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1.
目的探讨红芪多糖(HPS)介导信号转导子与转录激活子3(STAT3)通路抑制卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸的作用。方法取40只Balb/c小鼠通过皮下注射卵巢癌SKOV3细胞建立卵巢癌小鼠模型,将建模成功的小鼠随机分为模型组、米非司酮(MIF)组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组。HPS组灌胃给予HPS(200 mg·kg^(-1)·d^(-1)),MIF组灌胃给予MIF(40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),HPS^(+)MIF联合组灌胃给予HPS(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))和MIF(40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),模型组灌胃给予等量无菌生理盐水,连续干预14 d。观察记录各组小鼠瘤体积、瘤质量并计算抑瘤率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠外周血白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;流式细胞术检测各组小鼠肿瘤组织中CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)叉头框蛋白P3(^(+)Foxp3^(+))调节性T细胞(Treg)水平;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、程序性死亡配体-1(PD-L1)、程序性死亡受体1(PD-1)信使核糖核糖酸(mRNA)表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1蛋白表达。结果与模型组比,MIF组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组小鼠瘤体积和瘤质量、外周血IL-2、IL-10、TGF-β1水平以及肿瘤组织CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞水平降低,肿瘤组织中CD4^(+)细胞水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与MIF组和HPS组比,HPS^(+)MIF联合组小鼠瘤体积和瘤质量、外周血IL-2、IL-10、TGF-β1水平以及肿瘤组织CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞水平降低,肿瘤组织中CD4^(+)细胞水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比,MIF组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与MIF组和HPS组比,HPS^(+)MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HPS对卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸有一定抑制作用,推测可能是通过介导STAT3信号通路抑制STAT3、PD-L1、PD-1的表达实现上述作用的。 相似文献
2.
目的:制备Skint6基因突变小鼠模型,探究Skint6基因突变对小鼠脾脏各淋巴细胞亚群的影响。方法:利用CRISPR/Cas9技术定点突变小鼠Skint6基因,高分辨率熔解曲线(HRM)和DNA测序鉴定Skint6基因突变小鼠(B6-Skint6^(M));取6月龄B6-WT小鼠和B6-Skint6^(M)小鼠,qRT-PCR检测小鼠皮肤Skint6基因mRNA水平,考马斯亮蓝G-250法测定小鼠尿蛋白水平;计算小鼠体质量、脾脏指数和总细胞数并通过流式细胞术(FACS)检测其脾脏中各淋巴细胞亚群比例并计算细胞绝对数。结果:DNA测序结果显示B6-Skint6^(M)小鼠模型制备成功;qRT-PCR结果表明Skint6基因突变不影响皮肤Skint6 mRNA表达。B6-Skint6^(M)小鼠尿蛋白含量明显高于B6-WT小鼠(P<0.05)。Skint6基因突变对小鼠体质量、脾脏指数无显著影响(P>0.05)。FACS结果表明,与B6-WT组小鼠相比,B6-Skint6^(M)小鼠脾脏细胞数及淋巴细胞数明显增多(P<0.01);CD3^(+)T细胞比例及细胞绝对数明显上升(P<0.01,P<0.05),CD19^(+)B细胞比例下降(P<0.05);CD3^(+)T淋巴细胞亚群中CD8^(+)T细胞比例降低(P<0.01),双阴性T细胞(DNeg)比例及细胞绝对数明显上升(P<0.01,P<0.05);CD4^(+)CD69^(+)活化T细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.05,P<0.01),CD4^(+)CD44^(hi)T细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.01);Treg比例及细胞绝对数明显下降(P<0.001);Tfh细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.05);Breg比例及细胞绝对数上升(P<0.05);CD3^(+)T淋巴细胞亚群中非典型CD3^(+)B220^(+)T细胞比例及其细胞绝对数增高(P<0.001)。结论:Skint6基因突变不影响皮肤中Skint6 mRNA表达,但可影响小鼠脾脏淋巴细胞亚群比例、细胞绝对数和活化状态,从而引起小鼠免疫功能紊乱。 相似文献
3.
目的:探索STING激动剂联合PD-1抗体是否可以有效激活体内的T细胞,发挥抑制肺癌进展的作用。方法:通过CFSE检测T细胞的体外增殖情况;通过ELISA法检测T细胞的细胞因子分泌能力;利用小鼠皮下移植瘤模型验证STING激动剂联合PD-1抗体对肿瘤细胞的体内抑制作用;利用免疫荧光实验检测CD3+T细胞的肿瘤浸润情况;通过流式细胞术检测肿瘤浸润T细胞IFN-γ分泌情况;利用免疫组化法检测肿瘤组织中PD-1的表达水平。结果:STING激动剂可以在体外显著增强T细胞的增殖能力(P<0.0001)以及分泌IL-2(P<0.01)和IFN-γ(P<0.01)的能力;STING激动剂联合PD-1抗体显著抑制路易斯肺癌细胞LLC在小鼠体内的生长(P<0.0001);STING激动剂联合PD-1抗体可以显著增强肿瘤组织中CD3+T细胞的浸润情况(P<0.0001),增加肿瘤组织中IFN-γ阳性的T细胞比例(P<0.0001),同时还可以显著降低肿瘤组织中PD-1的表达水平(P<0.0001)。结论:STING激动剂联合PD-1抗体可以有效激活体内T细胞的抗肿瘤免疫应答,抑制肺癌荷瘤小鼠模型的肿瘤进展,该研究对在肺癌的临床治疗中实践这一联合疗法具有重要意义。 相似文献
4.
目的:探讨程序性死亡受体-1配体(PD-L1)阻断对脓毒症小鼠T淋巴细胞凋亡及单核细胞功能的影响。方法:30只8~10周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠随机分为3组:sham组、模型组、PD-L1拮抗组,每组10只,模型组、PD-L1拮抗组小鼠采用盲肠结扎穿孔手术(CLP)构建脓毒症小鼠模型,sham组小鼠暴露盲肠后即进行伤口缝合,不结扎。PD-L1拮抗组小鼠术后腹腔注射抗PD-L1抗体(50μg/只),每6 h注射1次,连续4次,sham组和模型组小鼠腹腔注射等剂量生理盐水。流式标记法检测各组小鼠CD3+T细胞表面PD-1和单核细胞CD11b+表面PD-L1表达,HE染色观察组织病理学改变,电镜下观察脾脏和胸腺超微病理结构改变,TUNEL染色检测脾脏和胸腺组织细胞凋亡、流式细胞术检测胸腺组织T淋巴细胞凋亡,ELISA检测Caspase-3和TNF-α、IL-6及IL-10表达。结果:与sham组相比,模型组小鼠CD3^(+)、CD11b^(+)表面PD-1和PD-L1表达、脾脏和胸腺组织细胞凋亡率、T淋巴细胞凋亡率、Caspase-3、TNF-α、IL-6、IL-10蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,PD-L1拮抗组小鼠CD3^(+)、CD11b^(+)表面PD-1和PD-L1表达、脾脏和胸腺组织细胞凋亡率、T淋巴细胞凋亡率、Caspase-3、TNF-α、IL-6蛋白表达明显降低,IL-10表达明显升高(P<0.05)。结论:PD-L1阻断可有效降低脓毒症小鼠T细胞凋亡率,改善其单核细胞功能。 相似文献
5.
侯晓睿黄钊霞易夏玉朱平刘北一 《中国免疫学杂志》2023,(9):1803-1808
目的:初步探讨NKT细胞在耐甲氧西林金葡菌(MRSA)感染性肺炎模型中的作用。方法:MRSA经鼻黏膜感染C57BL/6野生型(WT)小鼠和CD1d^(-/-)小鼠。观察小鼠生存率,检测肺组织中细菌载量,ELISA检测肺组织中细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-17、IL-6含量,流式细胞术检测肺组织中CD3^(+)CD8^(+)T细胞、NK细胞和NKT细胞百分比。结果:MRSA致死剂量感染5 d,WT小鼠生存率显著低于CD1d^(-/-)小鼠(46.2%vs 90.0%,P<0.05)。感染12~48 h,WT小鼠肺组织中细菌载量显著高于CD1d^(-/-)小鼠(P<0.01);WT小鼠肺组织中TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-17含量较CD1d^(-/-)小鼠明显增高(P<0.01)。MRSA感染24 h,WT小鼠肺组织中NKT细胞、NK细胞百分比显著高于CD1d^(-/-)小鼠(P<0.01),而CD3^(+)CD8^(+)T细胞百分比低于CD1d^(-/-)小鼠(P<0.01)。结论:在MRSA肺炎中,NKT细胞被激活,从而加重肺部炎症反应,降低生存率,减缓细菌清除。 相似文献
6.
吴倩黄珂彭诗亚熊莉杨文翠王儒鹏 《免疫学杂志》2022,(5):369-377
目的探讨分泌型糖蛋白Slit2在卵清蛋白(OVA)、金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)致敏小鼠特应性皮炎模型(AD模型+sponge模型)的皮肤炎性浸润、血管新生中的作用。方法1 g/L卵清蛋白(OVA)3周期贴片法重复刺激Balb/c小鼠背部皮肤构建小鼠AD模型,期间分别用0.5/5μg SEB处理该模型小鼠,35 d后评估皮炎程度,ELISA检测IgE水平。评估模型情况后,选皮炎程度最重的OVA+5μg SEB组给予重组Slit2蛋白处理。HE染色计数各组真皮细胞内炎症细胞数、表皮厚度,Western blot检测各组Slit2蛋白表达量,ELISA检测各组皮肤IL-13、INF-γ表达量;构建小鼠Sponge海绵模型观察各组血管新生情况,免疫组化检测各组海绵内Slit2^(+)细胞数,以及CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞的浸润情况。结果小鼠AD模型中OVA+5μg SEB组皮炎程度最重,炎性细胞浸润最多,表皮炎性增生最厚,IgE、IL-13、IFN-γ水平明显升高,Slit2蛋白表达量最高;给予重组Slit2蛋白处理后皮炎程度、炎细胞浸润、表皮厚度均减少,IL-13、IFN-γ水平降低,但IgE水平无统计学差异。小鼠Sponge模型中,OVA+5μg SEB组血管新生、Slit2^(+)细胞数最多,CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞浸润最多;给予Slit2蛋白处理后血管新生、Slit2^(+)细胞数明显减少,CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞浸润减少。结论在AD病程中,Slit2蛋白有一定的抗炎作用,可减少淋巴细胞浸润,且Slit2同时具有抗血管生成和促血管生成的作用。 相似文献
7.
目的研究羧胺三唑(CAI)对CD8+T细胞的作用,并探索其增强活化的T细胞杀伤作用的关键机制。方法用免疫磁珠分选出小鼠CD8+T细胞,分为对照组、CAI组、ZK756326(Ca2+激活剂)组以及CAI+ZK756326组。流式细胞计量术检测细胞内游离钙离子水平;酶联免疫吸附法检测细胞内钙调磷酸酶(CaN)的表达;免疫荧光染色检测细胞活化T细胞核因子2(NFAT2)核转运;染色质免疫共沉淀-qPCR检测细胞中NFAT2调控程序性死亡受体1(PD-1)表达。分离小鼠脾脏细胞毒性T淋巴细胞(CTLs),流式细胞计量术检测其中CD8+T细胞PD-1的表达。结果CAI组显著降低CD8+T细胞内Ca2+浓度(P<0.001),CAI+ZK756326组胞内Ca2+浓度有所升高(P<0.01);CAI显著降低CD8+T细胞中钙调磷酸酶的含量(P<0.001);CAI可显著抑制NFAT2核转运(P<0.001),并使NFAT2依赖的PD-1转录进程显著降低(P<0.001);CAI使小鼠脾脏CTLs细胞中PD-1+CD8+T细胞比例显著减少(P<0.001)。结论CAI通过抑制CD8+T细胞内钙离子水平以及钙调磷酸酶的表达抑制NFAT2核转运,从而降低CD8+T细胞PD-1的表达,进一步产生免疫治疗干预作用。 相似文献
8.
目的:探究分泌IL-7的溶瘤疱疹病毒(HSV)是否可以通过激活CD8+T细胞抑制肝癌生长。方法:Western blot检测IL-7表达情况;结晶紫染色法检测溶瘤病毒HSV以及HSV-IL-7对肿瘤细胞的体外裂解情况;皮下移植瘤模型检测HSV以及HSV-IL-7对肿瘤的抑制能力;ELISA法检测血清以及肿瘤组织中IL-7、IFN-γ、TNF-α含量;免疫组化法检测肿瘤组织中CD8+T细胞的浸润情况;流式细胞术检测肿瘤浸润CD8+T细胞Granzyme B的分泌水平。结果:HSV-IL-7感染的肿瘤细胞均高表达IL-7;HSV以及HSV-IL-7在体外均可以有效裂解B16-F10、CT-26以及H22肿瘤细胞系,且具有剂量依赖性;HSV-IL-7可以显著抑制H22肝癌细胞的体内生长(P<0.01),延长荷瘤小鼠的生存期(P<0.001);HSV-IL-7可以显著提高肿瘤部位IL-7的含量(P<0.000 1),同时有效增加肿瘤浸润CD8+T细胞的数目(P<0.001);HSV-IL-7可以显著增强肿瘤浸润CD8+T细胞分泌Granzyme B的能力以及增加肿瘤组织... 相似文献
9.
目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对小鼠接触性皮炎(CHS)的抑制作用及机制。方法:0.5%2,4-二硝基氟苯(DNFB)涂抹小鼠腹部连续2 d致敏,5 d后用0.25%DNFB涂抹左耳发敏,右耳涂抹丙酮和橄榄油混合液作为对照,于致敏前2 d灌胃给予DHA处理。HE染色观察小鼠皮肤组织病理学变化,免疫组化染色观察小鼠耳部皮肤CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞浸润情况,测定脾脏指数。ELISA检测血清IL-6、IFN-γ、IL-10、TGF-β和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1变化,Western blot检测皮肤Smad2和Smad3磷酸化水平,流式细胞术检测皮肤和脾脏免疫细胞浸润情况。结果:DHA可显著改善CHS小鼠耳朵肿胀、皮肤红斑及脾脏指数(P<0.05)。组织病理学结果显示,DHA处理可明显抑制CHS小鼠皮肤增厚和炎症细胞浸润。流式细胞术结果显示,DHA处理后皮肤和脾脏中浸润的CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、树突状细胞和巨噬细胞显著减少(P<0.05)。ELISA结果显示,相对于模型组,DHA处理组血清IL-6、IFN-γ、TGF-β和MCP-1水平明显降低(P<0.05)。Western blot结果表明DHA处理显著抑制皮肤Smad2和Smad3磷酸化水平(P<0.05)。结论:DHA通过减少免疫细胞浸润和调节TGF-β/Smad信号传导抑制CHS,为治疗CHS提供了新的药物选择和实验依据。 相似文献
10.
目的:观察泛素调控蛋白A20在慢性乙肝患者外周血中的变化及其对CD14^(+)单核细胞功能的影响。方法:选取慢性乙肝患者47例和健康对照者26例,纯化外周血CD14^(+)单核细胞和CD4^(+)T细胞,流式细胞术检测CD14^(+)单核细胞中A20水平,实时定量PCR检测CD14^(+)单核细胞中A20 mRNA相对表达量。A20 siRNA或对照siRNA转染慢性乙肝患者纯化的CD14^(+)单核细胞,ELISA检测上清中炎症细胞因子水平,实时定量PCR检测FasL和TRAIL mRNA相对表达量。CD14^(+)单核细胞与HepG2.2.15细胞共培养,检测CD14^(+)单核细胞诱导靶细胞死亡的比例。CD14^(+)单核细胞与CD4^(+)T细胞共培养,流式细胞术检测CD4^(+)T细胞分泌IFN-γ和IL-17的比例。结果:慢性乙肝患者外周血CD14^(+)单核细胞中A20^(+)细胞比例高于健康对照者(P=0.0004),慢性乙肝患者外周血CD14^(+)单核细胞中A20平均荧光强度和A20 mRNA相对表达量亦高于健康对照者(P<0.001)。A20 siRNA转染慢性乙型肝炎患者纯化的CD14^(+)单核细胞后,分泌炎症细胞因子水平高于未转染细胞和对照siRNA转染细胞(P<0.05),但FasL和TRAIL mRNA未见明显变化(P>0.05)。A20 siRNA转染的CD14^(+)单核细胞诱导靶细胞死亡的比例高于未转染细胞和对照siRNA转染细胞(P<0.05),诱导CD4^(+)T细胞分泌IFN-γ和IL-17的比例亦高于未转染细胞和对照siRNA转染细胞(P<0.05)。结论:慢性乙肝患者CD14^(+)单核细胞中高表达的A20有抑制细胞毒性及CD4^(+)T细胞活化的作用,可能与导致乙型肝炎病毒感染慢性化相关。 相似文献
11.
目的:探讨TRPV1对缺血性脑卒中后抑郁样行为的作用和机制。方法:45只雄性小鼠随机分为3组:假手术组(sham),脑缺血再灌注组(I/R),脑缺血再灌注+TRPV1抑制剂Capsazepine组(I/R+CPZ)。建立小鼠大脑中动脉阻塞模型(MCAO),HE染色观察病理性损伤;免疫荧光染色观察小胶质细胞的激活;免疫印迹检测IL-1β的表达;7 d后进行强迫游泳和悬尾实验。结果:行为学检测显示与I/R组相比,TRPV1抑制剂可显著改善小鼠的抑郁样行为(P<0.001)。HE染色结果表明,I/R+CPZ组杏仁核区病理损伤明显减轻。免疫荧光染色观察结果显示,杏仁核小胶质细胞有TRPV1的表达,且I/R+CPZ组与I/R组相比,小胶质细胞的激活明显减少(P<0.001)。免疫印迹检测结果显示,给药后IL-1β的表达量明显少于IR组(P<0.05)。结论:抑制TRPV1可减轻炎症反应,改善缺血性脑卒中后小鼠的抑郁样行为。 相似文献
12.
许雅丽李笃妙吴强林俊山 《免疫学杂志》2023,(5):379-387
目的探讨周期蛋白依赖性激酶(CDK2)对小鼠神经母细胞瘤免疫微环境的影响。方法评估CDK2抑制剂PF-07104091对皮下MYCN阴性神经母细胞瘤细胞SH-EP在C57BL/6N WT小鼠体内肿瘤生长的影响。评估CDK2稳定敲低MYCN的阴性神经母细胞瘤细胞在C57BL/6N WT小鼠体内的成瘤能力。评估CDK2抑制剂或者敲低CDK2对MYCN阴性神经母细胞瘤细胞增殖水平和凋亡水平的影响。探索CDK2抑制剂或者敲低CDK2是否影响MYCN阴性神经母细胞瘤免疫微环境。结果PF-07104091显著抑制MYCN阴性神经母细胞瘤生长并增加小鼠总生存率。CDK2敲低能够显著抑制肿瘤生长并增加小鼠总生存率。CDK2抑制剂或者敲低CDK2并不影响MYCN阴性神经母细胞瘤细胞的增殖水平和凋亡水平。CDK2抑制剂或者敲低CDK2的MYCN阴性神经母细胞瘤中观察到的CD3+T细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞和DC细胞的比例显著升高。CDK2抑制剂处理或者敲低CDK2后,MYCN阴性神经母细胞瘤中IFN-γ的水平上升,并且IFN-γ通路中的关键基因IFNB1、STAT1、TLR3、DDX58、CCL17、TAP1、TX2表达上调。腹腔注射或不注射CDK2抑制剂PF-07104091并不影响IFNGR1^(-/-)小鼠的生长速度和生存率。敲低与未敲低CDK2的MYCN阴性神经母细胞瘤在IFNGR1^(-/-)小鼠身上生长肿瘤的速度相似并且生存率相似。结论CDK2通过IFN-γ通路影响肿瘤免疫微环境中CD3+T细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞和DC细胞的比例。 相似文献
13.
目的:本研究旨在探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞体外扩增的方法。方法:采用磁珠分选小鼠CD4+T细胞,αCD3单克隆抗体包被24孔板,加入αCD28单克隆抗体、雷帕霉素、rhIL-2,培养3周后,流式细胞仪测定培养细胞中CD4+CD25+T细胞的含量,实时定量PCR检测CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达;单向混合淋巴细胞反应和增殖抑制试验测定扩增的CD4+CD25+T细胞的增殖及其抑制功能;ELISA检测培养上清中IL-10和TGF-β1的含量。结果:小鼠CD4+T细胞培养3周后,CD4+CD25+T细胞达(76.05±2.73)%,高于未加雷帕霉素组(52.17±1.36)%(P<0.001),磁珠分选的CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达是未加雷帕霉素组的5倍(P<0.001),增殖能力是未加雷帕霉素组的0.29倍(P<0.001),对CD4+T细胞增殖抑制能力是未加雷帕霉素组的3.6倍(P<0.001),培养上清中IL-10和TGF-β1分别是对照组的1.8倍和1.6倍(P<0.001)。结论:小鼠CD4+T细胞在含有1μg/ml的αCD28、rhIL-2 100 U/ml和终浓度为10 nmol/L雷帕霉素的培养体系中培养3周后能有效扩增CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。 相似文献
14.
目的:基于蛋白酪氨酸激酶1/信号转导因子3(JAK1/STAT3)信号通路探讨白芍总苷对过敏性紫癜小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。方法:动物实验分为对照组、模型组、实验组、抑制剂组,模型组、实验组、抑制剂组小鼠尾静脉注射印度墨水及灌胃麦角蛋白复制过敏性紫癜模型,实验组、抑制剂组小鼠每日灌胃0.1 g/kg白芍药总苷和AG490,连续处理4周。ELISA测定各组小鼠血清IL-10及IL-17含量;流式细胞术检测各组小鼠血清Treg、Th17变化;Western blot检测各组小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达。结果:与对照组相比,模型组、实验组、抑制剂组小鼠血清Treg占CD4+T细胞比例和IL-10含量明显下降,Th17占CD4+T细胞比例、IL-17含量以及小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达明显升高(均P<0.05);与模型组相比,实验组、抑制剂组小鼠血清Treg占CD4+T细胞比例和血清IL-10含量明显升高,Th17占CD4+T细胞比例、IL-17含量以及小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达明显降低(均P<0.05)。结论:白芍总苷可通过抑制JAK2/STAT3信号通路调控过敏性紫癜小鼠Treg/Th17免疫平衡。 相似文献
15.
目的:探究环状RNA(circRNA)_103809对结肠癌SW480细胞作用。方法:qRT-PCR检测结肠癌组织及细胞、正常组织及细胞中circRNA_103809表达。将SW480细胞分为对照组(Control),过表达circRNA_103809组(LV-circRNA_103809)及其阴性对照组(LV-scramble)。除对照组外,按分组分别转染LV-circRNA_103809和LV-scramble质粒。qRT-PCR检测各转染组SW480细胞中circRNA_103809、Ki67和p21表达;CCK8检测各组细胞增殖倍数;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;线粒体膜电位的变化;试剂盒检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;ELISA检测各组细胞上清液中IL-1β、IL-6和IL-4炎症因子水平,免疫荧光检测p65的核转移;Western blot检测Bax/Bcl-2,活化胱天蛋白酶(cleaved cas)-9/cas-9,cleaved cas-3/cas-3相对表达量及细胞核中p65蛋白的表达。结果:结肠癌组织及细胞中circRNA_103809表达显著下调,p21的表达显著上调(P<0.05)。与对照组相比,过表达circRNA_103809组SW480细胞中circRNA_103809的表达显著上调,Ki67的表达显著下调(P<0.05),细胞增殖倍数显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),线粒体膜电位降低,Bax/Bcl-2、cleaved cas-9/cas-9和cleaved cas-3/cas-3显著升高(P<0.05),SOD含量减少,MDA含量增加(P<0.05),促炎因子IL-1β和IL-6水平显著降低,抗炎因子IL-4水平显著升高(P<0.05),细胞核中p65蛋白表达显著下调,核定位显著减少(P<0.05)。结论:circRNA_103809在结肠癌SW480细胞中发挥抑癌作用,抑制细胞增殖,通过增强氧化应激促进细胞凋亡,抑制炎症反应阻止癌细胞发展进程。 相似文献
16.
目的探讨T辅助细胞22(Th22)在小鼠Lewis肺癌抗肿瘤免疫中的作用及其机制。方法通过皮下接种Lewis肺癌细胞悬液建立Lewis肺癌小鼠模型,IL-22中和抗体(IL-22 nAb)组小鼠在此基础上腹腔注射IL-22 nAb(50μg/kg)。14 d后处死小鼠,计算肿瘤质量和抑瘤率。流式细胞术检测小鼠Th22和调节性T细胞(Treg)的表达情况;RT-PCR法检测小鼠肿瘤组织TAP1和CTLA-4 mRNA表达;酶联免疫吸附法检测小鼠血清IL-4、IL-10、IL-22和TGF-β含量。结果与对照组比较,模型组小鼠Th22细胞数量和IL-22水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,IL-22 nAb组小鼠肺癌组织的质量和Treg细胞数量明显降低(P<0.05),肺癌组织TAP1和CTLA-4 mRNA表达显著降低(P<0.05),血清IL-4、IL-10和TGF-β表达明显降低(P<0.05)。结论IL-22通过调控Treg细胞功能,参与肺癌免疫逃逸过程。 相似文献
17.
目的:探索γδT细胞受体对心脏骤停-心肺复苏(CPCR)后脑缺血再灌注小鼠体内Treg及相关细胞因子的影响。方法:90只雄性C57BL/6小鼠随机分为CPCR组、对照组和CPCR+γδT细胞受体拮抗组(CPCR后注射γδT细胞受体拮抗剂),每组30只。收集小鼠脑组织,TUNEL检测神经元凋亡,HE染色观察神经元损伤情况,Western blot检测脑组织Foxp3蛋白表达,ELISA检测血清中MPO活性、TNF-α、IL-6和IL-1β浓度。结果:与对照组相比,CPCR组小鼠神经元凋亡显著增加(P<0.05),脑组织损伤严重,MPO活性、TNF-α、IL-6和IL-1β浓度显著上升(P<0.05),Foxp3表达显著下调。与CPCR组相比,CPCR+γδT细胞受体拮抗组大鼠神经元凋亡减少(P<0.05),脑组织损伤减轻,MPO活性、TNF-α、IL-6和IL-1β浓度明显降低(P<0.05),Foxp3表达显著上调。结论:γδT细胞受体拮抗剂可通过抑制炎症反应缓解CPCR后脑缺血再灌注损伤。 相似文献
18.
马梓航李金耀杨兴龙蒋静雯陈秋艳夏丽洁 《国际生物医学工程杂志》2023,(1):10-17
目的探讨中亚苦蒿醇提物大孔树脂30%乙醇洗脱部位(AAEM-30%)对小鼠树突状细胞(DC)和免疫功能的作用。方法中亚苦蒿醇提物经AB-8型大孔树脂分离得到AAEM-30%,对其多糖、黄酮和萜类含量进行测定。体外通过流式细胞术检测AAEM-30%对DC表面分子分化簇(CD)40、CD80和CD86的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测DC细胞因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;体内通过不同给药剂量(50、100 mg/kg)和不同给药方式(皮下注射、腹腔注射、灌胃)检测AAEM-30%对ICR小鼠免疫功能的影响。结果AAEM-30%中多糖、黄酮、萜类的质量分数分别为24.30%、22.50%、28.19%。体外能够增强小鼠DC表面分子CD40、CD86以及DC细胞因子IL-6和TNF-α的表达(均P<0.001)。与对照组比较,3种给药方式的小鼠体质量比较差异均无统计学意义(均P>0.05);50、100 mg/kg AAEM-30%腹腔注射组的胸腺指数和50 mg/kg AAEM-30%灌胃组的脾脏指数均增加(均P<0.05)。100 mg/kg AAEM-30%腹腔注射组的CD19^(+)细胞数量增加(P<0.01),50 mg/kg AAEM-30%灌胃组的CD19^(+)细胞数量增加(P<0.05)。100 mg/kg AAEM-30%灌胃组的CD11b^(+)和CD11c^(+)数量增加(P<0.05)。灌胃和腹腔注射2种给药方式均能增加CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞的数量(均P<0.05)。结论AAEM-30%能够促进小鼠DC的成熟,增强小鼠免疫功能。 相似文献
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目的:探讨游泳运动(Sw)调控沉默信息调节因子1(Sirt1)信号减轻小鼠心肌梗死(MI)后心脏病理性重塑的作用。方法:采用冠状动脉左前降支结扎制备小鼠MI模型,随机分为4组:假手术组、MI组、MI+Sw组和MI+Sw+EX527 (Sirt1抑制剂)组。游泳运动采用无负重游泳9周,检测左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax),HE和Masson染色观察心肌结构和纤维化程度,TUNEL染色检测细胞凋亡率,RT-qPCR检测炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平,Western blot检测cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax、Sirt1、Ac-NF-κB和NF-κB蛋白水平。结果:与假手术组相比,MI组±dp/dtmax显著降低(P<0.01),心肌纤维排列紊乱、断裂,纤维化程度、TUNEL阳性细胞数以及TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平均显著增加(P<0.01),同时,cleaved caspase-3、Bax和Ac-NF-κB的表达增加,Bcl-2和Sirt1表达降低(P&... 相似文献