愈疡灵软膏对糖尿病溃疡大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察愈疡灵软膏对糖尿病溃疡大鼠创面愈合的影响及其可能作用机制。方法 60只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、凡士林组、愈疡灵组,每组15只。除对照组外其余各组采用高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素液腹腔注射法制备糖尿病大鼠模型,后各组大鼠均制作溃疡模型。于溃疡造模后第2天愈疡灵组大鼠创面以愈疡灵软膏涂敷其上,约厚2 mm,外用无菌纱布包扎固定;凡士林组采用凡士林油纱外敷;对照组及模型组采用生理盐水纱布外敷,各组每日换药1次。观察给药第3、7、14天各组大鼠创面愈合情况,并采用HE染色法检测创面组织形态结构的变化,检测溃疡组织中Wnt信号通路相关的β-连环素(β-catenin)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、R-脊椎蛋白3(Rspo-3)蛋白及mRNA的变化。结果与对照组比较,模型组、凡士林组、愈疡灵组大鼠在第3、7、14天创面愈合率,创面组织中β-catenin、Rspo-3蛋白及mRNA表达均降低,GSK-3β蛋白及mRNA表达均升高(P0.05)。与模型组、凡士林组比较,愈疡灵组大鼠的创面愈合率、创面组织病理学变化、创面组织中β-catenin、GSK-3β、Rspo-3蛋白及mRNA的表达水平均得到不同程度改善,尤其以第14天最为明显(P0.05)。结论愈疡灵软膏可促进糖尿病溃疡大鼠创面的愈合,其机制可能通过对Wnt/β-catenin信号通路进行调节。     

壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法取新生SD大鼠颅骨进行成骨细胞原代培养,传代后随机分为4组:假手术组、模型组、对照组、中药组。培养3代后进行鉴定,加入相应含药血清干预48 h。测定各组成骨细胞Wnt3a、β-catenin、LRP5、GSK3βmRNA及蛋白的表达情况。结果与假手术组比较,模型组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA降低(P0.05),GSK3β蛋白及mRNA升高(P0.05)。与模型组比较,对照组和中药组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3β蛋白表达降低(P0.05),中药组GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。与对照组比较,中药组β-catenin蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。结论壮骨止痛方可通过上调Wnt3a、β-catenin、LRP5蛋白的表达,下调GSK3β的表达调控Wnt/β-catenin信号通路。     

毛冬青甲素促进骨髓间充质干细胞迁移的实验研究

目的观察毛冬青甲素（ilexonin A, IA）干预大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）后基质细胞衍生因子（SDF-1）特异性受体CXCR4和Wnt通路中β-连环蛋白（β-catenin）、糖原合成激酶（GSK-3β）的表达情况,探讨IA预处理促进BMSCs体外迁移的分子机制。方法采用全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠并行BMSCs鉴定。将BMSCs分为对照组、Wnt3a组、IA组、IA + Wnt3a组、IA + Dkk1组、Dkk1组。以Wnt 信号通路的激动剂Wnt3a、抑制剂Dkk1干预,Western blot法观察β-catenin、GSK-3β与CXCR4的表达关系。结果与对照组比较,Wnt3a组、IA组CXCR4、β-catenin蛋白表达显著增强、GSK-3β蛋白表达显著减弱;（P<0.05）,Dkk1组CXCR4、β-catenin蛋白表达显著减弱（P<0.05）;与Wnt3a组、IA组分别比较,IA+Wnt3a组CXCR4蛋白显著增强,GSK-3β蛋白表达显著减弱（P<0.05）;与Dkk1组比较,IA+Dkk1组CXCR4、β-catenin蛋白表达显著增强,GSK-3β蛋白表达显著减弱（P<0.05）;与IA组比较,IA+Dkk1组β-catenin的表达显著减弱,GSK-3β蛋白表达显著增强（P<0.05）。结论IA上调CXCR4 的表达,可能与 BMSCs 的Wnt/β-catenin信号通路激活有关,发挥其促迁移的作用。     

买朱尼对骨性关节炎大鼠关节软骨中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用研究

目的观察维药买朱尼对骨性关节炎模型大鼠关节软骨中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用,探讨买朱尼对软骨细胞的保护作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和买朱尼组,每组10只。模型组和买朱尼组采用改良Hulth造模法建立膝骨关节炎模型,建模第2周开始买朱尼组灌胃买朱尼10.31 mg/(kg·d),模型组和假手术组灌胃等量生理盐水,均连续4周。末次灌胃后24 h取3组大鼠膝关节软骨标本进行大体评分和组织学评分,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测Wnt/β-catenin通路中β-catenin、GSK-3β和Wnt-3a的表达水平。结果模型组大鼠膝关节软骨标本大体评分、软骨组织学Mankin评分及软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、Wnt-3a蛋白及mRNA表达水平均明显高于假手术组(P均0.05),而买朱尼组均明显低于模型组(P均0.05)。结论维药买朱尼可以减轻大鼠膝关节软骨退变的程度,其可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路来发挥保护关节软骨细胞的作用。     

补肾益脑灸法通过Wnt信号通路影响围绝经期抑郁症大鼠海马神经发生

目的:基于Wnt信号通路观察补肾益脑灸法对围绝经期抑郁症大鼠海马神经干细胞分化标记物表达的影响并探讨其治疗机制。方法:60只大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、假手术组、西药组和艾灸组5组,采用去势和慢性不可预见刺激结合制备围绝经期抑郁症大鼠模型。连续治疗28 d,观察大鼠一般情况变化、动情周期、体质量及糖水消耗实验结果,运用ELISA法检测海马组织中的GFAP、Tuj-1、GSK-3β、β-catenin,RT-PCR法检测海马组织中的GSK-3βmRNA、β-catenin mRNA表达。结果:造模后其他组较空白组表现出抑郁行为,而治疗后抑郁行为好转,西药组、艾灸组及假手术组较模型组海马组织中GFAP、GSK-3β及GSK-3βmRNA的表达量增加,Tuj-1、β-catenin及β-catenin mRNA表达量有所减少。结论:补肾益脑灸法可以通过调节海马Wnt通路GSK-3β、β-catenin的表达调控海马神经干细胞的定向分化,对围绝经期抑郁症起到治疗作用。     

黄芪提取液对糖尿病溃疡大鼠Wnt/β-Catenin信号通路调控表皮干细胞增殖分化的影响＊

目的 观察黄芪提取液对糖尿病溃疡的治疗效果，探讨其促进糖尿病溃疡创面愈合的作用机制。方法 雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、黄芪提取液低、中、高剂量组（1.35、2.7、5.4 g·kg^-1），采用大剂量链脲佐菌素腹腔注射和外科方法制备糖尿病溃疡模型。于溃疡造模后第2天各组分别经口灌胃给药及常规换药，观察给药第3天、7天、14天、21天各组大鼠创面愈合情况；分别于给药后第7、14、21天，应用Real Time-PCR检测大鼠创面组织Wnt1、Wnt3a、β-Catenin、GSK-3β mRNA的表达，采用Western Blot检测β-Catenin、GSK-3β、C-myc、CyclinD1及β-Catenin核内表达水平，以免疫组化法观察创面组织β1整合素、K19、PCNA的表达情况。结果 与对照组比较，模型组、各用药组创面造模后第3天、7天、14天创面愈合率均明显降低（P<0.01），模型组、低剂量组创面愈合时间明显延长（P<0.01）；与模型组比较，高剂量组给药后第14、21天创面愈合率显著提高（P<0.01），创面愈合时间缩短（P<0.05）；与模型组比较，高剂量组给药后第7天、14天、21天创面组织Wnt1、Wnt3a、β-catenin mRNA表达加强（P<0.05），β-Catenin、C-myc及CyclinD1蛋白表达增加（P<0.05），GSK3β mRNA及蛋白表达均降低（P<0.05），β1整合素、K19、PCNA的表达增加（P<0.05）。结论 黄芪提取液能促进糖尿病溃疡愈合，其机制可能与通过对Wnt/β-catenin信号通路的调节，促进表皮干细胞的增殖分化，加快创面上皮化的进程有关。     

明胶/白芨胶-三七多孔材料对糖尿病溃疡大鼠创面修复及β-catenin、GSK-3β、RSPO-3表达的影响

目的研究自制明胶/白芨胶-三七多孔材料对糖尿病溃疡大鼠模型创面愈合的影响,探讨其促进慢性溃疡愈合的机制。方法将60只高糖高脂喂养4周后SPF级SD雄性大鼠随机分为明胶/白芨胶-三七组、明胶/白芨胶组、凡士林组和空白组,每组15只。各组大鼠均采用磁石在背部脊柱两侧制作直径为2 cm大小的全层皮肤缺损模型,分别用明胶/白芨胶-三七多孔材料、明胶/白芨胶多孔材料、凡士林敷纱和无菌纱布覆盖创面,无菌敷料和绷带固定,每天换药1次,单笼饲养防止互舔。分别于致伤后第3天和第7天取材(每组每次各5只),光学显微镜下观察大鼠背部组织细胞生长分化和创面组织中毛细血管生长情况,并用Western blot法检测各组创面组织中β-连环素(β-catenin)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、R-脊椎蛋白3(RSPO-3)表达情况。结果造模第3天,4组创面均可见增生的毛细血管,其中明胶/白芨胶-三七组最多,明胶/白芨胶组次之;造模第7天,明胶/白芨胶-三七组、明胶/白芨胶组皮肤结构基本恢复正常,凡士林组和空白组皮肤结构与正常皮肤结构差异大,新生的毛细血管亦较少。造模第3天、第7天,明胶/白芨胶-三七组β-catenin、RSPO-3蛋白表达水平均明显高于其他组(P均0.05),GSK-3β蛋白表达水平均明显低于其他组(P均0.05)。结论明胶/白芨胶-三七多孔材料可明显促进糖尿病溃疡大鼠创面愈合,其机制可能与上调Wnt/β-catenin通路中β-catenin、RSPO-3表达,下调GSK-3β蛋白表达相关。     

化瘀软肝胶囊对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的作用

目的 探讨化瘀软肝胶囊对肝纤维化大鼠的作用以及对肝组织Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 将60只大鼠随机分为正常组(10只)和造模组(50只),造模组以CCl₄复合因素造模6周后，随机分为模型组、秋水仙碱组(0.2 mg/kg)和化瘀软肝胶囊低、中、高剂量组(0.27、0.54、1.08 g/kg),各组以相应的药物或生理盐水灌胃6周，每天2次。HE和Masson染色观察大鼠肝组织病理改变，生化法和化学发光法分别检测大鼠血清肝功能(ALT、AST、TG、TBIL)和肝纤维化指标(HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C),RT-qPCR和Western blot法检测大鼠肝组织Wnt1、Wnt3a、Wnt10、GSK-3β、β-catenin、c-Myc mRNA和蛋白表达，免疫荧光法检测大鼠肝组织β-catenin和α-SMA蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组肝组织病理损伤，血清ALT、AST、TG、TBIL、HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C水平升高(P<0.01),肝组织Wnt1、Wnt3a、Wnt10、β-catenin、c-Myc mRNA和蛋白表达...     

老鹳草素通过Wnt/β-catenin信号通路影响小鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化

目的:观察Wnt/β-catenin信号通路在老鹳草素诱导小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化中的作用机制。方法:分离、培养小鼠BMSCs,分为对照组(DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素低剂量组(10-9mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素中剂量组(10-8mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量组(10-7mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量+DKK1(Wnt/β-catenin信号通路特异性阻断剂)组和DKK1组。成骨诱导第7天时,采用CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量。成骨诱导48 h时,采用Real time-PCR和Western-blot检测各组Wnt/β-catenin信号通路的关键信号分子Wnt3a、β-catenin、GSK-3β、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达。结果:成骨诱导第7天时,老鹳草素各剂量组明显促进BMSCs的增殖,呈剂量依赖性(均P<0.05);同时ALP活性及OCN含量较对照组显著升高,呈剂量依赖性(均P<0.05)。成骨诱导48 h时,老鹳草素各剂量组Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达较对照组显著上调,GSK-3βmRNA和蛋白表达较对照组显著下调,呈剂量依赖性(均P<0.05)。加入DKK1后,细胞增殖受到显著抑制,ALP活性及OCN含量显著降低(均P<0.05);同时Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达显著下调,GSK-3βmRNA和蛋白表达显著上调(均P<0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs的增殖及向成骨方向分化,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨脊蛇祛湿胶囊治疗膝骨关节炎的作用机制

目的：探究脊蛇祛湿胶囊通过调控Wnt/β-catenin信号通路治疗膝骨关节炎（KOA）的作用机制。方法：70只大白兔随机分成7组：空白组,模型组,脊蛇祛湿胶囊低、中、高剂量组,盐酸氨基葡萄糖对照组及美洛昔康对照组,每组10只。造模、灌胃干预后,ELISA检测血清Wnt3a、Wnt5a、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-catenin、基质金属蛋白酶（MMP）13含量,HE染色观察膝关节软骨病理改变、AB-PAS染色进行Mankin’s评分,免疫组化检测软骨组织Wnt5a、Axin、GSK-3β、β-catenin、MMP13蛋白表达。结果：与空白组比较,模型组Mankin’s评分显著升高（P<0.05）,血清中Wnt3a、Wnt5a、GSK-3β、β-catenin、MMP13含量显著升高（P<0.05）,软骨组织中Wnt5a、GSK-3β、β-catenin、MMP13蛋白表达显著升高（P<0.05）,Axin蛋白表达显著降低（P<0.05）;与模型组比较,各药物组Mankin’s评分显著降低（P<0.05）,血清中Wnt3a、Wnt5a、GS...     

益气活血方对慢性心力衰竭大鼠心室重构的干预作用及其机制

目的:观察益气活血方对慢性心力衰竭模型大鼠心脏结构变化的影响,并从线粒体动力学和分泌型糖蛋白(Wnt)/β-链蛋白(β-catenin)通路探讨其作用机制。方法:40只雄性SD大鼠随机选取10只为假手术组,其余行左冠状动脉前降支结扎术构建慢性心力衰竭(CHF)大鼠模型,造模完成后随机分为模型组、卡托普利组和益气活血组,每组10只。给药组分别予以卡托普利片13.5 mg·kg^-1·d^-1,益气活血颗粒20 g·kg^-1·d^-1灌胃给药,干预8周后取心脏组织,称取体质量与心脏质量结合超声心动图检测心脏结构变化情况,行马松(Masson)染色测定心肌间质胶原容积分数,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌线粒体融合蛋白视神经萎缩相关蛋白1(Opa1),分裂蛋白线粒体动力相关蛋白1(Drp1)的表达水平,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Wnt/β-catenin通路相关因子低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6),糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β),β-catenin mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组左心室壁明显增厚(P<0.05),心腔明显扩大、心肌间质胶原含量升高(P<0.01);Opal表达水平降低,Drp1表达水平升高(P<0.01),LRP6,GSK-3β,β-catenin的mRNA表达量升高(P<0.01)。与模型组比较,益气活血组可减轻室壁增厚和心腔扩大(P<0.05,P<0.01),降低心肌间质胶原含量(P<0.05);上调Opa1的低表达、下调Drpl的高表达、下调LRP6,GSK-3β,β-catenin的高表达(P<0.01),作用效果优于或不劣于卡托普利组。结论:益气活血方可有效减轻慢性心力衰竭大鼠心室重构、改善线粒体能量代谢,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin的相关因子的表达相关。     

Wnt/β-catenin通路相关基因参与穴位敷贴修复缺血性脑损伤机制

目的:穴位敷贴治疗脑缺血为"靳三针"特色疗法,本实验在前期研究证实穴位敷贴对脑缺血具有神经保护作用的基础上,探讨Wnt/β-catenin通路基因参与其修复缺血性脑损伤的可能机制。方法:制备安宫牛黄贴(药物组成以郁金、黄芩、栀子、冰片、麝香等为主),实验动物分为正常组、模型组、药物组及穴位敷贴(高、中、低剂量)组,制备大脑中动脉局灶性脑缺血模型(MCAO),每组分为3个亚组(脑缺血后6 h、3 d、7 d)。采用RT-qPCR检测Wnt3、Dishevelled、Caspase-3、Survivin mRNA;Western-bolt检测β-catenin、GSK-3β蛋白表达。结果:穴位敷贴治疗后,穴位敷贴中剂量组大鼠神经行为学评分明显降低(P0.05),大鼠缺血侧脑组织Wnt3、Dishevelled、Survivin mRNA、β-catenin蛋白表达不同程度增加,Caspase-3mRNA、GSK-3β蛋白不断下降,与模型组相比具有统计学差异(P0.01或P0.05),以穴位敷贴中剂量组上述变化较为显著。结论:Wnt/β-catenin通路参与穴位敷贴防治缺血性脑损伤的可能机制为上调核心分子Wnt3、Dishevelled、β-catenin,激活靶基因Survivin,下调抑制因子GSK-3β、Caspase-3表达。     

白芍总苷对2型糖尿病大鼠肾组织Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

该实验研究白芍总苷对2型糖尿病大鼠肾组织Wnt/β-catenin信号通路表达的影响,探讨白芍总苷对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用及可能机制。实验采用高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠,动物分为正常对照组,糖尿病对照组,白芍总苷低、中、高剂量治疗组(50,100,200 mg·kg-1)及阳性对照组(雷公藤多苷8 mg·kg-1),灌胃给药,每日1次,14周末检测大鼠空腹血糖,血肌酐,尿素氮,24 h尿蛋白;光镜观察肾组织形态学的改变;病理图像系统分析平均肾小球面积及平均肾小球体积;免疫组织化学及Western blot检测肾组织Wnt-1,β-catenin蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织Wnt-1,β-catenin mRNA表达。研究发现高糖高脂诱导的2型糖尿病大鼠肾组织Wnt-1,β-catenin表达增高。与糖尿病对照组比较,各治疗组大鼠血肌酐,尿素氮,24 h尿蛋白,平均肾小球面积,平均肾小球体积显著降低,肾组织病理形态学明显改善;Wnt-1,β-catenin mRNA及蛋白表达显著减少。综上所述,2型糖尿病大鼠肾组织Wnt/β-catenin信号通路异常活化,白芍总苷可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活化,改善糖尿病大鼠肾脏损害,延缓糖尿病肾病的发生发展。     

独活寄生汤水提物对退变大鼠椎间盘软骨细胞功能的影响

目的探究独活寄生汤水提物对经IL-1β诱导退变的大鼠椎间盘软骨细胞中Wnt4、GSK-3β、β-catenin、DKK-1的影响。方法采用机械-酶消化法分离大鼠椎间盘软骨组织,进行软骨细胞体外培养、镜下观察与鉴定,分为正常组、模型组(经10 ng/m L浓度IL-1β造模)、实验1组(独活寄生汤水提物组200μg/m L干预24 h)、实验2组(独活寄生汤水提物组200μg/m L干预48 h)。观察4组大鼠椎间盘软骨细胞中Wnt4、GSK-3β、β-catenin、DKK-1 m RNA与蛋白的表达及上清液中Sox 9表达。结果 (1)第2代大鼠椎间盘软骨细胞增殖速度快,呈现多边形,胞核清晰,且含有1~2个核仁,融合后出现"铺路石"状,经Ⅱ型胶原法染色后,阳性对照组胞浆区域浸染为棕黄色;(2)与正常组比较,模型组中软骨细胞Wnt 4、GSK-3β、β-catenin m RNA与蛋白表达及上清液Sox 9含量明显提高(P0.05),DKK-1 m RNA与蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,实验1组、实验2组中软骨细胞Wnt 4、GSK-3β、β-catenin m RNA与蛋白表达及上清液Sox 9含量明显降低(P0.05),DKK-1m RNA与蛋白表达明显提高(P0.05),以实验2组变化最为显著(P0.05)。结论独活寄生汤水提物组可调控退变椎间盘软骨细胞的功能,下调Wnt 4、GSK-3β、β-catenin和上调DKK-1 m RNA与蛋白表达,进而延缓大鼠椎间盘软骨细胞的退变。     

金鸡毛草提取物经Wnt/β-catenin信号通路促进大鼠Ⅲ期压疮溃疡愈合的作用研究

目的观察金鸡毛草提取物经Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路促进大鼠Ⅲ期压疮溃疡愈合的作用。方法建立Ⅲ期压疮溃疡大鼠模型,将造模成功的SD大鼠随机分为模型组与金鸡毛草提取物低、中、高(4、8、16 g/kg)剂量组,每组12只。另取12只正常大鼠作为对照组。金鸡毛草提取物低、中、高剂量组大鼠灌胃4、8、16 g/kg的金鸡毛草提取物,灌胃体积10 mL/kg,对照组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,给药周期为2周。给药周期结束后,检测大鼠创面愈合率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定大鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠压疮溃疡组织和正常组织病理变化,实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法测定大鼠压疮溃疡组织和正常组织中Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平。结果对照组大鼠皮肤组织结构正常,可见大量成纤维细胞及毛细血管;模型组大鼠压疮溃疡组织大量炎症细胞浸润,成纤维细胞及毛细血管数目明显减少,表皮明显变薄;金鸡毛草提取物低、中、高剂量组大鼠压疮溃疡创面组织已经出现结痂,且表皮明显增厚,炎性细胞浸润较轻。与对照组比较,模型组大鼠血清IL-2、IL-4、TNF-α、压疮溃疡组织Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平升高(P <0.05);与模型组比较,金鸡毛草提取物低、中、高剂量组大鼠创面愈合率依次升高,血清IL-2、IL-4、TNF-α、压疮溃疡组织Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平依次降低(P <0.05),呈剂量依赖性(P <0.05)。结论金鸡毛草提取物能加速大鼠Ⅲ期压疮溃疡愈合,减轻大鼠Ⅲ期压疮炎症反应;其机制可能与金鸡毛草提取物可促进大鼠Ⅲ期压疮溃疡组织Wnt、β-catenin mRNA和蛋白的表达进而激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

独活寄生汤对膝骨关节炎模型大鼠中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响

目的?观察独活寄生汤（DHJSD）对膝骨关节炎（KOA）模型大鼠中Wnt/β-连环蛋白（β- catenin）信号通路相关蛋白表达的影响，探讨DHJSD治疗骨关节炎（OA）的机制。方法?选取32只SD大鼠，按随机数字表法分为DHJS组、模型（M）组、硫酸氨基葡萄糖（GS）组和正常（NC）组。除NC组外，其余3组予双膝关节腔内注射0.2 mL 4%木瓜蛋白酶法建立KOA模型。造模后DHJS组予DHJSD灌胃，GS组予GS灌胃，NC、M组给予等体积纯净水灌胃。连续给药8周后进行双膝关节X线扫描，观察大鼠膝关节影像学变化并评分，ELISA法检测血清基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、白介素-1β（IL-1β）含量，HE染色、番红O固绿染色法观察膝关节软骨病理改变并进行Mankin评分，采用实时聚合酶链式反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western Blot）及免疫组化法检测软骨组织中Wnt/β- catenin通路相关蛋白的mRNA及蛋白表达水平。结果?与NC组比较，M组大鼠膝关节间隙狭窄，软骨层损耗，X线评分、Mankin评分升高（P<0.05），DHJS组和GC组上述改变减轻，X线评分及Mankin评分下降（P<0.05）；DHJS组血清及软骨MMP-13含量减少（P<0.05）；下调软骨β-catenin、Wnt3a mRNA水平以及β-catenin、IL-1β蛋白表达水平（P<0.05），上调骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）mRNA 和蛋白表达水平（P<0.05）。结论?DHJSD能通过下调Wnt3a/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平，抑制MMP-13表达、促进BMP-2表达，从而改善大鼠KOA的影像学及病理学改变，发挥软骨保护作用。     

当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎软骨细胞氧化应激损伤与炎症反应

目的:研究当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路对骨关节炎软骨细胞的氧化应激损伤及炎症反应的影响。方法:在大鼠膝关节中注射碘乙酸建立关节炎模型,3 mg/只,对照组注射等量的0.9%氯化钠溶液; 将关节炎模型大鼠分为模型组和当归多糖组。给药3周后,采用酶联免疫吸附法测定SD大鼠血清中炎症因子水平、氧化应激参数水平[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]、膝关节软骨中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达水平和c-Fos蛋白表达水平。采用酶标仪测定当归多糖处理48 h后的IL-1β,损伤SW1353细胞8 h后的细胞活性。通过PCR法检测MMP-13 mRNA、β-catenin mRNA、ADAMTS4 mRNA的表达水平。通过Western blot法测定β-catenin、MMP-13蛋白表达水平。结果:当归多糖治疗后,IL-1β、TNF-α、MDA、SOD、CAT水平及MMP-13 mRNA和c-Fos蛋白均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。在IL-1β刺激的SW1353损伤模型中,经过10、50、100 μg/ml当归多糖处理后,SW1353细胞活性较模型组增加,组间比较差异有统计学意义(均P<0.05); Wnt 4a、GSK-3β、β-catenin、ADAMTS4 mRNA和MMP-13 mRNA蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎软骨细胞的氧化应激损伤与炎症反应。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨益气生肌合剂对慢性难愈性创面大鼠模型修复愈合的影响及作用机制

目的 观察益气生肌合剂对慢性难愈性创面大鼠模型创面修复愈合的影响,并探讨其作用机制。方法 将50只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性药物组(重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶)、中药组(益气生肌合剂)、联合用药组(重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶+益气生肌合剂),共5组,每组10只。建立慢性难愈性创面大鼠模型,空白对照组仅同手术部位置入磁性装置不予施加压力,其余各组予不同方式干预。观察各组大鼠创面愈合情况,苏木精—伊红染色观察各组大鼠创面病理情况,酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠血清白细胞介素-2(interleukin 2,IL-4)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素-10(interleukin 10,IL-10)细胞因子的表达水平,蛋白质印迹法及实时定量PCR检法检测创面组织Wnt/β-catenin信号通路的关键因子Wnt3a、β-catenin、Wnt5a、GSK-3β等蛋白及mRNA的表达情况。结果 (1)除模型对照组外,其余各组创面均呈现不同程度的愈合趋势,创面组织病理明显缓解;(2)与空白对照组比较,模型对照...     

胃癌前病变大鼠胃组织GSK-3β、β-catenin及Cyclin D1的表达及意义

目的:探讨胃癌前病变大鼠胃组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白GSK-3β、β-catenin及Cyclin D1的表达及其意义。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组10只和模型组40只,正常组予自由饮用清洁水,进食普通颗粒饲料;模型组予150μg/m L的N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)自由饮用,同时自由进食含0.03%盐酸雷尼替丁的颗粒饲料,每4周各处死5只模型组大鼠观察造模情况,28周建立PLGC模型后处死全部大鼠。观察大鼠一般情况(体重、进食量及饮水量)及胃组织大体形态,HE染色观察胃黏膜病理形态,免疫组织化学方法观察胃组织GSK-3β、β-catenin及Cyclin D1蛋白表达情况。结果:(1)大鼠体重及进食量、饮水量比较:与正常组比较,模型组大鼠体重、日进食量及日饮水量均有减少,具有统计学意义(P0.05或P0.01)。(2)病理形态学变化:正常组大鼠胃黏膜腺体形状规则、排列紧密,层次完整;模型组大鼠胃黏膜变薄,腺体减少,胃小凹粗大,或可见潘氏细胞,黏膜肌层增厚。(3)GSK-3β、β-catenin及Cyclin D1等蛋白表达情况:模型组GSK-3β于细胞质表达呈浅棕色或不着色,与正常组比较,阳性细胞平均光密度降低(P0.05);模型组β-catenin于细胞质及细胞核呈棕色或深棕褐色、Cyclin D1于细胞核表达呈深棕褐色颗粒状,与正常组比较,阳性细胞平均光密度较正常组明显升高(P0.01)。结论:PLGC发病与Wnt/β-catenin信号通路相关的异常激活,GSK-3β、β-catenin及Cyclin D1蛋白的异常表达有关。     

Study on Brain Protective Effect and Mechanism of Yiqi Huoxue(益气活血)Method based on Wnt/β-catenin Signaling Pathway on Focal Cerebral Ischemia-reperfusion Rats

目的:观察益气活血法对局灶性脑缺血再灌注大鼠的脑保护作用,并探讨其可能作用机制.方法:建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,建模成功大鼠随机分为模型组(n=17)、血塞通组(n=17)、补阳还五汤组(n=17)、联合组(n=18),另设假手术组(n=17)和空白组(n=17).各组大鼠给予相应干预.比较各组大鼠1、3、7d神经缺损评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比,检测脑组织无翅型MMTV整合位点家族成员3a(Wnt3a)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bax的mRNA及蛋白表达情况.结果:与模型组比较,血塞通组、补阳还五汤组和联合组大鼠1、3、7d神经缺损评分、大脑组织含水量、脑梗死体积百分比、脑组织GSK-3β mRNA及蛋白相对表达量均降低(P＜0.05),脑组织Wnt3a、β-catenin、CyclinD1的mRNA及蛋白相对表达量,以及Bcl-2/Bax均升高(P＜0.05);联合组上述指标改善情况均优于血塞通组和补阳还五汤组(P＜0.05).结论:益气活血法对局灶性脑缺血再灌注大鼠具有脑保护作用,其机制与激活Wnt3a/β-catenin信号通路有关.