p33ING1b基因对人结肠癌细胞SW480生物学行为的影响

目的:构建pcDNA3.1( )/p33ING1b真核表达载体及观察其对人结肠癌细胞SW480生长的影响。方法:构建人p33ING1b真核表达载体,采用脂质体转染方法,将pcDNA3.1( )/p33ING1b转染人结肠癌细胞系SW480,G418筛选,挑选阳性克隆,阳性克隆经RTPCR及Westernblot鉴定后,通过生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测高表达p33ING1b基因的SW480细胞体外增殖情况,并用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变。结果:成功构建重组pcDNA3.1( )/p33ING1b基因的真核表达载体,建立高表达p33ING1b基因的SW480细胞系,p33ING1b基因在SW480细胞中高表达后,其生长速度减慢,细胞凋亡率(15.4±1.7)%较空载体组(2.0±0.6)%及未转染组(1.6±0.8)%明显升高。结论:p33ING1b基因高表达对SW480细胞系具有生长抑制和促进凋亡的作用。     

p33ING1b对鼻咽癌细胞HNE1增殖的影响

背景与目的：作为ING1的一种主要表达产物，p33^ING1b蛋白结合和稳定p53后诱导肿瘤细胞周期阻断或引起细胞凋亡。本研究通过建立高表达p33^ING1b的鼻咽癌细胞HNE1模型，探讨p33^ING1b对鼻咽癌细胞增殖影响及分子作用机制。方法：利用脂质体介导转染HNE1细胞，RT—PCR法筛选p33^ING1b高表达的阳性克隆，绘制生长曲线检测细胞增殖速度，免疫组化法检测细胞中p53的表达分布，流式细胞术检测细胞周期，Western blot法检测p53、p21、Stat3、C-myc和Cyclin D1蛋白水平。结果：转染ING1后p33^ING1b表达水平显著升高，HNE1细胞增殖能力受到抑制，出现G0／G1期的阻滞、S期比例下降。细胞中Stat3、C—myc和CyclinD1表达水平显著降低，p53与p21表达水平上升。结论：p33^ING1b可能通过促进HNE1细胞中p53和阻断Stat3两种不同信号传导通路抑制鼻咽癌细胞的增殖。     

p33ING1b增强骨肉瘤细胞U2OS对足叶乙甙的敏感性

背景与目的作为一个新的抑癌基因,ING1与p53有许多相似的生物学功能,如细胞生长抑制、DNA修复、凋亡和化疗敏感性等.本实验目的在于研究p33ING1b对骨肉瘤细胞药物敏感性的影响并探讨其作用机制.方法瞬时转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,用足叶乙甙(etoposide,VP-16)处理24 h,然后采用台盼蓝拒染法计数活细胞数并计算细胞生长抑制率,流式细胞仪、DAPI染色等方法检测细胞凋亡率,Western blot技术检测p53、p21WAF1、MDM2和Bax蛋白的表达.结果台盼蓝染色结果表明,瞬时转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,再用VP-16处理24 h,细胞生长抑制率明显增加[(63.1±5.1)%].流式细胞计数和DAPI染色检测结果表明,细胞凋亡率明显增加(62.7%).Western blot检测结果显示,外源性p33 ING1b高表达明显提高了p53及其下游基因p21WAF1和Bax蛋白的表达水平,转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,再用VP-16处理24 h,p53、p21和Bax蛋白表达增加.在各实验组中,MDM2的蛋白表达没有明显变化.结论p33ING1b能够上调p53蛋白,并上调p53下游因子--p21WAF1和Bax的表达水平,通过p53依赖性凋亡信号通路,提高骨肉瘤细胞U2OS对VP-16的敏感性.     

肿瘤抑制蛋白p33ING1b在消化系统肿瘤中的研究进展

肿瘤抑制蛋白p33ING1b为生长抑制基因-1(ING1)的主要表达产物,它在细胞增殖和细胞周期调控、细胞衰老、DNA损伤修复、细胞凋亡和核染色质重塑中发挥重要作用。其表达异常与肿瘤的发生发展密切相关。本文就肿瘤抑制蛋白p33ING1b在消化系统肿瘤中的研究进展做一综述。     

p33ING1b在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究p33ING1b在非小细胞肺癌(non_small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其与p21WAF1蛋白表达的关系;探讨p33ING1b在NSCLC发生、发展中的可能作用机制。方法用免疫组化S_P法检测p33ING1b在61例NSCLC和13例正常肺组织中的表达,以及p21WAF1在61例NSCLC组织中的表达。结果p33ING1b在NSCLC组织中阳性率低于正常肺组织,差异有统计学意义(P<0.01)。p33ING1b低表达与肺癌的分化、分期及淋巴结转移均有关。p33ING1b与p21WAF1表达呈正相关(P<0.01)。结论p33ING1b在NSCLC中低表达,它的低表达对判断NSCLC恶性程度、浸润甚至转移有重要价值;p33ING1b的低表达使p21WAF1下调在NSCLC发生、发展中可能起重要作用。     

非小细胞肺癌中p33ING1b表达的临床及生物学意义

目的:探讨p33ING1b的表达与非小细胞肺癌(Non-smallCellLungCarcinoma,NSCLC)临床病理特征的关系及其在NSCLC发生、发展中的可能作用机制。方法:用免疫组化SP法检测NSCLC和非肿瘤肺组织中p33ING1b的表达及NSCLC组织p21WAF1和Bax中的表达。结果:p33ING1b在NSCLC组织中表达率显著低于非肿瘤肺组织(P<0.01)。p33ING1b低表达与肺癌的分化、分期及淋巴结转移有关。p33ING1b的表达率在低分化组(30.77%)显著低于高分化组(80.95%)、中分化组(71.43%)(P均<0.05)。在Ⅲ期和有淋巴结转移组的表达率显著低于Ⅰ～Ⅱ期和无淋巴结转移组(P均<0.01)。p33ING1b与p21WAF1表达呈正相关(P<0.01)。结论:1)p33ING1b在NSCLC中低表达,它的低表达对判断NSCLC恶性程度、浸润甚至转移有重要价值。2)p33ING1b的低表达使p21WAF1下调在NSCLC发生、发展中可能起重要作用。     

胰腺癌中p33ING1b基因变化及其表达研究

目的检测胰腺癌中p33ING1b蛋白表达及基因变化情况,以了解p33ING1b在肿瘤发生过程中的作用.方法采用免疫组化、聚合酶链反应单链构象多态性技术(PCR-SSCP)和杂合型缺失(LOH)技术,检测胰腺癌中p33ING1b表达及p33ING1b基因变化情况.结果ING1b蛋白的阳性表达率为85%(34/40),SSCP显示在40例病例中仅1例突变,LOH率为60.9%(14/23).结论突变与缺失表达并不是p33ING1b的主要失活形式,染色体改变可能导致p33ING1b功能下降,从而引发肿瘤发生.     

p33^（ING1）基因和MVD在乳腺癌中的表达及其意义

目的探讨p33ING1基因、MVD在乳腺癌中表达的意义及其相互关系。方法应用Envision免疫组化法对115例乳腺癌标本进行p33ING1基因和MVD表达检测。结果p33ING1在乳腺癌的阳性表达率为61.7%,与肿瘤浸润分化程度、淋巴结转移及激素受体呈明显负相关。MVD与肿瘤组织学分级及腋下淋巴结转移呈明显正相关,与肿瘤的大小、年龄及激素受体状况无相关性。结论p33ING1阴性者MVD表达明显高于p33ING1阳性者,呈负相关,p33ING1的过度表达及MVD的减少共同参与了抑制细胞生长、促进细胞凋亡的过程。     

肝癌组织中p33ING1b表达水平及其与p53关系和临床意义

目的 探讨肝癌组织中p33ING1b表达水平及其与p53的关系和临床意义.方法 用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测55例肝癌及其癌旁组织p33ING1bmRNA水平,同时用免疫组化法检测p53蛋白表达.结果 肝癌组织p33ING1bmRNA表达量为(0.410±0.175),明显低于癌旁组织(0.529±0.203)(P<0.05).p33ING1b表达与肝癌的病理分级、淋巴结转移、包膜浸润相关,而与年龄、性别、肿瘤大小、癌栓形成、合并肝硬化无关.p53蛋白阳性肝癌组p33ING1b表达(0.492±0.196)明显高于p53蛋白阴性组(0.363±0.176)(P<0.05).结论 p33ING1b表达下调在肝癌发生、发展中起重要作用,可以作为肝癌分化、侵袭性及预后的评价指标.p33ING1b表达异常可能是野生型p53在肝癌细胞的失活机制之一.     

人突变p27基因转染对大肠癌SW480细胞黏附作用的影响

目的研究人突变p27基因p27mt对大肠癌细胞黏附作用的影响，探讨p27mt基因在大肠癌转移中的作用机制。方法用Ad—p27mt转染大肠癌细胞SW480，采用Westeill：Blot，检测p27mt在SW480中的表达。分别采用细胞计数法，MTT法检测p27mt对大肠癌细胞同质黏附作用和异质黏附作用的影响。结果转染Ad—p27mt SW480细胞转染后，同质黏附作用高于对照，异质黏附作用低于对照。结论上调p27mt基因的表达，可使大肠癌细胞间的同质黏附作用增强，异质黏附作用降低。因此，p27mt基因具有抑制大肠癌细胞转移的功能，其机制是改变了细胞基质及细胞间的黏附能力。     

芬太尼对结肠癌细胞株SW480增殖及侵袭的影响

目的：探讨不同浓度的芬太尼对结肠癌细胞株 SW480增殖和侵袭的影响。方法：选用不同浓度的芬太尼（0．5、5、50ng／ml）干预结肠癌细胞株 SW480,采用四甲基偶氮唑蓝（MMT）法检测细胞增殖,Transwell法测定细胞侵袭。结果：各组芬太尼孵育 SW480细胞48h 及72h 后,均能显著抑制细胞的增殖（P ＜0．05）,且呈浓度和时间依赖性。芬太尼孵育 SW480细胞48h,与对照组相比,各浓度组均浓度依赖性抑制凋亡（P＜0．05）。结论：芬太尼可抑制结肠癌细胞株 SW480的增殖及侵袭。     

干扰素诱导跨膜蛋白1协同干扰素抑制结肠癌细胞增殖

目的：研究干扰素诱导跨膜蛋白1(interferon induced transmembrane protein 1,IFITM1)协同干扰素对结肠癌细胞株SW480增殖的影响。方法：将IFITM1基因亚克隆到真核表达载体pEGFP-C3,IFITM1/pEGFP-C3重组质粒转染结肠癌细胞株SW480,G418 500mg/L筛选阳性克隆细胞。激光共聚焦显微镜及RT-PCR检测IFITM1的表达。实验设pEGFP- C3/SW 480组、IFITM1/SW 480组、IFITM1/anti-IFITM1/SW 480、空白组,除空白组外,每组加入IFN_(-α) 1000 U/mL。MTT检测细胞的增殖性。结果：IFITM1/pEGFP-C3重组质粒转染SW480细胞后,激光共聚焦显微镜观察到绿色荧光融合蛋白位于细胞膜周围,RT-PCR在IFITM1/SW 480细胞中检测到IFITM1 mRNA表达,SW 480细胞及pEGFP-C3/SW480细胞中未见IFITM1 mRNA表达。MTT分析细胞增殖示pEGFP-C3/SW 480组、IFITM1/SW 480组、IFITM1/anti-IFITM1/SW 480组的D_(570mm)处值分别0.745±0.0267、0.346±0.0316、0.696±0.0613,空白组的D_(570mm)值是0.835±0.0362,IFITM1/SW 480细胞增殖比pEGFP-C3/SW 480细胞及IFITM1/anti-IFITM1/SW 480细胞低(P＜0.05)。而pEGFP-C3/SW 480细胞的增殖与IFITM1/anti-IFITM1/SW 480细胞增殖相比无显著差异(P＞0.05)。结论：IFITM1可协同IFN-α抑制SW 480细胞体外增殖。     

白藜芦醇对人结肠癌SW480瘤株作用的研究

目的研究白藜芦醇对人结肠癌细胞株SW480生长和细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法采用光镜及电子显微镜观察用药前后细胞形态结构的改变;采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,采用流式细胞术测定细胞周期。结果白藜芦醇呈时间和剂量依赖性抑制人结肠癌细胞株SW480的生长并诱导凋亡,IC50为80μmol/L;白藜芦醇使SW480处于S期细胞增多。结论白藜芦醇能有效的抑制人结肠癌细胞株SW480的生长并诱导其凋亡;白藜芦醇对结肠癌可能是一种有效的化学治疗和化学预防药物。     

柴胡皂苷D抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的分子机制探讨

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D,SSD）抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的分子机制。方法:Western blot检测SSD对AMPK信号通路相关蛋白（p-AMPKα和p-ACC）表达的影响;Western blot检测siRNA敲低AMPKα后SSD对AMPK信号通路相关蛋白表达的影响;MTT和细胞计数实验研究siRNA敲低AMPKα后SSD对SW480细胞增殖的影响。结果:SSD处理后,p-AMPKα和p-ACC的表达均增高（P＜0.05）;siRNA敲低AMPKα后SSD对p-AMPKα和p-ACC的上调作用被抑制（P＜0.05）;SSD抑制细胞的增殖（P＜0.05）,但AMPKα被敲低后SSD对SW480细胞的增殖抑制作用被抑制（P＜0.05）。结论:SSD通过激活AMPK信号通路抑制人结直肠癌细胞SW480的增殖。     

Epigenetic and genetic alterations of p33ING1b in ovarian cancer

p33ING1b is a candidate tumor suppressor gene and a nuclear protein. We investigated whether genetic and epigenetic mechanisms affect p33ING1b expression in ovarian cancer thus contributing toward its pathogenesis. A total of 111 ovarian cancers collected from Beijing and Hong Kong were used for this study. Weak or negative p33ING1b protein expression was demonstrated by immunohistochemistry on tissue microarray in 28/111 cases. Real-time quantitative RT-PCR also showed overall significant reduction of p33ING1b mRNA expression (P = 0.0137), with 53.1% (17/32) cases showing 2- to 5-fold reduction and absence of expression. The reduction of mRNA expression in cancer correlated with decreased p33ING1b protein expression (P < 0.0001). While no p33ING1b mutation was found, allelic loss at the p33ING1b locus was demonstrated in 25% (8/32) cases. The allelic loss profiles also showed statistical significant correlation with reduction of p33ING1b protein and mRNA expression (P = 0.031 and 0.030). Promoter methylation as assessed by methylation specific PCR was found in 23.9% (21/88) cases analyzed. Bisulfite sequencing results confirmed the p33ING1b promoter methylation status of these methylation positive cases. Statistical significant correlation between methylation and mRNA expression (P = 0.006) was demonstrated. Treatment with demethylating drug, 5'-aza-2'-deoxycytidine, resulted in dosage-dependent elevated mRNA expression of p33ING1b in ovarian cancer cell lines. This is the first study reporting epigenetic mechanism regulating the p33ING1b expression. Our findings support that genetic and epigenetic alteration of p33ING1b are likely to contribute towards the pathogenesis of ovarian cancers.     

Adenovirus-mediated expression of p33ING1b induces apoptosis and inhibits proliferation in gastric adenocarcinoma cells in vitro

Background

Inhibitor of growth 1b (ING1b) is considered to be a class II tumor suppressor gene. Although reduced expression of p33^ING1b has been reported in many human malignancies, including gastric cancers, the effect of p33^ING1b on gastric cancer cells has yet to be investigated.

Methods

Expression of p33^ING1b in gastric adenocarcinoma tissues and their adjacent non-malignant gastric mucosa, as well as in gastric adenocarcinoma cell lines and normal gastric epithelial cells, was detected by using Western blotting. Recombinant adenoviruses were prepared to mediate the ectopic expression of p33^ING1b (Ad-ING1b) and green fluorescent protein (GFP)(Ad-GFP) in the gastric adenocarcinoma cell lines, SGC-7901, MKN28, and MKN45 and the normal gastric epithelial cell line GES-1. Alterations in the proliferation and apoptosis of the cells after adenoviral infection were determined by the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and flow cytometry, respectively, and cell cycle distribution was analyzed in a fluorescence-activated cell sorter.

Results

Western blotting confirmed the reduced expression of p33^ING1b in gastric adenocarcinoma tissues and gastric adenocarcinoma cell lines. The ectopic expression of p33^ING1b mediated by Ad-ING1b resulted in decreased growth, increased apoptosis, and cell cycle arrest at the G1 phase in both benign and malignant gastric epithelial cells regardless of their p53 status. Addition of a p53 inhibitor, pifithrin-α, did not abolish the pro-apoptotic and cell cycle-arresting effects of p33^ING1b in p53 wild-type cells.

Conclusions

Down-regulation of p33^ING1b might play an important role in the development of gastric adenocarcinoma. Targeted local expression of p33^ING1b may offer a promising alternative therapeutic measure for gastric cancer.     

表观遗传学干预对结直肠癌细胞株p33ING1b基因表达及生物学特性影响

目的通过表观遗传学干预,研究p33ING1b启动子甲基化和组蛋白乙酰化状态、基因和蛋白的表达及其细胞增殖能力的改变,探讨结直肠癌中p33ING1b转录抑制的表观遗传机制。方法通过曲古抑菌素A及5-氮-2′-脱氧胞苷,对结直肠癌细胞株HT29、LOVO、HCT116和COLO205行恢复乙酰化和去甲基化干预,分单独用药组和联合用药组。RT-PCR结合Real-time qPCR方法检测其p33ING1bmRNA表达的变化,nMSP法分析其p33ING1b启动子甲基化状态的改变,ChIP法检测其p33ING1b乙酰化状态的改变,蛋白质印迹法检测p33ING1b蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖能力。结果曲古抑菌素A及5-氮-2′-脱氧胞苷可逆转结直肠癌细胞株的甲基化及乙酰化状况。2种药物干预后,4种结直肠癌细胞株各组间p33ING1bmRNA表达,差异有统计学意义,HCT116:F=1 690.446,P<0.001;HT29:F=284.474,P<0.001;LOVO:F=2 930.284,P<0.001;COLO205:F=33.540,P<0.001;p33ING1bmRNA蛋白表达差异有统计学意义,HCT116:F=32.606,P<0.001;HT29:F=33.422,P<0.001;LOVO:F=13.975,P<0.01;COLO205:F=7.119,P<0.05,细胞增殖能力差异有统计学意义,HCT116:F=7.327,P<0.05;HT29:F=17.642,P<0.001;LOVO:F=7.035,P<0.05;COLO205:F=9.008,P<0.01。联合使用两种药物对p33ING1bmRNA的表达具有协同作用。结论 p33ING1b基因甲基化和去乙酰化可抑制抑癌基因p33ING1b转录,使用甲基化抑制剂及去乙酰化抑制剂可逆转这一效应,且两者具有协同作用,这为表观基因治疗提供了新的思路。