过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号途径的作用研究

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂阻断转化生长因子(TGF)β1致肝纤维化作用的机制,探讨其抗肝纤维化的潜在作用.方法 体外培养肝星状细胞株HSC-T6.观察PPARγ配体15 d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGFβ1诱导的纤维连接蛋白(FN)表达的影响.利用Western印迹技术观...     

过氧化物酶增生物激活受体γ激动剂对肝星状细胞α1(I)胶原表达的影响

目的观察过氧化物酶增生物激活受体γ(PPARγ)激动剂15d-PGJ2对肝星状细胞株(HSC-T6)前胶原α1(Ⅰ)表达的影响,以进一步探讨PPARγ在肝纤维化进程中的作用机制。方法体外培养HSC-T6细胞,取对数生长期的细胞分为空白对照组、TGFβ-对照组和15d-PGJ2处理组,TGF-β对照组和15d-PGJ2处理组均给予TGF-β因子(终浓度3 ng/ml)共孵育6 h,15d-PGJ2处理组再用1、2、3μmol/L的PPARγ激动剂15d-PGJ2作用24 h。应用RT-PCR、Westernblot方法观察分析各组间肝星状细胞PPARγ、前胶原α1(Ⅰ)基因表达的变化。结果15d-PGJ2能够显著上调PPARγmRNA和蛋白的表达水平,15d-PGJ2处理组的相对吸光度值较空白对照明显升高(P<0.05),而TGFβ-对照组与空白对照组差异无显著性意义(P>0.05)。在TGFβ-刺激下,TGF-β对照组前胶原α1(Ⅰ)mRNA水平均升高,同空白对照组相比差异有显著性意义(P<0.05);15d-PGJ2处理组细胞前胶原α1(Ⅰ)mRNA水平与空白对照组相比差异无显著性意义(P>0.05),但与TGFβ-对照组相比,其表达明显受抑制(P<0.05)。结论PPARγ激动剂15d-PGJ2能够通过上调PPARγ表达而抑制前胶原α1(Ⅰ)转录,提示PPARγ可抑制肝纤维化的发生发展。     

Lefty-2蛋白对转化生长因子β1诱导的大鼠肾成纤维细胞NRK-49F转分化的逆转作用及其机制

目的观察Lefty-2蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾成纤维细胞(NRK-49F)转分化的逆转作用,并探讨其机制。方法对照组:NRK-49F不做处理;刺激组:加入TGF-β1(10ng/ml);低剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(10ng/ml);中剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(20ng/ml);高剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(50ng/ml)。通过细胞免疫荧光法观察各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,通过Western blot法检测各组α-SMA、FN、Vimentin、p-Smad3蛋白、Smad7蛋白的表达水平。结果细胞免疫荧光结果显示,刺激组α-SMA、FN、Vimentin表达量均显著增加,治疗组较刺激组表达量均明显减少。Western blot法结果显示,治疗组α-SMA、FN、Vimentin的表达量较刺激组均下降(P<0.01),而且呈现剂量效应。刺激组p-Smad3蛋白表达上调,治疗组p-Smad3蛋白的表达量较刺激组明显下调(P<0.01);刺激组Smad7蛋白表达下调,治疗组Smad7蛋白的表达量较刺激组明显上调(P<0.01)。结论 Lefty-2蛋白可逆转TGF-β1诱导的NRK-49F的转分化,可降低α-SMA、FN、Vimentin的表达,可能是通过活化Smad7信号通路,抑制Smad3的磷酸化,从而抑制Smad3信号通路来实现的。     

过氧化物酶增生物激活受体γ激动剂对肝星状细胞α1(Ⅰ)胶原表达的影响

目的观察过氧化物酶增生物激活受体γ（PPARγ）激动剂15d—PGJ2对肝星状细胞株（HSC-T6）前胶原α1（Ⅰ）表达的影响，以进一步探讨PPARγ在肝纤维化进程中的作用机制。方法体外培养HSC—T6细胞。取对数生长期的细胞分为空白对照组、TGF-β对照组和15d-PGJ2处理组，TGFp对照组和15d—PGJ2处理组均给予TGF-β因子（终浓度3ng／ml）共孵育6h。15d—PGJ2处理组再用1、2、3μmol／L的PPARy激动剂15d—PGJ2作用24h。应用RT—PCR、Westernblot方法观察分析各组间肝星状细胞PPARy、前胶原α1（Ⅰ）基因表达的变化。结果15d—PGJ2能够显著上调PPARymRNA和蛋白的表达水平，15d-PGJ2处理组的相对吸光度值较空白对照明显升高（P〈0．05），而TGF—β对照组与空白对照组差异无显著性意义（P〉0．05）。在TGF-β刺激下，TGF-β对照组前胶原α1（Ⅰ）mRNA水平均升高，同空白对照组相比差异有显著性意义（P〈0．05）；15dPGJ2处理组细胞前胶原α1（Ⅰ）mRNA水平与空白对照组相比差异无显著性意义（P〉0．05），但与TGF-β8对照组相比，其表达明显受抑制（P〈0．05）。结论PPARy激动剂15d—PGJ2能够通过上调PPARy表达而抑制前胶原α1（Ⅰ）转录，提示PPAR7可抑制肝纤维化的发生发展。     

脂溢性角化病皮损区受体活化Smad的变化

目的 探讨转化生长因子β（transforming growth factor—β,TGF—β）信号转导通路中受体活化Smads（Smad2,Smad3）在脂溢性角化病皮损区的表达及其意义。方法 采用反转录一实时定量聚合酶链式反应（RT and quantitative Real—Time PCR）和免疫组化技术分别检测脂溢性角化病皮损和正常对照皮肤中Smad2及Smad3的mRNA和Smad1／2／3及磷酸化Smad2／3（p-Smad2／3）蛋白的表达情况。结果 与正常对照皮肤组相比,脂溢性角化病皮损中Smad2、Smad3的mR-NA以及Smad1／2／3、p-Smad2／3的表达水平下降。结论 脂溢性角化病中受体活化Smads（Smad2、Smad3）和p-Smad2／3表达下调可阻断TGF—B信号转导,可能使TGF—p抑制上皮增生的作用不能有效发挥,从而促进了脂溢性角化病表皮的过度增生。     

甘草酸二胺抗大鼠肾间质纤维化作用及其机制

目的探讨甘草酸二胺对肾间质纤维化的影响及其与TGF-β1／Smad2通路的关系。方法以Wistar大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）为模型，在不同的时间点（7、14、28d）处死动物，以Masson染色观察甘草酸二胺治疗前后梗阻侧。肾小管的损害、肾间质纤维化指数；以免疫组化染色观察肾小管间质中转化生长因β1（TGF—β1）、Smad2信号蛋白及纤维连接蛋白（FN）等的表达情况；结果①随着梗阻时间的延长，肾小管损害、肾间质纤维化程度逐渐加重，呈时间依赖性（P〈0．01）；TGF—β1、Smad2、FN蛋白呈时间依赖性上调（P〈0．01），均显著高于假手术组（P〈0．01）；TGF—β1与Smad2、Smad2与FN、TGF—β1与FN蛋白之间均呈显著正相关（r=0．987，r=0．992，r=0．981，均P〈0．01）。②甘草酸二胺能改善UUO所致的肾间质纤维化程度（P〈0．01），下调肾脏组织TGF—β1、Smad2、FN蛋白的表达（P〈0．01）。结论甘草酸二胺能减轻UUO所致的。肾间质纤维化损伤，其作用机制可能是通过抑制TGF-β1／Smads通路的激活，减少肾间质纤维连接蛋白的沉积，减轻肾间质的纤维化。     

骨形成蛋白-7对MCP-1诱导人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1-Smad 3信号转导的作用

目的探讨骨形成蛋白-7（BMP-7）对单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导体外培养人肾小管上皮细胞转分化的作用,并初步探讨该作用与转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3表达变化的关系。方法将体外培养HK-2细胞分为以下各组：阴性对照组;阳性对照组：TGF-β1（5ng／ml）处理;MCP-1（0．1,1,10及50ng／ml）组,BMP-7组（0．1,1,10,50ng／ml）;MCP-1（1ng／ml）加BMP-7（50ng／ml）组;MCP-1（1ng／ml）加MCP-1中和抗体（5μg／ml）组。应用半定量RT—PCR方法检测HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）mRNA表达,ELISA方法测定上清液中Ⅰ型胶原分泌,Western blot方法检测HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达。结果MCP-1（0．1,1ng／ml）组HK-2细胞α—SMAmRNA表达较阴性对照组明显增强（P〈0．01）。ELISA方法测定MCP-1（0．1,1ng／ml）组上清液中I型胶原分泌明显高于阴性对照组（P〈0．01）。MCP-1中和抗体与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后。HKC细胞α—SMAmRNA表达几乎被完伞抑制（P〈0．001）,而BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后HK-2细胞α—SMAmRNA表达仅部分被抑制（P〈0．01）;MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后Ⅰ型胶原分泌较MCP-1（1ng／ml）组明显降低（P〈0．05）。Western blot方法检测显示,MCP-1（1ng／ml）组HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达水平均较阴性对照组明显上调（P〈0．01）。MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后,HK-2细胞TGF-β1表达均分别比MCP-1（1ng／mL）单独作用明显下调,以MCP-1中和抗体的作用更强（P〈0．01,P〈0．05）;在MCP-1中和抗体或BMP-7作用24h后,Smad3表达也有类似下调（P〈0．01,P〈0．05）。结论MCP-1能诱导体外培养的HK-2细胞发生转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达上调有关。BMP-7能部分抑制MCP-7诱导HK-2细胞转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达部分下调有关;间时提示MCP-1诱导的转分化可能涉及非TGF—β依赖的细胞信号传导途径,需进一步研究。     

TGF-β1作用下Smad3蛋白在绒癌细胞中的表达

目的：观察不同浓度的转化生长因子β1（transforming growthfactor-β1,TGF-β1）对绒癌细胞系JEG-3细胞Smad3蛋白表达的影响,探讨TGF—D／Smads信号通路在绒癌中的功能状况。方法：以绒癌细胞系JEG-3为研究对象,分别用0ng／ml、100ng／ml及200ng／ml浓度的TGF-β1处理48h后,采用蛋白印迹法检测JEG-3细胞Smad3蛋白的表达。结果：随着TGF-β1浓度的升高,Smad3蛋白的表达水平逐渐升高,呈一定的量效关系。结论：绒癌细胞系JEG-3中不存在Smad3的缺失,且其对外源性TGF-β1刺激具有良好的反应性。     

囊素五肽对人肺成纤维细胞细胞外基质及转化生长因子β1／Smad信号通路的影响

目的观察囊素五肽（BP5）对转化生长因子β1（TGF-1）刺激的人肺成纤维细胞分泌的细胞外基质以及对转化生长一β1／Smad信号通路的影响,探讨囊素五肽抗肺纤维化的机制。方法HLF细胞分为阴性对照组、TGF- β1 刺激组、TGF-β1＋BP5药物干预组（三组均用TGF-β1刺激后分别使用不同浓度BP52．5、5及10μg／mL进行干预）。免疫荧光法测定细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,Westernblot方法检测collagen—Ⅰ、p-Smad2／3、p-Smad3和Smad7蛋白的表达。结果TGF—β1刺激细胞经免疫荧光标记显示α-SMA阳性表达,说明人肺成纤维细胞在TGF-β1刺激下转化为肌成纤维细胞（MF）,TGF-β1刺激同时加BP5不同药物浓度组中,10μg／mL的BP5药物浓度能显著减少细胞增殖转化。经TGF-β1刺激后,人肺成纤维细胞collagen—Ⅰ[（1．402±0．158）比（0．605±0．367）]、p-Smad2／3[（1．457±0．111）比（0．815±0．039）]、p-Smad3[（1．320±O．147）比（0．623±O．128）]蛋白表达较刺激前表达明显增多（P〈0．01）,Smad7表达较对照组降低[（0．613±0．107）比（0．865±0．063）,P〈0．05）];与TGF-β1处理组相比,BP5可抑制由TGF-β1刺激人肺成纤维细胞引起的collagen—Ⅰ蛋白[（0．718±0．049）比（1．402±0．t58）]、p-Smad2／3[（0．696±0．031）比（1．457±0．111）]p-Smad3[（0．766±0．006）比（1．320±0．147）]表达上调（P均〈0．01）,而Smad7的蛋白表达明显增加[（1．237±0．173）比（0．614±0．107）,P〈0．05]。结论BP5可能通过抑制TGF—β1／Smads信号通路激活,下调TGF-β1刺激下人肺成纤维细胞的collagen-Ⅰ及d—SMA蛋白的表达,提示BP5可能对肺纤维化具有一定的干预作用。     

桃红四物汤调控NF-κB/TGF-β1/Smad通路抑制宫腔粘连的机制

目的 研究桃红四物汤治疗宫腔粘连（IUA）的作用机制。方法 选取50只SPF级雌性SD大鼠为研究对象,通过机械和感染双重损伤建立IUA大鼠模型,随机分为IUA模型组、桃红四物汤高（18 g/kg）、中（9 g/kg）、低剂量（4.5 g/kg）组,每组各10只,同时选取10只大鼠作为正常组。连续灌胃24 d后收集各组大鼠子宫组织,分别采用RT-qPCR、ELISA和Western blot检测子宫组织中α-SMA、Col Ⅰ、FN、TNF-α、IL-6和IL-18 mRNA及蛋白表达水平,以及NF-κB、p-NF-κB、TGF-β1、p-Smad2、Smad2、p-Smad、Smad3、p-Smad7及Smad7蛋白表达水平。结果 与正常组比较,IUA模型组子宫组织中α-SMA、Col Ⅰ、FN、TNF-α、IL-6、IL-18、p-NF-κB、NF-κB、TGF-β1、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3水平明显上调,p-Smad7、Smad7水平明显下调（P＜0.05）;与IUA模型组比较,桃红四物汤组可显著降低α-SMA、Col Ⅰ、FN、TNF-α、IL-6、IL-18、p-NF-κB、NF-κB、TGF-β1、p-Smad2、Smad2及p-Smad3、Smad3的表达,上调p-Smad7、Smad7的表达（P＜0.05）,且中、高剂量组效果更显著（P＜0.05）。结论 桃红四物汤可通过抑制NF-κB/TGF-β1/Smad信号通路的活化,进而抑制IUA大鼠子宫组织纤维化及炎症反应。     

Effects of Tanshinone ⅡA on Transforming Growth Factor β1-Smads Signal Pathway in Renal Interstitial Fibroblasts of Rats

The effects of tanshinone ⅡA （TSN） on transforming growth factor β1 （TGFβ1） signal transduction in renal interstitial fibroblasts of rats were studied in order to investigate its mechanism in prevention of renal interstitial fibrosis. Rat renal fibroblasts of the line NRK/49F were cultured in vitro, stimulated with 5 ng/mL TGFβ1 and pretreated with 10-6, 10-5, 10-4 mol/L TSN respectively. The mRNA levels of fibronectin （FN） were examined by RT-PCR. The protein expression of FN and Smads was detected by Western blot. TGFβ1 induced the expression of FN mRNA and Smads in a time-dependent manner in a certain range. Compared with pre-stimulation, the FN mRNA and protein levels were increased by 1.1 times and 1.5 times respectively （P〈0.01, P〈0.01）, and the protein expression of phosphorylated Smad2/3 （p-Smad2/3） increased by 7 times at the end of TGFβ1 stimulation （P〈0.01）. TSN pretreatment may down-regulate the FN and p-Smad2/3 expression in a dose-dependent manner. 10-6 mol/L TSN pretreatment had no effect on the FN and p-Smad2/3 expression （both P〉0.05）. After pretreatment with 10-5 and 10-4 mol/L TSN, the FN mRNA levels were decreased by 28.1% and 43.8% respectively （P〈0.05, P〈0.01）, the FN protein levels were decreased by 40% and 44% respectively （P〈0.05, P〈0.05）, and the p-Smad2/3 protein expression were decreased by 40% and 65% respectively （P〈0.05, P〈0.01）. The inhibitory effect of TSN on renal interstitial fibrosis may be related to its blocking effect on TGFβ1-Smads signal pathway in renal intersti- tial fibroblasts.     

骨形成蛋白-7基因转染对人肾小管上皮细胞外基质分泌的影响

目的构建骨形成蛋白-7(BMP-7)全长基因表达质粒,观察BMP-7过表达对转化生长因子(TGF)-β诱导的人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌(ECM)的作用。方法将BMP-7全长cDNA连接进入真核细胞表达质粒pcDNA3·1中,以脂质体Superfect介导的方法将重组表达质粒pcDNA3·1-BMP-7转染入人肾小管上皮细胞,挑选阳性克隆,以获得稳定转染的人肾小管上皮细胞株。采用Western印迹方法检测BMP-7在肾小管上皮细胞培养上清液中的表达。给予TGF-β(5ng/ml)进行处理,应用RT-PCR和ELISA的方法,观察BMP-7过表达对纤维粘连蛋白(FN)、胶原Ⅰ、Ⅲ(ColⅠ、Ⅲ)等细胞外基质mRNA和蛋白质表达的作用。结果EcoR I限制性酶切鉴定以及DNA双向测序结果均说明所构建的重组质粒为BMP-7全长基因表达质粒。Western印迹方法检测稳定转染人肾小管上皮细胞蛋白表达量明显高于空载体转染组(P<0·05)。TGF-β处理24、48、72h后,5ng/ml TGF-β处理组、空白质粒转染(pcDNA3·1)+5ng/ml TGF-β组ColⅠ、Ⅲ、FN mRNA的表达量明显高于正常对照组,空白质粒转染组(pcDNA3·1)[ColⅠ(A值):0·897±0·100、1·054±0·090vs0·286±0·010、0·319±0·080;ColⅢ(A值):1·114±0·040、0·961±0·090vs0·354±0·020、0·403±0·040;FN(A值):1·257±0·090、1·188±0·060vs0·413±0·020、0·454±0·060,均P<0·05];Col I、FN mRNA表达量pcDNA3·1-BMP-7转染组+5ng/ml TGF-β组明显低于TGF-β处理组(0·591±0·007、0·687±0·020,P<0·05),ColⅢmRNA表达有降低趋势(0·809±0·090),但差异无统计学意义。细胞培养上清液FN含量5ng/ml TGF-β处理组、空白质粒转染(pcDNA3·1)+5ng/mlTGF-β组明显高于正常对照组(P<0·05),而pcDNA3·1-BMP-7转染组+5ng/ml TGF-β组表达明显低于TGF-β处理组(P<0·05)。结论BMP-7过表达可以显著减少TGF-β所致的人肾小管上皮细胞FN、ColⅠ、ⅢmRNA和细胞培养上清液中的FN的表达。表明BMP-7减少小管间质炎症反应和纤维化的发生,改善肾功能的作用,部分是通过抑制肾小管上皮细胞分泌细胞外基质实现的。     

Effects of Tanshinone ⅡA on Transforming Growth Factor β1-Smads Signal Pathway in Renal Interstitial Fibroblasts of Rats

The effects of tanshinone ⅡA (TSN) on transforming growth factor β1 (TGFβ1) signal transduction in renal interstitial fibroblasts of rats were studied in order to investigate its mechanism in prevention of renal interstitial fibrosis. Rat renal fibroblasts of the line NRK/49F were cultured in vitro, stimulated with 5 ng/mL TGFβ1 and pretreated with 10-6, 10-5, 10-4 mol/L TSN respectively. The mRNA levels of fibronectin (FN) were examined by RT-PCR. The protein expression of FN and Smads was detected by Western blot. TGFβ1 induced the expression of FN mRNA and Smads in a time-dependent manner in a certain range. Compared with pre-stimulation, the FN mRNA and protein levels were increased by 1.1 times and 1.5 times respectively (P<0.01, P<0.01), and the protein expression of phosphorylated Smad2/3 (p-Smad2/3) increased by 7 times at the end of TGFβ1 stimulation (P<0.01). TSN pretreatment may down-regulate the FN and p-Smad2/3 expression in a dose-dependent manner. 10-6 mol/L TSN pretreatment had no effect on the FN and p-Smad2/3 expression (both P>0.05). After pretreatment with 10-5 and 10-4 mol/L TSN, the FN mRNA levels were decreased by 28.1% and 43.8% respectively (P<0.05, P<0.01), the FN protein levels were decreased by 40% and 44% respectively (P<0.05, P<0.05), and the p-Smad2/3 protein expression were decreased by 40% and 65% respectively (P<0.05, P<0.01). The inhibitory effect of TSN on renal interstitial fibrosis may be related to its blocking effect on TGFβ1-Smads signal pathway in renal intersti- tial fibroblasts.     

结缔组织生长因子协同转化生长因子β1的促肾纤维化效应

目的　探讨结缔组织生长因子 (CTGF)和转化生长因子 β1(TGF β1)对肾脏成纤维细胞合成和分泌基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )和细胞表型转化的影响。方法　将大鼠肾成纤维细胞分为对照组、CTGF刺激组、TGF β1刺激组、CTGF加TGF β1联合刺激组 ,以明胶酶谱法和Western印迹方法分别检测细胞上清中MMP 2活性和蛋白的变化 ,实时定量 聚合酶链反应 (PCR)方法检测细胞中MMP 2mRNA的水平。Western印迹方法检测成肌纤维细胞标志蛋白α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的表达水平和细胞上清中细胞外基质成分纤黏连蛋白 (FN)的水平。结果　MMP 2的活性和蛋白水平在刺激 2 4h时 ,各组之间无明显差异 ;刺激 4 8h ,10 0ng/mlCTGF组和 5ng/mlTGF β1组明显属于对照组 (P <0 0 5 ) ;而不同浓度的CTGF加TGF β1联合刺激组分别低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 ,其中 10 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1、5 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1均分别明显低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 (P <0 0 5 )。上述各组细胞刺激 12h ,MMP 2mRNA水平在 10 0ng/mlCTGF组和 5ng/mlTGF β1组均明显高于对照组 (1 72 ,1 6 8vs 1 2 9,P <0 0 1) ,而 10 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1联合组明显低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 (0 6 7v     

TGF-β1刺激对人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路的影响

目的：探讨人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路在TGF-β1致腹膜纤维化过程中是否发挥作用。方法：取健康成年人大网膜进行人腹膜间皮细胞原代培养，经鉴定95%以上为人腹膜间皮细胞。用5 ng/ml TGF-β1刺激第三代培养细胞，采用免疫组织化学染色、Western blotting，ELISA以及RT-PCR等方法，分别观察人腹膜间皮细胞内磷酸化Smad2/3（p-Smad2/3）的蛋白表达以及在细胞内的迁移；细胞内Smad7的蛋白和mRNA表达；细胞外纤维连接蛋白（FN）的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内I型胶原（COL1）的蛋白和mRNA表达。结果：人腹膜间皮细胞内p-Smad2/3的蛋白表达在TGF-β1刺激后15 min即开始显著增加，此时p-Smad2/3的阳性细胞率为29%，细胞着色主要分散在细胞质中，30 min阳性细胞率81%至1 h阳性细胞率84%增加最明显，细胞着色加深且集中在细胞核及周边，2 h蛋白表达明显回落，此时阳性细胞率为37%，细胞着色转淡并又分散至细胞质中；细胞内Smad7的蛋白表达在TGF-β1刺激后24 h明显增加，48 h时达高峰，mRNA表达呈时间依从性增强；细胞外FN的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内COL1的蛋白和mRNA表达从TGF-β1刺激后24 h起均明显增加，且均显示一定的时间依从性。结论：人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路能被TGF-β1特异性激活，并在TGF-β1致腹膜纤维化过程中发挥效应；经TGF-β1刺激后，在该通路中主要起抑制作用的Smad7蛋白和mRNA表达均反馈性增加。     

黄芪对TGF—β1致人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

OBJECTIVE: To study the effect of huangqi on peritoneal sclerosis and its possible mechanism. METHODS: Isolated human peritoneal mesothelial cells (HPMC) was cultured. Cultured HPMC were treated with F12 without serum (control group), F12 with TGF-beta 1 (TGF-beta 1 group), F12 with TGF-beta 1 and huangqi 100 micrograms/ml (huangqi 1 group), F12 with TGF-beta 1 and huangqi 1 mg/ml (huangqi 2 group). Fibronectin(FN) and plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) were detected by ELISA method. The expression of FN mRNA, PAI-1 mRNA and bFGF mRNA was detected by RT-PCR method. RESULTS: 1. HPMC expressed FN, PAI-1, and bFGF. 2. Fn and PAI-1 significantly increased compared with control with 5 ng/ml TGF-beta 1 stimulated at 24 hours and 48 hours(P < 0.05); 3. The different concentration of huangqi decreased FN and PAI-1 expression compared with TGF-beta 1 group, especially 1 mg/ml huangqi at 24 hours(P < 0.05). 4. FN, PAI-1 and bFGF mRNA expression were higher in 12 hours after stimulation with TGF-beta 1 compared with control. FN, PAI-1 and bFGF mRNA expression were lower in 12 hours after stimulation with different concentration of huangqi (100 micrograms/ml and 1 mg/ml) than those in the TGF-beta 1 group. CONCLUSION: TGF-beta 1 promotes extracellular matrix synthesis and secretion of HPMC. Huangqi partly counteracts the synthesis of human peritoneal mesothelial cell's extracellular matrix by the stimulation of TGF-beta 1.     

褪黑素抑制肝星状细胞增殖的机制研究

目的 通过转化生长因子-β1(TGF-β1)激活肝星状细胞系(HSC-T6),探讨褪黑素对活化的肝星状细胞系HSC-T6的抑制作用及相关机制.方法 肝星状细胞被分为5组,分别为:对照组、模型组和3个不同剂量实验组,培养24h贴壁后换用无血清培养基,除对照组外均加入TGF-β1,在实验组加入不同浓度的褪黑素,培养48 h后,通过MTF实验检测褪黑素对肝星状细胞增殖的影响,通过细胞免疫组化方法检测褪黑素对肝星状细胞中Smad蛋白表达的影响.结果 与模型组相比,实验组中肝星状细胞的增殖明显被抑制(P＜0.05);TGF-β1能明显刺激肝星状细胞中Smad2/3和p-Smad2/3的表达(P＜0.叭),与模型组比较,实验组可以明显抑制Smad2/3和p-Smad2/3的表达(P＜0.05).结论 褪黑素可显著抑制肝星状细胞的增殖,其作用机制可能与抑制TGF-β1/ Smad信号通路相关.     

氯沙坦对5/6肾切除大鼠残余肾组织中TGF-β1，p-Smad2/3及Smad7的作用

目的:观察氯沙坦对5/6肾切除大鼠肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的影响,探讨氯沙坦抗肾小球硬化的作用机制.方法:雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和氯沙坦治疗组,用两步法建立5/6肾切除模型,于术后12周处死各组大鼠.处死前留取24 h尿检测尿蛋白,心脏取血检测血清肌酐、尿素氮,行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,用免疫组织化学的方法检测肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的表达.结果:模型组大鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮和肾组织胶原相对面积明显较假手术组增多(P＜0.01),氯沙坦治疗后上述指标均得到不同程度的改善.肾组织TGF-β1和p-Smad2/3在假手术组低表达,模型组呈强阳性表达,而氯沙坦治疗组TGF-β1和p-Smad2/3表达较模型组明显减弱(P＜0.01).假手术组肾组织可见较多的Smad7表达,模型组其表达明显减弱(P＜0.01),而氯沙坦治疗后Smad7表达较模型组增强(P＜0.01).结论:氯沙坦可以通过影响5/6肾切除大鼠肾组织中TGF-β/Smads信号通路中TGF-β1,p-Smad2/3和Smad7的表达而起到抗肾小球硬化的作用.     

黄芪对TGF-β1致人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的 :探讨黄芪对腹膜纤维化的作用及可能机制。方法 :人腹膜间皮细胞 (HPMC)作体外培养 ,在第三代 ,将细胞转板至细胞融合后 ,将其分为对照组 (F12 ) ,TGF β1组 (F12 +TGF β15ng/ml) ,TGF β1加黄芪 1组(F12加TGF β1加黄芪 ,黄芪终浓度为 10 0 μg/ml,TGF β1加黄芪 2组 (F12加TGF β1加黄芪 ,黄芪终浓度为 1mg/ml) ,分别在 2 4,48h采用ELISA法检测上清液中纤维连接蛋白 (FN)和纤溶酶原抑制剂 (PAI 1)的含量 ;FNmRNA ,PAI 1mRNA和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达采用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测。结果 :①HPMC表达FN ,PAI 1和bFGF ;②HPMC在 5ng/mlTGF β1刺激下分泌FN及PAI 1明显的增加 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;③HPMC在TGF β1和不同浓度的黄芪刺激后 ,在 2 4h内可使FN及PAI 1减少 ,尤其是PAI 1与TGF β1组比差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。④HPMC经TGF β1作用 12h后 ,FNmRNA ,PAI 1mRNA和bFGFmRNA半定量结果与对照组相比 ,其表达量分别上调 18.5 4%,8.6 %和 6 6 .9%,HPMC经 10 0μg/ml和 1mg/ml黄芪作用 12h后FN ,PAI 1和bFGFmRNA的表达与TGF β1组比较均下调 ,其结果分别为5 .3 %,1.3%,3 .8%和 5 .4%,74.3 %,2 3 .7%。结论 :TGF β1可促进HPMC合成