钩藤碱固体脂质纳米粒的毒性研究

目的考察钩藤碱固体脂质纳米粒的急性毒性和长期毒性,并与钩藤碱缓释滴丸的毒性进行比较。方法小鼠1次性灌胃给药钩藤碱固体脂质纳米粒和钩藤碱缓释滴丸,观察14d内动物毒性反应和死亡情况,并计算其LD50;将100只Wistar大鼠随机分为空白对照组、钩藤碱固体脂质纳米粒高、低剂量组和钩藤碱缓释滴丸高、低剂量组,各20只。大鼠连续灌胃12周,每天观察大鼠的一般状态,每2周记录1次体质量。给药12周后和停药2周后检测大鼠血液学指标和血液生化指标,计算脏体比值,同时对重要脏器进行病理学检查。结果测得钩藤碱固体脂质纳米粒的LD50为2 125.5 mg·kg~(-1),95%CI为2 019.2~2 231.6mg·kg~(-1),钩藤碱缓释滴丸的LD50为1 900.7mg·kg~(-1),95%CI为1651.8~2 167.9mg·kg~(-1);连续灌胃给药12周后,钩藤碱缓释滴丸高剂量组大鼠饮食不佳,体质量增长缓慢,大鼠的ALT、AST和ALP值升高,脏体比值升高,肝脏部分出现变性、灶状坏死灶。钩藤碱固体脂质纳米粒剂量组大鼠各项指标无明显变化。结论固体脂质纳米粒剂型可改善钩藤碱对动物肝脏的毒性反应。     

钩藤碱固体脂质纳米粒对哮喘小鼠miR-155/p38 MAPK轴的影响

目的　观察钩藤碱固体脂质纳米粒（Rhy-SLN）对支气管哮喘模型小鼠微小RNA-155（miR-155）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）轴的影响。方法　15只BALB/c小鼠随机均分为正常对照组、模型组和Rhy-SLN组。Rhy-SLN组小鼠行鼻内氢氧化铝致敏操作前以Rhy-SLN（50 mg/kg）灌胃;正常对照组和模型组给予等量生理盐水。干预结束后,肺泡灌洗液涂片观察嗜酸粒细胞的数量;HE染色观察小鼠肺组织病理改变情况;酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠免疫球蛋白E（IgE）、白细胞介素（IL）-13水平;羟脯氨酸测试盒检测小鼠肺组织中羟脯氨酸水平;Werstern blot检测小鼠肺组织（α-SMA）、胶原蛋白Ⅰ（collagen Ⅰ）、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平;荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测小鼠肺组织miR-155 mRNA表达水平。结果　与模型组比较,Rhy-SLN组可以降低哮喘小鼠肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞的数目、血清中IgE和肺泡灌洗液中IL-13的水平（P＜0.05）;减轻肺组织炎性细胞浸润;降低肺组织中α-SMA、collagenⅠ、羟脯氨酸和p-p38 MAPK的表达（P＜0.05）;上调小鼠肺组织中miR-155的表达水平（P＜0.05）。结论　Rhy-SLN可缓解小鼠哮喘,其机制可能与调节miR-155/p38 MAPK轴,降低气道的炎症反应有关。     

青藤碱固体脂质纳米粒的制备

目的：以山嵛酸甘油酯为载体材料制备青藤碱固体脂质纳米粒并评价其质量。方法：采用乳化蒸发一低温固化法制备青藤碱固体脂质纳米粒，以正交设计优化其处方和制备工艺。对其粒径、形态、表面电位、包封率等理化性质进行研究，并考察其稳定性。结果：所制固体脂质纳米粒外观形态圆整，平均粒径为208．7nm，Zeta电位为-38．5mV，平均包封率为65．7％。4℃放置2个月，粒径、包封率无明显变化。结论：青藤碱固体脂质纳米粒的制备，为开发其新制剂奠定了实验基础。     

青藤碱固体脂质纳米粒凝胶骨架缓释片的制备及处方优化

目的：制备青藤碱固体脂质纳米粒凝胶骨架缓释片,考察凝胶骨架缓释片处方因素对青藤碱固体脂质纳米粒体外释药行为的影响。方法：采用乳化蒸发-低温固化法制备青藤碱固体脂质纳米粒。以羟丙基纤维素（HPMC）为骨架材料制备青藤碱固体脂质纳米粒凝胶骨架缓释片,单因素考察吸附剂种类、骨架材料比例、PEG种类和骨架材料用量对缓释片体外释药的影响,正交试验进一步优化处方,并对释药模型进行拟合。结果：骨架材料比例和PEG种类是影响青藤碱固体脂质纳米凝胶骨架缓释片体外释药行为的主要影响因素,优化后的处方体外释放行为符合一级释药模型,释药方程为ln（1-M_t/M_∞）=-0.187 2 t+0.071 2（r=0.991 1）,累积释放度在12 h内可达90.15%。结论：优化后的青藤碱固体脂质纳米粒凝胶骨架缓释片制备工艺简单,重复性良好,在12 h内具有良好的体外缓释特征。     

异钩藤碱对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的 探讨异钩藤碱（IRN）调节单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)/CC趋化因子受体2(CCR2)信号通路对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 通过注射和吸入卵清蛋白的方法建立哮喘小鼠模型,将造模成功后的小鼠随机分为哮喘组、IRN低剂量组（IRN-L组,灌胃10 mg/kg IRN）、IRN高剂量组（IRN-H组,灌胃20 mg/kg IRN）、IRN-H+CCL2组[灌胃20 mg/kg IRN+腹腔注射7.5 ng CC趋化因子配体（CCL2）]、阳性对照组（腹腔注射2 mg/kg地塞米松）,并以注射和吸入无菌磷酸盐缓冲液的小鼠为空白对照组,每组10只。各药物组小鼠每天给予相应药物1次,连续给药2周。检测各组小鼠气道高反应指标——呼吸间歇（Penh）值,血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素13(IL-13)、IL-4水平,支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞（EOS）、淋巴细胞（LYM）和中性粒细胞（NEU）数量,肺组织中MCP-1、CCR2蛋白表达水平;观察肺组织病理学变化并进行炎症细胞浸润评分。结果 与空白对照组比较,哮喘组小鼠肺组织炎症细胞浸润较明显,并有细胞肿胀、脱落现象发生;...     

离心超滤法测定石杉碱甲固体脂质纳米粒的包封率

固体脂质纳米粒（Solid lipid nanoparticles,SLN）其最大特点是采用生理相容性好、毒性低的脂质材料为载体,降低了其对人体的毒副作用同时,既具备聚合物纳米粒的高物理稳定性、药物泄漏慢的优势．又兼具了脂质体、乳剂的低毒性,可大规模生产的特点。模型药石杉碱甲（HuperzineA,HupA）为高效、高选择性、可逆性的乙酰胆碱酯酶抑制剂,     

罗格列酮对哮喘小鼠气道重塑模型气道平滑肌肌动蛋白-α表达的影响

目的探讨哮喘小鼠气道平滑肌肌动蛋白-α（SMA-α）表达与气道重塑的关系,评价罗格列酮治疗对两者的影响。方法将BALB/C小鼠32只随机分为正常对照组（A组,n=8）、哮喘模型组（B组,n=8）、哮喘模型地塞米松雾化吸入干预组（C组,n=8）、哮喘模型罗格列酮雾化吸入干预组（D组,n=8）。采用SABC法免疫组化技术和计算机图像分析系统对小鼠气道SMA-α表达和气道重塑进行研究。结果 （1）与A组比较,B组小鼠气道平滑肌（ASM）厚度和上皮厚度均显著增加（P〈0.05）,而气道直径显著减小（P〈0.05）;C、D组ASM厚度和上皮厚度均增加（P〈0.05）,气道直径减小（P〈0.05）。（2）与B组比较,C、D组小鼠ASM厚度和上皮厚度均显著下降（P〈0.05）,而气道直径显著增大（P〈0.05）;C、D组上述指标比较差异无统计学意义（P〉0.05）。（3）与A组比较,B、C、D组小鼠气道SMA-α表达水平显著升高（P〈0.05）;与B组比较,C、D组小鼠气道SMA-α表达水平显著下降（P〈0.05）;C、D组SMA-α表达水平差异无统计学意义（P〉0.05）。结论气道SMA-α表达水平的上调可能是导致气道重塑反应发生的机制之一,罗格列酮治疗可延缓该反应的发生。     

罗格列酮对哮喘小鼠气道重塑模型气道平滑肌肌动蛋白-α表达的影响

目的 探讨哮喘小鼠气道平滑肌肌动蛋白-α(SMA-α)表达与气道重塑的关系,评价罗格列酮治疗对两者的影响.方法 将BALB/C小鼠32只随机分为正常对照组(A组,n=8)、哮喘模型组(B组,n=8)、哮喘模型地塞米松雾化吸入干预组(C组,n=8)、哮喘模型罗格列酮雾化吸入干预组(D组,n=8).采用SABC法免疫组化技术和计算机图像分析系统对小鼠气道SMA-α表达和气道重塑进行研究.结果 (1)与A组比较,B组小鼠气道平滑肌(ASM)厚度和上皮厚度均显著增加(P<0.05),而气道直径显著减小(P<0.05);C、D组ASM厚度和上皮厚度均增加(P＜0.05),气道直径减小(P＜0.05).(2)与B组比较,C、D组小鼠ASM厚度和上皮厚度均显著下降(P<0.05),而气道直径显著增大(P<0.05);C、D组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).(3)与A组比较,B、C、D组小鼠气道SMA-α表达水平显著升高(P<0.05);与B组比较,C、D组小鼠气道SMA-α表达水平显著下降(P<0.05);C、D组SMA-α表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 气道SMA-α表达水平的上调可能是导致气道重塑反应发生的机制之一,罗格列酮治疗可延缓该反应的发生.     

A549细胞对单硬脂酸甘油酯固体脂质纳米粒的摄取作用A549细胞对单硬脂酸甘油酯固体脂质纳米粒的摄取作用

目的考察单硬脂酸甘油酯固体脂质纳米粒(monostearin solid lipid nanoparticles，MSLN)经PEG2000修饰后，对A549细胞摄取MSLN及J774A1细胞吞噬MSLN的影响。方法采用溶剂扩散法制备MSLN，测定其粒径和zeta电位；以罗丹明B(Rhodamine B)为荧光标记物，研究A549细胞对MSLN的摄取作用和J774A1细胞对MSLN的吞噬作用。结果MSLN的细胞毒性较低，A549细胞对MSLN的摄取可快速接近饱和，其摄取百分率与MSLN在细胞外的浓度呈负相关。结论MSLN经PEG2000修饰，可显著抑制J774A1细胞对MSLN的吞噬，但可增加A549细胞对MSLN的摄取。     

盐酸戊乙奎醚对哮喘鼠气道平滑肌细胞增殖作用的研究

目的探讨盐酸戊乙奎醚对哮喘鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响。方法BALB／c小鼠随机分为对照组（A）、哮喘组（B）和盐酸戊乙奎醚干预组（C）。进行支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞分类计数;测定转移生长因子-β1（TGF-β1）的浓度及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达;观察肺组织病理形态学变化;图像分析测定支气管基底膜周径（Pbm）、气道壁总面积（WAt）、平滑肌面积（WArn）。结果C组的TGF-β1、PCNA表达及WAt／Pbm、WAm／Pbm比值明显低于B组（P〈0．05）,而高于A组（P〈0．05）。结论早期行盐酸戊乙奎醚干预可通过减少TGF-β1在肺组织的表达减轻ASMC增殖。     

槲皮素固体脂质纳米粒对Aβ25-35损伤的PC12细胞雌激素样神经保护作用的研究

目的考察槲皮素固体脂质纳米粒(quercetin solid lipid nanoparticles,Que-SLN)对Aβ_25-35损伤的PC12细胞的雌激素样神经保护作用。方法通过熔融超声法制备Que-SLN并进行理化性质评价;Transwell小室考察Que-SLN体外血脑屏障通透性;MTT法测定不同处理组细胞活力、免疫荧光染色法和Western blot技术检测ERα和ERβ蛋白的表达。结果制备的Que-SLN包封率为(90.54±1.36)%,载药量(4.33±0.06)%,粒径(191.23±3.25)nm,电位(-24.40±1.24)mV,外观呈球形,形态较圆整,大小均一;与Que组相比,Que-SLN的血脑屏障通透性增加(P<0.01); Que-SLN(50、100、200μmol·L^-1)浓度组的细胞的存活率分别为(116.79±2.75)%(P<0.01),(119.46±1.89)%(P<0.01),(107.55±3.17)%(P<0.05),与Aβ_25-35组相比,Q...     

经半乳糖苷修饰的齐墩果酸固体脂质纳米粒对急性肝损伤模型小鼠的保护作用研究

目的:探讨半乳糖苷修饰的齐墩果酸(OA)固体脂质纳米粒(OA-G10SLN)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:60只小鼠分为正常对照组、模型组、OA普通溶液组及OA-G10SLN高、中、低剂量(25.0、12.5、2.5mg·kg-1)组,各组每天尾静脉给予相应药物1次,连续7d,各组除正常对照组外于第6天注射CCl4造模。第7天处死小鼠并测定血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量,同时作肝组织病理学检测。结果:与模型组比较,OA-G10SLN组血清AST、ALT含量明显降低(P<0.05),肝组织的病理改变明显减轻,且作用优于OA普通溶液组(P<0.05)。结论:OA-G10SLN对CCl4所致的小鼠急性肝损伤具有保护作用。     

吴茱萸碱丁酰基衍生物固体脂质纳米粒的体外释放及在体胃肠吸收研究

目的制备吴茱萸碱丁酰基衍生物(evodiamine butyryl derivative,EBD)和吴茱萸碱丁酰衍生物固体脂质纳米粒(evodiamine butyryl derivative-loaded solid lipid nanoparticles,EBDLN),并研究它们的体外释放特征以及在体胃肠吸收的能力。方法采用一步合成法制备EBD,经薄膜分散法制备EBDLN。采用动态透析法考察EBD和EBDLN的体外释药特征,并用单向灌流法研究吴茱萸碱(evodiamine,EDM)、EBD和EBDLN的胃肠道吸收。结果在同种释放介质中,EBD和EBDLN的释药趋势完全一致,但EBDLN相对于EBD而言其释药速度更慢。EBDLN在各个肠道的K_a值和P_(app)值均明显大于EDM和EBD。且EBDLN在胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠中的K_a值分别为EDM的110.14、56.70、51.23、45.70、127.23倍,EBDLN在十二指肠、空肠、回肠、结肠中的P_(app)值分别为EDM的9.74、4.48、3.82、11.30倍。结论EBDLN具有缓释效应,增加了EDM和EBD在胃肠道的吸收。     

姜黄素固体脂质纳米粒干粉吸入剂的体外释药、体内急性毒性及对哮喘模型小鼠炎症反应的影响

目的:研究姜黄素(Cur)固体脂质纳米粒(SLN)干粉吸入剂(DPI)的体外释药性能、小鼠体内急性毒性及对哮喘模型小鼠炎症反应的影响。方法:采用喷雾干燥法将微乳法制备的Cur-SLN混悬液微粉化后与乳糖(200目)等充分混匀制成Cur-SLN-DPI。采用动态膜透析法考察体外释药情况,比较Cur原料药、Cur-SLN、Cur-SLN-DPI分别在3种释放介质[含1.0%十二烷基硫酸钠(SDS)的磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)、含0.2%聚山梨酯80的PBS(pH 7.4)、生理盐水-20%乙醇溶液]中释放5、15、30 min和1、1.5、3、6、8、12、18、24、36、48 h的释放曲线,并筛选合适的释药模型。按急性毒性试验要求考察尾静脉注射最大剂量2 000 mg/kg Cur-SLN-DPI对KM小鼠的影响。将KM小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药物组(布地奈德3 mg)和Cur-SLN-DPI高、低剂量组(100、50 mg/kg),每组7只,以卵蛋白(OVA)为致敏原复制哮喘模型,每周1、3、5雾化OVA激发哮喘前30 min雾化给药,连续3周。末次激发24 h内,计数肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、淋巴细胞数、中性粒细胞数和嗜酸性粒细胞数,观察支气管和肺组织的病理学变化。结果:与Cur原料药比较,Cur-SLN和Cur-SLN-DPI均具有缓释作用,且Cur-SLN-DPI在3种释放介质中的缓释更平稳,释药特征均符合Weibull模型。尾静脉注射2 000 mg/kg Cur-SLN-DPI对小鼠无明显的急性毒性。与正常对照组比较,模型组小鼠BALF中白细胞总数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、嗜酸性粒细胞数均明显增加(P<0.01),支气管黏膜上皮被覆假复层纤毛柱状细胞,周围炎症细胞浸润严重,肺淤血,中度间质性肺炎;与模型组比较,各给药组小鼠BALF中上述细胞数均明显降低(P<0.01),Cur-SLN-DPI低、高剂量组小鼠气管病变均改善,肺部淤血减轻,且高剂量组减轻更明显。结论:Cur-SLN-DPI具有体外缓释作用,对小鼠无明显急性毒性,可改善哮喘模型小鼠的气管炎症反应和肺部淤血程度。     

花形乳糖装载姜黄素固体脂质纳米粒吸入微粉对COPD模型小鼠肺部炎症的影响及机制

目的 探讨肺吸入花形乳糖（FL）装载姜黄素（Cur）固体脂质纳米粒（SLN）吸入微粉（Cur-SLN-FL）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型小鼠肺部炎症的影响及机制。方法 对Cur-SLN-FL的肺部刺激性进行考察,明确吸入材料的局部安全性。然后随机选用10只小鼠经气管注入生理盐水,其余50只小鼠均滴注猪胰蛋白酶溶液（浓度为33.3 mg/mL、给药剂量为1.0 mL/kg）复制COPD模型,小鼠正常喂养28 d后分为假手术组、模型组、布地奈德组（20 mg/kg）和Cur-SLN-FL高、低剂量（100、50 mg/kg）组,每组10只。按要求给予相应药物,每日1次,连续14 d。末次给药24 h后,采集各组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）并对其中的白细胞分类计数;采用苏木素-伊红（HE）染色观察气管和肺组织病理形态;采用Masson染色检测肺组织胶原纤维沉积;采用免疫组织化学法检测肺组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)的阳性表达;采用Western blot法检测肺组织中NLRP3、caspase...     

青蒿琥酯改善哮喘幼鼠气道重塑的作用

目的 探讨青蒿琥酯对卵清蛋白诱导的哮喘幼鼠气道重塑的影响及作用机制。方法 将SD幼鼠随机分为正常组、模型组(卵清蛋白激发)、阳性对照组(在模型组基础上给予0.2 mg·kg^-1的地塞米松)、低剂量组(在模型组基础上给予10 mg·kg^-1的青蒿琥酯)、高剂量组(在模型组基础上给予20 mg·kg^-1的青蒿琥酯)、激动剂组(在模型组基础上给予20 mg·kg^-1的青蒿琥酯和100 mg·kg^-1的尼日利亚菌素钠盐),每组10只。处理结束后检测幼鼠气道重塑相关指标,使用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测NOD样受体蛋白3炎症小体(NLRP3)通路相关蛋白和mRNA表达水平,用酶联免疫吸附测定法检测炎性因子表达水平,用瑞氏-吉姆萨染色法检测肺泡灌洗液中炎性细胞分类和计数。结果 正常组、模型组、阳性对照组、高剂量组和激动剂组的NLRP3 mRNA表达水平分别为1.00±0.10、2.36±0.26、1.08±0.11、1.33±0.12和2.14±0.26,胱天蛋白酶1(ca...     

DATS通过p38MAPK通路抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α及IL-1β表达

目的探讨p38MAPK在二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达中的作用。方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预,Western blot检测细胞p38及磷酸化p38(p-p38)的表达;用LPS和(或)SB203580孵育细胞,反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1βmRNA表达,Western blot检测细胞磷酸化(p-IκB)及非磷酸化IκB的表达。结果 LPS刺激MH-S细胞可导致p-p38表达增加,呈时间依赖性;用DATS(0.1、0.5、2.5、5.0 mg.L-1)预处理细胞30 min后再给予LPS刺激,p-p38表达呈剂量依赖性下降;单独DATS对p-p38表达无明显影响。p38特异性抑制剂SB203580可剂量依赖性地抑制LPS诱导的p-IκB蛋白、TNF-α及IL-1βmR-NA表达。结论 DATS可通过抑制p38MAPK通路抑制IκB磷酸化及NF-κB活化,进而下调LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达。     

复方藜芍片对大鼠原发性三叉神经痛的治疗作用

目的 考察复方藜芍片对大鼠原发性三叉神经痛的治疗作用并初步探索相关机制。方法 建立雄性SD大鼠眶下神经压迫术原发性三叉神经痛模型,随机分为模型组、卡马西平组及复方藜芍片低、中、高剂量（420、840、1 680 mg/kg）组,ig给药28d;定期测定术侧面部机械痛敏阈值（MWT）;ELISA试剂盒检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;q-PCR检测三叉神经节中TNF-α、IL-1β mRNA表达;Western blotting检测三叉神经节中降钙素基因相关肽（CGRP）表达;免疫组化检测大脑纹状体中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）表达。结果 术后当天各组大鼠术侧MWT与术前相比均显著下降（P<0.05）,大鼠原发性三叉神经痛模型造模成功。复方藜芍片高剂量组MWT值为19.58,与模型组比较MWT值增加36.6%(P<0.05),复方藜芍片对原发性三叉神经痛模型大鼠的MWT有显著性改善。与卡马西平组（14.17）相比,复方藜芍片中、高剂量组大鼠MWT均显著性上升（P<0.05）。与模型组相比,复方藜芍片中...