重组人骨形成蛋白—2成熟肽在大肠杆菌中的高效表达

利用大肠杆菌系统高效表达人骨形成蛋白－２成熟肽。方法；将编码人骨形成蛋白２成熟肽的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体ｐＤＨ上，使其受控于ＰＲＰＬ启动子，构建成表达质粒ｐＤＨＢ２ｍ，以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主菌。对工程菌进行温度诱导表达，表达产物初步纯化后进行复性处理，用小鼠肌袋模型检测产物诱骨活性。     

大肠杆菌表达的重组人骨形成蛋白—3C端肽的纯化

目的：在用大肠杆菌表达人骨形成蛋白－３羧基端肽段获得成功的基础上，进一步探讨ｒｈＢＭＰ－３Ｃ的纯化方法。     

人重组骨形态发生蛋白Ⅲ在大肠杆菌中的表达及活性测定

本文报道了利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组骨形态发生蛋白Ⅲ。运用ＰＣＲ技术，从质粒ｐＳＰ６４／ｈＢＭＰ３中扩增出约０．３３ｋｂ的ｈＢＭＰ３ｃＤＮＡ片断，然后亚克隆到表达质粒ｐＭＳ３１６ｂ中，在大肠杆菌中成功地高效表达出人ＢＭＰ３融合蛋白，表达产物具有体内诱导导位体骨的趋势。     

人重组骨形态发生蛋白Ⅲ在大肠杆菌中的表达及活性测定

本文报道了利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组骨形态发生蛋白Ⅲ。运用ＰＣＲ技术，从质粒ｐＳＰ６４／ｈＢＭＰ３中扩增出约０．３３ｋｂ的ｈＢＭＰ３ｃＤＮＡ片断，然后亚克隆到表达质粒ｐＭＳ３１ｂ申，在大肠杆菌一成功地高效表达出人ＢＭＰ３融合蛋白，表达产物具有体内诱导异位化骨的趋势。     

人Era和人Era C端蛋白在大肠杆菌中的高表达

目的 在大肠杆菌中的高表达人Era和人EraC端蛋白。方法 PCR扩增人era基因（h-era)的全长cDNA和h-eraDNA的C端区域基因,h-eracDNA克隆到（His)6融合表达载体pRSET－C中,构建融合表达质粒并转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达（His)6-h-Era融合蛋白;h-eracDNA的C端区域基因克隆到非融合表达载体pDH中P1启动子下游,转化大肠杆菌ATP106,42℃热诱导表达人EraC端蛋白（h-Era-C),SDS-PAGE电泳、凝胶薄层扫描检测蛋白的表达。结果 表达的（His)6-h-Era融合蛋白产物占全工力总蛋白的80％;人EraC端蛋白占全菌总蛋白的40％。结论 人Era蛋白和EraC端蛋白在大肠杆菌中获得了高表达。     

骨形成蛋白2及骨形成蛋白4在牙胚发育中的时空表达及意义

牙齿发育初期和后期起调节作用的一些信号分子中,骨形成蛋白是与骨和牙齿形成相关的生长因子,作为形态生成信号在牙齿发育不同时期调控上皮与间充质间相互作用。牙胚发育过程中,BMP-2、BMP-4在牙胚发育各个时期的表达提示其在牙胚发育中的作用。研究表明,BMP-2、BMP-4作为上皮-间充质相互作用的继发调节信号参与牙齿发育,BMP-2参与调控牙乳头细胞分化形成成牙本质细胞;BMP-4与多种细胞因子相互作用参与调控牙型的形成。     

人骨形成蛋白2，3成熟肽削短／突变体的表达及其诱骨活性

0　引言　骨形成蛋白 [1 ] (bone morphogenetic proteins,BMPs)是属于 TGF-β超家族的成员 ,目前已有 18个 h BMP基因被克隆 .除 BMP- 1外 ,其他 BMPs在胚胎时期骨组织分化发育、成年骨损伤修复、胚胎发育期中胚层的诱导和分化以及神经系统的发育和修复等方面都起着重要作用 [2 - 4 ] ,因而BMPs有十分乐观的临床应用前景 .利用 E.coli表达的不同的长于成熟肽的羧端肽经复性后均具有不同程度诱骨活性 [5 ,6 ] ,但对短于成熟肽的肽段及其氨基酸组成与其生物学活性的关系 ,尚未见报道 .在上述工作的基础上 ,本研究在大肠杆菌中表达削…     

重组人骨形成蛋白2基因在大肠杆菌中的克隆

目的：在大肠杆菌中克隆人骨形成蛋白2基因,方法：由人成骨细胞中提取细胞总RNA,利用逆转录PCR方法扩增获得人骨形成蛋白2基因cDNA;将获得基因片段重组到pCI质粒中,转化到大肠杆菌Top10后挑选克隆,利用限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定重组质粒。结果：质粒DNA酶切分析及核酸序列分析证实,获得的基因片段为人BMP2全编码序列,结论：克隆获得人骨形成蛋白2基因,为表达骨形成蛋白2奠定了基础。     

人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的克隆、测序及表达

目的：扩增、克隆人骨形成蛋白－３（ｈＢＭＰ－３）成熟肽ｃＤＮＡ基因，利用大肠杆菌表达ｈＢＭＰ－３成熟肽．方法：ＰＣＲ方法扩增ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，双脱氧终止法测序正确后，克隆入大肠杆菌表达载体ｐＤＨ，受控于ＰＲＰＬ启动子，重组质粒ｐＤＨＢ－３ｍ以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主菌在４２℃进行温度诱导．结果：扩增出ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，序列测定完全正确；含重组质粒ｐＤＨ－Ｂ３ｍ的工程菌诱导后在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新生蛋白带，分子质量为１４．５ｋｕ，与预期ｈＢＭＰ－３成熟肽分子量大小一致，约占菌体总蛋白的２８％．结论：成功扩增、克隆ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，并可在大肠杆菌中得到高效表达     

重组人骨形成蛋白2在皮肤成纤维细胞中的表达

目的 构建人骨形成蛋白2(BMP2)的真核表达载体以探讨成纤维细胞表达BMP2的情况。方法 构建携带人BMP2基因的真核表达载体pRK5-hBMP2，并将其转染CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞后，采用RT-PCR方法检测人BMP2在mRNA水平上的表达。结果 RT-PCR显示转染后的CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞可以有效地转录BMP2 mRNA。结论 含有人BMP2 cDNA的重组质粒pRK5-hBMP2转染正常人皮肤成纤维细胞后可以有效地表达BMP2。     

人IL—2cDNA的亚克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

目的构建重组人IL－2表达质粒并观察其在大肠杆菌中的表达效率。方法应用重组DNA技术，将人IL一2cDNA亚克隆于pKK223－3表达载体，构建成pKK223－3－IL－2重组表达质粒，转化JM105受体菌后得到工程菌，命名为JM105／PKK223－3－IL－2。结果凝胶电泳和核酸杂交证实，人IL一2cDNA已成功地插入到pKK223－3质位的EcoRI－HindIII位点。在异丙基硫代-β-D-半乳糖昔（IPTG）诱导下，工程菌中重组人IL－2表达效率为26％；诱导8h，IL－2的产量达峰值；用含TritonX100的缓冲液反复洗涤，获得纯度很高的包含体。结论人IL-2cDNA在tac启动子控制不能在大肠杆菌中高效地表达人IL-2。     

人白细胞介素2基因在大肠杆菌中表达水平的提高及产物初步纯化

利用双Tac启动子和改造后的人白细胞介素2（IL－2）cDNA，提高了IL－2在大肠杆菌（E．Coli）中的表达水平，并经包涵体制备、分子重新折叠及分子筛层析等技术，对表达的IL－2进行了提取、活性恢复与纯化，纯度可达95％。本工作为用基因工程方法生产人IL－2积累了经验。     

人解痉多肽原核表达载体的构建及诱导表达

目的:构建人解痉多肽(hSP)原核表达载体,表达重组hSP,为功能研究奠定基础。方法:通过RT-PCR获得hSPcDNA片段,将目的基因插入原核表达载体pET32a,得到重组载体pET32a-hSP。IPTG诱导表达后行SDS-PAGE分析及WesternBlot检测。结果:经测序及PCR证实,hSPcDNA准确插入原核表达载体pET32a中,诱导表达后SDS-PAGE分析证明hSP的分子量约为32kD,Western-blot分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性。结论:上述结果表明成功构建出原核表达载体pET32a-hSP,获得重组hSP,并为深入研究hSP奠定了基础。     

Expression of the human era cDNA in E.coli

Objective: To amplify human era (Hera) gene, then express it in E.coli. Methods: Human era gene, after amplified by PCR and identified by sequencing, was inserted into the expression vector pGEX-4T3 in which exogenous gene was controlled by Ptac promoter. The recombinant plasmid pGEX-Hera was transformed into DH5 ( and induced with IPTG chemically. Results: The human era gene was amplified and the sequence was correct. When the bacteria with pGEX-Hera was induced, an anticipated 65 000 protein band appeared on SDS-PAGE gel and amounted to 23% of total bacterial protein. Conclusion: The human era gene has been successfully amplified and efficiently expressed in E.coli.     

胃癌相关基因GCRG213的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的：利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因GCRG213。方法：采用PCR技术从pGEM-T质粒上扩增出含完整ORF的GCRG213 cDNA序列，将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体pET102／D-TOPO中，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达重组融合蛋白，SDS-PAGE分析表达产物。结果：高效表达出相对分子量约29.4ku的重组融合蛋白。薄层凝胶扫描显示，其表达量占菌体总蛋白质的28.7％。结论：在大肠杆菌中成功表达了Thioredoxin-GCRG213融合蛋白，为后续功能研究、蛋白制备及其抗体研制奠定了基础。     

膜联蛋白A5 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的:克隆人膜联蛋白A5 cDNA并在大肠杆菌系统内作表达.方法:利用RT-PCR技术从人胎盘组织的总RNA扩增膜联蛋白A5的cDNA序列,将该基因插入GST融合表达载体pGEX-5T,在tac 启动子控制下,IPTG诱导表达GST融合蛋白.以亲合层析法纯化表达的融合蛋白,用KPTT法验证抗凝血活性.结果:凝胶电泳显示PCR扩增产物的长度为978 bp,重组质粒测序结果表明,插入片段与人膜联蛋白A5的序列完全一致.在IPTG诱导下,K802重组菌高效表达出相对分子质量为58 000的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的26%.纯化蛋白具有很强的抗凝血活性.结论:成功克隆人膜联蛋白A5基因并在大肠杆菌中高效表达.     

Expression of mature peptide of human bone morphogenetic protein-2 in Escherichia coli

bonemorphogenetlcprotein-:antI--/eisiveroleduringboneregenerationandrepairaswellasduringvariousstagesofelnbryonaldevelopment['].ThelengthofthecompletecDNAofhumanhonemorphogeneticprotein-2(hBMP-2)is1587hp,whose1188hpopenreadingframeencodesa396aminoacidsproteinwhichconsistsofasignalpeptide,apro--Peptideanda114ahanoacidmaturePeptide.FunctionalhBMP-2waseverexpressedinCOS,CHOandinsectcells,hutnotinE.colt:'.liuXinping['.",InZifan[5',ZhaoMing='jandlinbangetal-':haveexpressedvariedC-tenonalP…