X射线照射后鼻咽癌细胞多药耐药基因的表达

目的 通过检测射线照射前后鼻咽癌CNE1细胞多药耐药基因(mdr1基因)及其编码产物P糖蛋白(P-gp)的表达和功能为临床鼻咽癌放化疗顺序提供参考。方法 利用RT-PCR、Western blotting和流式细胞仪检测射线照射前后CNE1细胞的mdr1基因和P-gp的表达及对柔红霉素的外排功能。结果 鼻咽癌CNE1细胞射线照射前mdr1基因、P-gp不表达；照射后较长时间内mdr1基因、P-gp均明显表达；对柔红霉素的摄取较射线照射前低。结论 鼻咽癌CNE1细胞射线照射后化疗敏感性降低，提示临床对于中晚期鼻咽癌的治疗应考虑先化疗再放疗即诱导化疗的治疗方案。     

两种不同分化程度的鼻咽癌细胞在化疗药物作用前后多药耐药基因的表达

目的 检测鼻咽癌CNE1和CNE2细胞在阿霉素(adriamycin,ADM)作用前后多药耐药基因(mdr1 基因)及其编码产物P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是否表达及功能变化.方法 利用RT-PCR,Western blotting和流式细胞仪(FCM)检测CNE1和CNE2细胞在阿霉素作用前后的mdr1基因和P-gp的表达及对柔红霉素(daunorubicin,DNR)的外排功能.结果 鼻咽癌CNE1和CNE2细胞在阿霉素作用前mdr1基因、P-gp不表达;阿霉素作用后较长时间内mdr1基因、P-gp均明显表达,对柔红霉素的蓄积较阿霉素作用前低.结论 化疗可能诱导鼻咽癌细胞的多药耐药.     

多药耐药基因-1高表达可加剧类风湿关节炎患者对氨甲蝶呤的耐药

目的 观察多药耐药基因-1(MDR1)在类风湿关节炎(RA)患者氨甲蝶呤(MTX)耐药中的作用。方法 体外利用重组腺病毒Ad-EGFP-MDR1感染RA患者成纤维样滑膜细胞(FLS),获得MDR1过表达RA FLS。采用Real-time PCR和Western blot法检测MDR1过表达RA FLS中 MDR1基因转录水平及其编码产物P-糖蛋白(P-gp)的表达水平,罗丹明123外排实验验证MDR1过表达RA FLS外排罗丹明123功能,MTT法检测MDR1过表达RA FLS对MTX的耐药性。 结果 重组腺病毒Ad-EGFP-MDR1感染RA FLS 72 h后,MDR1过表达RA FLS细胞内颗粒增加,细胞体积变大,生长速度变慢。MDR1过表达组RA FLS中MDR1 mRNA表达水平(1.4325±0.3924比0.0650±0.0070;t=6.035,P=0.004)、P-gp蛋白表达水平(1.8667±0.2857比 0.9367±0.0551;t=5.536,P=0.005)和细胞外排罗丹明123能力(979.43±196.81比1680.06±147.04;t=-4.940,P=0.008)均明显高于阴性病毒对照组。MTX各个浓度下MDR1过表达RA FLS的存活率均显著增高(P均<0.05)。结论 MDR1基因高表达可通过上调P-gp蛋白的表达影响RA FLS对MTX的外排能力,从而增强RA FLS对MTX的耐药性。     

P糖蛋白功能抑制对耐药肿瘤细胞MCF-7/Adr放射敏感性的影响

目的 探讨P糖蛋白(P-gp)对肿瘤细胞放射敏感性的调控效应。方法 以经与未经维拉帕米处理的MCF-7/Adr细胞分别作为抑制和对照组,运用流式细胞仪检测X射线照射后不同时间点细胞凋亡率和线粒体膜电位(ΔΨm)的动态变化。结果 抑制组细胞在X射线照射后6、12、24h细胞凋亡率分别是25.53%±2.85%、30.43%±2.21%、39.03%±2.60%,对照组分别是16.13%±1.16%、21.73%±1.31%、27.53%±2.55%;抑制组在6、12、24h的ΔΨm平均荧光强度值分别是75.27±4.90、96.47±5.59、57.77±2.55,对照组分别是54.17±4.05、62.30±5.93、39.53±2.65。各时间点抑制组的细胞凋亡率和ΔΨm平均荧光强度值均明显高于对照组(P<0.01)。抑制组经X射线照射后24h细胞凋亡率最高(F=47.870,P=0.000)。照射后12h平均荧光强度值最高(F=74.485,P=0.000)。结论 抑制MCF-7/Adr细胞的P-gp功能上调了细胞的放射敏感性,这可能与线粒体膜电位改变有关。     

表皮生长因子受体对鼻咽癌放疗后细胞增殖的影响

目的:观察表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)对射线照射后的鼻咽癌细胞的增殖的影响。方法:用shRNA-EGFR转染人鼻咽癌细胞系CNE1,应用X射线照射转染EGFRSiRNA前后的细胞,MTT实验比较转染干扰质粒前后照射后细胞增殖变化。结果:shRNA-EGFR成功转染CNE1细胞。CNE1细胞干扰后照射较干扰前照射增殖减低。结论:通过抑制鼻咽癌细胞EGFR的表达,可以抑制鼻咽癌放疗后的增殖。     

α细辛醚对大鼠脑微血管内皮细胞P糖蛋白表达与功能的影响

目的 探讨α细辛醚对大鼠脑微血管内皮细胞P糖蛋白(P-gp)功能与表达的影响。方法 采用100 μmol/L L-谷氨酸作用于脑微血管内皮细胞30 min,诱导其细胞膜上P-gp高表达,模拟癫痫反复发作诱导的耐药性癫痫血脑屏障中血管内皮细胞P-gp升高。MTT法检测α细辛醚的安全药物浓度范围,设置3个浓度梯度(12.5、25.0、50.0 μg/μl) 干预模型细胞24 h。干预完成后,采用 Western blot法检测P-gp表达,Real-time PCR检测多药耐药基因1a(Mdr1a)mRNA扩增,罗丹明 123(Rh123)转运实验测定Rh123在脑微血管内皮细胞内的累积量变化,判断α细辛醚对P-gp功能的影响。结果 正常大鼠脑微血管内皮细胞经谷氨酸刺激后,P-gp(F=1.924,P=0.020)与Mdr1a mRNA(F=1.788,P=0.019)表达皆显著升高。25.0(F=1.924,P=0.025;F=1.788,P=0.017)、50.0 μg/μl(F=1.924,P=0.035;F=1.788,P=0.026)α细辛醚作用后,p-gp和Mdr1a mRNA的表达较模型组均显著降低。与模型细胞相比,25.0(t=6.085,P=0.000)、50.0 μg/μl(t=8.912,P=0.000)α细辛醚作用后,血管内皮细胞内Rh123皆显著升高,升高率分别接近40%和60%。结论 α细辛醚可以扭转谷氨酸诱导的大鼠脑微血管内皮细胞P-gp/Mdr1a的高表达,显著增加Rh-123在脑微血管内皮细胞内的蓄积。α细辛醚可能对P-gp介导的耐药性癫痫的耐药性具有一定扭转作用。     

人KIAA1173基因的克隆、转染及生物学特性的实验研究

目的 建立表达KIAA1173基因的鼻咽癌6-10B细胞模型,并观察转染细胞的生物学活性。方法 从新鲜肌肉组织中提取总RNA,采取逆转录PCR得到人KIAA1173基因cDNA。获得的人KIAA1173基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),进行酶切和序列鉴定。将重组质粒pcDNA3.1(+)-KIAA1173和空载体利用阳离子脂质体介导转入鼻咽癌6-10B细胞,经G418筛选阳性克隆。用RT-PCR、原位杂交及免疫细胞化学等方法检测KIAA1173基因在6-10B细胞中的稳定表达情况,并通过MTT法、肿瘤细胞侵袭实验及裸鼠体内成瘤性实验方法,检测KIAA1173基因对鼻咽癌细胞的增殖、侵袭及成瘤能力的影响。以空白质粒转染组作为对照。结果 在mRNA和蛋白水平证实,转染细胞内有KIAA1173基因的高表达,表明细胞可表达人KIAA1173基因。6-10B在转染了pcDNA3.1(+)-KIAA1173后,较转染空载体pcDNA3.1(+),肿瘤细胞的增殖能力、侵袭能力及裸鼠体内成瘤能力明显降低(P<0.05)。结论 结果提示KIAA1173基因可能是一鼻咽癌肿瘤抑制基因。获得生物学活性稳定的KIAA1173基因高表达的鼻咽癌细胞模型,为进一步研究奠定了基础。     

过表达DBHS家族基因可促进食管鳞癌细胞的迁移侵袭

目的 研究人类剪切蛋白(drosophila behavior human splicing,DBHS)家族基因,包括p5nrb、PSF、PSPC1基因,对食管鳞状细胞癌(以下简称食管磷癌)细胞系TE-8细胞系迁移、侵袭能力的影响。方法 构建p54nrb、PSF、PSPC1基因过表达载体,通过脂质体法转染TE-8细胞,转染48 h后qRT-PCR和Western blotting检测各组细胞p54nrb、PSF、PSPC1在mRNA和蛋白质水平的表达。细胞划痕实验及覆盖有Matrigel的Transwell小室检测食管鳞癌细胞的迁移、侵袭能力。结果 过表达p54nrb、PSF、PSPC1后,qRT-PCR和Western blotting检测证实食管鳞癌TE-8细胞中上述基因表达在mRNA水平和蛋白质水平均明显上调,细胞划痕实验及Transwell小室实验证实食管鳞癌TE-8细胞过表达p54nrb、PSF、PSPC1后,其迁移、侵袭能力增强。结论 过表达DBHS家族基因可促进食管鳞癌细胞的迁移侵袭。     

新基因LX3与白细胞介素-6诱导的相关性

目的 研究功能未知新基因LX3^[1]与白细胞介素-6(IL-6)的相关性,为研究IL-6的作用机制寻找新的靶基因。方法 反转录-PCR(RT-PCR)分析不同浓度IL-6处理的U937细胞及同一浓度IL-6诱导不同时间的U937细胞中新基因LX3的表达差异;NorthernBlot分析IL-6诱导前后U937细胞中新基因LX3表达的变化。结果 LX3基因在U937细胞中的表达量随IL-6诱导浓度的增加而增加,在IL-6浓度为500ng/ml时表达量最高,而在0ng/ml时不表达;时间表达谱分析显示在IL-6刺激8h时新基因LX3的表达量最高;Northern印迹分析显示新基因LX3在IL-6诱导后的U937细胞中的表达量明显升高。结论 LX3是与IL-6诱导紧密相关的新基因。     

反义mdr1对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨用反义技术抑制多药耐药基因1(Multidrug resistance gene 1,mdr1基因)对鼻咽癌细胞CNE放射敏感性的影响.方法:设立空白组、脂质体组(仅加入等量的脂质体)和mdr1正义寡核苷酸组作对照,用RT-PCR检测鼻咽癌细胞转染反义mdr1前后mdr1表达水平的变化.用集落形成试验检测各实验组照射后人鼻咽癌CNE细胞株的集落形成率,免疫组织化学法测定甲基鸟嘌呤甲基转移酶(Methylguanine-methyhransferase,MGMT)的表达.结果:mdr1反义寡核苷酸能有效抑制mdr1基因的表达.mdr1反义寡核苷酸 60Coγ射线照射组,其集落形成率较正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降,MGMT蛋白的表达也显著下调.与各对照组比较有显著差异(P<0.05).结论:mdr1反义寡核苷酸通过抑制mdr1基因降低了人鼻咽癌CNE细胞放射抗性.其辐射增敏作用可能与mdr1反义寡核苷酸下调照射后鼻咽癌细胞MGMT蛋白表达有关.     

高温合并化疗对耐药性大鼠肝癌CBRH-7919细胞多药耐药基因的影响

【目的】观察热化疗对多药耐药性CBRH-7919细胞MDR基因的影响。【方法】采用单纯化疗,单纯热疗及热疗联合化疗,分别作用于CBRH-7919及CBRH-7919mdr 1细胞。观察不同处理组细胞的存活率、mdr1mRNA及P-gp的表达情况。【结果】热化疗组细胞的存活率明显低于单纯加热组及单纯化疗组,同时热化疗组细胞mdr1mRNA的表达明显减低或消失,P-gp表达明显减低。【结论】热化疗可以使多药耐药细胞mdr1mRNA表达降低或消失,使P-gp表达降低,从而逆转了肿瘤细胞的多药耐药性,提高了化疗的敏感性。     

人鼻咽癌多药耐药细胞株CNE2/ADM的建立及生物学特性研究?

目的：建立人鼻咽癌多药耐药细胞株 CNE2/ADM,并研究其生物学特性。方法以人鼻咽癌细胞株 CNE2为亲本细胞,采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增法诱导建立多药耐药细胞株 CNE2/ADM。通过观察细胞形态学变化,药物敏感性试验,测定生长曲线、群体倍增时间、细胞周期及 P-糖蛋白(P-gp)功能和表达情况,评价CNE2/ADM 的生物学特性。结果与 CNE2细胞相比,CNE2/ADM 耐药细胞异形明显,并对 ADM 在内的4种化疗药物产生了耐药性,增殖速度减慢,群体倍增时间延长(P <0.05),G0/G1期细胞增多,S 期、G2/M 期细胞减少(P <0.05),P-gp 的药物泵出功能增强、表达水平升高。结论成功建立了人鼻咽癌多药耐药细胞株 CNE2/ADM,其具有典型的多药耐药表型,可作为进一步研究鼻咽癌多药耐药机制及筛选逆转剂较为理想的细胞模型。     

Retroviral-mediated transfer and functional expression of multidrug resistance gene in human placenta mesenchymal stem cells

Background Most of gynecologic malignancies are sensitive to chemotherapy. Myelosuppression is the main dose-related toxicity of many chemotherapeutic drugs. The human multidrug resistance （mdrl） gene is well known for its ability to confer drug resistance. This study aimed to explore the feasibility of expression and resistance of mdrl gene transduction into human placenta mesenchymal stem cells （P-MSCs） by retrovirus vector. Methods Human P-MSCs were isolated from trypsin-digested term placentas, and their immunophenotypes and differentiation potential were evaluated. Human P-MSCs were transduced by reconstructed retroviral vector containing the mdrl gene and green fluorescent protein （GFP） reporter gene. The integration and expression of the mdrl gene were observed indirectly by the expression of GFP, and fluorescence-activated cell sorter was used to evaluate the functional activity of permeability glycoprotein （P-gp） encoded by the mdrl gene. The stimulating test was made in vitro to show pleiotropic drug resistance of transfected cells. Results The isolated, cultured and expanded P-MSCs expressed stem cell markers such as CD29, CD44 and CD73, and showed osteogenic and adipogenic differentiation potentials under appropriate conditions. The expression of P-gp in the non-transfected P-MSCs cells was （0.4±0.1）%, but increased to （28.1±4.7）% after gene transfection （P〈0.01）. And positive staining of P-gp located mainly at cell membrane and cytoplasm. Accumulation and extrusion assays showed that P-gp expressed by the transfected cells had pump-functional activity and could efflux daunomycin out of cells. The analysis of cell survival confirmed that transfected P-MSCs had a characteristic of multidrug resistance with a significant increase in the resistance to anticancer agents. Conclusions Transfer and expression of human mdrl gene mediated by retrovirus vector conferred P-MSCs drug resistance. It might provide a new alternative to chemoprotection strategies.     

Y-盒结合蛋白1对白血病K562细胞多药耐药基因-1表达的调控

目的:观察多柔比星诱导K562细胞多药耐药基因-1(mdr1)基因表达过程中Y-盒结合蛋白1(YB-1)表达和核易位的变化情况,初步探讨YB-1蛋白对mdr1基因的转录调控。方法:多柔比星间歇性长期作用于K562细胞,剂量逐渐增加。RT-PCR检测mdr1,YB-1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gp)表达,蛋白质印迹检测YB-1蛋白核易位。通过RNA干扰技术使K562细胞中YB-1基因表达沉默,多柔比星处理YB-1基因沉默细胞,RT-PCR、流式细胞仪分别检测mdr1 mRNA和P-gp的表达。结果:经多柔比星作用后K562细胞mdr1基因转录上调,P-gp表达增加,同时YB-1基因转录也增强,且出现明显的核易位。YB-1基因沉默后,mdr1基因诱导性表达减少。结论:多柔比星诱导K562细胞mdr1基因表达的过程中,YB-1对于mdr1基因的转录活化起一定的作用。     

白藜芦醇对缺氧环境中鼻咽癌细胞株CNE2的化疗增敏作用

目的：观察缺氧环境下白藜芦醇（resveratrol,Res）提高人鼻咽癌细胞株CNE2对化疗药物敏感性的作用并探讨其机制。 方法：将不同浓度白藜芦醇加入化疗药物干预过的CNE2中,低氧培养48 h,甲基噻唑基四唑法检测CNE2中白藜芦醇对化疗药物的逆转倍数,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,应用反转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测CNE2细胞中多药耐药相关基因1（multidrug resistance gene 1,mdr1）、多药耐药相关蛋白1（multidrug resistance-associated protein 1,MRP1）和缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）mRNA和蛋白水平的表达变化。 结果：缺氧环境下白藜芦醇对化疗药物具有协同增效作用,200 μmol/L白藜芦醇对紫杉醇的逆转倍数为2.58。25、50、100和200 μmol/L白藜芦醇与紫杉醇合用,使紫杉醇诱导的CNE2细胞凋亡增加,且表现出明显的浓度依赖效应。此外随着白藜芦醇浓度的增加,mdr1、MRP1和HIF-1α的表达显著降低,加用白藜芦醇组与不加白藜芦醇组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。 结论：白藜芦醇可以通过下调核转录因子HIF-1α及多药耐药相关基因mdr1、MRP1的表达提高缺氧环境中鼻咽癌细胞株CNE2对化疗药物的敏感性。     

The role of c-myc in regulating mdr1 gene expression in tumor cell line KB

Ｔｈｅｃ ｍｙｃｐｒｏｔｏ ｏｎｃｏｇｅｎｅｐｌａｙｓａｒｏｌｅｉｎｍａｎｙｃｅｌｌｕｌａｒｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ,ｓｕｃｈａｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ,ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｉｔｉｓａｎｅａｒｌｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｇｅｎｅｎｅｃｅｓｓａｒｙｆｏｒｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ (Ｇ1 Ｓｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ)ａｎｄａｃｔｉｖａｔｅｓｑｕｉｅｓｃｅｎｔｃｅｌｌｓｉｎｔｏｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅ (Ｇ0 Ｇ1ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ) Ｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃ …     

多药耐药基因1与肝癌

目前认为肝癌化疗失败的主要原因与多药耐药有关,而多药耐药基因1(Multi-drug resistance 1gene,mdr1)编码的P-gP蛋白(Permeability-glycoprotein)被认为可能是参与肿瘤多药耐药的主要因素之一.目前的研究发现,mdr1参与肝癌的多药耐药可能与多种机制有关,而且mdr1...     

RNA干扰mdr1对尤文氏肉瘤细胞放射敏感性的影响

目的探讨利用RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术抑制多药耐药基因1(multidrug resistance gene1,mdr1基因)对尤文氏肉瘤细胞放射敏感性的影响。方法设立空白组、脂质体组(仅加入等量脂质体)、mdr1RNA干扰组作对照,用RT-PCR检测尤文氏肉瘤细胞转染shRNA前后mdr1的表达水平变化。用集落形成试验检测各实验组照射后人尤文氏肉瘤细胞株的集落形成率。AO/EB荧光检测法检测细胞凋亡率的变化。流式细胞仪测定P-gp的表达。结果mdr1基因的shRNA能够有效抑制mdr1基因的表达。经过RNAi的放射治疗组,其集落形成率较对照组明显下降,MGMT的表达也下调,差异有统计学统计学意义(P<0.05)。结论 RNAi技术抑制mdr1的表达,降低了尤文氏肉瘤细胞的放射抗性,其辐射增敏作用可能与抑制mdr1基因表达后P-gp的表达下调有关。     

不同分化程度鼻咽癌细胞化疗药物作用后放射敏感性的变化

目的 检测鼻咽高分化鳞癌细胞系CNE1和低分化鳞癌细胞系CNE2细胞化疗药物作用后放射敏感性的变化。方法 对CNE1和CNE2细胞以及经阿霉素作用后的细胞射线照射，应用集落形成实验方法绘制细胞存活曲线，得出放射生物学参数，比较化疗药物作用后细胞放射敏感性的变化。结果 CNE1细胞化疗药物作用后放射敏感性增高；而CNE2细胞化疗药物作用后放射敏感性降低。结论临床上对中晚期鼻咽癌的治疗应根据其不同病理类型考虑个体化治疗方案。