钩藤碱固体脂质纳米粒对哮喘小鼠miR-155/p38 MAPK轴的影响

目的　观察钩藤碱固体脂质纳米粒（Rhy-SLN）对支气管哮喘模型小鼠微小RNA-155（miR-155）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）轴的影响。方法　15只BALB/c小鼠随机均分为正常对照组、模型组和Rhy-SLN组。Rhy-SLN组小鼠行鼻内氢氧化铝致敏操作前以Rhy-SLN（50 mg/kg）灌胃;正常对照组和模型组给予等量生理盐水。干预结束后,肺泡灌洗液涂片观察嗜酸粒细胞的数量;HE染色观察小鼠肺组织病理改变情况;酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠免疫球蛋白E（IgE）、白细胞介素（IL）-13水平;羟脯氨酸测试盒检测小鼠肺组织中羟脯氨酸水平;Werstern blot检测小鼠肺组织（α-SMA）、胶原蛋白Ⅰ（collagen Ⅰ）、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平;荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测小鼠肺组织miR-155 mRNA表达水平。结果　与模型组比较,Rhy-SLN组可以降低哮喘小鼠肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞的数目、血清中IgE和肺泡灌洗液中IL-13的水平（P＜0.05）;减轻肺组织炎性细胞浸润;降低肺组织中α-SMA、collagenⅠ、羟脯氨酸和p-p38 MAPK的表达（P＜0.05）;上调小鼠肺组织中miR-155的表达水平（P＜0.05）。结论　Rhy-SLN可缓解小鼠哮喘,其机制可能与调节miR-155/p38 MAPK轴,降低气道的炎症反应有关。     

KATP通道开放剂对气道平滑肌细胞增殖表达及SOCS3/5免疫失衡的影响

目的 研究ATP敏感性钾通道（KATP通道）开放剂对气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖过程的影响,以及细胞因子信号转导抑制蛋白3/5 （SOCS3/5）表达变化与转化生长因子-β1（TGF-β1）分泌释放水平的关系.方法 体外构建增殖型ASMCs原代培养细胞模型,分为ASMCs组、AngⅡ.ASMCs组、淋巴细胞（L）组、ASMCs＋L组和AngⅡ.ASMCs＋L组.Real-time PCR检测细胞中SOCS3 mRNA及SOCS5 mRNA表达的差异;ELISA法检测上清液中TGF-β1的释放水平.观察KATP通道开放剂尼可地尔（NCR）干预的影响.结果 与ASMCs组比较,AngⅡ.ASMCs组TGF-β1的表达水平明显升高（P＜0.01）;NCR作用于细胞后各组ASMCs表达TGF-β1与格列本脲（GLI）比较明显减少（P＜0.05）.与ASMCs＋L组比较,AngⅡ·ASMCs＋L组SOCS3 mRNA表达增加,而SOCS5 mRNA表达减少（P＜0.05）.NCR可以下调SOCS3的表达,上调SOCS5的表达.结论 KATP通道开放可以通过抑制ASMCs增殖而调控TGF-β1分泌表达;SOCS3和SOCS5可能是哮喘气道重塑的特异性免疫治疗中的重要靶点.     

MiR-192-5p在支气管哮喘气道炎症中的作用北大核心CSCD

目的探讨微小RNA-192-50(miR-192-5p)在支气管哮喘(简称哮喘)患者血浆中的表达,及其对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、炎性因子的表达以及细胞周期相关蛋白的影响。方法将本院收治的65例急性哮喘患者作为哮喘组,并选取同时期年龄相仿的65例健康人员作为健康对照组。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测哮喘患者血浆中miR-192-5p的表达水平。将ASMCs随机分为空白组(常规培养,不做任何处理)、模型组(20 ng·mL^(-1)TNF-α处理24 h)、转染对照组(转染模拟物阴性对照mimic-NC后,用20 ng·mL^(-1)TNF-α处理24 h)和转染组(转染miR-192-5p mimic后用20 ng·mL^(-1)TNF-α处理24 h)。用噻唑蓝(MTT)法检测ASMCs的增殖活力;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测ASMCs细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平;用蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1和CDK6蛋白的水平。结果miR-192-5p在健康对照组和哮喘组血浆中的相对表达分别为1.01±0.09,0.44±0.05,与健康对照组相比,哮喘组血浆中miR-192-5p显著低表达(P<0.05)。空白组、模型组、转染对照组、转染组ASMCs上清液中IL-1β的水平分别为(132.58±17.41),(519.48±38.94),(509.41±20.34)和(204.14±28.71)pg·mL^(-1),IL-6的水平分别为(86.99±6.83),(639.21±56.25),(656.72±69.35)和(301.86±34.98)pg·mL^(-1),Cyclin D1蛋白的表达水平分别为0.36±0.02,0.95±0.08,0.97±0.09和0.48±0.03;CDK6蛋白的表达水平分别为0.11±0.01,1.04±0.09,1.01±0.08和0.16±0.02。模型组与空白组,转染对照组与转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-192-5p在支气管哮喘患者血浆中表达下调,过表达miR-192-5p抑制TNF-α诱导的ASMCs增殖、炎症和细胞周期相关蛋白。     

微囊蛋白-1蛋白参与哮喘气道平滑肌细胞增殖中ERK1／2调控以及罗红霉素的干预

目的：在细胞水平研究微囊蛋白-1（caveo-1in-1）对气道平滑肌细胞（ASMCs）的增殖作用以及对ERK1／2的通路调控,探讨caveolin-1抑制ASMCs增殖的可能机制。方法：复制哮喘大鼠模型,光镜观察肺组织病理变化,透射电镜观察ASMCs上微囊（caveolae）的结构及变化,用组织贴壁法体外培养气道平滑肌细胞,实验设正常对照组（A组）、哮喘组（B组）、ERKl／2信号通路阻断剂PD98059（C组）、罗红霉素组（D组）、caveo—lae结构破坏药物8-甲基环糊精组（E组）;用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,逆转录-聚合酶链测定（RT-PCR）和蛋白质印迹法（WesternBlot）检测ERKmRNA和p-ERK1／2蛋白的表达;WesternBlot法检测各组caveolin-1蛋白细胞表达。结果：CCK-8检测结果显示D组及C组ASMCs增殖反应低于B组,D组（0．59±0．15） vs B组（0．96±0．14）,P〈0．05,C组（0．63±0．11） vs （0．96±0．14）,P〈0．05;E组ASMCs增殖反应较B组进一步活跃（1．26±0．21） vs （0．96±0．14）,P〈0．05。D组及C组ASMCs上caveolin-1的表达较B组明显升高,P〈0．01,pERKl／2蛋白以及ERKInRNA表达较B组降低,E组相反。D组ASMCs的ERK mR-NA和p-ERK1／2蛋白表达水平均显著低于B组及E组（P〈0．01）。结论：caveolin-1可能是ASMCs内信号转导的负调控蛋白,这-作用可能是通过抑制ERK信号通路实现。罗红霉素可能上调caweolin-1蛋白的表达量,抑制ERK mR-NA表达和翻译,从而抑制哮喘大鼠ASMCs的增殖。     

罗红霉素对哮喘平滑肌细胞增殖以及微囊蛋白-1及PI3K/Akt的影响

目的研究罗红霉素(RXM)能否通过上调微囊蛋白-1(caveolin-1)的表达来调控PI3K/Akt通路,从而抑制TGF-β1刺激引起的哮喘气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖。方法 30只健康♂SD大鼠随机分为对照组和哮喘组,每组15只,以卵白蛋白(OVA)致敏和激发建立大鼠哮喘模型。将培养的ASMCs进行鉴定后,在哮喘组细胞中分别加入TGF-β1、PI3K/Akt通路抑制剂渥曼宁青霉素(wortmannin)、胆固醇剔除剂β-环糊精(β-CD)以及RXM进行干预,后三组在干预后再用TGF-β1刺激,故分6组:1TGF-β1组、2哮喘组、3正常组、4 wortmannin+TGF-β1组、5β-CD+TGF-β1组、6RXM+TGF-β1组,用CCK-8法检测哮喘大鼠ASMCs的增殖,Western blot检测ASMCs上caveolin-1、Akt、p-Akt的表达情况。结果 1TGF-β1组较正常组和哮喘组细胞增殖明显(P<0.01,P<0.05);RXM和wortmannin干预组较TGF-β1组细胞增殖减少(均P<0.01)。2与正常组比较,哮喘组、TGF-β1组、β-CD干预组气道平滑肌细胞caveolin-1的表达量明显减少(均P<0.05),TGF-β1组较哮喘组caveolin-1表达量明显减少(P<0.05);与此同时,哮喘组ASMCs较正常组p-Akt的表达量明显增加(P<0.05),TGF-β1组较哮喘组p-Akt表达量明显增加(P<0.05),wortmannin干预组较TGF-β1组p-Akt的表达量明显减少,β-CD干预组较TGF-β1组p-Akt表达量明显增加(P<0.05),RXM干预组较TGF-β1组p-Akt表达量明显减少(P<0.05)。结论罗红霉素可抑制TGF-β1刺激导致的哮喘大鼠ASMCs的增殖,并上调caveolin-1表达,抑制p-Akt活化。     

蒙药五味沙棘散对吸烟致小鼠肺部炎症的改善作用及机制研究

目的:研究蒙药五味沙棘散(WSP)对吸烟所致小鼠肺部炎症的改善作用及其机制。方法:将30只ICR小鼠随机分为空白组(生理盐水)、模型组(生理盐水)和WSP组(2 g/kg)。模型组和WSP组小鼠采用被动吸烟法复制肺部炎症损伤模型,并于造模的同时每天ig相应药物1次,连续28 d。给药结束后,采用酶联免疫吸附法检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10水平;苏木精-伊红染色后光镜下观察小鼠肺组织病理变化;Western blot法检测小鼠肺组织中细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、核因子κB p65(NF-κB p65)和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显升高(P<0.01),肺组织发生明显炎症病变,肺组织中p-ERK1/2、p-p38 MAPK、pNF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,WSP组大鼠BALF中TNF-α、IL-1β水平明显降低(P<0.05),肺组织炎症损伤明显改善,肺组织中p-p38 MAPK和p-NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:WSP可能通过阻断p38MAPK、NF-κB p65蛋白的磷酸化来抑制炎症因子TNF-α和IL-6的高表达,从而发挥其对吸烟所致小鼠肺部炎症损伤的改善作用。     

SOCS3对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化进展和逆转的影响及机制研究

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白-3(suppressor of cytokine signaling3,SOCS3)对肝纤维化进展和逆转过程的影响。方法皮下注射四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)建立C57BL/6小鼠肝纤维化模型,纤维化模型成功后正常饮食喂养1个月为纤维化逆转模型,以同体重、同性别的正常小鼠为对照组。分别在1、2、3、4、5、6、7、8周后处死小鼠,取肝组织,HE染色观察肝组织损伤情况,Masson染色观察胶原变化,免疫组织化学法观察Ⅰ型胶原(collagenⅠ,Colla-1)、α平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)和SOCS3蛋白表达。体外用TGF-β1刺激HSC-T6细胞株形成纤维化体外模型,MDI培养基逆转纤维化过程,SOCS3过表达质粒作用于逆转过程,Western blot方法检测SOCS3、Colla-1、α-SMA、TGF-β1表达情况。结果 SOCS3和TGF-β1在小鼠纤维化模型中随着纤维化加重而表达增加,逆转过程中减少,过表达逆转过程,纤维化指标降低,有利于逆转的进行,TGF-β1表达也相应降低。结论SOCS3可能通过调控TGF-β1的表达参与肝脏纤维化的形成和逆转过程。     

黄芪多糖对哮喘小鼠气道重构的干预作用

目的：探讨黄芪多糖（astragalus polysaccharide,APS）对哮喘小鼠气道重构的干预作用。方法：60只4～6周龄SPF（Specific PathogenFree）级BALB/c小鼠,随机均分为对照组、哮喘组、APS治疗组和地塞米松（dexamethasone,DXM）阳性对照组;用卵蛋白（ovalbumin,OVA）致敏/激发哮喘;APS治疗组和DXM阳性对照组分别用APS和DXM肌肉注射治疗。采用二步法免疫组化技术对小鼠肺组织α平滑肌肌动蛋白（smooth muscle actin-α,α-SMA）表达进行检测,采用计算机图像分析系统对气道重塑进行分析。结果：与对照组对比,哮喘组小鼠肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fliud,BALF）中白细胞计数显著增加（P〈0.01）,α-SMA强阳性表达,气道壁厚度（d/Pi）、气道壁面积（WA/Pi）、气道平滑肌面积（Wam/Pi）和平滑肌细胞计数（N/Pi）均明显增加（P〈0.05或P〈0.01）;与哮喘组对比,APS治疗组和DXM阳性对照组BALF中细胞计数显著减少（P〈0.001）,α-SMA阳性表达,d/Pi、WA/Pi、Wam/Pi和N/Pi均显著减小（P〈0.05或P〈0.01）。结论：APS可抑制哮喘小鼠的气道重塑,这种抑制作用可能是通过调节α-SMA的表达来实现的。     

双氢青蒿素通过抑制炎症反应在血管重塑中的作用机制研究

目的 探究双氢青蒿素通过抑制炎症反应对血管重塑的抑制作用。方法 采用贴块法培养小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)，以TNF-α诱导建立体外平滑肌细胞增殖模型，通过手术剥夺动脉方式建立小鼠股动脉损伤模型，并采用双氢青蒿素干预细胞及股动脉损伤小鼠。采用CCK-8法检测细胞增殖；H&E染色评价股动脉组织病理变化情况并测量中膜厚度；ELISA法检测细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6、CCR8及小鼠股动脉组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β1的含量；免疫组织化学法检测股动脉组织NF-κB p65、CCR8表达；qRT-PCR分析细胞及股动脉组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CCR8、NF-κB p65、TGF-β1、MCP-1 mRNA表达；Western blotting分析细胞及股动脉组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、NF-κB p65、CCR8、TGF-β1、MCP-1蛋白表达。结果 在TNF-α诱导的VSMCs增殖及股动脉损伤小鼠模型中，VSMCs增殖及TNF-α、IL-6含量明显升高，IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA表达明显升高，IL-6、CCR8、NF-κB p65蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01)；双氢青蒿素可明显降低TNF-α诱导的VSMCs中IL-1β、IL-8 mRNA及股动脉损伤小鼠IL-1β mRNA表达和IL-1β、p-NF-κB p65蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论 双氢青蒿素能降低血管炎症，延缓损伤血管的重塑，表明其为经皮冠状动脉介入治疗(如支架植入)的潜在治疗药物。     

复方积雪草煎剂对单侧输尿管结扎小鼠肾小管间质骨架蛋白α-SMA、vimentin表达的影响

目的：通过对复方积雪草煎剂对单侧输尿管结扎（unilateral ureteral occlusion，UUO）小鼠模型肾小管间质骨架蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、波形蛋白（vimentin）表达影响的研究，探讨其防治肾间质纤维化的作用和机理。方法：采用小鼠UUO模型，用复方积雪草水煎剂进行灌胃干预，血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin-converting enzyme inhibitor，ACEI）福辛普利作为对照。MASSON染色观察肾组织病理及间质纤维化；肾组织中α-SMA、vimentin表达采用免疫组化和Westem-blotting方法检测；基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法。结果：UUO模型组和治疗组小鼠肾间质纤维化程度以及α-SMA、vimentin蛋白表达和基因表达水平均较假手术组显著增高，而复方积雪草煎剂、福辛普利治疗组肾间质纤维化和间质骨架蛋白的表达均较模型组显著降低。结论：复方积雪草可显著抑制肾小管上皮细胞或间质细胞的表型转化，提示降低肌成纤维细胞的积聚是其防治肾间质纤维化的重要机制之一。     

周期蛋白D1正反义表达质粒的构建鉴定及其对哮喘大鼠气道平滑肌增殖的影响

观察哮喘大鼠气道平滑肌周期蛋白D1的表达，并构建大鼠周期蛋白D1 (CyclinD1)正反义表达质粒，转染支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)，探讨CyclinD1在哮喘大鼠ASMC增殖过程中的影响。大鼠雾化吸入卵清蛋白建立哮喘模型，免疫荧光检测CyclinD1的表达。以气道平滑肌条总RNA为模板，通过RT-PCR获取大鼠CyclinD1全长cDNA，插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上，构建CyclinD1正义表达质粒(pcDNA3.1-CyclinD1)和反义表达质粒(pcDNA3.1-asCyclinD1)。用脂质体介导的基因转染方法，将正反义重组体和空质粒(vector)分别转染哮喘大鼠和正常大鼠ASMC，用Western blotting方法鉴定CyclinD1基因的表达。采用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐(MTT)法、增殖细胞核抗原(PCNA)染色等方法观察构建质粒对哮喘大鼠ASMC增殖的影响。结果表明：(1)与对照组相比，哮喘组CyclinD1表达显著增高；(2)酶切鉴定和测序分析证实，试验成功构建了CyclinD1正反义表达质粒。与转染pcDNA3.1-CyclinD1组和vector组相比，转染pcDNA3.1-asCyclinD1组大鼠ASMC中CyclinD1表达水平下降(P<0.01)；(3)与vector组S+G₂M期比例、吸收度(A)值、PCNA阳性表达率相比，转染pcDNA3.1-CyclinD1组增殖指标均明显增加(P<0.01)。转染pcDNA3.1-asCyclinD1组增殖指标均明显下降(P<0.01)。正常组大鼠转染质粒后各组间变化趋势与哮喘组一致。pcDNA3.1-CyclinD1可促进哮喘大鼠ASMC增殖，pcDNA3.1-asCyclinD1可抑制哮喘大鼠ASMC增殖，提示CyclinD1在哮喘ASMC增殖的信号转导中具有重要作用。     

丝裂素活化的蛋白激酶反义寡核苷酸对p42/p44,p38和JNK激酶的靶向选择性及其对血管平滑肌细胞DNA合成的抑制作用

目的:探讨丝裂素活化的蛋白激酶(MAPK)反义寡核苷酸对血清诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增殖的选择性及序列依赖性抑制作用。方法:用脂质体将p42-和p44-MAPK反义寡核苷酸转染入大鼠血管平滑肌细胞,设正义及随机寡核苷酸对照,20％血清刺激后,用Western Blot法测定总p44/p42-MAPK、p38 MAPK及JNKs蛋白水平及磷酸化MAPK表达。[~3H]胸腺嘧啶核苷酸掺入测定平滑肌细胞DNA合成。结果:MAPK反义寡核苷酸能明显抑制血清诱导的血管平滑肌细胞总MAPK蛋白水平及磷酸化MAPK蛋白表达,对p38 MAPK及JNKs表达无影响,并能明显抑制[~3H]胸腺嘧啶核苷酸掺入。结论:针对p42-和p44-MAPK起始部位设计的17-mer反义寡核苷酸能选择性及序列依赖性地抑制血清诱导的血管平滑肌细胞的增殖。     

盐酸戊乙奎醚对哮喘鼠气道平滑肌细胞增殖作用的研究

目的探讨盐酸戊乙奎醚对哮喘鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响。方法BALB／c小鼠随机分为对照组（A）、哮喘组（B）和盐酸戊乙奎醚干预组（C）。进行支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞分类计数;测定转移生长因子-β1（TGF-β1）的浓度及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达;观察肺组织病理形态学变化;图像分析测定支气管基底膜周径（Pbm）、气道壁总面积（WAt）、平滑肌面积（WArn）。结果C组的TGF-β1、PCNA表达及WAt／Pbm、WAm／Pbm比值明显低于B组（P〈0．05）,而高于A组（P〈0．05）。结论早期行盐酸戊乙奎醚干预可通过减少TGF-β1在肺组织的表达减轻ASMC增殖。     

Effect of CTGF siRNA plasmid on renal interstitial fibrosis in mice with UUO

目的 利用单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化模型,采用尾静脉注射的方法整体转染CTGF-siRNA质粒抑制肾脏结缔组织生长因子(CTGF)的表达,观察敲低CTGF表达对肾脏间质纤维化的影响.方法 制备UUO模型及活体CTGF基因转染;应用免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;Western blot检测CTGF及α-SMA蛋白的表达;半定量RT-PCR检测α-SMA mRNA的表达.结果 转染CTGF-siRNA质粒的UUO小鼠CTGF及α-SMA的基因表达明显下降(P<0.05).结论 经小鼠尾静脉注射CTGF siRNA质粒能显著抑制小鼠肾CTGF和α-SMA基因表达并能有效抑制小鼠肾脏间质纤维化,提示CTGF siRNA有潜力成为防治肾脏间质纤维化的一种新策略.     

丝裂原活化蛋白激酶38在糖尿病小鼠肾组织中的表达

目的研究丝裂原活化蛋白激酶38（p38MAPK）在链脲左菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠肾组织中的表达及活化情况,从分子信号角度探讨糖尿病肾病。肾纤维化的发病机制。方法采用STZ腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型,并检测血糖、血肌酐、24h尿白蛋白排泄率、肾小球细胞外基质;用免疫组织化学方法检测糖尿病小鼠肾组织磷酸化p38MAPK和TGFβ的表达,用RT-PCR的方法检测肾组织p38MAPK和TGFβmRNA的表达。结果腹腔注射STZ后,模型组小鼠均出现明显的多食、多饮、多尿和体质量下降等糖尿病症状,血糖明显升高,血肌酐水平明显增高,24h尿白蛋白排泄率明显增加,肾小球细胞外基质明显增宽。正常。肾组织有基础的磷酸化p38MAPK和p38MAPKmRNA表达,糖尿病形成后4周,磷酸化p38MAPK和p38MAPKmRNA在肾组织中的表达明显增高,并持续增加到8周,第12周至16周磷酸化p38MAPK和p38MAPKmRNA的表达有所减少。正常肾组织有基础的TGFβ1蛋白和mRNA表达。糖尿病形成后4周,TGFβ1蛋白和mRNA在。肾组织中的表达均明显增高,并持续增加到12周,第16周肾组织TGFβ1的表达有所减少。肾组织磷酸化p38MAPK和TGFβ1的表达趋势一致,并呈明显正相关（r=0．64,P〈0．01）,且与肾小球细胞外基质的积聚密切相关。结论p38MAPK的表达和活化可能通过介导TGFβ1的表达参与了小鼠糖尿病肾病模型肾纤维化的发生。     

槐果碱对SNI致神经病理性疼痛小鼠脊髓组织TLR4/p38 MAPK的影响

目的观察槐果碱(sohpocarpine,SC)对坐骨神经分支保留性损伤(spared nerve injury,SNI)致小鼠神经病理性疼痛的缓解作用,并探讨其部分作用机制。方法将60只♂ICR小鼠随机分为6组,分别为:假手术组(control)、神经病理性疼痛模型组(model)、普瑞巴林阳性对照组(SNI+普瑞巴林10 mg·kg~(-1))、槐果碱高、中、低剂量组(SNI+sophocarpine 40、20、10 mg·kg~(-1))。采用SNI法建立小鼠神经病理性疼痛动物模型,于术前1 d、术后d 7(给药前d 1)及给药后1、3、5、7 d测定小鼠机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)、热刺激缩足反应潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)及冷缩足反射次数(cold withdrawal times,CWT);采用RT-PCR和Western blot法检测槐果碱对SNI损伤小鼠脊髓组织TLR4、p38 MAPK、IL~(-1)β、TNF-αm RNA及蛋白表达的影响。结果与假手术组比较,SNI致神经病理性疼痛模型组小鼠术后PWMT明显降低、PWTL明显缩短、CWT明显增多;小鼠脊髓组织p38 MAPK、TLR4、TNF-α、IL~(-1)βm RNA和蛋白表达水平明显上调。与模型组小鼠比较,SNI+槐果碱40 mg·kg~(-1)组小鼠给药后PWMT明显升高、PWTL延长、CWT减少;小鼠脊髓组织p38MAPK、TLR4、TNF-α、IL~(-1)βm RNA和蛋白表达水平明显下调。结论槐果碱对SNI致神经病理性疼痛有较好的缓解作用,其机制可能与其下调TLR4、p38 MAPK、IL~(-1)β及TNF-α表达水平有关。     

CTGF siRNA质粒对UUO小鼠肾脏间质纤维化的影响

目的利用单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化模型,采用尾静脉注射的方法整体转染CTGF-siRNA质粒抑制肾脏结缔组织生长因子(CTGF)的表达,观察敲低CTGF表达对肾脏间质纤维化的影响。方法制备UUO模型及活体CTGF基因转染;应用免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;Western blot检测CTGF及α-SMA蛋白的表达;半定量RT-PCR检测α-SMA mRNA的表达。结果转染CTGF-siRNA质粒的UUO小鼠CTGF及α-SMA的基因表达明显下降(P<0.05)。结论经小鼠尾静脉注射CTGF siRNA质粒能显著抑制小鼠肾CTGF和α-SMA基因表达并能有效抑制小鼠肾脏间质纤维化,提示CTGF siRNA有潜力成为防治肾脏间质纤维化的一种新策略。     

川贝母对哮喘模型小鼠气道炎症及ERK/MAPK信号通路的影响

目的:考察川贝母对哮喘模型小鼠气道炎症及细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,探讨其治疗哮喘的可能机制。方法:以卵蛋白致敏小鼠建立哮喘模型。将造模成功的40只小鼠随机分为模型组(灌胃0.5%羧甲基纤维素)、阳性对照组(腹腔注射0.5 mg/kg地塞米松)和川贝母低、高剂量组(灌胃9.0、18.0 mg/kg),每组10只;另选10只正常小鼠作为正常组(灌胃0.5%羧甲基纤维素)。每天给药1次,连续28 d。给药结束后,对小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中总细胞和分类细胞(中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和嗜酸性粒细胞)进行计数;光镜下观察小鼠支气管平滑肌病理组织形态,并进行炎症评分;酶联免疫吸附法测定肺组织中ERK、磷酸化ERK(p-ERK),p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)活性;Western blot法测定肺组织中ERK、p-ERK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法测定肺组织中ERK、p38 MAPK m RNA表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠BALF中总细胞计数、分类细胞计数、炎症评分和肺组织中p-ERK、p-p38 MAPK活性均显著升高(P<0.01),肺组织中p-ERK、p-p38 MAPK蛋白表达以及ERK、p38 MAPK m RNA表达均显著增强(P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论:川贝母可改善哮喘模型小鼠气道炎症,其机制可能与抑制ERK/MAPK信号通路的激活有关。     

落新妇苷对心脏移植排斥反应中活化T细胞p38丝裂原激活蛋白激酶信号传导通路的影响

目的：用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型，探讨落新妇苷对心脏移植排斥反应中活化T细胞p3S丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）信号传导通路的影响。方法：分离BALB／C小鼠心肌细胞（2×10^5个·mL^-1）和C57BL／6小鼠的睥细胞（1×10“个·mL^-1），前者做刺激细胞，后者做反应细胞，进行混合细胞培养，建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分3组：对照组，心肌细胞与脾细胞混合培养；落新妇苷组，在对照组基础上加入落新妇苷（15mg·L^-1）；落新妇苷加p38MAPK抑制剂组，在对照组基础上加入落新妇苷（15mg·L^-1）和p38MAPK抑制剂SB203580（5μmol·L^-1）。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。RT-PCR和Western blot法检测T细胞p38MAPK表达情况。结果：落新妇苷组T细胞凋亡指数和p38MAPK表达均明显高于对照组（P＜0．01）。落新妇苷加p38MAPK抑制剂组T细胞凋亡指数和p38MAPK表达均明显低于落新妇苷组（P＜0．01），而与对照组相比差异无显著性（P＞0．05）。结论：落新妇苷诱导心脏移植排斥反应中活化T细胞凋亡与其激活p38MAPK信号传导通路有关。     

冬虫夏草通过调控MAPK通路减轻CCl4诱导的大鼠肝脏炎症和纤维化

摘要：目的:探究中药冬虫夏草改善肝脏纤维化的调控机制。方法:基于转录组二代高通量测序（RNA-seq）的数据结果分析肝纤维化大鼠与正常大鼠的差异表达基因并找出差异基因的富集通路。大鼠随机分为对照组、模型组（四氯化碳诱导肝纤维化模型）、冬虫夏草(1 500 mg·kg-1·d-1)组。经过6周的灌胃治疗,取大鼠的眼眶血用于肝功能测定,提取肝脏中RNA用于分子生物研究。结果:转录组数据结果分析肝纤维化大鼠差异基因富集于丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路。与对照组相比,模型组ALT、AST含量和MAPK、生长因子β1（TGF-β1）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、人I型胶原（COL-I）、白细胞介素6（IL-6）mRNA表达明显升高（P<0.05）,白蛋白（Alb）含量明显降低（P<0.05）;与模型组相比,冬虫夏草组ALT、AST含量和MAPK、TGF-β、α-SMA、COL-I、IL-6 mRNA表达明显降低（P<0.05）,Alb含量明显升高（P<0.05）。结论:冬虫夏草通过调控TGF-β/MAPK通路减轻四氯化碳诱导的大鼠肝脏炎症和纤维化。