纳米颗粒致人血管内皮细胞损伤的比较

目的 比较3种不同类型的颗粒对血管内皮细胞的毒性效应,探讨颗粒成分和粒径对其心血管的毒性效应.方法 选择纳米二氧化硅(nano-SiO2)、纳米二氧化钛(nano-TiO2)和标准石英作为染尘颗粒,其中nano-TiO2和标准石英分别作为nano-SiO2的成分对照和粒径对照.将剂量为5.0、10.0、20.0、40.0 μg/ml的3种颗粒分别作用于人脐静脉内皮细胞,以不含颗粒物的DMEM培养液为对照组,24 h后收集培养液上清,测定乳酸脱氢酶(LDH)、总超氧化物歧化酶(SOD)活力、NO、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)释放量.结果 与0μg/ml剂量组比较,各剂量nano-SiO2染尘组和10.0、20.0、40.0 μg/ml nano-TiO2染尘组及标准石英染尘组的LDH活力明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).与0 μg/ml剂量组比较,5.0、10.0、20.0 μg/ml nano-SiO2染尘组和40.0 μg/ml nano-TiO2染尘组及20.0、40.0 μg/ml标准石英染尘组的SOD活力明显增加,40.0μml nano-SiO2染尘组的SOD活力明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).与0μg/ml剂量组比较,10.0、20.0、40.0 μg/mlnano-SiO2染尘组和各剂量nano-TiO2染尘组及40.0 μg/ml标准石英染尘组的TNF-α释放量明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.01).与0μg/ml剂量组比较,10.0、20.0、40.0 μg/mlnano-SiO2染尘组和20.0、40.0μg/ml nano-TiO2染尘组及40.0 μg/ml标准石英染尘组的IL-6释放量明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01).5.0、10.0、20.0、40.0 μg/ml nano-SiO2染尘组的LDH活力明显高于标准石英染尘组,10.0、20.0、40.0 μg/ml nano-TiO2染尘组LDH活力明显低于标准石英染尘组,差异均有统计学意义(P＜0.05).5.0、10.0、20.0μg/ml nano-SiO2染尘组SOD活力明显高于标准石英染尘组,40.0 μg/ml nano-SiO2染尘组和20.0 μg/ml nano-TiO2染尘组SOD活力明显低于标准石英染尘组,差异均有统计学意义(P＜0.01).5.0、10.0、20.0、40.0 μg/ml nano-SiO2染尘组和5.0、10.0μg/ml nano-TiO2染尘组的TNF-α释放量均明显高于标准石英染尘组,差异均有统计学意义(P＜0.01).5.0、10.0、20.0、40.0μg/ml nano-SiO2染尘组和20.0、40.0 μg/ml nano-TiO2染尘组的IL-6释放量明显高于标准石英染尘组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 3种颗粒都能够对细胞产生一定的毒性效应,其中以nano-SiO2的作用最强,nano-TiO2和标准石英的细胞毒性表现不一.颗粒物毒性与其成分和粒径有关.     

氟诱导成骨细胞程序性坏死的实验研究

目的探讨程序性坏死通路受体相互作用蛋白1-受体相互作用蛋白3-混合系列蛋白激酶样结构域(RIP1-RIP3-MLKL)是否参与氟诱导的成骨细胞死亡。方法体外培养人成骨肉瘤细胞株(Saos-2细胞), 按如下分组分别处理24、48 h:对照组, 氟化钠(NaF)组(5.0、10.0、20.0、40.0 mg/L NaF), 程序性坏死抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)组(50.0 μmol/L Nec-1), NaF + Nec-1组(5.0、10.0、20.0、40.0 mg/L NaF + 50.0 μmol/L Nec-1), 采用CCK-8法检测细胞增殖情况, 化学比色法检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性。为进一步分析NaF对RIP1-RIP3-MLKL通路的影响, 将Saos-2细胞分为对照Ⅱ组和NaFⅡ组(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mg/L NaF), 分别处理24、48 h, 采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞RIP1、RIP3、MLKL蛋白表达水平。结果各组处理24、48 h时细胞增殖率(%:100.00 ± 0.5...     

不同粒径SiO2致A549细胞毒性及氧化损伤作用实验研究

目的探讨纳米SiO2及纳米/微米复合SiO2颗粒对A549细胞的毒性效应及氧化损伤作用。方法将纳米、微米、纳米/微米复合SiO2按照不同作用浓度(0、3.13、6.25、12.5、25.0、50.0、100、200μg/ml),对A549细胞进行染毒作用24h后,采用CCK-8法测定A549细胞的抑制率,DCFH-DA荧光染色法标记检测细胞活性氧(ROS)水平,微量酶标法测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果与阴性对照组比较,纳米、微米、纳米/微米复合组细胞抑制率均升高(P<0.05);且纳米/微米复合组始终高于纳米组及微米组。低浓度时微米SiO2对细胞抑制率高于纳米SiO2。随着浓度的增加,纳米组高于微米组(P<0.05)。各暴露组ROS水平则呈剂量-效应关系。同浓度纳米SiO2组高于微米SiO2组,且纳米/微米复合SiO2组高于同浓度纳米组及微米组。与阴性对照组比较,染毒组LDH水平升高,存在剂量-效应关系。同浓度纳米组高于微米组,纳米/微米复合组高于纳米组及微米组(P<0.05)。结论不同粒径SiO2均可引起A549细胞抑制率升高、ROS水平升高和细胞膜损伤。且纳米/微米复合SiO2组强于纳米组及微米组,同浓度纳米SiO2组高于微米组,说明粒径越小,对细胞损伤越大,而氧化损伤可能是纳米SiO2致细胞凋亡的一个途径。     

氟化物对体外培养孕鼠子宫内膜上皮细胞的影响

目的研究氟化物对体外培养孕鼠子宫内膜上皮细胞的影响。方法选取20只清洁级昆明受孕小鼠,采用胰蛋白酶消化结合刮取法分离内膜上皮细胞,并测定细胞活力。设对照组和氟染毒组(F-浓度分别为2.5、5.0、10.0、20.0μg/ml)。细胞体外培养72h后,HE染色观察形态变化;并对首次传代的细胞染氟24h后,通过人工记数法测定细胞贴壁率;染氟72h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力。结果2.5、5.0μg/ml剂量组细胞无病理损伤,10.0μg/ml剂量组细胞出现颗粒变性、脂肪变性;20.0μg/ml剂量组细胞出现核溶解、死亡并脱壁。首次传代后对照组和各剂量组子宫内膜上皮细胞的贴壁率均在80%左右,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,5.0、10.0、20.0μg/ml组吸光度值较低,差异均有统计学意义(P<0.05),表明子宫内膜上皮细胞增殖活力受到抑制。结论氟可引起体外培养的子宫内膜上皮细胞出现多种病理损伤,降低其体外增殖能力。     

短期暴露于纳米SiO_2对HaCaT细胞基因组DNA甲基化的影响

目的探讨纳米SiO2对体外培养细胞基因组总体DNA甲基化水平的影响。方法分别以2.5、5、10μg/ml纳米SiO2溶液和10μg/ml微米级SiO2处理人皮肤表皮细胞系(HaCaT)24h;以3μmol/L DNA甲基化转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(DAC)处理48 h的10μg/ml组为阳性对照,并设立溶剂对照组。应用高效毛细管电泳(HPCE)定量分析纳米SiO2处理细胞24h后,基因组DNA总体甲基化的变化,用Q-PCR和Western Blot方法检测甲基化相关蛋白mRNA和蛋白的表达变化,并用DNA甲基化转移酶活性试剂盒检测DNA甲基化转移酶的活性。结果 HPCE定量分析结果显示纳米SiO2可引起HaCaT细胞总体甲基化程度降低,呈剂量依赖性关系;与正常细胞相比,微米SiO2以及2.5、5和10μg/ml纳米SiO2组分别降低37.8%、43.9%、54.9%和52.8%,差异有显著性(P<0.05);对照组5-aza-dC处理后使HaCaT细胞甲基化程度减少27.3%。各组酶的蛋白表达与mRNA表达水平及DNMTs活性变化具有相同的变化趋势,经纳米SiO2处理的HaCaT细胞,DNMT1、DNMT3a及MBD2表达随着纳米SiO2剂量的上升而下降,DAC组表达水平最低。结论纳米SiO2能引起HaCaT细胞整体基因组DNA甲基化水平降低,可能与DNA甲基化转移酶的酶活性降低有关。     

姜黄素对丙烯酰胺致HepG2细胞DNA损伤的保护作用

目的体外研究姜黄素对丙烯酰胺(AA)所致人肝癌HepG2细胞DNA损伤的保护作用。方法AA(0、2.5、5.0、10.0和20.0mmol/L)与HepG2细胞温育1h,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤;姜黄素(0.63、1.25和2.50μg/ml)37℃预处理HepG2细胞1h后,再与不同浓度的AA(0、10和20mmol/L)温育1h,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤,2',7'-二氢二氯荧光比色法测定细胞内活性氧水平。结果2.5、5.0、10.0和20.0mmol/LAA组的彗尾DNA含量、彗星尾长及彗星尾矩均显著高于对照组(P<0.05),姜黄素保护组的彗尾DNA含量、彗星尾长及彗星尾矩均比相同浓度AA处理组降低,2.50μg/ml姜黄素保护组的差异有显著性(P<0.05);AA(10和20mmol/L)作用于HepG2细胞1h后,细胞内ROS水平显著升高(P<0.01),2.50μg/ml姜黄素预处理组ROS水平显著低于单独AA处理组(P<0.01)。结论姜黄素对AA所致HepG2细胞DNA损伤具有保护作用。     

氯化镉对大鼠肾细胞内MAPK基因mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度氯化镉(CdCl2)对大鼠肾(NRK)细胞MAPK基因mRNA表达的影响.方法 应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度CdCl2(0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0μmol/L)染毒24 h后对NRK细胞存活率的影响;应用带有SYBR Green Ⅰ的实时荧光定量PCR技术观察不同浓度CdCl2(0、2.5、5.0和10.0μmol/L)对NRK细胞内MAPK基因(ERK1/2、p38MAPK、JNK1/2)mRNA表达的影响.结果 以阴性对照组(CdCl2 0μmol/L)NRK细胞存活率为100%,各染毒组(CdCl25.0、10.0、20.0和40.0μmol/L)NRK细胞存活率分别为72.28%、39.95%、15.66%、10.39%,且与对照组之间差异有统计学意义(P<0.01),并存在剂量-效应关系,经CdCl2染毒后,各实验组(CdCl2 2.5、5.0和10.0μmol/L)NRK细胞的ERK1/2、p38MAPK、JNK1/2基因的mRNA的相对表达量均低于阴性对照组(P<0.05或P<0.01).结论 CdCl2可能引起NRK细胞内MAPK基因mRNA的表达水平发生改变.     

纳米氧化锌对小胶质瘤BV2细胞炎症因子及p38MAPK蛋白磷酸化的影响

[目的]探讨纳米氧化锌(zinc oxide nanoparticle,nano-Zn O)对小胶质瘤BV2细胞炎症因子及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化的影响。[方法]不同质量浓度nano-Zn O(0、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0、50.0、75.0 mg/L)染毒小胶质瘤BV2细胞24 h,用MTT法测定细胞存活率后确定染毒剂量。以nano-Zn O(0、5.0、10.0、15.0、20.0 mg/L)染毒BV2细胞24 h,采用乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞培养液上清液中LDH活性,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的分泌水平,Western blot法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白水平并用Image J软件对蛋白条带灰度值进行分析。应用Spearman相关分析炎症因子分泌与p38MAPK蛋白磷酸化水平的相关性。[结果]随nano-Zn O染毒剂量的增加,BV2细胞存活率降低(r=-0.994,P0.001),细胞培养液上清液中LDH活性增加(r=0.749,P0.001)。与对照组相比,10.0、15.0、20.0 mg/L nano-Zn O染毒组TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平增加(均Ps0.05)。Western blot检测结果发现各染毒组p-p38MAPK蛋白表达水平增高,且与炎症因子分泌水平的变化趋势一致(r TNF-α=0.836,P0.001;r IL-6=0.539,P0.001;r IL-1β=0.659,P=0.008);20.0 mg/L nano-Zn O染毒组p-p38MAPK与p38MAPK灰度值的比值较对照组高,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]nano-Zn O可诱导BV2细胞炎症因子分泌水平和p38MAPK蛋白磷酸化水平增高。     

不同粒径纳米硒化铅对大鼠胚胎神经干细胞的氧化损伤作用

目的探讨不同粒径纳米硒化铅(Pb Se)对大鼠胚胎神经干细胞(NSCs)的氧化损伤作用。方法将处于对数生长期的NSCs暴露于终浓度分别为0(对照)、6.25、12.5、25、50、75、100、200μg/ml两种粒径(8、25 nm)的纳米Pb Se悬液24 h,采用MTT法检测细胞存活率,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜损伤情况。将处于对数生长期的NSCs暴露于终浓度分别为0(对照)、60、80、100μg/ml两种粒径的纳米Pb Se悬液24 h,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物还原酶(GSH-Px)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量,采用ELISA法检测细胞培养液中8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-d G)的含量。结果与对照组相比,不同浓度的两种粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞的存活率均降低,差异有统计学意义(P0.05);且随着两种粒径纳米Pb Se暴露浓度的升高,NSCs细胞的存活率均呈下降趋势。当纳米Pb Se暴露浓度≥50μg/ml时,8 nm粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞的存活率均低于25 nm粒径纳米Pb Se暴露组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,不同浓度两种粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞培养液中的LDH活力均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着两种粒径纳米Pb Se暴露浓度的升高,NSCs细胞培养液中的LDH活力均呈上升趋势。在相同浓度下,8 nm粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞培养液中LDH的活力均高于25 nm粒径纳米Pb Se暴露组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,不同浓度两种粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞上清液中SOD、GSH-Px活力和GSH含量均降低,而MDA含量均升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着两种粒径纳米Pb Se暴露浓度的升高,NSCs细胞上清液中SOD、GSH-Px活力和GSH含量均呈下降趋势,而MDA含量均呈上升趋势。与相同浓度25 nm粒径纳米Pb Se暴露组比较,各浓度8 nm粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞上清液中SOD、GSH-Px活力和GSH含量均降低,而MDA含量均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,不同浓度两种粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞培养基中8-OHd G的含量均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着两种粒径纳米Pb Se暴露浓度的升高,NSCs细胞培养基中8-OHd G的含量均呈上升趋势。与相同浓度25 nm粒径纳米Pb Se暴露组比较,80、100μg/ml的8 nm粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞培养基中8-OH-d G含量均升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论纳米Pb Se引起NSCs细胞的氧化损伤可能是导致其产生细胞毒性的主要原因。     

Hep G2培养条件的摸索及其与CHL、3T3细胞代谢能力的比较

目的：以MTT试验方法计算环磷酰胺（cyclophosphamide,CP）对Hep G2细胞和体外安全性评价常用细胞系CHL、3T3细胞的LC50,间接比较几种细胞系的代谢能力并确定Hep G2细胞适宜的培养试验条件.方法：用需代谢活化的阳性物CP以含血清和不含血清的培养液配制染毒液,按10.0、7.21、5.19、3.73、2.69、1.93、1.39、1.00 mg/ml浓度对CHL、3T3细胞和以不同培养液培养的Hep G2细胞染毒,在24 h时间点以MTT方法对细胞存活情况进行分析,计算LC50,比较各种细胞和不同培养条件下Hep G2细胞对CP的代谢活化水平,并观察不同培养条件下Hep G2细胞的生长状态.结果：MTT试验结果表明Hep G2细胞对CP的代谢能力最强,CHL细胞次之,而3T3细胞对CP的代谢能力最弱;3种不同培养液培养的Hep G2细胞无论染毒液是含血清的还是不含血清的均观察到CP对细胞的LC50：MEM＞DMEM＞RPMI 1640,Hep G2细胞在DMEM、RPMI 1640两种培养液中生长状态均良好,尤其是RPMI 1640培养的Hep G2细胞,在无血清的染毒液培养下既能获得较多的细胞又能表现出较强的代谢CP的能力.结论：Hep G2细胞对CP的代谢活化能力较CHL和3T3细胞强,以RPMI 1640培养的Hep G2细胞生长状态良好且较DMEM和MEM培养的细胞表现出更强的代谢活化CP的能力,能获得较理想的培养和试验结果.     

维生素C对脂多糖所致SW480细胞氧化损伤的保护

目的 探讨不同剂量维生素C（VC）对脂多糖（LPS）所致SW480细胞氧化损伤的保护。方法 将SW480细胞随机分为对照组（0 μmol/ml VC）、模型组（0 μmol/ml VC）、低VC组（0.1 μmol/ml VC）、中VC组（1 μmol/ml VC）、高VC组（10 μmol/ml VC）,除对照组外,其余各组均加入终浓度为0.1 μg/ml的 LPS。采用CCK - 8法检测细胞活力;使用倒置显微镜观察细胞划痕修复;采用微量酶标法检测胞内还原型谷胱甘肽（GSH）含量及培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活力;分别采用WST - 1法、TBA法检测胞内超氧化物岐化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量。结果 CCK - 8结果显示,VC可以抑制SW480细胞的增殖,且呈浓度依赖性递减;与对照组相比,模型组、低、中、高剂量VC组MDA水平[分别为（1.88±0.22）、（1.26±0.19）、（2.11±0.48）、（1.56±0.30） nmol/mgprot]均显著升高（P＜0.05）,与模型组相比,低VC组和高VC组MDA和LDH水平明显降低,且低VC组的SOD、GSH水平［分别为（16.62±0.48） U/mgprot、（126.26±1.20） μmol/gprot］显著升高（P＜0.05）;与对照组相比,细胞划痕后 48 h, 高VC组细胞划痕掩盖最为显著。结论 低剂量VC可以保护细胞膜的功能结构,增强细胞清除自由基的能力,高剂量VC有助于伤口愈合,从而保护细胞免受LPS导致的氧化应激损伤。     

大鼠肾细胞分离制备及培养方法的比较

目的比较胶原酶消化法、胰蛋白酶消化法和胶原酶、胰蛋白酶两步消化法(简称两步消化法)对大鼠肾细胞分离效果及细胞产量的影响,以及不同培养基(MEM、RPMI1640)、鼠龄(乳鼠、成年鼠)对细胞产量、质量、增殖率和乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响。方法分别对两组Wistar大鼠(乳鼠和成年鼠)用三种不同的消化方法制备大鼠肾组织细胞悬液,分别在MEM培养液和RPMI1640培养液中原代培养,培养48小时之后第一次传代,观察细胞质量,计算细胞产量,MTT法检测传代细胞24~48小时之间的增殖率,生化分析仪检测传代细胞第1~7天培养液中LDH漏出量。结果胶原酶消化法和两步消化法的肾细胞产量显著高于胰蛋白酶消化法(P<0.01),两步消化法的细胞质量优于胶原酶消化法,MEM培养液和RPMI1640培养液对细胞产量、增殖率和LDH漏出量的影响均无显著性差异,乳鼠的肾细胞产量显著高于成年鼠(P<0.01)。结论两步消化法对于肾细胞的分离制备尤为适合,MEM培养液和RPMI1640培养液均适于肾细胞的培养,乳鼠比成年鼠更适合肾细胞的制备。     

纳米氧化铈对过氧化氢所致大鼠肺泡巨噬细胞氧化损伤的影响

目的研究纳米氧化铈对过氧化氢致大鼠肺泡巨噬细胞NR8383氧化损伤的影响。方法将对数生长期的NR8383细胞分别暴露于终浓度为5、10、20、50、100μg/ml纳米氧化铈(20 nm)悬液孵育24 h,再加入新鲜配制的终浓度为100μmol/L的过氧化氢刺激细胞2 h,另设对照(PBS)组及过氧化氢(100μmol/L)组。采用CCK-8法检测NR8383细胞的细胞活性,采用酶标法检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,并测定细胞内谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)的水平。结果与对照组相比,过氧化氢对NR8383细胞造成氧化损伤,细胞的存活率下降25.25%。与过氧化氢组相比,5μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的存活率较高,而100μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的存活率较低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);且随着纳米氧化铈染毒浓度的升高,NR8383细胞的存活率呈下降的趋势。与过氧化氢组相比,对照组NR8383细胞的LDH释放量较低,50μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的LDH释放量较高,差异有统计学意义(P0.05);而5、10μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的LDH释放量有所降低,但差异均无统计学意义(P0.05)。且随着纳米氧化铈染毒浓度的升高,NR8383细胞的LDH释放量呈上下波动。与过氧化氢组相比,对照组NR8383细胞内GSH的水平升高,而ROS的水平上升;5、10μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞内的ROS水平均下降,而10μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞内的GSH水平上升,差异均有统计学意义(P0.05)。随着纳米氧化铈染毒浓度的升高,NR8383细胞内的SOD、GSH呈上下波动,ROS的水平呈逐渐升高的趋势。结论低浓度(5、10μg/ml)的纳米氧化铈颗粒可以缓解过氧化氢对NR8383细胞造成的氧化损伤,对细胞起到保护作用。     

血晶心停跳液不同流量连续灌注对心肌的保护作用

目的 探讨1:1血晶心停跳液不同流量连续灌注对心肌的保护作用.方法 选择80例择期行心脏手术患者,按照机械抽样法随机分为两组,分别用1:1血晶心停跳液微流量[0.5ml/(kg·min)]连续灌注(A组),高流量[2.0ml/(kg·min)]连续灌注(B组),每组各40例,分别记录术前,术后6、12、24、48、72 h肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸脱氢酶同工酶(LDH_1)的变化,进行组内和组间对比研究.结果 A组停跳液总量为(41.72±7.98)ml/kg,B组为(142.09±9.65)ml/kg,A组明显低于B组(P<0.05).术后72 h内,两组CK、CK-MB、LDH、LDH1均有不同程度升高,其峰值多在术后12、24 h,与术前比较差异均有统计学意义(P<0.05),两组心肌酶含量大部分在72 h降至正常.组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),两组术后需循环和呼吸辅助时间短,心功能恢复迅速、稳定.结论 微流量1:1血晶心停跳液连续灌注亦能保持心肌能量储备,术后心功能恢复迅速.     

瓷厂及钨矿生产性粉尘对血管内皮细胞的损伤效应

目的 评价瓷厂和钨矿生产性粉尘对血管内皮细胞的直接损伤作用,探讨粉尘引发心血管疾病的机制.方法 以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株HUV-EC-C为作用细胞,以瓷厂、钨矿作业点收集的生产性粉尘为实验粉尘,以中国标准石英为对照,将粉尘配制成25、50、100、200、400μg/ml浓度与HUVEC共培养24 h,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)活力、细胞的活力噻唑蓝(MTT)、一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放量.结果 瓷厂和钨矿作业点的生产性粉尘均能使HUVEC细胞培养液中LDH活力升高,释放NO及TNF-α水平升高,并随粉尘浓度升高呈现明确的剂量-反应关系.瓷厂和钨矿作业点生产性粉尘均能导致HUVEC细胞活力下降,呈剂量-反应关系.石英粉尘诱导HUVEC培养液中LDH活力升高的能力明显高于瓷厂和钨矿的生产性粉尘,差异有统计学意义(P＜0.05).瓷厂和钨矿生产性粉尘诱导HUVEC细胞活力下降及释放NO的能力相近且与标准石英相当.在较低剂量组(25、50、100μg/ml)时,瓷厂和钨矿生产性粉尘诱导TNF-α的释放量与标准石英相当,差异无统计学意义(P＞0.05),而在较高剂量组(200、400 μg/ml)时,标准石英诱导TNF-α的释放量明显高于瓷厂和钨矿生产性粉尘,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 不同来源的生产性粉尘及标准石英均能损伤血管内皮细胞,诱导TNF-α释放,引起不同程度的生物学效应.     

SiO2粉尘介导的DNA损伤及其影响因素的研究

目的 研究小剂量（7.5-120.0μg/ml)SiO2粉尘对中国仓鼠肺成纤维细胞（CHLF）的DNA损伤作用。方法 采用彗星试验，按SiO2粉尘不同的作用浓度和时间分组来观察DNA损伤，通过去铁胺（DFX）和盐酸维拉帕米（Ver)的作用间接观察钙离子和羟自由基对DNA损伤的影响。以彗星尾长作为DNA损伤程度的评价指标。结果 与对照组相比，SiO2明显增加了CHLF的DNA迁移距离，差异有显著性（P＜0．01）；在7．5－120．0μg/ml剂量范围内，彗星尾长随SiO2剂量的增加而增加，2h组的DNA损伤比1h组更严重。0.5-2.0mmol/L DFX和2.5-20.0μg/ml Ver能有效减轻90μg/ml SiO2所致的DNA损伤，其保护作用随浓度加大而增加。结论 小剂量SiO2有致CHLF DNA损伤的作用，损伤过程中有羟自由基和钙离子的参与，抗氧化剂和钙拮抗剂可对抗SiO2对机体DNA的损伤作用。     

磷脂酰肌醇-3激酶在石英诱导的DNA双链断裂修复中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)DNA双链断裂修复中的作用.方法 用200μg/ml的石英刺激HELF和用显性失活突变体抑制P13K功能的HELF(DN-Δp85)不同时间.免疫印迹法检测磷酸化H2AX(γH2AX)的水平以及DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)的组成成分Ku70、Ku8和DNA-PKcs的蛋白水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.中性彗星试验检测DNA双链断裂损伤,用彗尾DNA百分含量值观察DNA双链断裂损伤程度变化,并计算DNA修复能力.结果 γH2AX的水平在石英刺激3 h明显增高,12 h达峰值,24 h下降.与HELF相比,石英诱导的DN-Δp85细胞γH2AX水平增高受到抑制.石英刺激HELF和DN-ΔP85细胞12 h组Ku70、Ku80和DNA-PKcs的蛋白水平(0.58±0.09、0.95±0.21、0.55±0.06,0.37±0.14、0.55±0.17、0.52±0.07)均高于相应的无石英刺激组(0.26±0.10、0.69±0.26、0.43±0.11,0.11±0.07、0.27±0.14、0.39±0.07),差异有统计学意义(P<0.05).与石英刺激HELF 12 h组比较,石英刺激DN-ΔP85 12 h组的Ku70、Ku80蛋白水平增高受到抑制,差异均有统计学意义(P<0.05).石英刺激的HELF12 h组和DN-Δp85 12h组的彗尾DNA百分含量分别为9.78±1.15和11.79±4.90,明显高于同细胞系的无石英刺激组(2.40±0.69,3.31±1.35),差异有统计学意义(P<0.05);与石英刺激HELF 12 h组相比,石英刺激HELF细胞24 h组彗尾DNA百分含量明显降低(4.19±0.47),差异有统计学意义(P<0.05).石英刺激DN-Δp85 24 h组的彗尾DNA百分含量为(7.58±4.32),明显高于无石英刺激DN-Δp85组和石英刺激HELF 24 h组,差异有统计学意义(P<0.05).HELF的DNA修复能力为75.74%,DN-Δp85的DNA修复能力为49.64%.结论 石英可诱导DNA双链断裂损伤,PI3K与DNA损伤修复有关,通过调节Ku70和Ku80的水平,可促进石英诱导的DNA双链断裂损伤的修复.     

子宫内膜异位患者TGF-β、VEGF和ICAM-1水平及与临床分期关系

目的:观察子宫内膜异位症(EMS)患者纤维化因子转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平,并分析其临床意义。方法:选取2017年2月-2018年8月本院接受治疗的子EMS患者100例为观察组,同期体检健康女性100例为对照组。比较两组及观察组不同临床分期患者TGF-β、VEGF和ICAM-1水平,Pearson相关分析法分析观察组TGF-β水平与VEGF、ICAM-1水平的相关性。结果:观察组TGF-β(389.25±12.36pg/ml)、VEGF(178.45±10.02pg/ml)和ICAM-1(186.34±13.15μg/ml)高于对照组(322.16±15.04pg/ml、120.27±8.45pg/ml、104.28±12.93μg/ml(均P<0.001);观察组临床分期Ⅲ-Ⅳ期患者TGF-β、VEGF和ICAM-1水平(411.35±12.95pg/ml、192.92±8.35pg/ml、204.15±15.17μg/ml)高于Ⅰ-Ⅱ期患者(352.94±15.24pg/ml、155.36±7.28pg/ml、168.28±10.02μg/ml)(均P<0.001);TGF-β水平与VEGF、ICAM-1水平正相关(r=0.523、0.489,P<0.05)。结论:子宫内膜异位症患者的TGF-β、VEGF和ICAM-1水平较正常者高,且临床分期高者水平更高。TGF-β与VEGF、ICAM-1水平正相关。     

胃癌患者血清瘦互与营养状况的关系

目的探讨肥胖基因表达产物瘦素与胃癌病人营养状况的关系。方法采用放射免疫分析法测定86例胃癌病人血清瘦素含量,同时测定身高、体重、疾病分期、ECOG。体质指数(BMI)=体重(kg)/身高(m)２。营养正常的BMI范围为18.5～25;BMI<18.5为营养不良;BMI>25为肥胖。结果胃癌病人合并营养不良组的血清瘦素平均含量明显低于营养正常组或肥胖组。男性胃癌病人合并营养不良、营养正常及肥胖组血清瘦素水平分别为(2.41±1.59)μg/L、(4.80±3.21)μg/L、(9.16±2.81)μg/L;女性则分别为(5.53±3.06)μg/L、(8.94±4.78)μg/L、(20.58±9.48)μg/L。全组男性、女性胃癌病人的血清瘦素水平分别为(4.39±3.42)μg/L、(8.97±6.56)μg/L;女性均值高于男性一倍。胃癌病人的血清瘦素水平与BMI显著相关(男性r=0.538,P<0.05;女性r=0.785,P<0.05)。BMI正常的胃癌病人的血清瘦素与健康人无差异。结论血清瘦素含量可以反映胃癌病人的BMI变化和营养状况,且可作为判断胃癌病人营养状况的指标。     

纳米氧化锌诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549发生炎性凋亡的研究

目的用纳米氧化锌(ZnO-NPs)刺激体外培养的人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549),探讨其是否发生炎性凋亡。方法用10μg/ml和20μg/ml的ZnO-NPs分别刺激A549细胞8和24h,以磷酸盐缓冲液(PBS)为对照,用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定试剂盒和白介素-1β(IL-1β)ELISA试剂盒分别检测细胞培养上清液中的LDH酶活力和IL-1β含量,用半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(caspase-1)活性测定试剂盒检测细胞caspase-1的活性。结果纳米氧化锌作用于A549细胞8h,染毒组和对照组LDH酶活力差异无显著性,与对照组比较,20μg/ml ZnO-NPs染毒组caspase-1活性和IL-1β含量均升高(P<0.05)。ZnO-NPs作用于A549细胞24h时,染毒组和对照组caspase-1活性差异无显著性。染毒组IL-1β含量和LDH酶活力均显著高于对照组(P<0.05)。结论纳米氧化锌(20μg/ml)刺激A549细胞早期caspase-1活性升高,继之IL-1β含量和LDH酶活力升高,可能发生了炎性凋亡。