实时荧光PCR技术在手足口病检查中的应用

目的采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)法检测手足口病患儿病原体。方法收集433例疑似手足口病患儿的粪便标本进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型(EV-71)和柯萨奇病毒16型(CA-16)鉴别与分析。结果实时荧光PCR法检测433例患儿肛拭子标本使用通用型试剂盒检出366例阳性,其中66例为EV-71感染,151例为CA-16感染。结论 EV-71和CA-16肠道病毒是手足口病的主要病原体,该地区2011年以CA-16感染为主,实时荧光PCR技术对手足口病的病原诊断具有重要价值。     

荧光定量RT—PCR检测手足口病病原及其临床分析

【目的】采用荧光定量RTPCR法检测手足口病患儿病原,并对手足口病临床特点分析。【方法】利用荧光定量PCR核酸检测试剂盒对,临床诊断手足口病的咽拭子、粪便标本32份进行总肠道病毒和EV71、CoxA16检测,并对所致的临床特点分析。【结果】在32份样本中,肠道病毒通用核酸阳性22份,肠道EV71病毒核酸阳性10份,其他肠道病毒核酸阳性12份,无CoxA16核酸阳性;EV71与其他肠道病毒的早期临床特点和辅助检查结果基本相同。【结论】荧光定量RT-PCR法可早期对手足口病的病原学诊断,不同病原早期临床特点和辅助检查结果基本相同。     

实时荧光RT-PCR快速检测肠道病毒RNA及其临床意义

目的应用实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法快速检测肠道病毒RNA,为手足口病的早期诊断提供临床依据。方法采用实时荧光RT-PCR法检测手足口病患儿粪便、脑脊液中肠道病毒通用型、柯萨奇病毒A组16(CA16)和肠道病毒71型(EV71)RNA。结果 234份粪便标本中肠道病毒通用型阳性214例,检出率为91.45%;CA16阳性56例,阳性率为23.50%;EV71阳性87例,阳性率37.17%,其中有4例同时检出CA16和EV71。2份脑脊液标本中3种肠道病毒核酸结果均为阴性。结论实时荧光RT-PCR能对肠道病毒RNA进行快速检测,为手足口病的早期诊断提供诊断依据,并对手足口病患儿的病情分析、治疗及预后观察起到指导作用。     

广西壮族自治区南宁市50例非手足口病幼儿肠道病毒感染状况分析

目的了解肠道病毒在非手足口病幼儿中的感染情况,为预防控制手足口病在儿童中的流行提供依据。方法采用实时荧光定量PCR方法,对50例≤3岁儿童的肛拭子标本共50份进行肠道病毒、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxA16)核酸检测。结果共检出17份肠道病毒核酸阳性,阳性率为34%,均为其他肠道病毒。结论健康儿童中存在其他肠道病毒的隐性感染。开展手足口病流行病学和病原学研究,将有助于提出更好的预防和控制措施。     

2012～2013年杭州市萧山区手足口病病原谱及临床特征分析

目的：了解杭州市萧山区手足口病（H FM D ）病原谱及临床特征。方法采用荧光定量反转录聚合酶链反应,对2012年5月至2013年7月就诊的208例H FM D疑似患儿咽拭子标本（45份）和粪便标本（208份）进行病原体检测,结合患儿临床资料分析检测结果。结果208例患儿中,肠道病毒（EV ）检出率为83．17％,其中EV71、柯萨奇病毒A16（CoxA16）和其他EV亚型所占比例分别为55．49％、13．29％和31．21％;男、女性患儿EV检出率比较差异无统计学意义（P＞0．05）。5岁及其以下患儿以EV71感染为主,5岁以上患儿以其他EV亚型感染为主。HFMD患儿临床症状主要为发热伴疱疹,各种类型临床症状患儿均以EV71感染为主。粪便标本EV检出率高于咽拭子标本（P＜0．05）。结论 EV71和其他EV亚型是该地区 HFMD患儿常见病原体,CoxA16感染流行趋势有所下降。加强EV、EV71和CoxA16检测有助于 HFMD的预防和控制。     

肠道病毒71型感染手足口病患儿的肠道排毒时间及传播机制的初步探讨

目的 探讨肠道病毒71型(EV71)感染手足口病患儿的肠道排毒时间及传播机制,为科学防控手足口病提供参考. 方法 采集咽拭子或粪便标本用实时荧光定量反转录聚合酶链反应法进行病毒核酸检测,对实验室确诊的65例EV71感染手足口病患儿进行追踪和随访,直至患儿大便病毒转阴为止.同时调查与58名EV71核酸阳性患儿有密切接触史家庭成员(每位患儿2名)116人,其中36人采集咽拭子,80人采集粪便标本.采集手足口病病区医务人员粪便标本31人,其中医生10人,护士21人. 结果 25例普通型EV71感染患儿第1~6周大便病毒核酸阳性率分别为100%、88.4%、59.4%、22.3%、22.3%、0,持续最长时间为6周.40例EV71重症组患儿第1～10周大便病毒核酸阳性率分别为100%、97.0%、79.5%、60.6%、35.3%、25.2%、16.8%、16.8%、8.4%、0,持续最长时间为10周.31名医务人员粪便未检出EV71及柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)核酸.80名有患儿密切接触史人员中,22份粪便标本EV71核酸阳性,占27.5%;36份咽拭子标本除1例EV71核酸阳性其余均阴性,阳性者均无自觉症状. 结论 EV71感染手足口病患儿恢复期肠道排毒时间长,成为隐性感染者,易造成手足口病流行和传播.建议延长手足口病患者,特别是重症手足口病患者管理时限.EV71感染手足口病患儿家庭成员易成为隐性感染者,可造成手足口病传播.     

实时荧光定量PCR技术检测患儿手足口病病原体

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术检测患儿手足口病原体,以了解本地该病病毒流行特征,为防治手足口病提供病原学诊断依据。方法收集手足口病疑似病例65例（按年龄组分为小于3岁组39例,3~6岁组26例）患儿的咽拭子、疱疹液,用FQ-PCR技术检测标本中肠道病毒通用型（EV）、肠道病毒71型（EV71）及柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）,并与ELISA法进行比较。结果 65例手足口病患儿疑似组FQ-PCR检出EV阳性51例,阳性率为78.5%,其中小于3岁34例,3~6岁阳性17例,小于3岁组EV检出率明显高于3~6岁组（P〈0.05）;EV71阳性45例,COXA16阳性16例;咽拭子标本阳性率为72.3%（47/65）;疱疹液标本阳性率为81.25%（13/16）;ELISA法检测EV阳性29例,阳性率为44.6%（29/65）,CoxA16阳性22例,阳性率为33.8%（22/65）。结论采用FQ-PCR技术进行手足口病病原体检测有助于早期、快速的对手足口病做出病原学诊断。2012年安康地区手足口病病原体以EV71为主,CoxA16次之。     

2009-2010年江苏省徐州市儿童手足口病病原学检测分析

目的了解江苏省徐州地区2009-2010年儿童手足口病流行的病原学特征。方法 2009年3-8月和2010年1-12月共采集徐州儿童医院门诊、住院及常规监测的511例疑似手足口病(HFMD)儿童患者的咽拭、肛拭标本,提取病毒RNA,用实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法同时进行肠道病毒(EV),肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16(Cox A16)的特异性基因检测。结果 511例疑似手足口病患儿的标本中,总肠道病毒阳性288例,占56.36%;288个肠道病毒核酸阳性病例中,EV71核酸阳性202例,Cox A16核酸阳性55例,构成比分别为70.14%和19.10%。≤5岁儿童感染的肠道病毒有EV71型、Cox A16型及非EV71非Cox A16的其他肠道病毒感染,>5岁儿童则只有EV71感染病例。结论 2009-2010年徐州地区儿童手足口病患儿以1～3岁儿童为主,其主要病原是肠道病毒EV71型,其次是Cox A16型。     

某地区2010年手足口病患者肠道病毒RNA实时荧光逆转录PCR检测结果分析

目的用实时荧光定量RT-PCR技术检测惠州市2010年手足口病患者肠道病毒RNA,了解手足口病病例肠道病毒的感染情况,为制定预防和控制肠道病毒感染策略提供依据。方法采集2010年1～12月本院送检的1712例手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子和脑脊液等标本5849份,应用荧光RT-PCR技术检测样本中的肠道病毒(EV)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)。结果男性及女性EV、EV71和CA16感染率分别为68.15%、43.61%、5.56%和61.23%、37.03%、5.70%;共检出1123份EV阳性标本,705份EV71阳性标本,96份CA16阳性标本,阳性率分别为60.28%、33.35%和5.13%;4～6月和7～9月是手足口病发病高峰期,感染肠道病毒EV、EV71型、CA16型人数分别占所有肠道病毒EV、EV71、CA16型感染者的36.33%、49.50%、42.70%和42.56%、38.72%、40.63%;0～4岁的儿童是手足口病的高发人群,占所有患者的85.46%。结论惠州市2010年手足口病的病原以肠道病毒71型为主,夏秋季节是手足口病发病高峰期,0～4岁儿童是感染肠道病毒的高危人群。     

西安地区儿童手足口病病原学分析

目的 对西安地区手足口病病原学进行分析调查,为手足口病防治提供科学依据.方法 采集2010年5月～6月432例临床诊断为手足口病患儿咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法检测肠道病毒通用型（EV）、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CA16）.结果 EV阳性率82.87%（358/432）,EV71阳性率25.93%（112/432）,CA16阳性率21.06% （91/432）,EV71阳性率与CA16阳性率比较差异无统计学显著性意义（χ2=2.84,P〉0.05）.22例重症患者11例由EV71引起,2例由CA16引起.结论 西安地区手足口病病原以EV71和CA16多见,高发于4岁以下儿童,重症患者主要由EV71引起.     

2012年杭州地区手足口病病原体流行特征分析及临床意义

目的对2012年4月至9月手足口病（HFMD）流行期间对449例HFMD患儿的临床特点及病原学流行特征进行分析,旨在为手足口病的防治工作提供依据.方法收集449例手足口病患儿资料,用荧光定量RT-PCR法进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CA16）定量分型.结果449例HFMD临床诊断病例中,肠道病毒通用型阳性数为331例,包含203例EV71型和109例CA16型,肠道病毒总阳性率为69.5%（331/476）,其中EV71占42.6%（203/476）,CA16占22.9%（109/476）,EV71/CA16两者兼有者占3.8%（18/476）,非EV71、CA16的其他肠道病毒占4.6%（22/476）.2012年送检标本中EV71与CA16检出率的差异无统计学意义（χ^2=1.432,P=0.231）.结论2012年HFMD患儿以EV71型和CAl6型流行为主.而重症手足口病多发生于年龄〈3岁的儿童,且重症患儿基本为EV71型感染.故小年龄组HFMD患儿应成为HFMD流行期间重点监测对象,并给予积极治疗,以防止成为重症HFMD患儿,从而降低重症HFMD病死率.     

EV71病毒载量与手足口病病情严重程度的相关性

目的：探讨肠道病毒71型（EV71）手足口病患儿病毒载量拷贝数与病情轻重程度的关系。方法收集2013年5月至7月实验室确诊为EV71型手足口病患儿154例,其中重症109例,普通型45例。采集患儿的咽拭子标本,用荧光定量RT-PCR法进行肠道病毒71型（EV71）病毒核酸定量检测。比较分析重症EV71手足口病患儿与普通型EV71手足口病患儿咽拭子病毒载量的差异;同时比较两组患儿在年龄、性别、高热天数及体温峰值上的差异。结果重症EV71手足口病患儿与普通型EV71手足口病患儿在病毒载量方面差异无统计学意义（P〉0.05）;在高热天数及体温峰值方面差异无统计学意义（P〉0.05）;而在性别和年龄方面差异有统计学意义（P〈0.05）。结论在EV71型手足口病患儿中,病毒载量拷贝数与病情轻重程度无关;患儿发热持续时间及发热程度与病情轻重程度无关;而小年龄、男性患儿更易发生重症手足口病。     

西安地区2011年儿童手足口病病原学分析

目的 对西安地区2011年手足口病病原学进行分析,为手足口病的临床诊断、治疗及防治提供科学依据.方法 采集2011年1月～6月555例(其中男性347例,女性208例,年龄范围8个月～6岁,平均年龄2.6岁)西安市儿童医院临床诊断为手足口病患儿咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法检测肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16).结果 56例重症患者其中45例由肠道病毒71型(EV71)引起,占重症病例的80.4％(45/56),4例由柯萨奇病毒A组16型(CA16)引起,占重症病例的7.1％(4/56).肠道病毒71型(EV71)阳性率与柯萨奇病毒A组16型(CA16)阳性率差异有统计学显著性意义(x2=273.4,P＜0.0001).结论 西安地区2011年手足口病病原学以肠道病毒71型(EV71)为主,与2010年相比肠道病毒71型(EV71)感染有上升趋势,且高发于3岁以下儿童组,重症患者与2010年相同,主要由肠道病毒71型(EV71)引起.     

2008-2011年辽宁省锦州市手足口病病原监测结果分析

目的 了解辽宁省锦州地区手足口病的病原学特征及变化趋势,为手足口病防治工作提供参考依据。 方法 日常监测工作中收集2008-2011年锦州地区294例手足口病临床确诊患儿的330份样本检测结果,其中咽拭子274份,粪便标本56份,进行病原学检测。 结果 294例被检测患儿中246例为肠道病毒阳性,阳性率为83.67％,其中肠道病毒71型(EV71)阳性率30.61%,柯萨奇A组16型(Cox A16)阳性率32.31%,EV71、Cox A16混合感染阳性率0.34%,其他肠道病毒阳性率20.41%。330份标本中咽拭子阳性率82.12％(225／274),粪便阳性率71.43%(40/56)。2008-2011年病例的咽拭及粪便标本采用不同检测方法、不同试剂的阳性检出率差异无统计学意义(P﹥0.05)。 结论 锦州市儿童手足口病病原体以EV71和Cox A16为主,每年略有不同,近年其他肠道病毒感染率逐年增高。手足口病患者的咽拭和粪便标本的阳性检出率无差异。     

粤东地区2011年手足口病病原学检测及临床分析

目的 了解粤东地区2011年婴幼儿手足口病的病原体分型情况及其与临床的关系.方法 采集2011年1月至12月汕头大学医学院第二附属医院儿科手足口病住院患儿的咽拭子标本,RT-PCR检测肠道病毒71型（EV71）,柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）,肠道病毒属,并对扩增产物测序鉴定.结果 301例患儿中有214例咽拭子中检测到肠道病毒,病毒阳性率为71.1%,其中EV71 60例,占28.0%,CoxA16 108例,占50.5%,除EV71、CoxA16外的其他型别肠道病毒为46例,占21.5%;91例患儿有明显神经系统损害,其中33例EV71检测阳性（33/60,55.0%）,35例CoxA16检测阳性（35/108,32.4%）,8例除EV71、CoxA16外其他型别肠道病毒检测阳性（8/46,17.4%）,15例肠道病毒检测阴性.除1例由EV71引起的的危重型手足口病死亡外其余300例均痊愈出院.结论 粤东地区2011年手足口病病原体主要为CoxA16、EV71,但CoxA16已经成为当年优势病原体,其他型肠道病毒也占有一定比率.而EV71最容易引起神经系统损害和导致重症及危重症,EV71、CoxA16及其他型肠道病毒均可引起神经系统损害.     

肠道病毒71型与其他肠道病毒所致的手足口病临床特点差异研究——附37例分析

目的：探讨肠道病毒71型（entervirus 71,EV71）与其他肠道病毒所致的手足口病临床特点的差异。方法：收集37例手足口病患儿的临床资料,根据病原学筛查结果分为EV71感染组（28例）和其他肠道病毒感染组（9例）,比较2组的发热情况、出疹情况、主要实验室检查指标以及并发症发生情况的差异。结果：2组患儿均有发热,EV71感染组的热程较长,体温峰值较高（P〈0．05）。EV71感染组以手、足为首发出疹部位23例（82％）、以细小粟粒疹为主22例（79％）,其他肠道病毒感染组则分别为3例（3／9）、3例（3／9）;EV71感染组以手、足为首发出疹部位及以细小栗粒疹为主的患儿所占比例均比其他肠道病毒感染组高（均为P〈0．05）。2组的外周血白细胞计数、血糖、CK—MB、乳酸脱氢酶及CD4^＋／CD8^＋比值比较差异无统计学意义。2组的呼吸系统并发症发生率、中枢神经系统损害发生率相当。结论：与其他肠道病毒所致的手足口病比较,EV71感染所致的手足口病热程更长,体温峰值更高,多以手、足为首发出疹部位,且皮疹以细小粟粒疹为主,这些临床特点差异有助于临床医师在手足口病流行期进行病原学鉴别。     

2012年江西省南昌市手足口病病原学监测结果分析

目的 分析江西省南昌市2012年临床诊断为手足口病患者标本的病原学检测结果,为手足口病的临床诊治和防控提供实验室依据。方法 采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（real time RT-PCR）对2012年1-12月间1028例医院诊断为手足口病的患者标本核酸进行鉴定分型,并统计分析。结果 临床诊断为手足口病的患者标本1028 份中,632 份为肠道病毒通用阳性,总阳性率为61.48%,其中肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）、EV71 和 Cox A16 混合感染、其他肠道病毒阳性检出率分别为39.0%、10.21%、0.09%和12.16%。病原学检测阳性标本中男女性别比为1.8:1;发病年龄段主要集中在5岁以下儿童（94.36%）,尤其是 3 岁以下男童。结论 2012年南昌地区手足口病的主要病原体为EV71,且较2009-2011年有上升趋势。     

手足口病1073例病原检测分析

目的分析手足口病低龄儿童病例的肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CA16）的感染状况。方法采集手足口病（HFMD）疑似病例咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR方法检测患者EV71和CA16感染情况,并分析患者性别、年龄分布情况。结果收集到1 073例HFMD儿童疑似病例的咽拭子标本和临床资料,EV71男女总的阳性检出率为46.04%,CA16男女总的阳性检出率为9.04%。结论本次北京地区HFMD疫情的主要病原体包括EV71和CA16,EV71感染率高于CA16,分析结果可为HFMD防治提供参考。     

手足口病相关肠道病毒感染血清IgM抗体交叉反应及动态变化

目的分析手足口病相关肠道病毒间IgM抗体交叉反应及动态产生过程,评价抗体捕获法检测肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A组16型(CA16)感染的早期诊断价值。方法收集广州市妇女儿童医疗中心319名手足口病患者及疑似患者咽拭子319份、血标本565份。荧光定量PCR检测咽拭子标本,血清中和试验检测配对血清,结合两法结果为判断标准,将手足口病患者分为EV71、CA16及其他肠道病毒感染组;以捕获ELISA法检测不同发病时间EV71-IgM抗体及CA16-IgM抗体。结果发病第一天均能检测出EV71-IgM抗体及CA16-IgM抗体,阳性率分别为33.0%和25.0%,检出率分别在第5天和第7天达到100%,抗体可持续检出时间达数月。EV71感染血清CA16-IgM捕获ELISA法交叉反应率为25.0%,CA16感染血清EV71-IgM捕获ELISA法交叉反应率为28.0%。EV71-IgM和CA16-IgM抗体存在严重交叉反应,通过两者450 nm处吸光度(A450 nm)比值可以成功诊断97.1%EV71感染和93.0%CA16感染。同一天采集的肛拭子及血清标本检测结果表明,荧光定量PCR与ELISA法诊断EV71及CA16感染的结果差异无统计学意义。结论 EV71及CA16抗体捕获ELISA法是一种简单、有效的诊断方法,联合两种方法检测可以有效提高诊断特异性。     

手足口病患儿病毒型别及与肌酸激酶同工酶的关系

手足口病是由多种肠道病毒感染引起的临床症候群,引发手足口病的肠道病毒有20多种（型）,其中以柯萨奇病毒A16型（Cox A16）和肠道病毒71型（EV 71）最常见。多数患儿临床表现较轻,少数重症患儿出现中枢神经系统、呼吸系统损害,引起心肌炎、肺水肿等症状。各地区手足口病病毒型别差异较大,而且同一地区不同季节差异也很大,