骨髓基质细胞与异种脱蛋白骨生物相容性的体外实验

骨组织工程研究为治疗骨缺损、骨不连开辟了新的途 经［１］。目前,国内外学者多采用成骨细胞、骨膜细胞和骨髓基 质细胞种植于人工合成材料上制备组织工程化骨［２－５］。采用 骨髓基质细胞和天然材料,尤其是脱蛋白骨来制备组织工程化 骨的研究报道甚少［６］。本实验检测骨髓基质细胞与脱蛋白骨 体外生物相溶性,旨在为采用这两者制备组织工程化骨提供依 据。 １　材料和方法 １。１　材料 ＰＲＭＩ １６４０（ＧＩＢＣＯ）、加强型小牛血清（ＨｙＣｌｏｎｅ）、胰蛋白酶 （ＧＩＢＣＯ）、ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ）、四唑盐（ＭＴＴ,Ｓ…     

部分脱蛋白骨的生物相容性研究

目的：探讨部分脱蛋白骨的生物相容性。方法：将部分脱蛋白骨植入兔的骶棘肌及股骨骨膜下，用组织学检测观察植入材料周围淋巴细胞浸润情况、材料与周围软组织的关系及材料对骨膜成骨的影响，并用ELISA间接法检测兔血清中的抗体。结果：植入背部骶棘肌的材料周围皆有软组织长入，包裹并形成纤维囊，难以将软组织和材料分开，植入骨膜下的材料皆与股骨相融合，有的已形成新骨，植入部位股骨增粗，材料植入后1周出现抗体，4周达高峰，以后逐渐下降。结论：部分脱蛋白骨无毒性作用，且对骨膜成骨无有害影响，引起的免疫反应较弱，机体能耐受，具有良好的生物相容性。     

部分去蛋白脱钙骨的细胞相容性研究

目的：探讨部分去蛋白脱钙骨的细胞相容性。方法：将猪肋骨用理化方法处理制得部分去蛋白脱钙骨(PDDB)，在对PDDB理化性能检测的基础上，将其与人胎骨膜成骨细胞体外复合培养，了解其细胞相容性。结果：PDDB的无机成份为羟基磷灰石。含有少量蛋白质，仍具有原骨组织骨盐支架的二三维多孔网状孔隙结构系统，对复合培养的人胎骨膜成骨细胞的形态特征、细胞周期、倍体水平尤有害影响。结论：PDDB具有原骨组织的网状孔隙结构系统，具有良好的细胞相容性，可望用于成骨细胞的支架材料。     

异种脱蛋白骨与骨形成蛋白重组修复骨缺损实验研究

本文用新方法处理异种骨，将小牛骨经脱蛋白处理，即脱去主要抗原物质后，再复合进去骨形成蛋白使其成为既无抗原性，对利于骨形成的异种脱蛋白ＢＭＰ复合骨。将其植入新西兰白兔就骨缺损。实验结果表明，植入的异种脱蛋白ＢＭＰ复合骨，术后不同时间内，均显示出良好的成骨性。且无任何排斥免疫反应。     

复合型完全脱蛋白骨的生物相容性研究

目的：探讨复合型完全脱蛋白骨的生物相容性。方法：将复合型完全脱蛋白骨植入兔的骶棘肌及股骨骨膜下，用组织学检测观察植入材料周围细胞浸润情况、材料与周围软组织的关系及材料对骨膜成骨的影响，并用ELISA间接法检测兔血清中的抗体。结果：植入背部骶棘肌的材料皆与股骨相融合，有的已形成新骨，植入部位股骨增粗，材料植入1周后出现抗体，2周后略增，以后逐渐下降。结论：复合型完全脱蛋白骨无毒性作用，且对骨膜成骨无有害影响，引起的免疫反应较弱，机体能耐受，具有良好的生物相容性。     

异种脱蛋白骨修复长骨大段骨缺损实验研究

目的研究改良法制备的异种脱蛋白骨（deproteinated bone,DPB）作为组织工程支架材料修复大动物长骨大段缺损24周后新生骨的生物力学变化。方法山羊18只,采用完全随机设计法分为正常骨对照组、自体骨组和实验组,每组6只,在自体骨组和实验组每只山羊右侧胫骨中下段造成胫骨总长度20％骨膜和骨缺损,正常骨对照组不截骨,其余2组分别在缺损处植入自体骨、DPB＋自体MSCs＋rhBMP2,采用半环槽外固定,术后24周取手术侧胫骨进行生物力学检测。结果术后24周,正常骨对照组、自体骨组和实验组新骨生物力学相比无统计学差异（P〉0．05）。结论改良法制备的异种DPB复合物作为组织工程支架材料修复大动物长骨大段缺损形成的新骨,其生物力学与正常骨对照组、自体骨组相当,可作为骨移植材料试应用于临床。     

长骨大段缺损修复用的脱蛋白骨制备和性能研究

目的:通过对脱蛋白骨制备过程中骨块大小、保存方法的改进及理化性能研究,探索为长骨大段缺损修复提供合适的支架材料。方法:将猪股骨下端松质骨沿骨小梁方向制成30mm×3mm×3mm大小骨块。参照改良法制备脱蛋白骨,进行深低温(-85℃)冷冻3个月,蒸馏水浸泡48 h后置入干燥箱内烘干,真空抽气、包装,60Co照射消毒,-4℃保存备用。对脱蛋白骨进行形态结构、组成成分、力学性质及细胞相容性检测。结果:本法制备的脱蛋白骨具有天然网状结构,其无机成分为羟基磷灰石,有机成分为Ⅰ型胶原,力学性能良好,有良好的细胞相容性,细胞上架率高,无明显的免疫排斥反应。结论:本法制备的猪脱蛋白骨各项性能良好,可用作长骨大段缺损修复的支架材料。     

脱蛋白骨联合VEGF基因转染治疗股骨头缺血坏死

目的探索一种新的方法治疗股骨头早期缺血性坏死（avascular necrosis of the femoral head,AVNFH）。方法69只AVNFH造模成功后的新西兰大白兔随机分成3组。第1组,将脱蛋白骨（deproteinized bone,DPB）复合pcDNA3．1／VEGF165质粒植入坏死的股骨头内,第2组植入DPB,第3组仅在股骨头内钻一隧道。术后3d,1、2、4、8和16周获取标本。RT—PCR、Western blot和免疫组化技术分别检测VEGF165 mRNA、蛋白的表达及安全性。X线大体观察成骨情况,组织形态学分析血管发生和股骨头修复。结果第1组VEGF165 mRNA和蛋白表达术后1周达到高峰,时间持续超过3周,第1组动物术后远膈脏器未检测到VEGF165的表达。血管形成术后2,4周增加,骨形成术后2,4和8周增加,与另两组相比差异有显著性（P〈0．01）。结论VEGF165基因转染可促进局部血管的早期形成,DPB-VEGF复合物可增加骨形成,VEGF基因治疗兔AVNFH有效、安全,脱蛋白骨联合VEGF165基因治疗为骨坏死的修复提供了理论基础。     

VEGF基因转染结合脱蛋白骨修复股骨头坏死的实验研究

目的:构建pcDNA3.1/VEGF165质粒及联合脱蛋白骨基因治疗早期股骨头缺血性坏死.方法:将含人VEGF165全长cDNA序列的克隆载体pUC18/VEGF165与pcDNA3.1( )载体构建成重组真核表达质粒pcDNA3.1/VEGF165;69只AVNFH造模成功后的新西兰大白兔随机分成3组.第一组,将脱蛋白骨复合pcDNA3.1/VEGF165质粒植入坏死的股骨头内;第二组植入DPB;第三组仅在股骨头内钻一隧道.股骨头标本术后3天,1,2,4,8和16周获取.RT-PCR检测VEGF165mRNA的表达,Western blot检测VEGF165蛋白的表达,组织形态学分析血管发生和股骨头修复.结果:成功构建pcDNA3.1/VEGF165;第一组VEGF165 mRNA和蛋白表达术后1周达到高峰,时间持续超过3周.血管形成术后2,4周增加,骨形成术后2,4和8周增加,与另两组相比差异呈显著性(P＜0.01).结论:VEGF165基因转染可促进局部血管的早期形成,DPB-VEGF复合物可增加骨形成.脱蛋白骨联合VEGF165基因治疗为骨坏死的修复提供了理论基础.     

部分开放式组织瓣移植术治疗36例开放性胫骨骨感染的临床观察

目的探析临床采用部分开放式组织瓣移植术治疗开放性胫骨骨感染的疗效。方法现选择该院2010年12月-2012年9月期间收治的一定程度开放性胫骨骨感染患者36例为研究对象,对比分析不同感染患者的疗效。结果感染程度低患者移植组织瓣成活率明显高于感染程度低患者（P〈0．05）;感染程度低患者伤口愈合和手术创面闭合时间明显缩短（P〈0．05）。结论开放式组织瓣治疗开放性胫骨骨感染由于患者感染程度存在差异,疗效具有一定的差异,但其为治疗该疾病可行有效的方法,治疗周期短,有助于患者身体恢复,值得在临床上广泛的推广和应用。     

纤维连接蛋白对卵巢癌多细胞团簇形成的影响

目的 初步探索纤维连接蛋白对卵巢癌多细胞团簇形成的影响及可能参与的整合素受体亚型。 方法 以卵巢癌细胞系SKOV3为对象,在体外建立多细胞团簇模型,研究纤维连接蛋白对团簇形成的影响,在此基础上再用荧光定量PCR和免疫蛋白印迹从mRNA和蛋白水平上检测因纤维连接蛋白刺激而表达改变的整合素受体亚型。 结果 纤维连接蛋白能够促进大于250 μm的多细胞团簇的形成;纤维连接蛋白刺激形成的多细胞团簇中整合素受体亚型ITGA5的表达受到了抑制。 结论 本研究证实了纤维连接蛋白能促进卵巢癌多细胞团簇的形成,并初步提示整合素受体亚型ITGA5很可能参与了这一影响过程。     

小牛血清去蛋白注射液细菌内毒素检测方法的研究

目的：建立小牛血清去蛋白注射液的细菌内毒素检查方法。方法：根据2000年版《中国药典》进行试验。结果：小牛血清去蛋白注射液在2mg/ml浓度下进行细菌内毒素检查干扰现象，获得了可靠的数据和结果。结论：本品所采用的细菌内毒素检查方法灵敏、可靠。     

The Effect of Fibronectin on the Fertilization Capacity of Human Spermatozoa

Fibronectin (Fn) is a major molecular glycoprotein that is known to play an important role in many systems involved in cell-to-cell interation and cell-to-matrix adhesion. We initially studied the effect of Fn on the fertilization capacity of human spermatozoa with a penetration test in vitro. Following co-incubation of Fn in a heterologous system (human spermatozoa and zona-free golden hamster oocytes ), we have noted a significant decrease in the rate of sperm penetration into oolemma at 2.8 μg Fn/ml,and a complete inhibition of fertilization at 15 μg Fn/ml. Besides, we noted a specific increase in the penetration rate during the co incubation of anti-Fn-serum in a heterologous system. These results suggest that extrinsic Fn binds with the Fn-receptor in the oolemma, thereby, competitively inhibiting fertilization.     

双相陶瓷生物骨的制备和细胞相容性研究

目的：按一定的方法制备出双相陶瓷生物骨(biphasic ceramic—like biologic bone，BCBB)．观察BCBB与体外培养的骨髓基质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)的相容性，为将复合物植入骨缺损处提供实验依据．方法：以取材丰富的猪椎骨经煮沸、脱水、低温锻烧等工艺处理制成的BCBB为载体。将体外培养的兔BMSCs复合到BCBB后第4、8天取材，行扫描电镜和倒置相差显微镜观察，在第2、4、6、8、10天时用酶标检测仪测定光密度(OD)值．结果：4d后BCBB表面及孔内即有了细胞贴附生长，8d后细胞明显增多，有胶原纤维形成．第8天时，BMSCs、载体联合培养细胞增殖达稳定期．结论：通过低温煅烧的方法可以制备出BCBB，BCBB与兔BMSCs有良好的相容性，第8天移植时机最佳．     

纤维粘连蛋白及骨形成蛋白-2、4在牙胚发育中的表达研究

目的 观察纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和骨形成蛋白-2、4(BMP-2、4)在大鼠牙胚发育中的表达,探讨其在成牙本质细胞分化及成熟过程的时空表达关系,为明确牙齿发育的分子调控网络提供理论和实验基础.方法 获取SD大鼠蕾状期和钟状期第一磨牙牙胚,通过免疫组化LsAB法观察FN和BMP-2、4的表达差异及相互关系.结果 FN在蕾状期和钟状期都有表达,蕾状期主要分布在牙上皮、牙间质,周围非牙间质细胞为阴性,钟状期主要分布在成牙本质细胞分化活跃的区域和分化中的内釉上皮细胞.钟状期BMP-2、4的表达较强,主要分布在成牙本质细胞分化活跃的区域. 结论 BMP-2、4和FN在牙齿发育的蕾状期和钟状期均有表达,但表达的阳性分布区不同.     

异种脱蛋白松质骨载体的制备及性能评价

目的研究探讨异种脱蛋白松质骨性能,以制备综合性能优异的骨组织工程载体材料。方法我们将取材于成年猪股骨远端松质骨通过理化方法制作成脱蛋白松质骨载体,并对载体形态结构、组成成分、载体与种子细胞黏附及生长增殖情况以及生物力学特性进行检测分析。同时将载体材料复合自体骨髓间充质干细胞和骨形态生长因子植入成年山羊横突间进行组织工程化成骨融合,观察成骨情况,并通过免疫酶组织染色方法检测异种脱蛋白松质骨的免疫原性。结果脱蛋白松质骨具有天然网状孔隙结构,其无机成分为羟基磷灰石,有机成分为Ⅰ型胶原,力学性能保存良好,有良好的细胞相容性,免疫原性检测阴性。异种脱蛋白松质骨复合rhBMP-2和MSCs植入体内后多点成骨,效果满意。结论异种脱蛋白松质骨是一种良好的载体材料。     

慢性阻塞性肺疾病患者血浆纤维连接蛋白动态观察

本文用火箭电泳法测定60名正常人和60名COPD患者血浆纤维连接蛋白(PFn)水平,并对其进行治疗前后PFn动态观察。结果:①COPD患者PFn水平明显低于正常人。②92%的患者随病情好转PFn水平逐渐升高,8%的患者随病情加重而进行性下降,显示PFn水平与病情改变密切相关。     

小牛血清去蛋白注射液对大鼠脑缺血早期脑组织中NO含量的影响

目的探讨脑缺血早期,小牛血清去蛋白注射液通过影响脑组织中一氧化氮水平及一氧化氮合成酶的表达而产生的对神经元的干预作用及机制。方法动物分为假手术对照组、缺血模型对照组和小牛血清去蛋白注射液治疗组。局灶性脑缺血模型由线栓法阻塞大鼠大脑中动脉(MCAO)制成。在缺血4小时后进行相邻区域切片的nNOS免疫组化及HE染色,测定脑组织含水量,脑组织匀浆中NO和nNOS的含量。结果小牛血清去蛋白注射液能明显降低脑组织缺血损害的范围;与模型组相比,脑缺血4小时后DCSI组的脑组织含水量明显降低,脑组织匀浆中NO及nNOS的含量都明显降低(P<0.01)。结论小牛血清去蛋白注射液有可能是通过降低脑组织中神经型一氧化氮合成酶的表达,从而降低脑组织中一氧化氮的含量,而产生对大鼠脑缺血早期的保护作用。     

骨质疏松大鼠骨髓基质细胞膜片制备过程中纤维连接蛋白表达检测

目的 探讨骨质疏松大鼠骨髓基质细胞(BMSC)膜片体外构建过程中纤维连接蛋白(FN)的表达情况。 方法 体外分离培养骨质疏松大鼠BMSC,采用含50 μg/mL维生素C的培养基连续培养构建细胞膜片,通过倒置显微镜和组织学染色对细胞膜片进行形态学观察; 利用免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链反应及Western-blot检测细胞外基质中FN在基因和蛋白水平的表达情况。 结果 采用含维生素C的培养基连续培养可获得含多层细胞及丰富胞外基质的BMSC细胞膜片。免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链反应及Western-blot检测结果显示所构建的细胞膜片高表达FN。 结论 以浓度为50 μg/mL的维生素C培养基连续培养可成功构建骨质疏松大鼠BMSC细胞膜片,膜片富含FN,有望应用于骨质疏松状态下牙槽骨缺损的治疗。