神经母细胞瘤研究前沿及思考

神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）是儿童最常见的颅内实体肿瘤,发现时常常已是晚期,易发生转移,高危NB患儿即使接受高强度治疗,仍可出现复发或转移,治疗效果差。目前NB的发病机制及治疗等已成为儿童实体恶性肿瘤研究的热点、难点。近年来,随着单细胞测序等各种技术手段的进步,NB的发病机制、治疗手段等相关研究取得了诸多进展。本文将对近年来NB的研究进展进行文献综述,阐述了NB的起源、分子遗传学调控机制及免疫学调控机制研究成果,并介绍NB单克隆抗体、肿瘤疫苗、过继细胞疗法及小分子抑制剂的最新进展。     

神经母细胞瘤增殖凋亡的研究

目的　本实验通过研究神经母细胞瘤的增殖、凋亡的失衡 ,结合神经母细胞瘤的分化 ,以探讨增殖、凋亡的改变与神经母细胞瘤预后的关系。方法　分别取正常对照组、良性肿瘤组、恶性肿瘤组 3组组织制作石蜡切片 ,运用免疫组织化学法检测增殖细胞 ,计算增殖细胞占细胞百分比 ,求得增殖指数 (PI)。运用原位DNA末端标记法 ,检测凋亡细胞 ,计算凋亡细胞占细胞百分比 ,求得凋亡指数 (AI)。结合神经母细胞瘤的组织学分类 ,了解增殖指数、凋亡指数与神经母细胞瘤预后情况。结果　预后好的组织与预后差的组织 2组的PI相比P <0 .0 1。预后好的组织与预后差的组织两组的AI相比P <0 .0 1。Ⅲ期或Ⅳ期死亡与健在分别PI相比较P <0 0 1。Ⅲ期或Ⅳ期死亡与健在分别AI相比较P <0 0 1。结论　PCNA指数越高 ,神经母细胞瘤预后越差。凋亡细胞和凋亡小体越多 ,凋亡指数越高 ,神经母细胞瘤预后越好。联合检测神经母细胞瘤的增殖指数、凋亡指数结合凋亡小体可提高对神经母细胞瘤诊断及预后判断的准确性 ,并对治疗指导有重要价值     

神经母细胞瘤肿瘤细胞球富含表达Nestin细胞的研究

背景与目的:已有研究证实,悬浮生长的肿瘤细胞球具有自我更新和增殖的能力,同时表达干细胞的特征性标记物.本研究旨在通过分离、培养神经母细胞瘤获得肿瘤细胞球,观察其在体外的增殖、分化能力,并检测其表面特征性标志物.方法:取外科手术切除获得的神经母细胞瘤瘤块及骨髓转移患儿的骨髓标本,接种于含生长因子的无血清培养液中,悬浮培养;加入维甲酸(retinoic acid,RA)诱导细胞分化;接种裸鼠,比较肿瘤细胞球与非肿瘤细胞球裸鼠成瘤情况;利用免疫荧光及RT-PCR法比较肿瘤细胞球与非肿瘤细胞球细胞干细胞标志物Nestin表达的差异.结果:神经母细胞瘤细胞在无血清培养液中悬浮生长成肿瘤细胞球,传代后仍保持很强的自我更新和增殖能力;肿瘤细胞球在RA的诱导下分化,产生具有神经元形态特征的子代肿瘤细胞;1 ×104个肿瘤细胞球细胞14 d可形成移植瘤;RT-PCR及免疫荧光检测证实肿瘤细胞球表达神经干细胞的特异性标志物Nestin.结论:体外培养获得的神经母细胞瘤肿瘤细胞球中富集肿瘤干细胞;肿瘤细胞球中存在Nestin表达阳性的肿瘤干细胞.     

神经母细胞瘤中酪氨酸激酶受体和神经营养素的基因表达研究

目的:探讨神经母细胞瘤(NB)中酪氨酸激酶受体(TRKs)和神经营养素(NTs)的基因表达及其意义.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测27例NB中TrkA、TrkB、TrkC及BDNF mRNA的表达.结果:TrkA的高表达率及总表达率在低分期组均明显大于高分期组(P＜0.05),而其高表达水平与患者2年存活率之间具有明显的相关性(P＜0.01).TrkB的高表达率及总表达率在高分期组均明显大于低分期组(P＜0.05),而BDNF的三种表达率在两组间比较则均无显著性差异(P＞0.05),但这两者的共同表达率在高分期组则明显大于低分期组(P＜0.05).TrkC的表达通常伴有TrkA的表达,而这两者的共同表达率在低分期组则明显大于高分期组(P＜0.05),但它们的表达之间并不存在着关联性趋势.结论:RT-PCR法检测酪氨酸激酶受体和神经营养素的基因表达对NB肿瘤的分期和预后评估具有重要的临床意义.     

节细胞神经母细胞瘤的临床病理学及免疫组化研究

节细胞神经母细胞瘤（ｇａｎｇｌｉｏｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ，ＧＮＢ）与神经母细胞瘤（ｍｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ，ＮＢ）和神经节细胞瘤（ｇａｎ－ｇｌｉｏｎｅｕｒｏｍａ，ＧＮ）是同源性不同分化程度的肿瘤。前者的分化程度界于后两者之间。本文报告我院４０年来１１例ＧＮＢ的研究结果，探讨这种可见肿瘤的临床病理学特征、免疫组化及癌基因产物表达情况。１０例患者为２～６岁，１例为４４岁；８例男性，３例女性；原发部位７例在腹膜后，４例在纵隔。组织学分型，依据肿瘤内成热节细胞与神经母细胞的比例和分布不同，参照ｓｈｉｍａｄａ分类法分为中间混合型（包括Ａ型３例、Ｂ型２例）和结节型６例。免疫组化染色结果为ＮＳＥ９／９、ＣＧＡ８／１１Ｓ－１００９／１１、Ｐ５３蛋白３／１１、Ｃ—ｅｒｂ—Ｂ２９／１１、Ｐ２１蛋白５／６。ＮＳＥ、ＣＧＡ和Ｓ—１００可作为ＧＮＢ的标记物，具体应用时应２～３项合用并结合组织学图像，以提高诊断正确率。ＧＮＢ内肿瘤基因产物的表达提示其发生与这些肿瘤基因有关，但未发现它们之间有协同现象。说明该肿瘤的发生机理十分复杂，可能是多环节调节异常的结果。对该肿瘤的深入研究有待于资料的进一步积累。     

小剂量阿糖胞苷诱导神经母细胞瘤细胞分化的研究

[目的]通过人神经母细胞瘤(NB)SMS-KCNR细胞的体外实验,观察小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对NB细胞的诱导分化作用.[方法]MTS法检测小剂量Ara-C对SMS-KCNR细胞增殖的影响;观察小剂量Ara-C处理后SMS-KCNR细胞的形态变化;流式细胞仪检测小剂量Ara-C处理后SMS-KCNR细胞的细胞周期分布;Western blot检测TrkA、N-myc蛋白的表达,RT-PCR检测TrkA及MYCN mRNA水平的变化.[结果]小剂量Ara-C对SMS-KCNR细胞的增殖具有抑制作用,诱导SMS-KCNR细胞周期停滞于S期,G2/M期细胞比例下降(P＜0.05).经小剂量Ara-C处理后SMS-KCNR细胞形态与正常神经节细胞类似,并使TrkA的表达上调(P＜0.05),MYCN的表达下调(P＜0.05).[结论]小剂量Ara-C对SMS-KCNR细胞具有诱导分化作用,该作用可能与TrkA表达上调,MYCN表达下调有关.     

异环磷酰胺联合卡铂治疗复发和难治性神经母细胞瘤的疗效分析

背景与目的:约30%的神经母细胞瘤患者一线化疗疗效欠佳或在治疗中进展,而且尽管采用综合治疗可使晚期神经母细胞瘤患者获得完全缓解(completeresponse,CR),仍有不少患者最终复发。本研究采用异环磷酰胺/卡铂(IC)方案治疗复发和难治性神经母细胞瘤,探讨复发和难治神经母细胞瘤的挽救化疗方案。方法:9例难治和23例复发性神经母细胞瘤患者接受IC方案化疗:卡铂(carboplatin,CBP)400mg/m2静脉滴注,第1天;异环磷酰胺(ifosfamide,IFO)1.5g/m2,静脉滴注,第1～5天,同时予美斯钠解毒,用法为用IFO后第0、4、8h,各静脉注射1次,每次剂量为IFO剂量的20%。每2～3周重复。结果:部分缓解(partialresponse,PR)19例(59.4%),无CR病例。有效患者中位缓解时间4.2(1～28)个月。8例(25%)患者化疗后获得手术切除肿瘤。主要不良反应有:Ⅲ～Ⅳ度白细胞下降发生率44.7%;Ⅲ～Ⅳ度血小板下降发生率53.1%;粒细胞缺乏合并感染发生率18.8%;Ⅰ度肝功能异常发生率12.5%;出血性膀胱炎发生率9.4%。结论:IC方案治疗复发/难治性神经母细胞瘤近期有效率较高,毒性可耐受。但远期预后较差,仍需探讨一些积极有效的治疗方法以提高其远期生存率。     

复发儿童神经母细胞瘤的长期随访结局与挽救治疗策略分析

目的：分析儿童神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）复发的临床特点、生存情况,并对挽救治疗的策略进行讨论。方法：回顾性分析2010年1月至2021年12月于上海交通大学医学院附属新华医院接受治疗后出现复发的43例NB患儿的复发类型、复发时间及初始治疗情况;通过生存分析、Cox多因素回归分析治疗失败的危险因素,并对挽救治疗的情况进行初步评价。结果：共纳入43例复发儿童NB中,男女性别比2.1∶1,初发时中位诊断年龄为3.7(0.7～15.6)岁,复发时中位年龄为5.5(1.9～17.0)岁。9例患儿为局部复发,34例为多部位复发,主要累及部位包括骨骼、淋巴结、骨髓以及中枢神经系统。43例复发患儿中,1例初治为低危组、7例中危组,35例高危组。复发后经过再次治疗的随访中位时间为5.3年,截至末次随访时间有17例患儿处于生存状态,1、3、5年的总体生存率分别为（76.0±6.4）%、（42.0±7.8）%和（36.3±7.7）%。放疗的缺失是局部复发的危险因素（HR=2.3;95%CI:1.14～3.7）。局部复发后接受再次完整手术和放疗的患儿结局较好。VIT方案（长春新碱、伊立替...     

TrkA基因的表达抑制神经母细胞瘤血管生成的实验研究

目的:探讨TrkA基因通过抑制神经母细胞瘤(NB)血管生成而阻止其生长、转移的可行性.方法:常规培养对照组SY5Y细胞、TrkA基因高表达的实验组细胞(SY5Y-TrkA)和表达载体基因的空载体组细胞(SY5Y-Vec);比较三组细胞的裸鼠皮下致瘤性:通过RT-PCR、免疫组织化学、微血管面积计算检测并比较三种细胞所致的肿瘤瘤体内血管生成情况.结果:SY5Y-Trk A细胞在裸鼠皮下的致瘤性和其所致肿瘤的血管生成能力明显下降.肿瘤终体积:对照组1.736±0.485cm3,空载体组1.803±0.751cm3,实验组0.3945±0.015cm3(P＜0.01);对照组与实验组相比,血管内皮生长因子(VEGF)的表达差别显著(P＜0.01);微血管密度(MVD):对照组27.2l±14.58,空载体组27.76±14.15,实验组4.08±4.72(P＜0.01).结论:TrkA基因能有效抑制神经母细胞瘤的血管生成和肿瘤生长,为应用基因抗血管治疗神经母细胞瘤提供理论依据.     

加减八珍汤辅助治疗小儿神经母细胞瘤的效果观察

目的:观察加减八珍汤辅助治疗小儿神经母细胞瘤的临床疗效。 方法:将80例小儿神经母细胞瘤患者按照随机数字表法分为2组,每组各40例。实验组在基础治疗上给予加减八珍汤治疗,对照组在基础治疗上予以安慰剂,均连续治疗4周,同时观察治疗期间中医证候变化、治疗效果、生活质量、肿瘤进展、不良反应等情况。4周后,以生活质量评分表、中医症状量表进行问卷调查,统计药物干预前后各组患者评分并进行数据分析。结果:两组患儿治疗前各症状程度比较,差异无统计学意义;服加减八珍汤治疗后,实验组疗效评价较治疗前均改善（P<0.05）,且实验组总体生活质量评分均优于对照组（P<0.05）。结论:加减八珍汤辅助治疗小儿神经母细胞瘤有显著效果,可提高患者生存质量,且疗效安全、可行。     

3-D CT成像技术在小儿腹膜后神经母细胞瘤治疗中的应用

目的：探讨CT三维成像（3-DCT）在小儿腹膜后神经母细胞瘤手术中的应用。方法：对12例小儿神经母细胞瘤应用CT机工作软件对图像进行多平面重建、容积再现及透明重建，根据情况制订手术方案。结果：完整切除术5例；大部切除术3例；部分切除2例；明确诊断，放弃手术治疗2例。1例发生并发症是由于术中肿瘤包绕腔静脉，术前腔静脉腹段显示不清。所有病例经3-D CT成像后，显著提高了对肿瘤与周围脏器的解剖关系的了解，血供及供应血管等信息可清晰显示。结论：CT三维成像可以立体直观地显示小儿神经母细胞瘤的形态轮廓及与邻近结构的关系，帮助医生了解病理解剖、体积测定、制订手术计划、最大限度地降低术中损伤。     

神经母细胞瘤增殖、凋亡与休眠消退的相关性研究

目的　本实验通过研究神经母细胞瘤的增殖、凋亡的改变 ,结合神经母细胞瘤的分化 ,以探讨增殖、凋亡的改变与神经母细胞瘤休眠消退的关系。方法　肿瘤休眠消退组 :神经母细胞瘤休眠消退 6例 ,男 4例 ,女 2例。取组织制作成石蜡切片 ,运用免疫组织化学方法检测增殖细胞 ,计算增殖细胞占细胞百分比 ,求得增殖指数 (PI)。运用原位DNA末端标记法 ,检测凋亡细胞 ,计算凋亡细胞占细胞百分比 ,求得凋亡指数 (AI)。结果　休眠消退病例中 5例凋亡指数大于 9% ,5例增殖指数大于 13 % ,6例增殖率减凋亡率均小于 4%。结论　增殖指数小于 13 % ,凋亡指数大于 9% ,特别是增殖指数减凋亡指数小于 4% ,神经母细胞瘤休眠消退的可能性大。     

CIK、DC-CIK细胞对神经母细胞瘤细胞杀伤作用的研究

目的：研究细胞因子诱导的杀伤细胞（ CIK）与树突状细胞（ DC）共培养后对神经母细胞瘤（ neuro-blastoma,NB）细胞株的杀伤作用。方法：取健康人和肿瘤患者外周血单个核细胞（ PBMC）,加入不同的细胞因子分别诱导出DC和CIK细胞,用流式细胞术测定诱导培养前后DC和CIK细胞的表型,MTT法测定不同组CIK细胞对NB细胞株的杀伤活性。结果：流式细胞仪检测健康人PBMC培养后CD3＋CD56＋淋巴细胞百分比以及对NB细胞株的杀伤活性均显著高于肿瘤患者（ P〈0.05）。此外,与单纯CIK细胞相比,DC-CIK细胞具有更强的杀伤NB细胞株的活性（ P〈0.05）。结论：DC-CIK细胞是一种细胞毒作用高于单纯CIK细胞的免疫活性细胞。健康人和肿瘤患者的PBMC经诱导培养获得的CIK细胞有显著差别,为临床进一步提高CIK细胞的治疗效果提供了实验依据。     

中国肿瘤领域重点技术的识别研究

摘 要：［目的］ 基于专利文献分析与识别中国肿瘤领域的重点技术。［方法］ 采用专利相对优势指标法（RPA）和二维象限法分别对中国肿瘤领域的重点技术进行识别,综合两种识别方法的结果确定中国肿瘤领域的重点技术。［结果］ 中国肿瘤领域共有12个重点技术,分别是天然药物抗肿瘤活性,天然抗肿瘤药的药物制剂技术,天然抗肿瘤药的药物载体技术,微生物药物抗肿瘤活性,微生物抗肿瘤药的遗传工程技术,微生物抗肿瘤药的细胞及组织培养技术,微生物抗肿瘤药的药物载体技术,肿瘤放疗设备,肿瘤外科设备,肿瘤外科手术器械,肿瘤诊断及手术相关的外科设备,肿瘤诊断方法或仪器。［结论］ 通过对中国肿瘤领域重点技术的识别与分析,可以了解该领域的研究现状及技术趋势,为肿瘤研究和药物研发提供一定的借鉴和参考。     

护理干预联合中医治疗小儿神经母细胞瘤化疗后疲乏的疗效

目的探讨护理干预联合中医治疗小儿神经母细胞瘤(NB)化疗后疲乏的临床疗效。方法选取2015年1月至2016年1月间德州市陵城区人民医院收治的68例NB患者,采用随机数表法分为观察组和对照组,每组34例。两组患者均服用来复汤中药治疗,观察组患者给予循证护理干预,对照组患者给予常规护理。分别于治疗前后采用Piper疲乏量表和生活质量评分量表评价治疗效果。结果两组患者治疗后疲乏程度均较治疗前有所缓解,差异均有统计学意义(均P<0.05),治疗后观察组患者疲乏程度低于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者躯体功能、角色功能、认知功能、情感功能、社会功能和总体健康评分均显著提高,差异均有统计学意义(均P<0.05),观察组患者功能量表各项评分和总体健康评分显著高于对照组患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗后两组患者生活质量症状量表各项评分均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05),观察组患者生活质量症状量表各项评分显著低于对照组患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论护理干预联合中医治疗可以有效的缓解小儿NB化疗后的疲乏,提高生活质量,有较好的疗效。     

基于专利分析和社会网络分析的天然抗肿瘤药研究

[目的]基于专利文献分析天然抗肿瘤药的发展态势.[方法]采用专利计量分析、社会网络分析等方法从专利申请数量、专利生命周期、专利技术领域、网络密度、中心性等方面对天然抗肿瘤药的发展态势进行深入分析.[结果]全球天然抗肿瘤药领域共有专利申请57 728件,近几年处于稳定的发展时期;美国和中国专利数量处于绝对领先地位,专利申请量分别为21 227件和18 172件;专利申请最多的机构是中国上海BODE基因发展有限公司和瑞士罗氏制药公司,专利数量分别为1172件和862件;专利技术领域主要集中在抗肿瘤活性和剂型的相关研究;研究主题主要涉及肿瘤相关的基因克隆表达及其编码蛋白的特征与功能研究、细胞生长因子及其受体对肿瘤细胞的影响及机制研究等14个领域.[结论]天然抗肿瘤药是肿瘤领域非常重要的研究方向.通过对天然抗肿瘤药的专利进行深入分析,可以了解该领域的研究现状和发展态势,为肿瘤研究和新药研发提供一定的借鉴和参考.     

加温联合钙剂诱导人神经母细胞瘤 SK-H-SN细胞凋亡的研究

目的探讨加温联合钙剂对诱导 SK-H-SN 细胞凋亡的作用及其意义.方法采用 3 种温度和 4 种浓度的外源性氯化钙(CaCl2)诱导 SK-H-SN 细胞凋亡.采用形态学观察、原位缺口末端标记(TUNEL)的方法检测细胞凋亡的结果,并用火焰原子吸收分光光度法测定细胞内钙含量([Ca]i).结果加温和/或加钙均可诱导 SK-H-SN 细胞凋亡.在有外源性钙剂存在时,加温可明显升高[Ca]i.同一温度下,各组的凋亡率(APO%)和[Ca]i均随外源性 CaCl2浓度的升高而升高;同一 CaCl2浓度下,APO% 和[Ca]i均随温度的升高而升高.析因设计的方差分析结果显示,加温和加钙在诱导细胞凋亡时有很强的协同作用,P<0.01.APO% 和[Ca]i之间呈正相关,r=0.983,P<0.01.结论加温和加钙在诱导 SK-H-SN 细胞凋亡方面有很强的协同作用,APO% 和[Ca]i呈正相关,通过增加[Ca2+]i 来诱导凋亡可认为是加温诱导凋亡的机制之一.     

IFNγ、TRAIL及化疗药联合诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的探讨γ-干扰素(Interferon,IFNγ)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfactorre-latedapoptosisinducingligand,TRAIL)及化疗药联合诱导神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞株SH-SY5Y(SY5Y)凋亡的作用及其发生机制。方法应用Western-blot方法检测IFNγ作用前后SY5Y细胞Caspase8蛋白的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测IFNγ、TRAIL、IFNγ TRAIL、IFNγ Caspase8抑制剂(zIETD-FMK) TRAIL及IFNγ 化疗药 TRAIL对SY5Y细胞生长及凋亡的影响。结果SY5Y细胞不表达Caspase8,IFNγ作用48h后的SY5Y细胞Caspase8蛋白表达明显增加;SY5Y细胞对TRAIL不敏感,经IFNγ诱导表达Caspase8的SY5Y细胞对TRAIL敏感;zIETD-FMK可明显抑制TRAIL对表达Caspase8的SY5Y细胞的杀伤作用;化疗药可增强SY5Y细胞对TRAIL的敏感性。结论IFNγ可通过上调SY5Y细胞Caspase8表达而逆转SY5Y细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受,化疗药可增强TRAIL对SY5Y细胞的诱导凋亡作用。     

反义寡核苷酸下调神经母细胞瘤细胞S100A4基因表达的研究

目的 :研究反义硫代磷酸寡核苷酸 (asODN)抑制人神经母细胞瘤细胞系S10 0A4基因表达的作用。方法 :将S10 0A4反义寡核苷酸通过脂质体转染人神经母细胞瘤细胞系LA N 6和SK N SH ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法分析不同浓度、不同作用时间asODN对两细胞株中S10 0A4mRNA表达水平的影响。结果 :asODN明显抑制S10 0A4mR NA的表达 ,其抑制作用随浓度增加逐渐增强 ,0 9μmol/L的asODN可使 2株细胞S10 0A4mRNA相对丰度与对照组相比下调达 3 0 %以上 ,P <0 0 5 ;asODN的抑制作用 2 4h达高峰 ,以后逐渐降低。结论 :asODN能够下调神经母细胞瘤细胞S10 0A4基因的表达 ,为进一步研究S10 0A4在NB细胞中的作用奠定了基础     

神经母细胞瘤原代培养及细胞类型意义的研究

目的:应用骨髓转移标本及原发肿瘤建立神经母细胞瘤原代培养细胞并鉴别N、S和I型细胞,根据细胞集落形成及特征经过提示不同种类细胞与神经母细胞瘤临床预后之间的关系.方法:应用体外原代培养技术对8例骨髓转移神经母细胞瘤患儿骨髓液及4例神经母细胞瘤手术切除肿瘤进行原代细胞培养,观察培养细胞形态学特点,应用Western blot法检测特异性标志物的表达以区分N、S和I型细胞,并应用细胞集落形成实验检测不同类型细胞所致集落形成情况,结合临床治疗及预后结果来评价N、S和I型细胞在神经母细胞瘤中的不同作用及对预后的指示作用.结果:N型细胞呈现聚集生长、核浆比例增大,轴突生长;S型细胞呈单层生长、胞体大而扁平,无轴突突起;I型细胞兼有以上两种细胞特点.I型细胞形成集落的数鼍高于N型细胞,而s型细胞并未形成集落.临床预后中N型及I型临床进展快,预后差,3年生存率为1/5及0(0/4);而s型临床有自发消退逆转迹象,预后良好,3年生存率为3/3.结论:神经母细胞瘤细胞类型包括N、S及I型,I型细胞具有肿瘤干细胞特点,可同时表达N及S型细胞的特异标志物且具有较强形成集落的能力,临床提示预后极差.N型细胞形成集落能力较I型细胞弱,且临床预后不良,而S型细胞无集落形成,临床预后良好.