家蝇幼虫分泌型抗菌肽对小鼠免疫功能影响

目的 探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽对正常小鼠免疫功能影响.方法 选用BalB/c小鼠,随机分为对照组(生理盐水)和家蝇幼虫分泌型抗菌肽(腹腔注射)5、10、20mg/kg组,每天1次,7d后处死小鼠,测量体重、胸腺/体重比值、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、刀豆蛋白A诱导小鼠脾T淋巴细胞转化率、碳粒廓清能力及半数溶血值.结果 10、20mg/kg抗菌肽组小鼠脾脏指数分别为(7.41±0.93)和(7.56±1.05),胸腺指数分别为(3.80±0.69)和(3.51±1.02),巨噬细胞吞噬率为(38.81±7.88)%和(40.16±9.74)%,脾脏酸性磷酸酶活性分别为(268.60±36.64)、(270.48±54.62)U/g,脾T淋巴细胞转化率分别为(0.31±0.11)%和(0.32±0.09)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.05).抗菌肽组小鼠体重及血清半数溶血值与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 家蝇幼虫分泌型抗菌肽对小鼠具有增强免疫功能作用.     

家蝇幼虫分泌型抗菌肽分子鉴定

目的 十二烷基磺酸钠对家蝇幼虫分泌型抗菌肽进行分子鉴定。方法 对纯化所得的家蝇幼虫分泌型抗菌肽使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及肽指纹图谱方法进行分子鉴定。结果 SDS-PAGE结果表明,纯化得到的2个抗菌组分,主要成分的分子量在14.157 kDa左右,另一组分的分子量为7.579 kDa,但蛋白含量明显低于上一组分;分别将这2个抗菌肽分子命名为家蝇幼虫分泌型抗菌肽Ⅰ和抗菌肽Ⅱ,抗菌肽Ⅰ经肽指纹图谱分析,精确分子量为14.264 kDa,其与溶菌酶序列有一定同源性,序列覆盖率为20%,但两者生物学特性不同,推测为不同蛋白质。结论 从家蝇幼虫分泌物中分离得到的抗菌肽与溶菌酶有一定同源性,但生物学特性有差异。     

家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果观察

目的研究家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果。方法针刺感染大肠杆菌诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经研磨、离心、层析等步骤提取其抗菌肽,所提取的抗菌肽作用于肿瘤细胞K562、Daudi、109及T24,以流式细胞仪检测其作用效果。结果抗菌肽对4种肿瘤细胞的有效杀伤力M1均在85%以上。结论家蝇幼虫抗菌肽可作为潜在的抗肿瘤药物开发。     

感染大肠埃希菌后家蝇幼虫血细胞来源的初步研究

目的探讨家蝇3龄幼虫感染大肠埃希菌后大量增加的血细胞来源。方法观察对照组及感染大肠埃希菌后4、8、16h组家蝇3龄幼虫血淋巴的血细胞总数（THC）变化;用流式细胞仪检测感染前后各组家蝇3龄幼虫血细胞周期的变化。结果感染后4、8、16h组THC与对照组比较均有显著增加,感染后8 h组THC最高,达（38 920±2274）/μl;对照组幼虫血细胞增殖指数（PI）为15.98%;感染后各组G2/M期和S期细胞增多,PI值均明显增加;感染后4 h组PI值最高,达44.34%。结论家蝇幼虫血细胞自身具有分裂能力,是其造血功能的重要补充。     

家蝇抗菌肽对弓形虫的抑制作用研究

目的研究家蝇抗菌肽对弓形虫速殖子的抑制作用。方法对家蝇幼虫针刺感染细菌，诱导其产生抗菌肽，以离心法提取其血淋巴中所含的抗菌肽。结果家蝇血淋巴中抗菌肽有杀伤弓形虫速殖子的作用。结论提取的血淋巴中含有抑制弓形虫的成分。     

家蝇幼虫抗弓形虫抗菌肽分离纯化

目的 从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化具有抗弓形虫作用的抗菌肽.方法 通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心和层析等过程,将家蝇幼虫抗菌肽进行分离纯化,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法和血细胞计数法筛选对弓形虫速殖子有抑制作用的抗菌肽.结果 经Resource S阳离子柱和Su-perdex G75凝胶柱层析后,筛选出2种对弓形虫速殖子有杀伤作用的抗菌肽.结论 家蝇幼虫血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽,而且不止一种,但其效果有所不同.     

大肠埃希菌感染后家蝇幼虫血清中3种酶活性的变化

目的探讨大肠埃希菌感染对家蝇3龄幼虫血清中3种酶活性的影响。方法（1）用比色法分别测定感染后不同时间家蝇3龄幼虫血清中酸性磷酸酶（ACP）及过氧化氢酶（CAT）活性的变化。（2）用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定感染后不同时间家蝇3龄幼虫血清中二酚氧化酶（DPO）活性的变化。结果（1）大肠埃希菌感染后各时间组血清中ACP及CAT活性显著高于对照组（P〈0．01）。其中ACP及CAT活性分别在感染8和16h达高峰，其值分别为（107．9±3．5）u／100ml和（174．6±4．7）u／ml，然后逐渐下降。（2）家蝇幼虫体内存在DPO，且感染后4hDPO活性上升，16h达高峰，其值为98805．39，之后下降。结论大肠埃希菌感染后家蝇3龄幼虫血清中ACP、CAT及DPO活性均增强，提示这3种酶在防御微生物感染过程中发挥了重要作用。     

家蝇幼虫抗菌肽对K562细胞膜的质量浓度阈值作用

目的探讨家蝇3龄幼虫抗菌肽对K562细胞膜的作用。方法通过针刺感染大肠埃希菌诱导家蝇3龄幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心、固相萃取、反相高效液相色谱分离纯化家蝇3龄幼虫抗菌肽,采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法和光镜观察法筛选对K562有抑制作用的抗菌肽;用不同质量浓度的峰5、峰8处理K562细胞,采用台盼蓝拒染法测定细胞存活率和生长曲线的变化;用光学显微镜和荧光显微镜检测细胞膜形态的变化;用荧光分光光度计检测细胞膜荧光素的渗漏;用激光共聚焦显微镜观察细胞膜的损伤程度。结果低质量浓度(<50μg/ml)对细胞存活率无明显影响,细胞整体形态变化不大,细胞荧光素渗漏较少[(18.95±0.05)～(22.49±0.68)],细胞损伤甚微;高质量浓度(≥50μg/ml)使细胞存活率明显下降,细胞形态变化逐渐增大,细胞荧光素渗漏较多[(62.77±4.08)～(70.81±0.18)],甚至大分子荧光素DextranFITC可以通过。结论家蝇3龄幼虫抗菌肽对K562细胞膜的作用存在质量浓度阈值,低质量浓度时可引起膜通透性增加,高质量浓度时可引起细胞膜严重损伤。家蝇幼虫抗菌肽可能通过直接杀伤作用抑制K562细胞生长,其作用机制首先是通过对膜作用,然后可能进一步对膜作用从而使膜上孔洞不断扩大或者进入细胞后经过其他途径抑制K562细胞生长。     

不同诱导源诱导家蝇幼虫抗菌蛋白效果的比较

目的比较5种诱导源所诱导产生家蝇幼虫抗菌蛋白的抗菌活性,观察不同诱导源对家蝇幼虫抗菌蛋白产生的诱导效果.方法用金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、大肠埃希菌脂多糖、紫外线及热诱导家蝇幼虫,在诱导后不同时间提取抗菌蛋白进行抑菌实验,观察不同诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间,并比较各诱导组高峰时间产生抗菌蛋白的抗菌活性.结果各诱导组诱导家蝇幼虫产生抗菌蛋白达最大活性时间为诱导后36～48 h（热诱导后家蝇幼虫很快化蛹,未观察抗菌蛋白产生高峰时间）;金黄色葡萄球菌诱导后的抗菌蛋白抗菌活性最佳,热诱导后的抗菌蛋白抗菌活性也较未诱导组好.结论各诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间不同;细菌诱导的抗菌蛋白抑菌效果最好,热诱导也是一种较理想的诱导方法.     

家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤细胞的影响

目的 探讨家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤细胞（A375）的抑制作用。方法 细胞计数法、四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法及吖啶橙（AO）染色法测定家蝇幼虫抗菌蛋白对如，A375细胞生长的影响；四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法测定家蝇幼虫抗菌蛋白对正常人牙周膜细胞生长的影响。结果 高浓度组A375细胞数及吸光度（A）值明显降低，细胞增殖抑制率随浓度的增加而增大；而各浓度组正常人牙周膜细胞A值及细胞增殖抑制率与对照组相比差异无统计学意义；高浓度组A375见细胞凋亡。结论 家蝇幼虫抗菌蛋白可能通过诱导细胞凋亡而抑制A375细胞生长，对正常人体细胞基本无抑制作用；这种抑制作用有一个阈值。     

家蝇幼虫抗菌蛋白的诱导及抗菌特性

目的用不同诱导源诱导家蝇幼虫,观察抗菌蛋白产生的规律及其抑菌特性,为进一步研究家蝇幼虫抗菌蛋白的产生及应用提供实验依据.方法用4种诱导源诱导后不同时间的组织匀浆提取抗菌蛋白进行抑菌实验,观察不同诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间及各诱导组抗菌蛋白的抑菌特性.结果各诱导组抗菌蛋白的抑菌活性明显高于对照组,各诱导组抗菌蛋白的产生在诱导后36～48h达高峰;各诱导组产生的抗菌蛋白均能抑制几种革兰阴性菌、一种革兰阳性菌和耐药菌株,但对不同细菌的抑菌活性有差别.结论不同诱导源诱导家蝇幼虫后抗菌蛋白产生的高峰时间不同、产生的抗菌蛋白抗菌谱广.     

家蝇幼虫血淋巴提取物抗肿瘤作用

目的 探讨家蝇3龄幼虫血淋巴40%固相萃取组分抗肿瘤作用及机制。方法 应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测40%固相萃取组分对S180肉瘤细胞株生长的抑制作用;通过体内试验检测40%固相萃取组分对S180小鼠实体瘤生长的抑制率,测定荷瘤小鼠血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量变化。结果 在体外,40%固相萃取组分25 μg/mL对S180肉瘤细胞增殖抑制率最高达79%,与阴性对照组比较差异有统计学意义(t=6.40,P<0.05);40%固相萃取组分有抑制S180实体瘤小鼠肿瘤生长的作用,高、中、低剂量组肿瘤生长抑制率分别为46.23%、35.23%、32.13%;与模型对照组(3.19±0.80)、(163.41±22.65)U/mL比较,3个剂量组的血清T-AOC和SOD活性均升高,其中高剂量组小鼠血清T-AOC和SOD活性分别为(4.91±0.46)、(213.19±43.37)U/mL,差异均有统计学意义(t_T-AOC=7.12、t_SOD=-7.16,P<0.01);3个剂量组的血清MDA含量均降低,其中高剂量组血清MDA含量为(8.85±1.81)nmol/mL,差异有统计学意义(t_MDA=6.79,P<0.01)。结论 40%固相萃取组分在体外和体内均具有抑制S180肉瘤细胞生长的作用,清除自由基可能是其体内抗肿瘤机理。     

家蝇蛆粉对小鼠急性毒性及致突变性作用

目的探讨家蝇蛆粉对小鼠急性毒性和致突变性,以评价其安全性。方法将家蝇3龄幼虫超声破碎的内容物溶液制成干粉,余下的幼虫壳制成壳聚糖,两者按10:1比例进行组合混匀,制成粉末状家蝇蛆粉。以昆明小鼠为实验对象,采用最大耐受量实验、骨髓微核实验和精子畸形实验,评价家蝇蛆粉对小鼠的急性毒性和致突变性作用。结果小鼠对家蝇蛆粉的最大耐受量为33.0 g/(kg·bw),未见毒性效应或不良反应;家蝇蛆粉2.8,5.5和11.0剂量组雄性小鼠的嗜多染红细胞微核率分别为0.12%,0.14%,0.14%,雌性小鼠的嗜多染红细胞微核率分别为0.14%,0.12%,0.16%,与溶剂对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),小鼠精子畸形率分别为2.3%,1.6%,2.1%,与溶剂对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论家蝇蛆粉对小鼠无急性毒性和致突变性。     

家蝇蛹抗菌肽对肿瘤细胞膜破坏作用

目的观察4种肿瘤细胞在家蝇蛹抗菌肽作用下细胞表面的变化,探讨抗菌肽杀伤肿瘤细胞的机制。方法用针刺对家蝇幼虫感染大肠埃希菌,诱导其产生抗菌肽,然后至蛹期提取该抗菌肽并作用于4种肿瘤细胞（人髓样白血病细胞株K562;人淋巴瘤细胞株Daudi;人食管癌细胞株Eca109;人膀胱癌细胞株T24）。36 h后用扫描电镜观察其细胞表面变化。结果4种肿瘤细胞表面出现大小不等的创伤,且大部分创伤为孔洞型。结论抗菌肽杀伤肿瘤细胞可能是从细胞表面穿孔产生作用