菌条件下来集正常人脐血，密度梯度离心法分离脐血单个核细胞，用Mesencult培养基进行纯化和扩增培养，通过MTT法检测不同浓度的EGF的促人脐血MSCs增殖作用。结果EGF的5—100ng／ml各浓度组增殖效应均明显大于对照组（P〈0．05），10ng／ml组明显大于其它各浓度组（P〈0．01）。结论EGF对体外培养的人脐血MSCs有促进增殖的作用，此作用呈剂量依赖性。     

高浓度葡萄糖对人肾间质成纤维细胞增殖及PAI-1基因表达的影响

目的：探讨高糖环境下成纤维细胞的增殖情况以及I型纤溶酶原激活物抑制物（PAI－1）在介导肾小管一间质损伤过程中的作用。方法：采用MTT方法分别检测正常糖浓度和高糖浓度下细胞的增殖，RT－PCR方法观察PAI－1mRNA的表达。同时将细胞培养于25mmol/L甘露醇中，观察高糖中渗透压所起的作用。结果：培养24h后，高糖以剂量依赖形式抑制细胞增殖，与正常对照组相比，高糖可以增加PAI－1的表达，甘露醇也抑制细胞增殖，同时对PAI－1的表达产生作用。结论：高糖可抑制成纤维细胞增殖，刺激PAI－1的表达。PAI－1在糖尿病肾病肾小管一间质纤维化过程中，可能具有主要的介导作用。     

不同糖浓度对颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的 研究不同糖浓度对颌骨骨髓间充质干细胞（orofacial bonemesenchymal stem cells, OFMSCs）增殖和成骨分化的影响。方法 体外分离、培养OFMSCs,成骨、成脂、成软骨分化诱导及鉴定,并使用不同含糖量培养基（5.5、11、16.5、25、44 mmol/L）培养OFMSCs,以5.5 mmol/L基准糖浓度为对照组,其余组为实验组。采用CCK-8及流式细胞仪检测各组OFMSCs的增殖活性及增殖指数,OFMSCs成骨诱导后4、7 d检测碱性磷酸酶（ALP）活性,21 d进行茜素红染色及矿化定量分析,同时用RT-PCR检测3、7、14及21 d相关成骨基因Runx2、Osterix的表达。结果 培养的OFMSCs成骨诱导21 d后茜素红染色可见钙结节,成脂诱导14 d 后油红O染色可见红色脂滴,成软骨诱导14 d 后阿利新蓝染色可见蓝色胞浆;糖浓度在5.5～25 mmol/L促进OFMSCs的增殖,但随着糖浓度的继续增加（25～44 mmol/L）,OFMSCs的增殖活性受抑制;成骨诱导时,随着培养液糖浓度升高,ALP活性呈剂量依赖性降低（P Runx2、Osterix mRNA 表达量高于实验组（P Runx2、Osterix mRNA 表达量均出现先上调再下调的趋势。结论 在一定范围的糖浓度内,糖浓度升高可促进OFMSCs的增殖;而糖浓度升高对成骨分化呈抑制效应。     

葡萄糖对人骨髓间充质干细胞增殖的影响及调控机制

目的观察不同浓度葡萄糖对人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)增殖的影响,并初步探讨其可能的基因调控机制。方法 hMSC-TERT细胞在不同浓度葡萄糖(5.6、11.0、25.0mmol/L)培养液中,分别培养14、28d后,用MTT法测定各组hMSC-TERT细胞的增殖率,基因芯片检测hMSC-TERT细胞在高浓度葡萄糖(25.0mmol/L)与生理浓度葡萄糖(5.6mmol/L)作用下基因谱的差异性表达,并用RT-PCR扩增技术进一步证实不同浓度葡萄糖作用下的hMSC-TERT细胞硫氧还蛋白相关蛋白(TXNIP)mRNA表达的差异。结果细胞增殖测定结果显示随着葡萄糖浓度的增加以及培养时间的延长,hMSC-TERT细胞的增殖率下降。同时基因芯片测定筛选出表达差异的基因有87条,其中12条表达上调,75条表达下调。在表达上调的基因中,TXNIP基因表达增加最为显著。RT-PCR结果也进一步证实在相同培养时间下,与5.6mmol/L葡萄糖浓度组相比,11.0mmol/L和25.0mmol/L葡萄糖浓度组TXNIP mRNA表达均明显增加(均P<0.01);25.0mmol/L组较11.0mmol/L组TXNIP mRNA表达增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。在5.6mmol/L葡萄糖浓度组,培养28d时TXNIP mRNA水平较培养14d时明显增加(P<0.01);在11.0mmol/L和25.0mmol/L葡萄糖浓度组间,培养至14d与28d后,TXNIP mRNA水平的改变差异均无统计学意义(P>0.05)。结论高糖环境中hMSC-TERT细胞的增殖能力下降,TXNIP mRNA的表达增加调节hMSC-TERT细胞增殖能力的改变。     

高糖环境下FGF-21对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的 研究高糖环境下成纤维细胞生长因子21(FGF-21)对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）骨向分化的作用及其机制。方法 取健康成人骨髓,分离培养hBMSCs,成骨、成脂诱导分化后,茜素红、油红O染色鉴定,流式细胞仪检测第3代细胞表面标志物CD105、CD90、 CD73和CD44水平。将hBMSCs分为对照组〔以葡萄糖（Glu）浓度5.5 mmol/L模拟正常生理状态糖浓度〕,Glu A、B、C高糖浓度梯度组（Glu 16.5、25、40 mmol/ L）,FGF-21干预组(Glu 5.5 mmol/ L+ FGF-21),高糖环境FGF-21干预组(Glu B+FGF-21)和Glu B+FGF-21干预+细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 信号转导阻断剂（包括PD98059、SP600125、SB203580）组。成骨诱导第14天,检测碱性磷酸酶（ALP）活性;成骨诱导第21天,以RT-PCR检测骨向分化的相关因子ALP、骨钙素（OCN）、Runx2的mRNA水平,以Western blot检测MAPK通路中细胞外信号调节激酶(ERK1/ 2)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38)、c-Jun 氨基末端激酶(JNK)蛋白磷酸化水平。结果 ①分离培养得到的hBMSCs成骨、成脂诱导后茜红素、油红O染色阳性,hBMSCs被成功地诱导向成骨细胞（OB）和脂肪细胞分化。流式细胞仪鉴定为hBMSCs。②与对照组相比,高糖组的骨向分化标志物ALP、OCN、Runx2的mRNA水平明显增加,MAPK通路中ERK、P38、JNK磷酸化水平表达增加。③与Glu B组相比,Glu B+FGF-21组的ALP、OCN、Runx2的mRNA水平降低,ERK、P38和JNK的磷酸化水平降低。④与Glu B+FGF-21组相比,Glu B+FGF-21+MAPK信号转导阻断剂组的ALP、Runx2的mRNA水平进一步降低,且相应的ERK、JNK和P38及其磷酸化水平进一步降低。结论 高糖能促进hBMSCs的骨向分化。高糖环境下FGF-21具有抑制hBMSCs的成骨分化或矿化作用。     

低氧对大鼠海马神经干细胞增殖的影响

目的观察和分析不同低氧浓度对海马神经千细胞（NSCs）增殖的影响。方法在体积分数4％O2、1％O2及常氧环境下培养新生SD大鼠海马神经干细胞,观察低氧对神经球数量和直径的影响。结果（1）对海马神经干细胞增殖效率的影响：体积分数1％低氧组神经球数量明显低于常氧对照组,具有显著性差异（P〈0．05）;体积分数4％低氧组神经球数量有高于对照组的趋势,但不具有显著性差异。（2）对海马神经干细胞增殖速度的影响。在培养24h、36h和48h后,体积分数1％低氧组神经球的直径都小于对照组,且在24h和36h时具有显著性差异（P〈0．05）,在48h具有极显著性差异（P〈0．01）;在培养24h、36h和48h后,体积分数4％低氧组神经球的直径都大于对照组,在36h时具有显著性差异（P〈0．05）,在48h时具有极显著性差异（P〈0．01）。结论体积分数4％低氧浓度环境既提高海马神经干细胞的增殖效率也提高海马神经千细胞的增殖速麾体积分数1％低氧浓度环境则既抑制海马神经干细胞的增殖效率也抑制海马神经干细胞的增殖速度。提示中度低氧有利于海马神经干细胞的增殖：过度低氧不利于海马神经千细胞的增殖。     

益气养阴活血药物血清对脑缺血再灌注后高糖培养大鼠神经干细胞增殖的影响

目的观察益气养阴活血药物人参、玉竹、川芎组合对体外培养脑缺血再灌注合并高糖培养条件下大鼠神经干细胞增殖的影响。方法神经干细胞培养分为4组：正常对照组、缺血再灌注模型组、缺血再灌注后高糖模型组、缺血再灌注后高糖加益气养阴活血药物血清组。BrdU掺入法观察神经干细胞的增殖,甲基噻唑基四唑比色试验检测细胞活性。结果脑缺血再灌注后神经干细胞增殖显著增加,细胞活力下降;高糖可抑制神经干细胞的增殖,降低细胞活力;益气养阴活血药物血清可促进神经干细胞的增殖,提高其活力。结论益气养阴活血药物可促进脑缺血再灌注后高糖培养大鼠神经干细胞的增殖,提高细胞活力。     

碱性成纤维细胞生长因子对间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及其信号机制。方法:全骨髓贴壁法培养MSCs,流式细胞仪分析其表面MSCs标记(CD45、CD34、CD90、CD29)以及成骨、成脂肪等多向诱导分化潜能,鉴定其特征。MTT法分析不同浓度bFGF对MSCs增殖的影响,确立最佳浓度bFGF诱导MSCs增殖的时间特征,分别以磷脂酰肌醇3-激酶、促分裂素原活化蛋白激酶、磷脂酶C、蛋白激酶C、钙通道和钙泵选择性抑制剂等处理P3MSCs后,观察其对bFGF介导MSCs增殖的影响。结果:培养的MSCs表现CD90、CD29强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;bFGF诱导MSCs增殖呈时间和剂量依赖特征,5.4×10-4mol/L bFGF作用48 h时MSCs增殖达峰值;磷脂酶C阻断剂U73122、钙通道阻断剂和选择性蛋白激酶C阻断剂等明显抑制了bFGF所介导的MSCs增殖效应;尤其是非选择性PKC抑制剂Straurosporine、钙泵选择性抑制剂thapsigargin以及蓝尼定受体抑制剂Ryandoine均抑制bFGF所诱导的MSCs增殖。结论:bFGF通过Ca2+/PKC/Erk1/2途径促进MSCs的增殖。     

高浓度葡萄糖对晶状体上皮细胞形态及细胞周期的影响

目的：观察高浓度葡萄糖状态对培养的兔晶状体上皮细胞RNA、DNA、超微结构的影响，以探讨糖尿病性白内障的发病机理。方法：高浓度葡萄糖（4.5g/L）作用于培养的兔晶体上皮细胞24、72、144h后采用流式细胞仪检测晶体上皮细胞RNA、DNA、细胞周期、增殖指数。且以倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜进行晶体上皮细胞形态学的研究。结果：高浓度葡萄糖作用于培养兔晶体上皮细胞24h各指标无明显变化，72hRNA量、S期细胞增加，G2/M期细胞减少，144G2/M期细胞增加，但分裂指数并未相应提高；形态学上可见实验组细胞微绒毛及细丝丢失，细胞膜破裂，细胞染色质分布不均，细胞器减少、肿胀，髓样体出现。结论：高浓度葡萄糖（4.5g/L）能诱导晶体上皮细胞进入有丝分裂，但又阻碍有丝分裂的完成；同时对细胞膜、细胞核、细胞器均产生有害影响，使晶体上皮细胞的形态结构发生改变，细胞更趋老化，为糖尿病性白内障的发生奠定了基础。     

AGEs与葡萄糖浓度对血管内皮细胞增生的影响

为研究非酶促糖化终末产物(AGEs)和不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞增生的影响,用氚标记胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入法,测定不同浓度葡萄糖、AGEs以及抗氧化剂(维生素E)对血管内皮细胞增生的影响。结果:11mmol/L葡萄糖加AGEs(5 mg/L)、30 mmol/L葡萄糖、11 mmol/L葡萄糖+AGEs+维生素E组的血管内皮细胞的2 h~3H-TdR掺入量分别为对照组的4.69倍(P<0.01)、2.15倍(P<0.05)和1.46倍(P<0.05)。提示:高糖和AGEs均能直接刺激血管内皮细胞增生,高糖及AGEs同时存在时更为明显,而抗氧化剂维生素E则抑制内皮细胞增生。     

高糖对内皮祖细胞增殖、凋亡的影响及与氧化应激的关系

目的:探讨高糖对内皮祖细胞增殖、凋亡的影响及与氧化应激的关系.方法:分离培养、鉴定SD大鼠骨髓内皮祖细胞,分为正常组和高糖组(30 mmol/L),MTT法检测增殖能力,Annexin-V/PI双染法检测凋亡率,荧光分光光度计检测活性氧的含量,酶标仪检测超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性.结果:与正常组相比,高糖组内皮祖细胞增殖能力降低,凋亡率增加,活性氧含量升高,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性降低(P＜0.05).结论:高糖可抑制内皮祖细胞的增殖能力,促进其凋亡,其机制可能与高糖抑制内皮祖细胞中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性,诱导活性氧生成增加有关.     

表皮干细胞与创面修复

表皮干细胞的研究尚处于初级阶段,但现有干细胞增殖与分化调控的研究已经为生物工程学提供了分子与基因水平的调控手段并指明了未来的发展和研究方向。本文从表皮干细胞的定义、来源、归宿、分布、增殖分化、表皮细胞培养及在创面愈合过程中表皮干细胞的分布特征等方面详细探讨了表皮干细胞在创面修复中的进展。