RNA干扰在肝病治疗中的研究进展

RNA干扰(RNAi)是双链RNA(dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列及基因的表达使其沉默的过程[1].RNAi最主要的功能特色在于它可调节和关闭基因的表达,促使mRNA降解或阻止蛋白产物合成,进而调控细胞的各种高级生命活动,其抑制基因表达作用具有高效性和特异性[2].RNAi作为一种快捷方便的工具广泛用于高通量的研究基因功能、基因敲除、基因治疗和基因表达调控领域的研究.现对RNAi在肝病治疗中的最新进展作一综述.     

RNA干扰与基因沉默的分子机制研究进展

近年来,分子生物学研究中的基因阻断技术发展迅速,其中RNA干扰(RNA inteference,RNAi)与基因沉默(Gene silncing)现象的发现,为人们所感兴趣的"明星事件".作为一种高效、特异的基因阻断技术,RNAi技术正广泛运用于基因治疗、功能基因组研究、药物筛选、病毒感染研究、信号传导途径研究等领域,倍受人们的关注.本文对近年来RNAi和基因沉默机制、影响因素和应用前景研究概况阐述如下.     

运用免疫受体基因进行RNA干扰对猪颗粒细胞发展的意义

在卵泡发育过程中颗粒细胞获得不同的功能,在细胞分化过程中颗粒细胞的基因是独特的。双链RN(A dsRNA)可以引起序列特异性的转录后基因沉默,此现象称为RNA干扰(RNAi)。长dsRNA经过处理产生的21～23mer的小干扰RNA(siRNA)片段是RNAi的介质。核酸复合体即RNA诱导的沉默复合体(RISC),以siRNA为向导,使同源序列的靶基因mRNA降解成片段,mRNA水平降低。RNAi也可用于对猪颗粒细胞发育过程中感兴趣的基因进行功能分析。在此研究中,用一种质粒编码的绿色荧光蛋白(GFP)作为靶基因,同样由质粒编码的红色荧光蛋白(RFP)作为参考基因,…     

RNA干扰技术在肥胖研究中的应用

在多种生物细胞中，外源或内源性双链RNA（doublestranded RNA，dsRNA）可触发细胞内同源mRNA的特异性降解，从而使该基因表达沉默，这种现象称为RNA干扰（RNA interference，RNAi）。RNAi现象在生物中普遍存在。首先在线虫中发现了RNAi现象，随后证实在果蝇、涡虫、水螅、锥虫、小鼠胚胎细胞及哺乳动物成体细胞中均存在dsRNA介导的RNAi现象。由于RNAi在动植物抵抗外源病毒、生长发育调控方面起着重要作用。而且在功能基因组研究、基因治疗方面有着广泛的应用前景，所以对其研究较多。现在RNAi已用于在体研究，并在抗病毒、肿瘤、免疫、药理、遗传等方面得到广泛地应用。基因有限公司和宝生物公司等已开发出RNAi试剂盒。目前RNAi数据库与表型blast也已建立。本就RNAi干扰技术在肥胖研究中的应用作一综述。     

运用免疫受体基因进行RNA干扰对猪颗粒细胞发展的意义

在卵泡发育过程中颗粒细胞获得不同的功能，在细胞分化过程中颗粒细胞的基因是独特的。双链RNA（dsRNA）可以引起序列特异性的转录后基因沉默。此现象称为RNA干扰（RNAi）。长dsRNA经过处理产生的21～23mer的小干扰RNA（siRNA）片段是RNAi的介质。核酸复合体即RNA诱导的沉默复合体（RISC），以siRNA为向导，使同源序列的靶基因mRNA降解成片段，mRNA水平降低。RNAi也可用于对猪颗粒细胞发育过程中感兴趣的基因进行功能分析。在此研究中，用一种质粒编码的绿色荧光蛋白（GFP）作为靶基因，     

RNA干扰技术及其在胰腺癌研究中的应用

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是指一些小的双链RNA（double stranded RNA，dsRNA）通过特异性降解与其同源的RNA而高效地阻断体内特定基因表达的现象。到目前为止，RNAi现象已经被发现广泛存在于植物、线虫、果蝇、哺乳动物等多种生物体细胞中，使这些生物能够抵御病毒的感染、阻断转座子的作用等。由于RNAi能特异性地抑制某一基因的表达，目前已经广泛应用于抗肿瘤、抗病毒等的治疗研究以及一些基础研究领域。现主要就近年来RNAi技术在胰腺癌研究中的应用进行综述。     

RNAi技术抗病毒感染的研究

RNAi技术是近年来发现的一项基因沉默的新技术,在各种疾病的基因治疗研究中,发挥出了巨大的潜力和独特的效果.在抗病毒感染领域,RNAi技术可以防止病毒入侵,抑制病毒复制,减少病毒RNA数量,阻断病毒蛋白的表达,从而发挥防治病毒性疾病的作用.     

RNA干扰技术用于肝脏疾病治疗的研究进展

RNA干扰（RNAi）指通过导入由对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA（dsRNA），诱导受体细胞中与其有同源序列的特异性靶mRNA发生降解，阻止蛋白质的翻译过程，从而使其相应的同源基因沉默。     

RNAi-基因敲除技术在妇科领域中的应用

RNAi是存在于真核生物体内的一种阻断外源基因表达的自我防御体系。它是由双链RNA介导的使与其互补的具有同源序列的单链RNA进行特异性的降解。随着这几年RNAi研究的不断深入,RNAi的干涉机制逐渐被阐明。该文介绍了RNAi的干涉机制和在妇科肿瘤领域中的应用进展。RNAi技术必将成为妇科肿瘤领域基因功能研究、细胞信号传导以及基因治疗的一种强大的新型工具。     

RNA干涉技术在宫颈癌相关HPV及RARβ2研究中的应用

宫颈癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤,其发生与发展是多因素共同参与的结果。除高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染与宫颈癌的关系密切外,肿瘤抑制基因的表达沉默是十分重要的参与因素,且多为表观调节引起。其中维甲酸受体β2（RARβ2）的表达沉默相当普遍,但上述二者致病的关系不明。RNA干扰（RNAi）是近年来发展起来的一门新兴的在转录水平上的基因阻断技术,可以通过在细胞内引入设计的外源双链RNA诱导细胞内特定基因的沉默,从而观察相关生物因子的变化。该文就在有关宫颈癌细胞系中通过RNAi干扰HPV表达观察RARβ2表达及其表观遗传学改变的最新结果进行综述,旨在了解HPV与RARβ2之间的关系,进一步探索对宫颈癌发生机制的认识。     

RNA interference: a promising technique for the improvement of traditional crops

RNA interference (RNAi) is a homology-dependent gene-silencing technology that involves double-stranded RNA directed against a target gene. This technique has emerged as powerful tool in understanding the functions of a number of genes in recent years. For the improvement in the nutritional status of the plants and reduction in the level of antinutrients, the conventional breeding methods were not completely successful in achieving the tissue-specific regulation of some genes. RNAi has shown successful results in a number of plant species for nutritional improvement, change in morphology and alteration in metabolite synthesis. This technology has been applied mostly in genetic engineering of important crop plants, and till date there are no reports of its application for the improvement of traditional/underutilized crops. In this study, we discuss current knowledge of RNAi function and concept and strategies for the improvement of traditional crops. Practical application. Although RNAi has been extensively used for the improvement of popular crops, no attention has been given for the use of this technology for the improvement of underutilized crops. This study describes the importance of use of this technology for the improvement of underutilized crops.     

RNA干扰在早产儿视网膜病中的研究进展

RNA干扰是指具有同源性的双链RNA能高效、特异地使靶mRNA发生降解,使基因转录后的mRNA不能表达而导致基因沉默的一种现象.RNA干扰在维持基因组稳定、保护基因组免受外源核酸侵入、基因表达调控等方面发挥重要生物学作用.RNA干扰作为基因沉默的一个工具,已被广泛用于基因功能研究、基因治疗和新药研究与开发等方面.早产儿视网膜病是发生于未成熟或低出生体重儿的增殖性视网膜病变,是儿童致盲的主要原因之一,血管新生是早产儿视网膜病的病理生理基础.RNA干扰技术在分析和研究目的 基因功能、抗肿瘤和病毒等方面取得了一些突破性进展,为增殖性视网膜病变的基因治疗提供了新思路. 该文对RNA干扰的机制特点及在早产儿视网膜病中的研究进展作以综述.     

RNA干扰技术在德国小蠊功能基因研究中的应用

德国小蠊是我国蜚蠊的优势种,在医学与经济方面的重要性和危害性,以及作为多种科学问题的重要研究模型决定了其在生物科学研究领域的重要地位,而在后基因组时代对功能基因的研究成为生物学研究的基础。RNA干扰是外源性或内源性双链RNA诱发的在mRNA水平上进行的基因沉默现象,从而阻止某一基因功能在细胞或整体水平上的表达,具有高效性和特异性等优势。鉴于蜚蠊重要研究价值与RNA干扰表现出的技术优势,该文简要介绍RNA干扰技术分子机制,重点对德国小蠊功能基因的最新研究结果进行综述。     

RNA干扰hTERT基因对人乳腺癌细胞株MCF-7周期及凋亡影响的研究

目的 观察载体介导的RNA干扰技术能否有效抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的hTERT的表达及其对细胞周期及凋亡的影响.方法 构建2个针对hTERT基因表达短发夹状siRNA的真核表达载体（pshRNA-hTERT）并转染人乳腺癌细胞株MCF-7,通过RT-PCR检测该基因mRNA,Western blot蛋白质检测,端粒酶活性检测,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡等方法检测RNAi效果,从中筛选出基因沉默效果好的靶位点.结果 转染乳腺癌细胞后,pshRNA - hTERT1,2质粒均能抑制hTERT基因表达,mRNA表达分别下调了54.6%,55.2% 蛋白表达分别下调46.6%,47.8%.端粒酶活性均明显下降.对乳腺癌细胞周期中S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加.结论 RNAi在体外明显抑制乳腺癌细胞中hTERT基因的表达和瘤细胞增殖.     

RNA干扰技术抑制哺乳动物细胞绿色荧光蛋白表达的研究

目的本研究旨在探讨阳离子脂质体的体外转染效率、化学合成双链RNA(dsRNA)诱导RNA干扰(RNAi)的效应强度及其作用特点,为采用RNAi技术开展基因治疗提供实验依据。方法①采用磷酸钙沉淀法构建293T/GFP细胞株。②体外化学合成dsRNA,经由三种不同的阳离子脂质体TransIT-TKO,Oligofectamine reagent,Lipofectamine2000导入293T/GFP细胞,通过荧光显微镜、流式细胞仪测定荧光强度的变化,观察不同阳离子脂质体的体外转染效率。③采用dsRNA-Lipofectamine2000复合物转染293T/GFP细胞。dsRNA分设5个不同的浓度(0.01,0.02,0.04,0.08,0.16μmol/L)转染细胞48h以观察剂量效应关系。dsRNA0.08μmol/L/Lipofectamine20008μl转染细胞,于4个不同的时间点(12h,24h,48h,72h)观察时间效应关系。结果绿色荧光蛋白序列特异性dsRNA(dsRNA-eGFP)经由三种不同的阳离子脂质体导入细胞均可产生RNAi效应,序列非特异性dsRNA(dsRNA-unrelated)无抑制效应。在三种不同的阳离子脂质体中,Lipofectamine2000的转染效率最强,转染48h可将293T/GFP细胞荧光强度降低约80%,与空白载体组比较差异显著,TransIT-TKO组,Oligofectamine reagent组分别降低41.02%、37.45%,与空白载体组比较无显著性差异,而且TransIT-TKO、Oligofectamine的细胞毒性较强。结果还表明dsRNA/Lipo-fectamine2000诱导的RNAi效应具有剂量及时间双重依赖性,dsRNA0.08μmol/L/Lipofectamine20008μl/6孔培养板转染细胞48h的抑制效应最强。结论①体外化学合成的dsRNA可有效诱导哺乳动物细胞出现序列特异性基因沉默效应。②三种不同的阳离子脂质体中Lipofectamine2000的转染效率最强,且细胞毒性轻微。③dsRNA/Lipofectamine2000诱导的RNAi效应具有剂量及时间双重依赖性。     

亲代谢型谷氨酸受体5在Homer 1a RNA干扰大鼠学习记忆障碍中的作用

目的 Homer 1a RNA干扰(RNA interference,RNAi)后的Sprague Dawley (SD)大鼠在Morris水迷宫中表现学习记忆能力障碍,本研究旨在通过检测Homer 1a RNAi后大鼠不同脑区亲代谢型谷氨酸受体5(metabotropic glutamate receptor 5,mGluR 5)的表达情况,来初步探讨Homer 1a RNAi致大鼠学习记忆障碍的分子机制。方法 将24只SD大鼠随机分为两组: Homer 1a RNAi组(RNAi组,n=12)和对照组(Nc组,n=12),运用侧脑室注射技术,分别向两组大鼠的侧脑室注射针对Homer 1a 的RNAi慢病毒和无义病毒,等待病毒起效时间7 d,完成相应的行为学检测(Morris水迷宫)后,利用荧光定量PCR 和Western blot 技术检测不同脑组织(前额叶、纹状体、海马)mGluR5 mRNA 和蛋白表达情况。 结果 RNAi组大鼠纹状体和海马mGluR5 mRNA和蛋白表达均较对照组显著降低(纹状体:mRNA t=6.67,蛋白t=3.10;海马:mRNA t=3.08;蛋白t=2.89,P值均<0.05或<0.01),前额叶mGluR5 mRNA和蛋白表达较对照组差异无统计学意义(mRNA t=1.58,蛋白t=1.66,P值均>0.05)。 结论 Homer 1a RNAi后大鼠脑组织Homer 1a相关基因mGluR5表达下调,提示mGluR5可能作为Homer 1a的下游基因,参与Homer 1a RNAi后大鼠学习记忆的损伤过程。