辣根过氧化物酶示踪大鼠孤束核、臂旁核至中央杏仁核纤维投射的解剖观察

目的　研究孤束核 (NST)、臂旁核 (PBN)至中央杏仁核 (CNA)纤维投射 ,为阐明三者对内脏心血管活动的调节机制提供形态学资料。方法　用辣根过氧化物酶 (HRP)逆行追踪标记技术 ,研究NST、PBN向CNA投射的起始神经元形态与分布。结果　在外侧臂旁核 (PBL)内见到大量中等大小圆形多极和梭形HRP标记细胞 ,在内侧臂旁核 (PBM)及Kolliker Fuse核仅见稀疏散在标记细胞。NST内见到中等量小而深染的椭圆形标记细胞 ,多集中于NST的尾侧 2 / 3处。结论　孤束核可直接或间接经臂旁核中继向杏仁核投射 ,为内脏心血管活动的重要传入途径之一。     

肼化辣根过氧化物酶糖蛋白染色法

探索一种简便灵敏的糖蛋白半定量法。在ｐＨ５．０，碳二亚胺催化下，辣根过氧化物酶与己二酰二肼反应成肼化的ＨＲＰＨＲＰ－ＨＺ），固相于硝酸纤维素膜上的糖蛋白经过碘酸氧化其糖链中的糖基后生成的醛基可与ＨＲＰ－ＨＺ缩合，用ＨＲＰ的发色底物显色即可检出糖蛋白的存在与否。     

肼化辣根过氧化物酶糖蛋白染色法

探索一种简便灵敏的糖蛋白半定量法。在 ｐＨ ５．０，碳二亚胺（ＥＤＣ）催化下，辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）与己二酰二肼反应生成肼化的ＨＲＰ（ＨＲＰ－ＨＺ），固相于硝酸纤维素膜上的糖蛋白（纤连蛋白或转铁蛋白）经过碘酸氧化其糖链中的糖基后生成的醛基可与ＨＲＰ—ＨＺ缩合，用ＨＲＰ的发包底物显色即可检出精蛋白的存在与否。结果：糖蛋白中，１０ ｎｇ的糖即可被检出。结论：与其他糖定量方法相比，该方法灵敏度高，方法简便，能够普遍应用。     

化学发光法测定辣根过氧化物酶浓度的实验条件探讨

探讨了对碘苯酚增强的鲁米诺－过氧化氢－辣根过氧化物酶体系的反应特性，通过正交试验并经方差分析，获得了增强发光酶免疫检测法测定辣根过氧化物酶及其标记物的最佳实验条件。     

化学发光法测定辣根过氧化物酶浓度的实验条件探讨

探讨了对碘苯酚（PIP）增强的鲁米诺—过氧化氢—辣很过氧化物酶（Luminol-H_2O_2-HRP）体系的反应特性,通过正交试验并经方差分析,获得了增强发光酶免疫检测法测定辣根过氧化物酶（HRP）及其标记物的最佳实验条件（缓冲液的pH=8.2,Luminol的浓度5×10~(-4)mol/L,H_2O_2的浓度4×10~(-3)mol/L,PIP的浓度4×10~(-4)mol/L,乙二胺四乙酸的浓度0.25mg/ml,温度25℃.反应时间10min）。在上述最佳条件下检测HRP的浓度,其线性范围为:10~(-9)～10~(-12)g/L,Y=-0.05 1.07X（r=0.96,P<0.01）,最低检出限为 0.2pg（5 amol）。     

狗坐骨神经荧光素及辣根过氧化物酶逆行追踪实验研究

目的：确定狗周围神经逆行示踪试验的最佳示踪剂及示踪时间。方法：用快蓝（ＦＢ）、碘化丙啶（ＰＩ）及辣根过氧化物酶（ＧＲＰ）注射于正常狗坐骨神经,选择不同时间观察脊髓及相应脊神经背根神经节的神经元。结果：１４天时神经元胞体开始出现ＦＢ,随后荧光逐渐加强和阳性标记细胞逐渐增多;而ＰＩ及ＨＲＰ追踪组,仅少量胞体中出现很细的ＨＲＰ未能观察到ＰＩ。结论：狗的周围神经逆行示踪试验最好选择易溶解、激发波长较短的荧     

大鼠杏仁体及丘脑背内侧核至额前皮质各区的纤维投射：HRP逆…

用辣根过氧化物酶逆行示踪法，对大鼠杏仁体及丘脑背内侧核至额前皮质各区的纤维投射进行了研究。将ＨＲＰ分别导入右侧额前皮质各区，同侧丘脑背内侧核可见密集的标记细胞，并有局部定位关系；杏仁体的标记细胞主要见于同侧基底外侧核的外侧核，其次见于同侧基底内侧核及皮质核，少量见于前杏仁核区和皮质杏仁移行区，间介核和中央核中央未见标记细胞，标记细胞在杏仁体的分布随导药部位不同而有差异。     

大鼠视网膜节细胞细胞色素氧化酶与逆行示踪辣根过氧化物酶联合反应

大鼠经双上丘辣根过氧化物酶埋藏后,用氯化钴细胞色素氧化酶反应法处理视网膜,观察到节细胞分别呈高细胞色素氧化酶活性反应、辣根过氧化物酶标记和细胞色素氧化酶/辣根过氧化物酶联合反应,说明此法可作联合反应法使用。本实验中辣根过氧化物酶标记是在不使用过氧化氢的条件下作出的。     

非水介质中辣根过氧化物酶失活过程

以辣根过氧化物酶催化酚类氧化反应为研究对象,考察了温度,含水量等因素对酶储存稳定性的影响以及反应过程中酶的失活动力学。结果表明,在低水环境的有机相中,酶的热稳定性显著提高;催化酚和过氧化物的氧化反应中,反应物和产物参与酶的失活过程,使失活速率增加;选择合理的反应条件,有助于减少失活,增加酶的使用周期。     

RmIL-18多克隆抗体的制备及辣根过氧化物酶的标记

目的用纯品rmIL-18免疫新西兰兔，制备多克隆抗体，并予辣根过氧化物酶标记。方法使用免疫佐剂包被rmIL-18分次免疫新西兰兔，得到兔血清，再采用硫酸铵沉淀粗提法和QAE-Sephadex A-50离子交换层析法提纯IL-18抗体，最后用HRP简易过碘酸钠法标记IL-18抗体。结果用以上方法标记的IL-18抗体酶标记率为40．29％，酶标抗体的效价为1：3200，最佳工作浓度为1：1600。结论成功制备出标记HRP的IL-18多克隆抗体，建立了IL-18抗原的酶联免疫检测，以进一步用于实验研究。     

用化学发光法测定辣根过氧化物酶几种体系的研究

作者采用四种体系,确定了用化学发光法测定辣根过氧化物酶(HRP)的最佳测定条件和操作步骤。用鲁米诺-H_2O_2(NaOH)可以方便地测定0.05～4pmol HRP,绝对检测限16fmol。用邻苯二酚-H_2O_2(pH6.5)体系可测定0.1～100pmol HRP,绝对检测限3～17fmol。用鲁米诺-H_2O_2-对碘苯酚(pH8.5)体系,可由1分钟时的光强度测定10～50fmol HRP,绝对检测限10fmol。用对羟基联苯代替对碘苯酚,测1或3分钟时的光强度可测定6～40fmol HRP,绝对检测限6.5或3.3fmol.     

利用辣根过氧化物酶作为示踪物质研究大鼠局部淋巴结抗体产生的动态变化

利用辣根过氧化物酶(HRP)为抗原,加入弗氏佐剂,注入大鼠足掌皮内.对抗原在局部淋巴结中的存留时间;巨噬细胞对抗原的处理;特异性抗 HRP 抗体的产生以及抗原刺激对其它免疫球蛋白合成的影响等进行了追踪观察.共采用了4种不同的组织化学和免疫组织化学方法,在光镜下进行比较.实验证明,采用 HRP、DAB 和 H_2O_2作为追踪物质和底物,研究细胞生物学和病理学问题,既可在光学显微镜又可在电子显微镜下观察反应产物,同时,也可以在细胞水平上和超微结构水平上,对结果进行比较研究.     

利用辣根过氧化物酶作为示踪物质研究大鼠局部淋巴结抗体产生的动态变化

利用辣根过氧化物酶(HRP)为抗原,加入弗氏佐剂,注入大鼠足掌皮内.对抗原在局部淋巴结中的存留时间;巨噬细胞对抗原的处理;特异性抗HRP抗体的产生以及抗原刺激对其它免疫球蛋白合成的影响等进行了追踪观察.共采用了4种不同的组织化学和免疫组织化学方法,在光镜下进行比较.实验证明,采用HRP、DAB和H₂O₂作为追踪物质和底物,研究细胞生物学和病理学问题,既可在光学显微镜又可在电子显微镜下观察反应产物,同时,也可以在细胞水平上和超微结构水平上,对结果进行比较研究.     

辣根过氧化物酶酶促体系引发丙烯酰胺聚合的研究

对辣根过氧化物酶(HRP)、H2O2和乙酰丙酮(ACAC)组成的三元醇促体系引发的丙烯酰胺(AAM)聚合进行了研究。在膨胀计中考察了反应温度和HRP、ACAC、H2O2及AAM初始浓度对酶促体系引发AAM聚合动力学行为的影响，确定了适宜的反应条件。用FTIR和GPC对聚合产物进行表征，得到的聚丙烯酰胺的数均分子量为10^5-10^6，分子量分布指教DI为2-3。     

抗辣根过氧化物酶单克隆抗体的研制和鉴定

用国产辣根过氧化物酶(HRP)免疫BALB/C鼠,取免疫脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得了7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株,其培养上清液的效价为256～4096,腹水效价为1024×10~3～4 096×10~3.上述7株细胞株中的6株所产生的单克隆抗体均能制备出质量良好的鼠单克隆PAP复合物,用于免疫组织化学及血清学研究均取得较理想效果。将7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株适应于含8-氮杂鸟嘌呤培养基中,诱导出了对HAT敏感的突变细胞株,为研制双特异性单克隆抗体奠定了基础。     

辣根过氧化物酶在Au-Gemini纳米复合物修饰玻碳电极上的直接电化学

将辣根过氧化物酶(HRP)固定在Au-Gemini纳米复合物修饰的玻碳(GC)电极表面,制备了HRP修饰电极(HRP/Au-Gemini/GC),研究了HRP在AuGemini纳米复合膜中的直接电化学,考察了其对H2O2的电催化还原作用。研究表明,HRP在AuGemini 纳米复合膜中发生了准可逆的电化学反应,其氧化峰峰电位(Epa)和还原峰峰电位(Epc)分别为-0.236 V和-0.273 V。HRP/Au-Gemini/GC修饰电极对H2O2具有良好的电催化还原响应,其表观米氏常数Km=2.0×10-5 mol/L,H2O2浓度在1.0～7.0 μmol/L范围内与催化电流呈线性关系。该研究为实现氧化还原酶的直接电子传递和生物传感器的构制提供了一种有效途径。     

十七种哺乳动物二级抗体的制备和辣根过氧化物酶标记

目的制备兔抗17种哺乳动物的二级抗体,并进行辣根过氧化物酶标记,为哺乳血清学检测系统的建立提供工具。方法利用饱和硫酸铵沉淀法粗纯抗体后,再利用protein A或protein G亲和层析的方法进一步纯化哺乳动物的IgG,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗哺乳动物的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗哺乳动物的二级抗体进行辣根过氧化物酶标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blot方法考察标记抗体的特异性。结果纯化了恒河猴、东北虎、布氏田鼠、黑线姬鼠、斑羚、原驼、果子狸、食蟹猴、梅花鹿、长爪沙鼠、马鹿、骆驼、大仓鼠、豚鹿、熊猴、大耳羊和雪貂等17种哺乳动物的血清IgG,分别免疫大耳白兔制备了这17种哺乳动物的兔抗血清,免疫双扩散法测定兔抗这17种哺乳动物的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗恒河猴IgG、兔抗东北虎IgG、兔抗布氏田鼠IgG、兔抗黑线姬鼠IgG、兔抗斑羚IgG、兔抗原驼IgG、兔抗果子狸IgG、兔抗食蟹猴IgG、兔抗梅花鹿IgG、兔抗长爪沙鼠IgG、兔抗马鹿IgG、兔抗骆驼IgG、兔抗大仓鼠IgG、兔抗豚鹿IgG、兔抗熊猴IgG、兔抗大耳羊IgG和兔抗雪貂IgG等17种哺乳动物的二级抗体进行了辣根过氧化物酶标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶(2000～60000)左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性。结论成功制备了HRP标记的兔抗17种哺乳动物的二级抗体,为哺乳动物血清学检测体系的建立提供了工具。     

十六种鸟类二级抗体的制备和辣根过氧化物酶标记

目的制备兔抗16种鸟类的二级抗体,并进行辣根过氧化物酶标记,为鸟类血清学检测系统的建立提供工具。方法采用水稀释法粗纯抗体后,再利用改良的饱和硫酸铵分级沉淀法,或亲和层析结合饱和硫酸铵沉淀法,或饱和硫酸铵沉淀法结合SDS-PAGE凝胶切胶纯化的方法进一步纯化鸟类的IgY,利用纯化的IgY免疫大耳白兔制备抗血清,用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗鸟类的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗鸟类的二级抗体进行辣根过氧化物酶标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blots考察标记抗体的特异性。结果纯化了灰雁、鸬鹚、鸵鸟、小鹈、鸽子、鹅、孔雀、鹌鹑、贵妃鸡、草鹭、夜鹭、赤嘴潜鸭、燕鸥、长脚鹬、虎皮鹦鹉、翘鼻麻鸭等16种鸟类的IgY,免疫双扩散法测定兔抗这16种鸟类的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗灰雁IgY、兔抗鸬鹚IgY、兔抗鸵鸟IgY、兔抗小鹈IgY、兔抗鸽子IgY、兔抗鹅IgY、兔抗孔雀IgY、兔抗鹌鹑IgY、兔抗贵妃鸡IgY、兔抗草鹭IgY、兔抗夜鹭IgY、兔抗赤嘴潜鸭IgY、兔抗燕鸥IgY、兔抗长脚鹬IgY、兔抗虎皮鹦鹉IgY、兔抗翘鼻麻鸭IgY等16种兔抗鸟类IgY的二级抗体进行了辣根过氧化物酶标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶800～80000左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性。结论成功制备了辣根过氧化物酶标记的兔抗16种鸟类的二级抗体,为鸟类血清学检测体系的建立提供了工具。     

大鼠中缝背核内一氧化氮合酶阳性神经元向中央杏仁核的投射

目的：观察大鼠中缝背核（DR）内一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元向中央杏仁核（CeA)的投射，为进一步阐明一氧化氮（NO）参与情绪，疼痛，内脏心血管活动的中枢调节机制提供形态学资料。方法：用黄递酶（NADPH-d）组织化学染色结合辣根过氧化酶（HRP）逆和追踪技术，观察大鼠DR内向CeA投射的NOS阳性神经元的分布与形态，结果：DR内有一定数目的NOS／HRP双标阳性神经元，主要分布在外侧部与背．正中部。结论：DR内有部分NOS阳性神经元向CeA投射，提示NO在DR至CeA上行感觉传导通路中起重要的神经递质作用。     

辣根过氧化物酶自组装多层膜结构形貌与活性的研究

用分子沉积自组装作制备了阳离子化和阴离子化的辣根过氧化物酶自组装膜；并用原子力显微镜（AFM）研究了不同离子化辣根过氧化物酶单层及多层自组装膜的形貌结构与自组装膜的活性变化关系。结果表明：阴离子化的辣根过氧化物酶自组装膜的表面形貌比较粗糙，均方根粗糙度（RMS）及酶分子粒径较大，且组装膜的活性比较大。