短波紫外线与交联淀粉碘对血浆中辛德比斯病毒灭活的研究

对ＵＶＣ与ＣＳＩ分别对血浆中病毒灭活的效果和对血浆中ＦⅧ凝血活性的影响进行了观察。ＣＳＩ按１００ｍｇ／ｍｌ加入血浆，作用３０ｍｉｎ与６０ｍｉｎ，能使ＳＶ分别下降２５５与３６１个对数级，但血浆ＦⅧ凝血活性亦分别降至５７３３％和０；继续延长作用时间至１２０ｍｉｎ，灭活病毒的效果增加不明显。用剂量为７１７０～５７３６０Ｊ／ｍ２的ＵＶＣ照射血浆，可使ＳＶ下降４２６～６７１个对数级。照射剂量为７１７０Ｊ／ｍ２时，病毒灭活速度较快，ＦⅧ凝血活性也无损害，但超过此剂量后的病毒下降速度减缓，而对ＦⅧ凝血活性的损害明显加重。     

病毒灭活新鲜冰冻血浆的质控指标初探

目的分析病毒灭活新鲜冰冻血浆中纤维蛋白原、总蛋白、凝血因子FⅧ：C的含量,探讨病毒灭活血浆的质量控制指标,以保证病毒灭活血浆的质量。方法取成分制备好的同一份血浆平均分成容量相等的两组,一组为非病毒灭活、另一组做病毒灭活,留取各10ml,分别检测纤维蛋白原、总蛋白、FⅧ：C含量,并把相对应的两组数据进行比较。结果两组的纤维蛋白原、总蛋白、FⅧ：C含量t值分别为1.120、1.135、1.275,均无统计学意义,且病毒灭活血浆蛋白回收率为91.42%,FⅧ：C回收率为81.60%,纤维蛋白原回收率为90.27%。结论病毒灭活新鲜冰冻血浆的纤维蛋白原、总蛋白、FⅧ：C损失较小、质量可靠,应在临床上大力推广使用,使输血更科学、更合理、更安全。     

用两种相结合的双重病毒灭活方法生产的因子Ⅷ浓制剂的特征

临床应用的高纯因子Ⅷ浓制剂其生产趋势仍在发展之中。尽管所有血浆衍生物必须经过病毒灭活过程,但病毒疾病感染的可能性是不可能完全消除的。为了减少这种危险性,作者在因子Ⅷ浓制剂的生产工艺中包含双重病毒灭活。将分离因子Ⅷ浓制剂工艺按比例放大时采用了两种方法。第一种方法是在巴斯德消毒冷沉淀溶液和S/D病毒灭活后的基础上用层析提纯因子Ⅷ。第二种方法是用氯化钠和甘氨酸多步沉淀因子Ⅷ为基础的,病毒灭活是用S/D处理和最终冻干产品经100℃加热30分钟。有代表性的因子Ⅷ活性回收率在冻干产品中,第一种方法为     

S/D法对人凝血因子Ⅷ产品中人免疫缺陷病毒灭活效果的研究

目的研究S/D法对人凝血因子Ⅷ中污染的人免疫缺陷病毒灭活效果。方法采用细胞培养法,对S/D处理人凝血因子Ⅷ灭活HIV的效果进行了检测。结果在常温(25℃)条件下,在污染有HIV的人凝血因子Ⅷ种混入体积分数9%S/D灭活剂,作用60 min,HIV灭活对数值为6.83。重复处理3批人凝血因子Ⅷ制品,对HIV均达到完全灭活,经细胞培养盲传三代,均未出现细胞病变。结论 S/D法能够完全灭活人凝血因子Ⅷ产品中污染的人免疫缺陷病毒,灭活效果可靠。     

80℃,72h干热处理FⅧ制剂中指示病毒灭活效果的考察

以水泡性口炎病毒（ＶＳＶ）、Ｓｉｎｄｂｉｓ和ＰｏｌｉｏＩ型疫苗病毒为指示病毒，考察８０℃，７２ｈ干热处理对ＦⅧ制剂中的病毒灭活效果。结果表明，该法对加入制品中的ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ和ＰｏｌｉｏＩ型疫苗病毒的灭活能力分别为８．３、９．１和７．７ｌｇＴＣＩＤ５０／ｍｌ；证实８０℃，７２ｈ干热处理，对模拟脂包膜和非包膜病毒的指示病毒ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ和ＰｏｌｉｏＩ型疫苗病毒，均可起到有效的灭活作用。     

经白细胞过滤和病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀的可行性探讨

目的探讨经白细胞过滤和亚甲蓝光化学法(methylene blue photochemistry,MB-P)病毒灭活后新鲜血浆制备冷沉淀凝血因子的有效成分Ⅷ因子和纤维蛋白原(Fib)含量的变化,为临床应用病毒灭活冷沉淀凝血因子进行治疗提供使用依据。方法对93袋全血(400ml)经白细胞过滤后分离制备的新鲜血浆进行MB-P病毒灭活制成病毒灭活冷沉淀,测定因子Ⅷ和纤维蛋白原的含量,同时与标准进行比较。结果 93袋经MB-P病毒灭活后新鲜冰冻血浆(FFP)制备的冷沉淀凝血因子中凝血因子(Ⅷ)平均值为71.28IU/袋,标准差18.60,90%区间分布范围为47.48~95.09IU/袋;纤维蛋白原(Fib)平均值为121.38IU/袋,标准差22.74,90%区间分布范围为92.28~150.49/袋,FⅧ和Fib含量未达到冷沉淀凝血因子的标准,但对FⅧ和Fib的影响符合相关报道。结论加强MB-P及制备过程控制,减少FⅧ和Fib损失,提高留存率,经MB-P病毒灭活后新鲜血浆制备冷沉淀凝血因子方法还是可行的,因MB-P病毒灭活新鲜血浆制备的冷沉淀凝血因子没有标准,暂不能提供临床。     

采用S/D病毒灭活后凝血酶原复合物在犬非停滞模型上致血栓性的研究

目的：进一步评价采用有机溶剂／表面活性剂（Ｓ／Ｄ）技术灭活病毒后新工艺凝血酶原复合物（ＰＣＣ）的潜在致血栓性。方法：采用犬非停滞模型进行实验研究，动态监测血小板数（即刻测定），Ｄ－二聚体、ＴＸＢ２、ＦⅤ∶Ｃ、ＦⅧ∶Ｃ、蛋白Ｃ和ＰＴ７项指标，并与未经病毒灭活处理的旧工艺ＰＣＣ进行比较。结果：新工艺ＰＣＣ组的上述指标动态变化所表明的潜在血栓倾向均明显低于旧工艺ＰＣＣ组。结论：经病毒灭活处理的新工艺ＰＣＣ不但病毒安全性已提高，其血栓形成的危险性也明显降低。     

病毒灭活冷沉淀制备过程中滤除亚甲蓝对凝血因子的影响

目的使用两种不同的方法制备病毒灭活冷沉淀凝血因子,通过对Ⅷ因子和纤维蛋白原含量的检测,观察制备过程中滤除亚甲蓝对凝血因子含量的影响。方法将40袋全血（保养液为ACD-B）分为A、B两组,A组制备的病毒灭活冷沉淀凝血因子不滤除亚甲蓝,B组制备的病毒灭活冷沉淀凝血因子滤除亚甲蓝。使用全自动血凝仪分别检测A、B两组的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量。参考国外相应标准,将病毒灭活冷沉淀凝血因子Ⅷ因子含量的合格标准定为≥70IU/袋,纤维蛋白原含量的合格标准定为≥140mg/袋,两项质控指标抽检合格率必须≥75%。结果 A组病毒灭活冷沉淀凝血因子,Ⅷ因子含量为（102.89±19.2）IU/袋,抽检合格率为90%;纤维蛋白原含量为（186.5±49.2）mg/袋,抽检合格率为80%。B组病毒灭活冷沉淀凝血因子,Ⅷ因子含量为（89.9±16.4）IU/袋,抽检合格率为85%;纤维蛋白原含量为（152.8±58.4）mg/袋,抽检合格率为40%。结论为确保病毒灭活冷沉淀凝血因子的质量,不能对其进行亚甲蓝的滤除。     

病毒灭活新鲜冰冻血浆质量控制指标分析

目的探讨MB法病毒灭活新鲜冰冻血浆的质量控制指标。方法随机抽取200 ml新鲜血浆,每例平均分成两份,一组进行病毒灭活,一组不进行,分别检测两组中Fib、TP、FⅧ因子含量,用t检验进行统计学分析。结果两组血浆中Fib、TP含量均无统计学意义（P〉0.05）,FⅧ因子病毒灭活后回收率为79.5%,含量下降,与灭活前相比差异有统计学意义。结论MB法病毒灭活新鲜冰冻血浆可以沿用GB18469-2001国家标准。     

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对凝血因子的影响

目的:探讨亚甲蓝(methylene blue,MB)光化学法病毒灭活血浆对凝血因子的影响.方法:制备过程中随机抽取新鲜血浆120人份,根据新鲜血浆进行病毒灭活情况分为对照组和试验组,分别对上述两组标本进行PT、APTT、TT、Fg、FⅤ、FⅧ、TP测定.对照组,即新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)组,不进行病毒灭活,直接进行检测;试验组,即病毒灭活血浆组,先对其进行MB法病毒灭活,后再检测.结果:试验组中APTT、FⅤ、FⅧ水平与对照组比较差异有显著性(P＜0.01),PT、TT、Fg、TP较对照组无显著变化(P＞0.05).结论:MB法病毒灭活对于新鲜血浆中内源性凝血因子,特别是不稳定因子FⅤ、FⅧ有显著影响,对外源性凝血因子及血浆蛋白成分影响不大.     

四种病毒灭活方法用于登革病毒灭活效果的比较

目的评价常用病毒灭活方法对血液制品中登革病毒(DENV)的灭活效果。方法将单采新鲜冰冻血浆(FFP),人凝血因子Ⅷ(FⅧ)和静脉注射免疫球蛋白(IVIG)3种血浆及其制品中加入高滴度(8.00-9.25)的登革病毒液,分别采用亚甲蓝(MB)光化学法灭活FFP、有机溶剂/去污剂(S/D)法灭活FⅧ、低pH常温孵化法和巴氏消毒法灭活IVIG;以1×10~6/mL A549细胞接种于T25的培养瓶中作为病毒传代及滴度滴定指示细胞,将灭活前后的血浆及制品接种于A549细胞并检测其DENV滴度,并通过qRT-PCR对DENV RNA做定量检测;评估不同的灭活方法对DENV的灭活效果。结果 DENV滴度下降:MB光化学法灭活FFP下降滴度≥5.92 log,S/D法灭活FⅧ下降滴度≥5.17 log、巴氏法和低pH法灭活IVIG均下降滴度≥5.92 log,其中MB光化学法灭活FFP、SD灭活FⅧ及巴氏法灭活IVIG后DENV RNA(cp/mL)降低1.25 log-2.25 log,低pH法灭活IVIG后DENV RNA(cp/mL)降低0.17 log。所有血浆和血液制品样品经灭活后,在DENV宿主细胞上3代盲传后均未检测到DENV RNA。结论 4种常用病毒灭活方法均能有效灭活血浆及血液制品中的DENV。     

新鲜冰冻血浆病毒灭活前后凝血因子水平监测分析

目的探讨新鲜冰冻血浆病毒灭活前后凝血因子之间的差别,为临床选择使用不同血浆制品提供依据。方法随机抽取30人份新鲜冰冻血浆,于病毒灭活前、后检测各相关出凝血指标和类凝血因子[凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、血浆纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)、凝血因子Ⅷ(FⅧ)]进行对比。结果新鲜冰冻血浆经病毒灭活后APTT、FⅧ活性水平则显著降低(P0.05)。结论新鲜冰冻血浆尽管病毒灭活后部分凝血因子含量有所降低,但仍高于国家标准,而且在灭活掉经血传播病毒后,其临床输注安全性得以保障。建议医疗机构根据临床输血指征、2种血浆的各自优缺点,合理输注上述2种血浆,达到输注合理、安全、有效的目的。     

亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆质量的影响

目的探讨亚甲蓝光化学法(methylene blue photochemistry,MB-P)病毒灭活对不同规格血浆质量的影响,为临床应用病毒灭活血浆提供参考依据。方法测定90份血浆(包含25份100 ml/袋和10份50 ml/袋)病毒灭活前、后的Fib、Ⅴ因子、Ⅷ因子和总蛋白含量,PT、APTT的变化情况;同时测定20份病毒灭活血浆(包含10份150 ml/袋和10份200 ml/袋)的有效Fib、Ⅴ因子、Ⅷ因子和总蛋白含量;PT、APTT的变化情况。结果 Fib、Ⅴ因子、Ⅷ因子和APTT灭活前后差异比较:t值分别为10.30、14.09、12.15、5.00,P<0.05;TP的回收率为97.13%;Fib的回收率为82.1%;Ⅴ因子的回收率为81.3%;Ⅷ因子的回收率82.9%。不同规格的病毒灭活血浆除Fib和Ⅷ因子有差异(大规格优于小规格)。结论经MB-P病毒灭活的血浆,提高输血安全的同时也造成有效成分一定程度的损失,在临床应用时应在原来的剂量基础上增加约20%的用量,同等输注量尽量减少使用的血浆袋数,有利于达到预期效果,也可减少输血不良反应的发生。     

南昌血站病毒灭活血浆制品主要质量控制指标的分析

目的：了解本血站经亚甲蓝/光化学法病毒灭活后,新鲜冰冻血浆、冷沉淀、冷上清中总蛋白、纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ的含量是否符合《全血及成份血质量要求》（GB18649-2012）的质量要求。方法随机采集100袋新鲜冰冻血浆,经亚甲蓝/光化学法病毒灭活过滤后留取1份标本（病毒灭活新鲜冰冻血浆实验组）,解冻后制备冷沉淀前各留取1份标本（病毒灭活新鲜冰冻血浆实验组）,采用改良快速融化离心法制备冷沉淀后各留取1份标本（冷沉淀实验组）,留取冷上清标本各1份（冷上清实验组）,三个实验组分别检测总蛋白、纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ含量。结果病毒灭活新鲜冰冻血浆总蛋白和凝血因子Ⅷ含量分别为57.7g/L、0.66IU/ml,冷沉淀的纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分别为154.4mg/袋、87.8IU/袋,冷上清的总蛋白含量为46.3g/L。结论本站制备的病毒灭活新鲜冰冻血浆、冷沉淀符合《全血及成份血质量要求》（GB18649-2012）的质量要求,冷上清的血浆蛋白含量不足,不能标注为病毒灭活冰冻血浆在临床上使用。     

亚甲兰/光化学法病毒灭活对血浆成分的影响

目的 探讨亚甲兰(methylene blue,MB)光化学法病毒灭活血浆对血液成分结构和功能的影响.方法 新鲜血浆经MB病毒灭活后.检测照射前后样品的血浆量、MB浓度、FⅧ:C含量的变化.结果 血浆病毒灭活后血浆容量、FⅧ:C、的回收率分别为:(95.11±1.36)%、(79.23±3.95)%、MB去除率(77.12±6.44)%.结论 利用MB法灭活血浆病毒对血浆成分有一定影响,但血浆质量符合国家标准,可以满足临床安全输血的需求.     

亚甲蓝光化学病毒灭活法对血浆质量指标的影响

<正>血浆输注在临床输血中占有重要的地位,主要用于治疗各种凝血因子缺乏引起的凝血功能障碍。由于血浆传播病毒的危险比较大,因此,用适合于血浆病毒灭活的方法处理临床输注的血浆,对于提高输血的病毒安全性有重要意义。本站于2007年8月起对血浆进行亚甲蓝光化学病毒灭活法处理后才供应于临床。为探讨本灭活处理对血浆FⅧ因子、纤维蛋白原和总蛋白几个质量指标的影响,笔者对病毒灭活后的血浆FⅧ因子、纤维蛋白原和总蛋白的抽样进行检测,现报道如下。     

分光光度法检测S／D处理中纯因子Ⅷ制品中残留Tween－80方法研究

分光光度法检测Ｓ／Ｄ处理中纯因子Ⅷ制品中残留Ｔｗｅｅｎ－８０方法研究６１００８１中国医学科学院中国协和医科大学输血研究所赵青蓉余蓉病毒灭活是保证血液制品安全性的必要措施。病毒灭活的方法有多种，其中有机溶剂／表面活性剂（Ｓ／Ｄ）灭活法不但能灭活高滴度的...     

核黄素光化学法病毒灭活对新鲜血浆活性影响的探讨

目的探讨核黄素光化学法病毒灭活对新鲜血浆活性的影响,为临床合理应用病毒灭活血浆提供理论参考依据。方法收集血液中心提供的健康献血者新鲜血浆样本100份。以核黄素光化学法对100份新鲜血浆进行病毒灭活,分别检测100份血浆样本在病毒灭活处理前后的APTT、FIB、总蛋白(Tg)和FⅧ含量。将数据进行对比分析。结果新鲜血浆在核黄素光化学法病毒灭活后与未作病毒灭活处理相比较,APTT时间延长14.93s,差异有统计学意义(P0.05);FIB含量减少0.94 mg/m L,差异有统计学意义(P0.05);Tg含量减少3.39 g/L,差异无统计学意义(P0.05);FⅧ含量减少0.26 IU/m L,差异有统计学意义(P0.05)。结论核黄素光化学法病毒灭活在灭活病毒、提高输血安全的同时导致血浆中活性成分有一定程度降低,临床上在应用灭活血浆时应注意适当增加血浆用量以提高血浆输注疗效。     

离子交换层析法由冷沉淀制备高纯度的FⅧ:C

本文建立了一种新的离子交换层析法,可从血浆冷沉淀中制备高纯度的已灭活病毒的FⅧ:C浓缩物。作者溶解冷沉淀,经氢氧化铝吸附后,加入0.3％三正丁基磷酸盐(TNBP)和1％吐温80.25℃处理8小时灭活病毒。该溶液通过离子交换层析柱,使用DEAE-Fractogel TSK 650M凝胶吸附FⅧ:C,NaCl浓度梯度洗脱,即可得到高纯FⅧ:C,经除菌过滤,分装,冻干得FⅧ:C浓缩物。     

不同时间制备的血浆及冷沉淀的质量比较

目的考察不同时间制备的血浆及冷沉淀的质量。方法选取3组时间段(<8 h、8～18 h、18～24 h)制备的FP、病毒灭活FP、冷沉淀的标本各20份,检测FⅧ、Fib及FⅤ、FⅦ。结果 <8 h制备的FP、病毒灭活FP、冷沉淀的FⅧ、Fib均符合现行《全血及成份血质量要求》;8～18 h、18～24 h制备的FP、病毒灭活FP、冷沉淀的Fib有所下降,但仍符合现行《全血及成份血质量要求》。在不同时间段内FⅧ含量区别明显,<8 h、8～18 h、18～24 h制备的FP中FⅧ含量分别为(1.01±0.15)IU/mL、(0.76±0.10)IU/mL、(0.64±0.09)IU/mL;制备的病毒灭活FP中FⅧ含量分别为1.01(0.88,1.12)IU/mL、0.67(0.61,0.78)IU/mL、0.66(0.57,0.69)IU/mL;原料FP制备的冷沉淀FⅧ含量分别为(103.55±17.25)IU/mL、(68.95±11.36)IU/mL、(54.70±11.15)IU/mL。结论用于制备冷沉淀的原料FP应<8 h才符合现行质量要求;24 h内制备的病毒灭活FP基本符合病毒灭活FFP质量要求;8～24 h内制备的FP中FⅧ含量达不到FFP质量要求。