慢病毒靶向携带survivin-siRNA抗肺腺癌裸鼠体内研究

目的探讨慢病毒载体介导survivin-siRNA对人肺腺癌裸鼠移植瘤的体内抑瘤活性。方法参考siRNA的设计策略,构建表达survivin-siRNA的慢病毒载体;于各BALB/C裸鼠右侧腋窝皮下接种人肺腺癌A549细胞悬液,构建人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,肿瘤组织局部注射survivin-siRNA的慢病毒载体,观察肿瘤的体积及随时间变化的生长曲线;通过碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化。结果慢病毒载体介导survivin-siRNA对裸鼠人肺腺癌A549的抑瘤率为46.07%;经过PI和Annexin-V染色区分凋亡早晚期的细胞为30%~35%,荧光显微镜下观察肿瘤细胞凋亡;G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例则明显减少。结论慢病毒载体介导的siRNA能有效抑制裸鼠移植人肺腺癌A549的survivin基因的表达,有效激发细胞凋亡。     

CIK细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用的实验研究

目的：探讨正常人细胞因子诱导的杀伤（Cytokine induced-killer,CIK）细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用。方法：取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗联合诱导CIK细胞,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定多西紫杉醇、CIK细胞及两者联合对耐药细胞SPC-A1/DTX体外的细胞毒活性。用肺腺癌耐药细胞SPC-A1/DTX建立裸鼠皮下移植瘤模型,2周后腹腔给予生理盐水（对照组）、多西紫杉醇（单纯化疗组）、CIK细胞和CIK细胞联合多西紫杉醇（联合治疗组）,观察它们对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结果：体外实验表明,SPC-A1/DTX对多西紫杉醇的耐受性（IC50为110.5μg/ml）较亲代敏感株SPC-A1（IC50为8.5μg/ml）增加了13倍。CIK细胞对人肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的杀伤活性,明显高于其亲代敏感株SPC-A1（P〈0.05）。经CIK细胞作用后的SPC-A1/DTX细胞,仅10μg/ml的DTX即可使CIK：SPC-A1/DTX效靶比为5：1组中的联合杀伤率比单纯加DTX（同等剂量）组增加6.1倍,比单纯加CIK（相同效靶比）细胞杀伤率增加1.4倍,联合杀伤率的大小随效靶细胞比值和DTX浓度的升高呈依赖性增加。体内实验表明,CIK细胞联合多西紫杉醇可明显抑制裸鼠皮下肺腺癌耐药细胞移植瘤的生长,联合治疗组肿瘤生长缓慢,肿瘤组织坏死、淋巴细胞浸润明显。结论：CIK细胞联合多西紫杉醇能够显著抑制体内外肺腺癌多药耐药细胞SPC-A1/DTX的生长,为临床上应用CIK细胞联合化疗治疗放、化疗等无效的中晚期耐药肺癌患者提供了实验依据。     

siRNA抑制胃癌细胞BGC-823及裸鼠皮下移植瘤中生存素的表达

目的： 探讨RNA干扰用于胃癌治疗的可行性与特异性。方法: 设计靶向生存素基因的小干扰RNA,并导入胃癌BGC-823细胞株和裸鼠皮下移植瘤,在体内、外诱导RNA干扰,采用MTT、流式细胞检测技术、RT-PCR法、Western bloting、免疫组织化学和TUNEL检测survivin基因表达、细胞周期和细胞凋亡。结果: 重组质粒pTZU6+1-siRNA- survivin导入BGC-823后,survivin mRNA和蛋白表达均明显下调;细胞生长被抑制,细胞周期中S期细胞减少, G1/G0期细胞增加,出现明显细胞凋亡。裸鼠皮下移植瘤体积明显缩小,Survivin表达均下调。体内、外对照组各指标均无明显变化。 结论: RNA干扰明显抑制靶基因survivin在胃癌细胞BGC-823及裸鼠皮下移植瘤中的表达及肿瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡,且特异性好,可能成为肿瘤治疗的新方法。     

3-溴丙酮酸通过抑制糖酵解阻止A549肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡

目的探究3-溴丙酮酸(3-BP)对人肺腺癌A549细胞的增殖和凋亡的影响及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测(10、 20、 40、 80、 160)μmol/L3-BP处理24、 48 h,对肺腺癌A549细胞存活率的影响;采用(0、 50、 100、 150)μmol/L 3-BP处理肺腺癌A549细胞24 h,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染法结合流式细胞术检测A549细胞的凋亡率;试剂盒检测A549细胞ATP水平、 2′, 7′-二氯二氢荧光黄二乙酸酯(DCFH-DA)染色结合流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平变化,Western blot法检测糖酵解及凋亡相关蛋白己糖激酶2(HK-2)、单羧酸转运蛋白1(MCT1)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)和凋亡相关B细胞淋巴瘤分子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)的表达。近红外荧光蛋白(iRFP)和荧光素酶双标记的A549细胞接种至裸鼠皮下,当皮下肿瘤体积达到100 mm~3时,将所有裸鼠随机分成PBS组、 5 mg/kg顺铂(DDP)组、 7 mg/kg 3-BP组;每组5只,采用腹腔注射方式进行给药。HE染色检测肿瘤病变情况,免疫组织化学染色检测KI-67抗原(ki67)表达确定对肿瘤细胞增殖的影响,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡情况,评估3-BP的体内抗肿瘤效果并进行肝肾功能检测确定3-BP肝肾毒性。结果 3-BP可以抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡;与对照组相比,3-BP处理组ATP水平明显下降,ROS水平明显升高,HK-2、 MCT1、 PDK1、 Bcl2蛋白表达明显降低,BAX表达明显增加。动物模型结果显示,与PBS组相比,3-BP可以抑制裸鼠肺腺癌移植瘤的生长,3-BP可以抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,3-BP对裸鼠肝肾毒性较为轻微,安全性较高。结论 3-BP通过抑制糖酵解抑制A549人肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,对荷肺癌裸鼠的抗肿瘤效果较好且肝肾毒性较低。     

芒柄花苷靶向ADORA1抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

为探讨芒柄花苷靶向腺苷A1受体(adenosinereceptor A1, ADORA1)抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制,将肺腺癌细胞(SPC-A1和A549)分成对照组(细胞不处理)、芒柄花苷组(芒柄花苷处理细胞)、ADORA1组(转染ADORA1质粒)和芒柄花苷+ADORA1组(经芒柄花苷处理细胞后转染ADORA1质粒)。通过生物信息学分析芒柄花苷的作用靶点及其恶性行为。以不同浓度芒柄花苷干预细胞,随后通过MMT法检测细胞活力、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞增殖能力、Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。裸鼠移植瘤实验检测芒柄花苷体内抑制细胞增殖能力。免疫组化检测增殖细胞抗原Ki-67。Western blotting检测细胞ADORA1蛋白表达。生物信息学结果显示ADORA1是芒柄花苷的作用靶点之一,且在肺腺癌中高表达,与临床恶性行为有关。细胞实验表明,芒柄花苷可以抑制肺腺癌细胞活力(P<0.05),且能抑制其细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。裸鼠移植瘤实验显示,芒柄花苷处理明显抑制移植瘤体积和重量增长(P<0.05)。分子水平揭示,...     

RNA干扰下调Stat5对人肝癌裸鼠移植瘤的抑制及诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨Stat5-shRNA对裸鼠体内人肝癌SMMC7721移植瘤的抑制及其诱导肿瘤细胞凋亡的作用.方法 将SMMC7721细胞悬液接种于裸鼠背部皮下,15d后,待在接种部位出现肿瘤结节、质地较硬等指标认定为成瘤.将15只成瘤裸鼠完全随机分为:空白对照组、HK质粒对照组、Stat5-shRNA组共3组,每组各5只.空白对照组瘤内注射生理盐水,HK质粒对照组瘤内注射Pgenesil1-HK,Stat5-shRNA组瘤内注射Pgenesil-1 -Stat5A1,各组注射剂量及次数均为50μl/只,每2天1次,共10次.第35天,处死各组全部动物,剥瘤称重,计算肿瘤大小及抑瘤率,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 与空白对照组和HK质粒对照组比较,Stat5-shRNA组裸鼠人肝癌移植瘤的生长受到明显抑制,肿瘤细胞凋亡率明显上升[(21.35±3.69)％比(3.56±1.12)％,(3.81±3.05)％,P＜0.05].结论 Stat5-shRNA可有效抑制裸鼠体内人肝癌移植瘤的生长,并能够诱导肿瘤细胞凋亡.Stat5-shRNA在人肝癌的基因治疗中具有潜在的应用价值.     

三氧化二砷纳米粒子对直肠癌作用的实验研究

目的 探讨三氧化二砷纳米粒子在体外、体内对直肠癌的抗癌作用.方法 Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测三氧化二砷纳米粒子诱导直肠癌细胞HR8348凋亡情况;建立HR8348细胞裸鼠皮下移植瘤模型,监测给药后肿瘤体积的变化,并通过对肿瘤组织标本Ki67染色和TUNEL染色检测肿瘤细胞增殖和凋亡情况.结果 流式细胞术结果显示,4.0 μmol/L三氧化二砷纳米粒子诱导直肠癌细胞凋亡率为7.02%,高于对照组(1.76%),P＜0.05,三氧化二砷纳米粒子体外可诱导直肠癌细胞的凋亡.在体内,三氧化二砷纳米粒子可抑制HR8348裸鼠皮下移植瘤的生长,4.0 μmol/L三氧化二砷纳米粒子组增殖指数(31.61%)低于对照组(66.75%),而凋亡指数(19.21%)高于对照组(6.47%),P＜0.05.可抑制肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡.结论 在直肠癌中,三氧化二砷纳米粒子通过抑制增殖,诱导凋亡而发挥抗癌作用,是直肠癌治疗的良好药物.     

iASPP对表达野生型p53基因的乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响

目的： P53凋亡刺激蛋白（ASPP）家族成员能够调节P53诱导的细胞凋亡。其中ASPP家族抑制成员(iASPP)主要通过特异性地和P53蛋白结合抑制肿瘤细胞的凋亡,本实验通过构建iASPP的RNAi质粒,研究在体内外抑制iASPP基因后对表达野生型p53基因的乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法: 采用分子生物学方法构建iASPP的腺病毒RNAi质粒pAd-iASPP-RNAi;体外转染MCF-7细胞,同时建立MCF-7细胞的裸鼠移植瘤模型;分别采用RT-PCR和Western blotting检测转染后瘤细胞iASPP mRNA和蛋白质表达的变化;采用流式细胞术检测转染前后瘤细胞凋亡的变化。结果: 转染iASPP RNAi后,MCF-7细胞的iASPP mRNA及蛋白表达量降低（抑制率分别为95.4%和96.8%,P<0.01）;MCF-7细胞的凋亡百分率、坏死百分率与对照组相比具有显著差异（P<0.01）。裸鼠移植瘤模型经pAd-iASPP-RNAi处理后,iASPP mRNA及蛋白表达量也明显降低（抑制率分别为87.4%和89.2%,P<0.01）;移植瘤细胞的凋亡百分率和坏死百分率显著上升（P<0.01和P<0.05）。结论: 在体内外抑制iASPP基因的表达能够通过p53途径诱导表达野生型p53的乳腺癌细胞凋亡。     

p53正向凋亡调节因子重组腺病毒载体的构建及对胰腺癌细胞增殖的抑制作用

目的 构建p53正向凋亡调节因子重组腺病毒(Ad-PUMA)载体,探讨Ad-PUMA对人体内外胰腺癌的治疗作用.方法 利用Ad-Easy系统在大肠杆菌同源重组,构建Ad-PUMA腺病毒载体,在293细胞内成功包装并鉴定后,以Ad-PUMA转染人转移胰腺癌细胞株AsPC-1.用MTT法检测转染前后存活细胞,观察Ad-PUMA的体外抑瘤作用;用Western blot方法鉴定转染前后AsPC-1细胞内PUMA蛋白表达.通过裸鼠皮下胰腺癌移植瘤模型观察Ad-PUMA的体内抑瘤效果;Westem blot方法鉴定Ad-PUMA转染后肿瘤组织内PUMA蛋白表达,TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP nick end labeling)法检测肿瘤组织细胞凋亡.结果 在体外,随着Ad-PUMA感染剂量增加,细胞内PUMA蛋白表达逐渐增加,细胞存活率逐渐下降;在体内,Ad-PUMA可显著抑制裸鼠皮下肿瘤的生长,其抑瘤率为44.2%,瘤体组织PUMA表达水平及凋亡指数明显升高.结论 PUMA抑制体内外胰腺癌细胞增殖,可能是一种潜在的肿瘤生物治疗手段.     

Survivin-siRNA真核重组质粒对前列腺癌移植瘤的抑制作用

 目的：探讨survivin-siRNA真核重组质粒对前列腺癌移植瘤的抑瘤效应,并分析相关机制。方法：体外培养前列腺癌DU145细胞,将细胞注射到裸鼠背部皮下,待移植瘤直径达到8 mm时将瘤无菌取出,分成直径约2 mm的瘤块,手术植入另外的裸鼠皮下,将survivin-siRNA质粒或scrambled siRNA对照质粒电转染进行治疗,描记移植瘤生长曲线,并计算抑制率;通过HE染色、免疫组化染色及TUNEL染色观察survivin-siRNA对移植瘤影响。结果：成功构建裸鼠前列腺癌移植瘤模型。与mock和scrambled siRNA组相比,survivin-siRNA抑瘤率分别为两对照组的61.81%和62.87%;免疫组织化学染色发现：survivin-siRNA质粒明显抑制细胞内survivin表达;TUNEL染色证实治疗组肿瘤细胞凋亡明显增加。结论：重组质粒survivin-siRNA明显抑制DU145细胞移植瘤的生长,抑制内源性 survivin 蛋白的表达并促进细胞凋亡,针对survivin靶点的基因治疗前景广阔。     

地塞米松对顺铂诱导人肺腺癌细胞SPC-A1凋亡的抑制作用及分子机制

研究地塞米松(DEX)对顺铂(CDDP)引起的人肺腺癌细胞SPC-A1凋亡的抑制作用及可能的分子机制。将不同浓度的DEX分别加入人肺腺癌细胞SPC-A1体外诱导培养24h后,再用不同浓度CDDP处理SPC-A1细胞48h。MTT法检测细胞存活率;RT-PCR方法检测1μmol/L DEX诱导培养不同时间后SPC-A1细胞内血清/糖皮质激素-诱导激酶(SGK-1)和有丝分裂原蛋白激酶(MKP-1)的表达;用生物素标记的抗糖皮质激素受体(GR)抗体对SPC-A1细胞行免疫组化染色来检测GR的表达。MTT测定结果显示,SPC-A1细胞经DEX诱导后,对CDDP所致的凋亡有抵抗作用并与DEX浓度呈剂量依赖关系。RT-PCR检测到DEX诱导培养能提高SGK-1在SPC-A1细胞中的表达,表达量随时间延长而增加;但未检测到MKP-1的表达。免疫组化检测显示SPC-A1细胞经DEX诱导后GR上调,细胞内GR表达的阳性细胞数明显高于对照组。结果表明DEX对CDDP引起SPC-A1细胞的凋亡有抑制作用。可能的分子机制是通过上调细胞内GR表达,进而上调其通路下游抗凋亡蛋白SGK-1的表达,导致SPC-A1细胞产生抗凋亡作用。     

c-Met基因调控肺腺癌A549细胞放射敏感性

目的探讨上调和下调肺腺癌细胞株A549细胞中c-Met基因表达水平后,该细胞鼠移植瘤放射敏感性的变化情况。方法利用电穿孔法将c-Met siRNA和重组表达载体pc DNA3.1-c-Met分别转染入肺癌A549细胞后采用G418筛选得到稳定转染的肺癌细胞系。转染48 h后用RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中c-Met基因和蛋白表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖活性;克隆形成实验研究分别上调和下调c-Met基因表达水平对肺腺癌细胞株A549放射敏感性的影响;TUNEL法检测细胞凋亡影响,移植瘤实验检测基因沉默和激进c-Met基因表达水平并联合放射射线照射对肺腺癌细胞生长的抑制作用。结果 c-Met下调组中肺癌A549细胞内c-Met基因和蛋白表达水平明显降低,而上调组中的表达水平则得到了明显升高。c-Met下调组肺癌A549细胞放射敏感性升高,c-Met上调组肺癌A549细胞放射敏感性降低(P0.05)。下调组中肺癌A549细胞的增殖活性受到抑制而细胞凋亡率显著增加(P0.05),上调组肺癌细胞的增殖能力明显增强而细胞凋亡率明显降低(P0.05);下调组裸鼠移植瘤的平均体积明显小于对照组,而上调组裸鼠移植瘤的瘤体平均体积则显著大于对照组(P0.05)。结论基因沉默c-Met的基因表达水平能显著降低肺癌细胞的增殖活性,抑制人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长并明显提高移植瘤瘤体的放射敏感性。     

在不同转移潜能人肺癌细胞移植瘤中血管性血友病因子的表达

目的探讨血管性血友病因子(vWF)在不同转移潜能人肺癌裸鼠移植瘤中的表达。方法体外培养低转移及高转移人肺癌细胞系A549和D95,Transwell小室法检测肿瘤细胞体外侵袭和迁移能力;10只Balb/c裸小鼠随机分为A549组和D95组(n=5)。0. 2 mL两种肿瘤细胞悬液(浓度约为1×10^7/mL)分别皮下注入A549组及D95组裸小鼠左上肢,构建人肺癌裸鼠移植瘤模型。观察vWF对裸小鼠移植瘤生长的影响;ELISA检测外周血vWF水平;免疫组化检测移植瘤vWF蛋白表达;免疫印记检测移植瘤、肺和肝vWF蛋白表达。结果 D95肺癌细胞体外侵袭和迁移细胞数多于A549肺癌细胞(P<0. 05);D95组裸小鼠于皮下接种后第5天全部出现瘤结节,A549组于第7天全部出现;与A549组相比,D95组裸小鼠移植瘤质量及肺转移瘤结节数显著增多(P<0. 05),D95组移植瘤、肺及肝组织vWF蛋白的表达显著高于A549组(P<0. 01)。结论 vWF与人肺癌细胞的转移潜能密切相关。     

乙莫克舍增强顺铂对肺癌细胞系A549的抑制作用

目的探讨化学药物顺铂与肉毒碱棕榈酰基转移酶1(CPT1)小分子抑制剂乙莫克舍(etomoxir)对肿瘤细胞增殖及迁移的影响。方法分别用顺铂(7.5μmol/L)、etomoxir(75μmol/L)及顺铂联用etomoxir处理人非小细胞肺癌细胞系A549 72 h,CCK8检测A549的增殖作用;Transwell细胞迁移实验检测A549的迁移能力;annexin V/PI检测A549细胞凋亡;用etomoxir和顺铂联合治疗,裸鼠皮下成瘤模型检测该种联合治疗方法对肿瘤生长的影响。结果顺铂联用etomoxir后,肿瘤细胞生长及迁移能力受到明显抑制(P0.05),并且肿瘤细胞的凋亡有明显增加(P0.05);另外顺铂联用etomoxir治疗后,小鼠肿瘤的生长受到明显抑制(P0.05)。结论顺铂联用etomoxir可以降低肿瘤细胞增殖能力,增强肿瘤细胞凋亡,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,进而抑制肿瘤在裸鼠体内的生长。     

人肺腺癌细胞株SPC-A1诱导球体形成及肺癌干细胞致瘤能力评估

背景：目前关于肺癌干细胞是否可以形成球体及其致瘤能力尚缺乏明确的定论。 目的：观察人肺腺癌细胞株SPC-A1诱导球体形成及肺癌干细胞的致瘤能力。 方法：利用无血清-DF12培养液培养增殖期肺癌细胞株SPC-A1,加入重组人胰岛素样生长因子1和重组人表皮生长因子及重组人成纤维细胞生长因子10诱导球体形成,获得球体细胞沉淀物,进行免疫荧光检测和PCR扩增,了解干细胞相关标志的表达情况。将肺球体细胞植入NOD-SCID免疫缺陷小鼠皮下,观察肿瘤生长情况,并利用活体荧光成像仪进行摄片。 结果与结论：培养肺腺癌细胞SPC-A1 5-10 d获得肺球体。RT-PCR检测发现,肺球体细胞表达肺癌干细胞及细支气管肺泡干细胞标志物,CD24、CD221、CCSP和SP-C;另外,肺球体细胞与纯化的CD24⁺、CD221⁺肺癌干细胞同样表达肺干细胞的主干基因TTF-1、胚胎干细胞主干基因OCT4、Nanog和Bmi-1肺干细胞的主干基因TTF-1。荧光检测显示,80%以上的肺球体细胞中表达CCSP和OCT4;SPC-A1细胞具有肺泡Ⅱ型细胞特征,并表达SP-C蛋白,但仅约5%的细胞表达CCSP和OCT4。肺球体细胞皮下植入50 d,活体荧光成像可清晰显示小鼠体内肿瘤直径达1 cm。表明人肺腺癌细胞株SPC-A1可诱导球体形成,球体中富含肺癌干细胞并具有致瘤能力。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

五味子乙素通过激活Caspase-3影响三阴乳腺癌增殖和凋亡

目的观察中药五味子乙素对三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-231裸鼠成瘤能力的影响及机制。方法利用MTT实验验证五味子乙素对三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-231的毒性作用;利用流式细胞术检测不同浓度的五味子乙素对MDA-MB-231细胞凋亡的影响;利用裸鼠移植瘤模型分析五味子乙素对乳腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响;利用蛋白免疫印迹方法检测各组移植瘤组织中Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平。结果五味子乙素呈剂量依赖性显著抑制MDA-MB-231细胞的体外增殖能力,促进细胞的凋亡,较好地抑制乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长,明显缩小肿瘤体积。五味子乙素处理后肿瘤裸鼠模型的肿瘤组织中Bax、Caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,说明五味子乙素促进移植瘤细胞凋亡。结论五味子乙素抑制MDA-MB-231细胞增殖并促进凋亡,并抑制裸鼠移植瘤的生长。     

阿糖胞苷诱导肺腺癌细胞凋亡与p73激活相关

目的 体外观察阿糖胞苷(1-β-D-arabinofuranosylcytosine, Ara-C)对肺腺癌A549细胞凋亡的诱导作用,探讨p53、p73基因在此凋亡过程中的调控作用.方法 Ara-C体外作用于A549细胞,TUNEL法检测A549细胞的凋亡;透射电镜观察A549细胞凋亡的典型超微结构;免疫印迹法检测A...     

Survivin突变体对乳腺癌细胞的体内外作用

为了探讨Survivin负性突变体T34A对乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响,本文分别采用生理盐水、空载体质粒(PORF-9-null)及Survivin-T34A与MCF-7细胞共培养,观察体外MCF-7细胞的增殖及凋亡情况;建立乳腺癌裸鼠模型,体内实验检测Survivin-T34A对乳腺癌的抑制作用。结果表明转染了Survivin-T34A的细胞增殖率明显低于PORF-9-null组,电镜下观察可见细胞凋亡增多,流式细胞术检测显示其凋亡率明显高于空载体组。瘤内注射Survivin-T34A组的抑瘤效果明显,抑制率达47.1%。本研究提示Survivin-T34A负性突变体能够有效地抑制乳腺癌细胞的增殖,并促进其凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。     

参慈胶囊联合顺铂通过PI3K/AKT/mTOR信号通路逆转人肺腺癌顺铂耐药的机制研究

目的:探讨参慈胶囊联合顺铂是否通过PI3K/AKT/mTOR信号通路逆转接种人肺腺癌A549/DDP细胞的裸鼠体内的顺铂耐药。方法:建立裸鼠人肺腺癌移植瘤模型,随机分为对照组、参慈胶囊组、顺铂组和参慈胶囊+顺铂组。对照组予生理盐水,其余各组荷瘤裸鼠均用药21 d,断颈处死,取肿瘤组织,采用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡;采用FQ-PCR技术检测A549/DDP肺癌组织PTEN、P-糖蛋白、PI3K、AKT和mTOR的mRNA表达情况。结果:参慈胶囊组、顺铂组和参慈胶囊+顺铂组与对照组比较,对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖均有抑制作用,其中参慈胶囊+顺铂组较其它治疗组能够进一步将人肺腺癌A549/DDP细胞阻滞于G_2/M期,促进细胞凋亡,增加PTEN的表达,抑制P-糖蛋白、PI3K、AKT和mTOR的表达。结论:参慈胶囊可能通过阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进PTEN的表达,或者抑制P-糖蛋白介导的耐药途径,增强裸鼠体内人肺腺癌A549/DDP耐药细胞对顺铂的敏感性。     

CDA1在肺腺癌细胞株SPC-A1中表达的作用

目的观察CDA1在肺腺癌细胞株SPC-A1加入干扰素γ及喜树碱前后表达的变化,明确CDA1在肺腺癌发生发展中作用。方法人肺腺癌细胞株SPC-A1细胞体外培养分为四组即对照组、喜树碱组、干扰素γ组和喜树碱及扰素γ联合组,采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖情况,运用real time RT-PCR及Western blot法测定CDA1、P53、P21、CyclinD1 mRNA及蛋白的表达,分析其相关性。结果 MTT比色法结果显示分别或共同加入喜树碱及干扰素γ24h后SPC-A1细胞增殖均不同程度地受到抑制,联合加入喜树碱和干扰素γ组细胞增殖抑制程度比单独加入干扰素γ及喜树碱组明显(P<0.05);real time RT-PCR和Western blot检测显示,SPC-A1细胞中单独加入喜树碱和干扰素γ24h后CDA1 mRNA及蛋白的表达均增加(P<0.05),同时P21、P53 mRNA及蛋白表达增加及CyclinD1蛋白表达减少(P<0.05),联合加入喜树碱和干扰素γ组比单独加入干扰素γ及喜树碱组明显(P<0.05);在SPC-A1细胞中加入干扰素γ及喜树碱,CDA1与P53、P21蛋白表达呈正...