戊四氮致痫大鼠中ERK信号通路的研究

目的:研究细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号通路在癫痫大鼠脑内的表达规律及其意义。方法:建立戊四氮致痫大鼠模型,在痫性发作30 min、1.5 h5、h和8 h应用免疫组织化学和Western印迹法对海马ERK1、ERK2和p-ERK1/2蛋白水平的表达进行研究,并加用ERK通路阻断剂PD98059干预。结果:正常大鼠脑内有少量的ERK1和ERK2阳性神经元,未见有p-ERK1/2阳性神经元。戊四氮致痫后30min p-ERK1/2开始表达,ERK1和ERK2表达较对照组开始增强(P<0.05),1.5 h后p-ERK1/2强烈表达(P<0.05),5 h后3者的表达开始减弱。PD98059干预组ERK1/2的活化较癫痫组显著受抑(P<0.05)。Western Blot结果显示,癫痫组大鼠ERK1、ERK2和p-ERK1/2蛋白表达较对照组明显增强(P<0.05),PD98059干预组3种蛋白水平显著低于癫痫组(P<0.05)。1.5 h时点的蛋白表达水平高于其他各时点相应组(P<0.05)。同时PD98059完全抑制了大鼠的痫性发作。结论:ERK信号途径在戊四氮致痫模型中被激活,参与癫痫发作的病理生理过程,并可能具有上游始动发生的作用。     

海仁藻酸致痫大鼠肾脏ERK1/2表达的检测及意义

目的：研究海仁藻酸(KA)致痫大鼠肾脏细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）表达情况,阐明癫痫引起肾损伤的可能机制。方法：健康雄性Wistar大鼠70只,随机分为致痫组和正常对照组,每组35只。采用立体定位仪下杏仁核内注射KA方法制备癫痫动物模型,在大鼠癫痫发作后0、2、6、12和24 h制备肾脏组织标本,采用免疫组织化学法检测正常对照组和致痫组大鼠癫痫发作后不同时间肾脏组织ERK1/2表达水平,并与对照组对比。结果： 致痫组大鼠肾脏组织ERK1/2表达水平于癫痫发作后逐渐增加,6 h肾组织ERK1/2的表达达到高峰,高于癫痫发作后0 h（P<0.01）,随后逐渐下降;至癫痫发作24 h,肾脏ERK1／2表达恢复至致痫0 h的表达水平（P>0.05）。致痫组大鼠肾脏HE染色显示,肾小管、肾小球均无明显形态学改变。结论：ERK1/2　活化可能在癫痫所引起的肾脏损伤中具有重要的作用,抑制ERK1/2活化对肾脏起到保护作用。     

谷氨酸钠致痫大鼠大脑皮质mGluR5的表达变化

目的探讨谷氨酸钠(GluNa)致痫时大鼠大脑皮质代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)的表达变化。方法将动物随机分为正常对照组、生理盐水组、GluNa致痫组。在GluNa诱导大鼠癫痫发作2h后，进行SABC法免疫组织化学染色。结果正常对照组大鼠大脑皮质各层均有丰富的mGluR5表达，特别是第V层锥体细胞。生理盐水组mGluR5表达同正常对照组相比没有明显改变。而GluNa致痫组mGluR5表达明显下调。结论在癫痫发作早期mGluR5表达下降可能是神经细胞的一种自我保护作用。     

槐定碱致痫大鼠海马组织超微结构的观察

目的建立槐定碱（sophoridine,SRI）致痫大鼠癫痫模型,电镜下观察槐定碱致痫大鼠海马组织超微结构的变化,探讨癫痫发病机制。方法将30只成年SD大鼠（雌雄不拘）随机分为生理盐水对照组（NS）、槐定碱致痫组（SRI）、苯巴比妥钠＋槐定碱组（PBS＋SRI）,每组各10只。腹腔注射大剂量槐定碱（47．83mg／kg）后,观察大鼠行为学变化以及应用电镜技术观察各组大鼠致病后海马CAI区和CA3区神经元组织病理学和形态学的改变。结果腹腔注射大剂量槐定碱后,大鼠出现了痫性行为发作;电镜下可见槐定碱致痫大鼠海马CAI区和CA3区神经元核膜双层结构破坏,神经细胞核严重固缩,染色质颗粒状聚集,线粒体肿胀,嵴断裂或消失,毛细血管内皮细胞核固缩。经苯巴比妥钠干预后,槐定碱致痫大鼠海马CAI区和CA3区神经细胞的损伤程度减轻。结论大剂量槐定碱可导致大鼠在体海马神经细胞损伤,从而诱发癫痫。     

氧化苦参碱和槐定碱对青霉素致痫大鼠海马的影响

目的观察氧化苦参碱和槐定碱对青霉素致痫大鼠行为学和海马组织形态学的改变。方法取大鼠雌雄各半，随机分为7组，每组10只，分别为正常对照组、癫痫模型组、阳性药物苯巴比妥钠组、氧化苦参碱高剂量组、氧化苦参碱低剂量组、槐定碱高剂量组和槐定碱低剂量组。大鼠腹腔注射大剂量青霉素致痫模型，并腹腔注射氧化苦参碱和槐定碱，观察其行为学和海马组织形态学改变。结果与致痫组相比氧化苦参碱低、高剂量组和槐定碱低剂量组均能不同程度地延长痫性发作潜伏期，并且降低痫性发作程度；光镜、电镜观察使用氧化苦参碱和小剂量槐定碱后致痫大鼠海马组织神经细胞肿胀、细胞器损伤等改变得到改善。结论氧化苦参碱和小剂量槐定碱对脑组织损伤有一定的保护作用。     

氧化苦参碱和槐定碱对癫痫的比较研究

目的探讨氧化苦参碱和槐定碱对癫痫的作用。方法大鼠腹腔注射青霉素制作癫痫模型,以苯巴比妥钠作阳性对照,观察氧化苦参碱和槐定碱的不同作用。结果氧化苦参碱中、高剂量组和槐定碱低剂量组可延长癫痫大鼠惊厥潜伏期,明显减轻大鼠痫样发作程度;氧化苦参碱低、中、高剂量组和槐定碱低剂量组对大鼠皮层脑电图有明显改变;在青霉素致痫后,光、电镜观察可见神经细胞肿胀、细胞器损伤等改变,使用氧化苦参碱和槐定碱后神经元细胞肿胀明显减轻,细胞器等损伤能够得到改善。结论不同剂量的氧化苦参碱和槐定碱对癫痫具有不同的影响。     

Brain protective effect of EGF on iron-induced epilepsy rats

目的 探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)在铁离子致痫大鼠模型中的脑保护作用.方法 成年大鼠64只,分为正常组、假手术组、模型组、治疗组,每组16只.模型组和治疗组建立大鼠大脑皮质铁离子注射致痫模型,假手术组皮质予以生理盐水注射,正常组不作处理.应用Western blot和RT-PCR方法检测各组大鼠谷氨酸转运蛋白-1(glutamate transporter,GLT-1)及其mRNA的表达情况,皮层脑电监测记录造模后大鼠脑电图特征,并通过Racine评分评价每组大鼠造模后第2周的行为学变化.结果 在成功造模后第8天,模型组大鼠皮层GLT-1蛋白(0.495±0.077)及mRNA含量(0.644±0.067)较正常组降低(P＜0.05),而EGF治疗组可明显上调铁离子致病大鼠脑皮层GLT-1蛋白(1.088±0.068)及mRN A(0.965±0.039)表达(P＜0.05);正常组、假手术组无痫性放电及癫痫发作,模型组及治疗组均出现痫样脑电及癫痫发作,但治疗组较模型组癫痫发作频次减少、程度减弱(P＜0.05).结论 EGF在大鼠铁离子致痫模型中可上调GLT-1蛋白及mRNA表达,降低大鼠癫痫发作频次及程度,对铁离子致痫大鼠具有一定脑保护作用.     

槐定碱对青霉素致痫大鼠中枢活动的影响

目的探讨槐定碱对青霉素致痫大鼠中枢活动的影响。方法大鼠50只,随机分为5组,每组10只,实验3组分别腹腔注射槐定碱2.94、5.88和11.76 mg/kg,阳性对照组和模型组分别腹腔注射苯巴比妥钠10mg/kg和生理盐水,观察槐定碱对大鼠癫痫模型大脑皮层脑电、脑组织形态学的影响及对其脑组织中MDA含量、SOD活性的影响。结果槐定碱2.94mg/kg可延长癫痫大鼠惊厥潜伏期,明显减轻大鼠痫样发作程度,明显减少大鼠皮层脑电图中的棘波;青霉素致痫大鼠后,光、电镜观察可见大鼠脑海马部位神经细胞肿胀,细胞器损伤等改变。使用槐定碱2.94mg/kg后神经元细胞肿胀明显减轻,细胞器等损伤能够得到不同程度的改善;槐定碱2.94mg/kg能降低癫痫大鼠脑中MDA含量,提高SOD活性;槐定碱5.88和11.76mg/kg未显示上述作用。结论槐定碱2.94mg/kg具有一定的抗癫痫作用,而槐定碱5.88和11.76mg/kg可能有一定的致痫作用。     

癫痫大鼠脑组织内HSP7O表达的免疫组化研究

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)在癫痫大鼠脑组织内的表达情况及其意义。方法采用戊四氮致痫模型,应用免疫组织化学及常规病理检查的方法进行研究。结果在正常大鼠脑内未见HsP70免疫反应(IR)阳性细胞,戊四氮致痫后12h脑内开始出现HSP70IR阳性细胞,24hIR达高峰,3d后开始下降,7d后消失。HSP70主要在边缘系统(尤其是海马的CA1、CA3、CA4区)、大脑皮质(尤其是颞叶皮质、梨状皮质)等区域表达。常规病理检查发现,上述区域散在出现受损的异常神经元。结论癫痫发作可诱导HsP70在大鼠脑内广泛表达。HsP70表达可作为神经元受损的一个早期指标。     

坎地沙坦干预KA致痫大鼠心肌细胞ERK1/2的表达及其机制

目的：探讨坎地沙坦干预后海人藻酸（KA）致痫大鼠心肌细胞细胞外信号调节激酶（ERK1/2）的表达及其机制。方法：雄性Wistar大鼠（n=105）随机分为3组：A对照组（n=35）;B_1-5 致痫组(n=35);C_1-5坎地沙坦组(n=35),1-5分别表示癫痫后0、0.5、2.0、4.0及6.0 h。采用立体定位仪下杏仁核内注射KA方法制备大鼠癫痫模型,于致痫后不同时程进行灌流固定、心肌组织的石蜡包埋、切片及免疫组织化学染色,检测不同时程心肌细胞ERK1/2表达的灰度值。结果：与对照组比较,致痫组及坎地沙坦组心肌细胞于致痫后0.5 h ERK1/2表达均开始增加（P<0.05）,致痫后2 h两组大鼠心肌组织ERK1/2的表达均达到高峰（P<0.01）,随后逐渐下降,致痫后6 h,两组大鼠心肌组织ERK1/2表达均回到对照组水平（P>0.05）。即致痫组及坎地沙坦干预两组大鼠心肌ERK1/2蛋白表达组间比较,坎地沙坦组ERK1/2表达较低（P<0.05）。结论：ERK1/2在KA致痫大鼠心肌细胞中表现为短时程表达增加,坎地沙坦可使心肌ERK1/2表达降低。