ARHI真核表达质粒对胃癌恶性表型的影响

目的 观察外源ARHI在胃癌细胞中过表达对胃癌细胞增殖、迁移以及侵袭的影响.方法 构建pEGFP-ARHI表达载体,并通过lipofectamineTM 2000将其转入ARHI低表达的胃癌细胞系MKN-28中作为实验组,空载质粒pEGFP-N1转入MKN-28作为空载组,未处理MKN-28细胞作为未处理组.通过荧光显微镜及Western blot检测外源ARHI的表达,采用增殖实验、损伤刮擦实验、体外侵袭实验(Transwell小室)分别检测过表达ARHI胃癌细胞MKN-28的增殖能力、侵袭和迁移能力的变化.结果 ARHI在胃癌细胞系MKN-28中表达较低,成功构建重组真核表达质粒pEGFP-ARHI并成功转染MKN-28细胞后,CCK8法检测显示,相对于空载组和未处理组,转染pEGFP-ARHI的实验组细胞增殖变慢(P＜0.05),Transwell小室实验显示实验组细胞侵袭能力减弱(P＜0.05),细胞划痕实验表明实验组细胞迁移能力减弱(P＜0.05).结论 在ARHI低表达的胃癌细胞系MKN-28中表达重组质粒pEGFP-ARHI能够抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力.     

TUSC3基因表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 本研究旨在探讨干扰乳腺癌细胞中TUSC3基因的表达后对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 通过使用siRNA和过表达质粒分别建立TUSC3高/低表达的实验组,空质粒转染为对照组,采用划痕实验、Transwell实验检测各组乳腺癌细胞运动及侵袭能力的变化;采用western blot实验检测在乳腺癌细胞各实验组和...     

RSRC2影响三阴性乳腺癌细胞增殖迁移及侵袭的初步研究

目的:探究富含精氨酸/丝氨酸卷曲螺旋2（RSRC2）对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:将RSRC2过表达、降表达和空载体质粒通过慢病毒包装转染至三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中,通过Western blot检测转染效果,通过Transwell 迁移实验、侵袭实验、划痕实验检测RSRC2对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭能力的影响,通过平板克隆形成实验检测RSRC2对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响。结果:Western blot结果显示RSRC2过表达和降表达质粒成功转染至MDA-MB-231细胞中,Transwell迁移实验、侵袭实验、划痕实验、平板克隆实验显示,RSRC2过表达的MDA-MB-231细胞其迁移、侵袭及增殖能力减弱,RSRC2降表达的MDA-MB-231细胞其迁移、侵袭及增殖能力增强（均P<0.05）。结论:RSRC2在三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭过程中起着重要的负调控作用。     

MMP-9 过表达对骨肉瘤143B 细胞 侵袭与迁移能力的影响

目的 研究MMP-9 过表达对成骨肉瘤143B 细胞侵袭与迁移能力的影响。方法 通过慢病毒介导 MMP-9 过表达载体转染骨肉瘤143B 细胞,实验分为3 组：实验组（转染pLV-Puro MMP-9 过表达序列）、 对照组（转染pLV-Puro MMP-9-NC 序列）、空白组（PBS）;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检 测MMP-9 和VEGF mRNA 的表达;Western blot 法检测MMP-9 和VEGF 蛋白的表达;Transwell 小室侵袭 实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 实验组MMP-9 和VEGF 的mRNA 和蛋 白表达量较对照组和空白组上调（P < 0.05）;实验组穿过人工基底膜细胞数高于对照组和空白组（P < 0.05）; 实验组划痕愈合率高于对照组和空白组（P <0.05）。结论 慢病毒介导MMP-9 过表达通过作用于VEGF 靶 基因,抑制成骨肉瘤143B 细胞侵袭及迁移能力。     

膜蛋白AN01过表达对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株生物学特性的影响

目的 研究膜蛋白ANO1过表达对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖、剥脱、伸展和迁移的影响。方法 以ANO1稳定过表达的Hep-2细胞株作为实验组,空白质粒转染的Hep-2细胞作为对照组,采用MTT法检测细胞增殖活性,细胞剥脱实验检测细胞剥脱能力,细胞伸展实验检测细胞伸展能力,Boyden小室侵袭实验、体外划痕愈合实验和尼氟灭酸阻断氯离子通道实验检测细胞迁移能力。结果 MTT法检测结果显示,实验组与对照组的光密度值差异无统计学意义(P=0.62)。细胞剥脱实验和细胞伸展实验结果显示,实验组的细胞剥脱百分比(P＜0.0001)和伸展百分比(P＜0.0001)明显大于对照组。Boyden小室侵袭实验结果显示,实验组的穿膜细胞百分比明显大于对照组(P＜0.0001);体外划痕愈合实验结果显示,实验组的划痕面积百分比明显小于对照组(P＜0.0001);尼氟灭酸阻断氯离子通道实验结果显示,实验组的划痕面积百分比明显大于对照组(P＜0.0001)。结论 ANO1过表达并未加快癌细胞的增殖速度,但却大大增加了头颈鳞癌细胞的移动、伸展和剥脱能力。     

Noggin蛋白对MCF-7细胞增殖、侵袭能力的影响

目的观察Noggin蛋白对乳腺癌细胞MCF-7增殖、侵袭能力的影响。方法以Noggin重组腺病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7,MTT法检测Noggin对MCF-7细胞增殖能力的影响,划痕修复实验及Transwell细胞侵袭实验检测其运动和侵袭能力的改变,Real-time PCR和Western blot检测CXCR4和MMP1基因的表达改变。结果过表达Noggin蛋白的MCF-7细胞增殖能力增强(P<0.05);划痕修复实验提示过表达Noggin蛋白的MCF-7细胞划痕愈合延迟;Transwell细胞侵袭实验提示与空病毒组相比,Noggin组穿膜细胞数显著降低(55±4 vs 25±3,P<0.05)。RT-PCR和Western blot结果:过表达Noggin后,MCF-7细胞中CXCR4和MMP1基因表达下调。结论 Noggin蛋白可抑制乳腺癌细胞MCF-7的运动和迁移,可能与下调CXCR4和MMP1基因的表达相关。     

转移相关基因2对喉癌细胞系Hep-2的增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨转移相关基因2(MTA2)对喉癌细胞系Hep-2的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过针对MTA2基因的小干扰RNA(siRNA-MTA2)对MTA2基因表达进行下调,采用RT-PCR和Transwell检测转染,作为实验组,对照组转染阴性对照(sicontrol),通过MTT、细胞划痕实验和Transwell法分别检测MTA2对Hep-2的增殖、迁移和侵袭的影响。结果:实验组MTA2mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05),实验组培养7d和9d时细胞增殖能力明显低于对照组(P<0.05),实验组细胞迁移能力和细胞侵袭能力明显低于对照组(P<0.05)。结论:MTA2与喉癌细胞系Hep-2细胞增殖、迁移和侵袭密切相关,有望成为治疗喉癌的靶点。     

Calphostin C对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的探讨Calphostin C对高转移乳腺癌MDA-MB-435S细胞侵袭能力的抑制作用。方法高转移乳腺癌MDA-MB-435S细胞系购于中国医学科学院上海细胞库,通过划痕实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验及细胞黏附实验观察Calphostin C对MDA-MB-435S细胞侵袭能力的影响。结果划痕实验结果显示,与对照组比较,实验组MDA-MB-435S细胞伤口愈合显著减慢,对照组细胞伤口24 h基本愈合,而实验组细胞伤口24 h仍未愈合。Transwell迁移和侵袭实验结果显示,实验组MDA-MB-435S细胞迁移、侵袭并穿过Transwell小室底膜的细胞数显著少于对照组(P<0.05)。细胞黏附实验结果显示,与对照组比较,实验组MDA-MB-435S细胞与纤维连接蛋白的黏附性显著降低(P<0.05)。结论 Calphostin C可显著抑制高转移乳腺癌MDA-MB-435S细胞的侵袭能力。     

苯噻啶对人肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 观察不同浓度苯噻啶(Pizotifen)对人肺腺癌A549和PC9细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,并初步探究其机制。方法 取对数生长期的A549和PC9细胞,分为对照组(细胞对照组为培养基直接作用于细胞,溶剂对照组为含有0.1%DMSO的培养基作用于细胞)和实验组(浓度分别为10、20、30、40μmol/L的苯噻啶作用于细胞)。CCK-8法检测人肺腺癌细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell迁移实验检测其迁移能力,Transwell侵袭实验检测其侵袭能力,ELISA法检测Wnt3a/β-catenin信号通路蛋白、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。结果 与溶剂对照组相比：CCK-8结果显示,实验组A549和PC9细胞活力降低,出现不同程度的增殖抑制现象,在20、30、40μmol/L浓度组有一定的时间依赖性(P<0.05);划痕实验结果表明,实验组划痕愈合率小于对照组,苯噻啶浓度越高,划痕愈合率越低(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验结果显示,实验组穿过小室的肺腺癌细胞数量明显低...     

TSPAN15 mRNA在乳腺癌增殖侵袭转移中的作用研究

目的 探讨TSPAN15 mRNA在乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移中的作用。方法 选取正常乳腺上皮细胞MCF-10A（对照组1）、乳腺癌细胞系MCF-7(MCF-7组)和MDA-MB-231(231组),分别采用空白质粒psilencer 2.1和TSPAN15-ShR3质粒转染MCF-7组（对照组2和沉默组1）和231组细胞（对照组3和沉默组2）。采用细胞计数试剂盒、Transwell侵袭实验和划痕实验检测TSPAN15对乳腺癌细胞增殖、侵袭以及迁移能力的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction, RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western blotting, WB）比较不同组细胞转染后的TSPAN15 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 RT-qPCR和WB实验结果显示,MCF-7组和231组的TSPAN15表达水平高于对照组1,差异有统计学意义（P <0.05）。沉默组1和沉默组2肿瘤细胞的增殖能力、侵袭能力、迁移能力、肿瘤N-cadherin的mRNA水平...     

miR-376c-3p通过靶向谷氨酸受体相互作用蛋白1影响乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-376c-3p在乳腺癌中的表达水平、生物学功能及分子调控机制.方法:通过实时荧光定量PCR检测乳腺上皮MCF-10A细胞及乳腺癌细胞中miR-376c-3p表达水平;然后,用miR-376c-3p mimic转染乳腺癌MCF-7与MDA-MB-231细胞,用平板克隆实验、划痕实验以及Transwell...     

RNAi沉默Plk1对胰腺癌细胞系AsPC-1侵袭转移的影响

目的 探讨RNAi沉默Plk1基因表达与胰腺癌细胞侵袭转移能力的关系.方法 根据Plk1基因特点,设计并用化学方法合成了4个小干扰核糖核酸分子（siRNA） （shplk 1-1、shplk 1-2、shplk1-3、shplk1-4）,脂质体转染法将短链siRNA转入AsPC-1细胞;细胞分为：未处理组为对照组、空质粒组、shplk1-1组、shplk1-2组、shplk1-3组、shplk1-4组.采用RT-PCR和Western blot法检测siRNA对Plk1表达的抑制效果;采用Transwell法检测转染后细胞侵袭能力;采用划痕实验检测转然后细胞迁移能力.结果 RT-PCR和Western blot结果示所设计的4个siRNA均能明显抑制AsPC-1细胞Plk1 mRNA水平,以shplk1-3效果最好,与对照组、空质粒组及其他三组比较,转染shplk1-3组Hk1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低（P＜0.01）;以转染shplk1-3处理AsPC-1细胞后与对照组、空质粒组比较,Transwell侵袭实验证实：细胞转染24 h后,正常对照组、空质粒组和shplk1-3组穿过人工基底膜的侵袭细胞数分别为（195±16）、（176±13）、（83±5）个,侵袭能力明显降低,差异有高度统计学意义（P＜0.01）;细胞划痕实验证实：shplk 1-3组迁移能力明显降低.结论 抑制胰腺癌细胞Plk1基因,侵袭迁移能力明显降低,能够为胰腺癌的治疗提供新的策略.     

MicroRNA-34a对尿路上皮癌细胞株5637细胞迁移、侵袭和增殖的影响

目的 研究microRNA-34a （miR-34a）对膀胱肿瘤细胞株5637细胞迁移、侵袭和增殖的影响.方法 在5637细胞株中过表达miR-34a,运用小室迁移实验和小室侵袭实验检测细胞迁移力和侵袭力;运用血球计数板法和新型四唑氮盐（MTS）法检测细胞增殖力.结果 过表达miR-34a后,5637细胞迁移力和侵袭力均下降（P＜0.01）,细胞增殖受抑（P＜0.01）.结论 过表达miR-34能抑制膀胱肿瘤细胞株5637的迁移、侵袭和增殖.     

富含亮氨酸重复序列蛋白1通过上调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白表达促进乳腺癌细胞迁移和侵袭

目的:探究富含亮氨酸重复序列蛋白1(leucine-rich repeat protein 1, LRR1)在乳腺癌细胞中的表达及对其生物学功能的影响。方法:培养人乳腺癌MDA-MB-231、HCC70细胞株和正常乳腺上皮MCF-10A细胞;采用蛋白免疫印迹法检测LRR1表达。将人乳腺癌MDA-MB-231、HCC70细胞株分为干扰对照组、LRR1干扰组、LRR1过表达组和空载体对照组,分别转染LRR1对照、干扰、过表达、空载体序列;采用Transwell实验检测乳腺癌细胞迁移和侵袭能力;采用蛋白免疫印迹法检测细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, m-TOR)表达。结果:与正常人乳腺上皮MCF-10A细胞相比,乳腺癌MDA-MB-231和HCC70细胞中LRR1表达水平显著增加(P均<0.01)。在人乳腺癌MDA-MB-231、HCC70细胞中,与干扰对照组相比,LRR1干扰组细胞迁移和侵袭数显著降低(P均<0.01), m-TOR表达水平明显降低(P<0.01);与空载体对照组相比,过表达LRR1组细胞迁移和侵袭...     

HP1α（CBX5）对前列腺癌细胞迁移、侵袭和增殖影响的研究

目的:探讨HP1α在前列腺癌细胞LNCaP和PC3中的表达情况,并研究HP1α的表达对LNCaP和PC3的影响。方法:采用qPCR及Western 印迹检测HP1α的表达情况,通过Transwell检测细胞的迁移和 侵袭能力,CCK-8和集落形成检测细胞的增殖能力。结果:HP1α在前列腺癌细胞C4-2和LNCaP中表达水平最高,PC3和DU145次之,良性前列腺增生的最低（P <0.05）;Transwell显示,与si-NC组相比, si-HP1α组前列腺癌细胞LNCaP和PC3的迁移和侵袭能力均降低（P <0.05）;CCK-8和集落形成实验显示敲低HP1α后,前列腺癌细胞LNCaP和PC3的增殖能力下降（P <0.05）;Western 印迹发现EMT分子标 志物E-cadherin的表达增加,而N-cadherin、Vimentin等的表达均降低（均P <0.05）。结论:HP1α在前列腺癌细胞LNCaP、C4-2、PC3和DU145中高表达,而降低其表达可以抑制前列腺癌细胞LNCaP和PC3 的迁移、侵袭、增殖以及上皮-间充质转化（EMT）能力。     

miR-126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的探讨MicroRNA-126(miR-126)在人结肠癌细胞中的表达以及对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法应用荧光PCR定量检测60例结肠癌患者的结肠癌组织以及癌旁组织中miR-126的表达,共60对,再测定5株结肠癌细胞(SW480、HT29、HCT116、LOVO、SW620)中的表达情况;CCK-8法、划痕实验和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并进一步通过体外实验研究miR-126对结肠癌细胞生物学行为的影响。结果与癌旁组织细胞比较,miR-126在结肠癌细胞中表达下降(95.0%vs.55.0%,P<0.05),发生转移者与未发生转移者比较,差异有统计学意义(25.0%vs.75.0%,P<0.05)。miR-126可以抑制SW480细胞的生长及其侵袭转移,有基质胶Tran—swell实验中,转染组及空白对照组细胞迁移数分别为(10.0±4.3)个和(258.0±30.6)个;无基质胶的Transwell实验中,分别为(84.0±13.2)个和(335.0±27.3)个,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-126高表达可以增强癌细胞对奥沙利铂的敏感性。结论miR-126可明显抑制结肠癌细胞的发生发展,影响多种结肠癌细胞株生物学行为。     

MiR-671-3p靶向DEPTOR而抑制乳腺癌细胞的增殖与侵袭

目的 研究miR-671-3p对乳腺癌细胞增殖、侵袭生物学功能的影响及其可能的作用机制。方法 以实时荧光定量PCR方法检测正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）与乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3）中miR-671-3p表达情况;检测miR-671-3p 在MCF-7细胞中的转染效率;通过CCK-8法检测miR-671-3p对MCF-7细胞增殖的影响;通过Transwell实验、划痕实验检测miR-671-3p对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响;Targetscan预测miR-671-3p的靶基因,并通过双荧光素酶法和Western blot法对靶基因DEPTOR进行验证,并检测DEPTOR的表达。结果 miR-671-3p在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3的表达量低于乳腺正常上皮细胞MCF-10A的表达。通过mimics、inhibitor分别促进、抑制miR-671-3p在MCF-7细胞中的表达后,结果显示miR-671-3p对乳腺癌细胞的增殖有抑制作用（P<0.05）,对肿瘤细胞的侵袭和迁移有抑制作用（P<0.05）。双荧光素酶结果 显示DEPTOR蛋白为miR-671-3p的直接作用靶点,过表达miR-671-3p可直接抑制DEPTOR蛋白的表达。结论 miR-671-3p直接靶向作用于DEPTOR蛋白从而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。     

吉西他滨联合索拉非尼对胆囊癌细胞生长侵袭的抑制作用

目的评估吉西他滨和索拉非尼联合用药对胆囊癌细胞株SGC996,生长、凋亡、辽移和侵袭的影响、方法 采用吉西他滨和索托非尼单独或联合处理SGC996细胞,吉西他滨雌独处坪组浓度分别为0．1、1．0、2．0、4．0和10．0μg/mL;索拉非尼单独处理组浓度分别为0．1、1．0、2．5、5．0、10．0和20．0μmol／1．;两药联合处理组：索拉非尼浓度分别为2．5、5．0、10,0和20．0μmol／L,吉西他滨浓度分别为2．0、4．0和10．0μg／mL。未经药物处理的SGC996细胞作为空白对照组。采用MTT法检测SGC996细胞的生长状况;应用Transwell实验检测SGC996细胞的迁移和侵袭能力应用FITC—AnnexinV／PI双染法检测SGC996细胞的凋亡率。结果 索拉非尼可抑制SGC996细胞生长,并且这种抑制作用具有浓度和时间依赖性（P〈0．05）;同时还可抑制SGC996细胞的迁移和侵袭（P〈0．05）,但不诱导细胞凋亡（P〉0．05）。吉西他滨对SGC996细胞的生长和辽移并无显著抑制作用（P〉0．05）．但可以抑制细胞的侵袭,并诱导细胞凋亡（P〈0．05）,索托非尼和吉西他滨联合用药可以抑制SGC996细胞的生长、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡（P〈0．05）、结论 吉西他滨和索托非尼联合用药对胆囊癌细胞的抑制作用显著强于单独用药,可能成为治疗胆囊癌的有效化疗方案。