酵母表达的重组戊型肝炎病毒ORF2蛋白在实验感染恒河猴血清抗体检测中的应用

诊断试剂的研制和开发亦是戊型肝炎研究的重要内容 ,以Ｅ .Ｃｏｌｉ及昆虫细胞表达的重组戊型肝炎病毒 (ＨＥＶ)ＯＲＦ2蛋白作为抗原建立的免疫学检测方法已应用临床戊型肝炎的诊断、实验感染灵长类动物抗戊型肝炎病毒 (ＨＥＶ)抗体的检测以及ＨＥＶ特异性抗原的检测。这些方法包括 :Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ,ＩＦＡ、ＥＬＩＳＡ等。研究证实 ,重组ＨＥＶＯＲＦ2蛋白具有较好的抗原性〔1 3〕。我们应用巴氏毕赤酵母 (Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ)成功表达了戊型肝炎结构区蛋白ＯＲＦ2 ,制备了新型重组ＨＥＶＯＲＦ2 〔4〕,将其作为抗原建…     

庚型肝炎病毒IgM抗体检测方法的建立及其临床意义

目的建立一种早期、快速诊断庚型肝炎的血清学检测方法。方法以辣根过氧化物酶标记庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）多肽ＮＳ３,ＮＳ５区段抗原,建立了捕获酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,用于检测血清中ＨＧＶＩｇＭ抗体。结果本法不受特异性ＩｇＧ的竞争和类风湿因子的干扰;与其它致肝炎的病毒（ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＥＶ、ＣＭＶ、ＥＢＶ）无交叉反应。检测４６例非甲、乙、丙、戊型肝炎患者血清,抗－ＨＧＶＩｇＭ阳性１４例,阳性率３０．４３％,其中,６例同时为ＨＧＶＲＮＡ阳性,阳性符合率为４２．８６％（６／１４）,检测１２例庚型肝炎病人双份血清,其中,急性期血ＨＧＶＩｇＭ抗体均为阳性。结论该法检测ＨＧＶＩｇＭ抗体特异性强,敏感性高,且简便快速,适用于临床对庚型肝炎新近感染的早期诊断,有推广应用价值。     

中国株庚型肝炎病毒C(GBV-C)感染的检测及部分核酸序列测定

国内首次采用合成肽抗原筛查高危人群血液中的庚型肝炎病毒Ｃ（ＧＢＶ－Ｃ）抗体。单采浆站供血者ＧＢＶ－Ｃ抗体阳性率为０．４４％（１１／２５００）；非甲－戊型肝炎患者ＧＢＶ－Ｃ抗体阳性率为６．６７％（２／３０）。抗体阳性血清再用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＧＢＶ－ＣＲＮＡ。部分扩增产物进行了核苷酸序列测定，其核苷酸序列与Ｓｉｍｏｎｓ等报道的ＧＢＶ－Ｃ序列同源性为８９．０９％至９２．４８％。该研究提示，ＧＢＶ－Ｃ可能不是非甲－戊型肝炎的主要致病因子，可能存在ＧＢＶ－Ｃ健康携带者，应尽快研制出ＧＢＶ－Ｃ感染检测试剂盒，以筛选献血员。     

肝病患者中庚型肝炎病毒感染的检测

目的探讨临床肝病病人中庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）感染情况及临床特点。方法应用庚型肝炎病毒基因组５’ＵＴＲ两对寡核苷酸作为引物，建立逆转录套式聚合酶链反应，检测１６９例不同肝病患者血清标本中ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ，并对其中１例ＰＣＲ扩增产物进行克隆及测序。结果１６９例各型肝病病人ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ总的检出率为９５％（１６／１６９）。在２９例有手术输血史患者中，３１０％（９／２９）ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ呈阳性，明显高于无手术输血史组（５％，Ｐ＜００１）。序列分析显示１株庚肝病毒５’ＵＴＲ部分基因片段与已知庚肝病毒株核苷酸同源性在８９１４％～９８９１％之间。结论ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染普遍存在于临床肝病患者中，病人感染ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的临床表现未发现有特殊性，ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ可能不是非甲～戊型肝炎的主要致病因子。     

中国株庚型肝炎病毒C（GBV—C）感染的检测及部分核酸…

国内首次采用合成肽抗原筛查高危人群血液中的庚型肝炎病毒Ｃ（ＧＢＶ－Ｃ）抗体。单采浆站供血者ＧＢＶ－Ｃ抗体阳性率为０．４４％（１１／２５００）；非甲－戊型肝炎患者ＧＢＶ－Ｃ抗体阳性率为６．６７％（２／３０）。抗体阳性血清再用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＧＢＶ－ＣＲＮＡ。部分扩增产物进行了核苷酸序列测定，其核苷酸序列与Ｓｉｍｏｎｓ等报道的ＧＢＶ－Ｃ序列同源性为８９．０９％到９２．４８％。该研究提示，ＧＢＶ－Ｃ可     

中国株庚型肝炎病毒C感染的检测及其部分核酸序列测定

中国株庚型肝炎病毒Ｃ感染的检测及其部分核酸序列测定国内首次采用合成肽抗原筛查高危人群血液中的庚型肝炎病毒Ｃ（ＧＢＶ－Ｃ）抗体。单采浆站供血者ＧＢＶ－Ｃ抗体阳性率为０．４４％（１１／２５００）；非甲－戊型肝炎患者ＧＢＶ－Ｃ抗体阳性率为６．６７％（２／３...     

合成肽作抗原酶免疫技术检测非甲－戊型肝炎病人血清中抗HGV

本文应用人工合成肽作为抗原建立了检测庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）抗体的酶免疫技术（ＥＩＡ），最适抗原包被浓度为４μｇ／ｍｌ。在特异性验证的基础上，检测了３４例非甲－戊５型肝炎病人血清和３２例丙型肝炎感染病人血清。结果表明，在ＨＧＶ感染高危人群中，诸如输血后肝炎－丙型肝炎中有较高的ＨＧＶ的感染率。本方法的建立为临床上难于作出诊断的庚型肝炎提供了敏感、特异、易于应用的新技术。     

HGV RNA逆转录套式聚合酶链反应法的优选实验

1995年 ,美国Ｓｉｍｏｎｓ等和Ｌｉｎｎｅｎ等分别从肝炎患者的血清中克隆出庚型肝炎病毒 (ＧＢＶ Ｃ/ＨＧＶ)的基因组 ,并建立了检测血清ＧＢＶ Ｃ/ＨＧＶＲＮＡ的逆转录套式聚合酶链反应 (ＲＴ ｎＰＣＲ)方法。但是 ,该检测方法的灵敏度存在着较大差异。本实验使用Ａ～Ｅ共 5套ＰＣＲ引物 ,基中Ａ、Ｂ、Ｄ为自行设计的ＨＧＶ 5′端非编码区引物 ,目的产物长度分别为36 8ｂｐ ,15 8ｂｐ及 2 2 0ｂｐ ;Ｃ引物为参照文献设计的核心区引物 ,目的产物为30 2ｂｐ ;Ｅ引物为李倬副研究员设计的ＮＳ3区引物 ,目的产物长度为 5 91ｂｐ。采用改良的…     

广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

目的了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对７２１例肝炎患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测。结果发现８０例ＨＧＶＲＮＡ阳性，以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高；慢性丙型肝炎（ＨＣＶ）和慢性乙型混合丙型肝炎（ＨＢＶ＋ＨＣＶ）次之；在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行     

我国北方地区献血员庚型肝炎病毒感染的研究

我们对我国北方某地区健康献血员血浆中的庚型肝炎病毒 (ＨｅｐａｔｉｔｉｓＧｖｉｒ ｕｓ ＧＢｖｉｒｕｓＣ ,ＨＧＶ)ＨＧＶＲＮＡ及抗 ＨＧＶ抗体进行了检测 ,初步探讨了我国北方地区单采浆献血员血浆中ＨＧＶ感染情况。1　材料和方法1 1　标本和试剂　北方某地区单采浆献血员血浆 176份。经检测血浆ＨＢｓＡｇ、抗 ＨＣＶ、抗 ＨＩＶ抗体均为阴性 ,血清丙氨酸转氨酶 (ＡＬＴ)水平正常。异硫氰酸胍、琼脂糖均为Ｓｉｇｍａ公司产品 ;ＰｗｏＤＮＡ聚合酶为Ｒｏｃｈｅ公司产品 ;限制性内切酶、Ｔ4ＤＮＡ连接酶、ＡＭＶ逆转录酶、ＲＮＡ酶抑…     

7例庚型肝炎的临床分析

７例庚型肝炎的临床分析张绍刚王建文任宝琴检测了６１例各型病毒性肝炎病人血清中庚型肝炎病毒感染情况。检出庚型肝炎病毒抗体阳性者７例（抗－ＨＧＶ）。其中９例甲～戊型病毒性肝炎标志均阴性者，有２例抗－ＨＧＶ阳性，另外５例均与它型肝炎重叠感染。１材料和方法１...     

酶母表达的重组HEV ORF2蛋白在戊型肝炎诊断中的初步应用

戊型肝炎是经消化道途径传播的传染病 ,对人民健康影响很大 ,疫苗和诊断抗原的研制和开发是预防和控制其流行和传播的重要手段。戊型肝炎病毒(ＨｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ ,ＨＥＶ)结构区蛋白ＯＲＦ2存在多个抗原性决定簇并可能具有中和抗体的结合位点 ,因此戊型肝炎病毒基因工程重组蛋白的研制主要集中于ＯＲＦ2。我们应用巴氏毕赤酵母 (ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ)成功表达了戊型肝炎病毒结构区蛋白ＯＲＦ2 ,制备了新型重组ＨＥＶＯＲＦ2 ,将其作为抗原建立酶联免疫吸附试验 (简称Ｐ ＥＬＩＳＡ) ,检测正常人群及戊型肝炎患者血清…     

用重组结构区抗原检测抗丙型肝炎病毒IgM抗体方法？…

目的 检测抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区蛋白ＩｇＭ抗体。方法 采用丙型肝炎病毒Ｃ，Ｅ１、Ｅ２区重组抗原混合包被和分别包被酶标板；用兔抗人γ链血清处理人血清标本，再用固相包被羊抗兔抗体吸附兔抗人γ链－人ＩｇＧ复合物，建立了抗－ＨＣＶＩｇＭ检测方法。结果 对７６例现型肝炎病人血清进行抗－ＨＣＶ ＩｇＭ检测，同时与逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ＋ＰＣＲ）检测结果进行比较，再会得具有相关性（Ｐ〈０．００５     

庚型肝炎病毒（HGV／GBV—C）NS3区基因序列的多变性

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病人血清中检测庚型肝炎病毒。采用５６个循环周期的减温ＰＣＲ方法对ＮＳ３区基因进行扩增，并对阳性ＰＣＲ产物进行了克隆、测序。在ＮＳ３区，ＨＧＶ与样品之间核苷酸的同源性在８２．０％～９１．４％之间；而ＧＢＶ－Ｃ与样品之间的同源性为７８．４％～８４．２％之间。ＮＳ３区变异较大，这种变异可能与ＨＣＶ的基因变异的趋势相类似。     

庚型肝炎病毒NS3蛋白在大肠杆菌中的表达

目的　获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３ 抗原。方法　从重组质粒Ｉｗｑ２利用ＰＣＲ 反应扩增出ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段,克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸ ＨＴａ 后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经ＩＰＴＧ 诱导重组工程菌,用ＳＤＳＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 对重组蛋白进行鉴定。结果　酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段。ＳＤＳＰＡＧＥ 分析诱导表达产物发现在相对分子质量约４３ ８１０处有一条明显的蛋白表达带,占菌体总量的１７ ．７ ％ 。用ＮｉＮＴＡ 亲和层析柱快捷地获得了纯化的重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定发现重组蛋白可与ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＲＮＡ 阳性病人血清发生抗原抗体反应。结论　获得了具备免疫反应原性的ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 抗原,该重组蛋白可用于ＧＢＶＣ／ＨＧＶ 感染的检测。     

乌鲁木齐市部分高危人群庚型肝炎病毒感染现状及5′ UTR区基因序列分析

新疆地处我国西部边陲 ,存在着各型肝炎散发流行的危险因素 ,庚型肝炎病毒在乌鲁木齐市的流行现状尚未见报道。在新疆医科大学第一附院收集了2 67份各类人群的血清 ,用酶标法检测血清中庚型肝炎病毒抗体 (抗 ＨＧＶ) ,再以庚型肝炎病毒ＮＳ3区为引物运用ＲＴ ＰＣＲ法对抗 ＨＧＶ(阳性 )血清进行庚型肝炎病毒核酸 (ＨＧＶＲＮＡ)的扩增检测 ,阳性扩增产物为 83ｂｐ。最后 ,选择该病毒 5′非编码区为引物对第一次ＲＴ ＰＣＲ扩增ＨＧＶＲＮＡ(阳性 )血清 ,再次进行163.ｃｏｍ)ＲＴ ＰＣＲ扩增 ,阳性扩增产物为 1 90ｂｐ ,对第二次扩增ＨＧＶ…     

43例庚型肝炎病毒抗体阳性肝病患者的临床分析

４３例庚型肝炎病毒抗体阳性肝病患者的临床分析李跃旗程云韩军陈黎明张晓峰董漪庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）为一种新型肝炎病毒，为了解肝病患者合并ＨＧＶ感染情况，我们用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测肝病患者血清抗庚型肝炎病毒抗体（抗－ＨＧＶ）。４３例抗－ＨＧＶ...     

丙型肝炎病毒核心区多片段基因在大肠杆菌内表达

用融合蛋白表达质粒ｐＧｅｘ，在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒核心区不同基因片段，共获得四个表达蛋白，用免疫印染和ＥＬＩＳＡ检测均与ＨＣＶ抗体阳性血清反应而不与正常人血清反应，证明有ＨＣＶ核心蛋白抗原活。本工作为进一步研究ＨＣＶ不同片段核心蛋白多肽功能及发展我国高质量ＨＣＶ临床诊断试剂提供了基础。     

丙型肝炎病毒（HCV）E2／NS1相对保守区多肽抗原在检？…

目的 研究（ＨＣＶ）Ｅ２／ＮＳ１相对保守区多肽抗原在检测抗－ＨＣＶ中的意义。方法 利用ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因编码的膜区糖蛋白合成Ｅ２／ＮＳ１相对保守区多肽抗原,建立酶免疫试验（ＥＩＡ）,对９６例ＨＣＶ感染者及４０例正常献血员进行ＨＣＶＥ２／ＮＳ１抗体的检测,同时平行检测ＨＣＶＲＮＡ肝炎为１３．５５％,慢性丙型肝炎为２５．０４％,无症状感染者为２．０８％;正常献血员中发现３例抗ＨＣＶＥ２／ＮＳ１抗体     

用重组结构区抗原检测抗丙型肝炎病毒IgM抗体方法的建立

目的检测抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区蛋白ＩｇＭ抗体。方法采用丙型肝炎病毒Ｃ，Ｅ１，Ｅ２区重组抗原混合包被和分别包被酶标板；用兔抗人γ链血清处理人血清标本，再用固相包被羊抗兔抗体吸附兔抗人γ链－人ＩｇＧ复合物，建立了抗－ＨＣＶＩｇＭ检测方法。结果对７６例丙型肝炎病人血清进行抗－ＨＣＶＩｇＭ检测，同时与逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测结果进行比较，两者具有相关性（Ｐ＜０００５）；ＩｇＭ抗体组成分析结果表明采用全片段Ｃ、Ｃ＋Ｅ２区抗原血清标本中的抗－ＨＣＶＩｇＭ检出率分别可达９６６％和１００％。结论ＨＣＶ的Ｃ、Ｅ２重组抗原用于抗－ＨＣＶＩｇＭ检测具有较高的敏感度和特异性。