高同型半胱氨酸诱导神经细胞凋亡的机制研究进展

目的探讨和研究高同型半胱氨酸诱导神经细胞凋亡的机制,及其对高同型半胱氨酸诱导神经细胞凋亡起协同作用的因素,和加剧或缓解高同型半胱氨酸诱导的神经细胞凋亡的因素。方法对近年来的有关文献进行分析,归纳。结论高同型半胱氨酸诱导神经细胞凋亡的机制,及其对高同型半胱氨酸诱导神经细胞凋亡起协同作用的因素,和加剧或缓解高同型半胱氨酸诱导的神经细胞凋亡的因素值得进一步探讨和研究。     

血清同型半胱氨酸对糖尿病患者血管内皮功能的影响

近年来, 国内外大量临床研究和流行病学调查结果显示, 同型半胱氨酸(Hcy)血症是冠状动脉、脑动脉、周围动脉粥样硬化的独立危险因子[1,2].     

黄酒对同型半胱氨酸诱导的内皮祖细胞功能障碍的影响

目的:探索同型半胱氨酸(Hcy)诱导的内皮祖细胞(EPCs)的功能障碍能否被黄酒所逆转。方法:密度梯度离心法从大鼠骨髓细胞悬液中获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,诱导单个核细胞向EPCs分化,孵箱中培养7 d后,收集贴壁细胞用于实验。激光共聚焦显微镜鉴定Di I-ac-LDL和FITC-UEA-I双染色阳性细胞被认定是正在分化的EPCs。上述细胞培养24 h后收集样品,采用MTT比色法、Transwell小室、凋亡试剂盒和体外血管生成试剂盒分别观察EPCs的活力、迁移能力、凋亡和体外血管生成能力。结果:与对照组相比,Hcy干预下EPCs的活力、迁移和体外血管生成能力均显著减弱(P0.01);黄酒或红酒的干预则能明显改善Hcy对EPCs上述功能的影响(P0.01);进一步与对照组比较后,发现黄酒或红酒的干预还能使EPCs的活力、迁移和体外血管生成能力较对照组也有明显改善(P0.05);乙醇组EPCs的上述功能较Hcy组没有明显的变化。各组对EPCs的凋亡没有影响。结论:Hcy能显著减弱EPCs的活力、迁移能力和体外血管生成能力,小剂量的黄酒能改善EPCs的上述功能。     

同型半胱氨酸对大鼠血管内皮依赖性舒张反应的影响

目的：观察同型半胱氨酸对内皮依赖性舒张反应的影响。方法：Wistar大鼠24只,随机分为两组。实验组腹腔内注射同型半胱氨酸溶液100 mg·kg^-1·d^-1;对照组注射等量生理盐水。第16周末,测血清同型半胱氨酸浓度、扫描电镜检查颈总动脉内皮细胞并测定离体内皮依赖性舒张功能。结果：实验组血清同型半胱氨酸显著高于对照组。扫描电镜观察,实验组内皮细胞表面收缩、凹凸不平、细胞间隙增宽,部分区域可见片状脱落;实验组的血管环对乙酰胆碱浓度依赖性舒张反应明显下降。结论：同型半胱氨酸对血管内皮细胞有损伤作用,进而降低内皮依赖性舒张功能。     

同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡caspase 3的活化

目的：本研究拟探讨Hcy致内皮细胞凋亡的信号途径。 方法： 以Hcy诱导培养人脐静脉内皮细胞24 h后，通过检测细胞膜磷脂双分子层的改变，DNA ladder的形成确证细胞凋亡，并检测caspase3 及其抑制蛋白c-IAP1/2 mRNA 及蛋白质水平，以及caspase3的活化情况。 结果： Hcy(0.3 mmol/L)即可引起内皮细胞凋亡, 随Hcy浓度升高caspase3酶原含量增加，活化增强；c-IAP2 mRNA 及蛋白质表达降低。 结论： Hcy(0.3-3 mmol/L)可增加细胞内caspase3酶原表达，通过活化caspase3信号途径诱导HUVEC凋亡。在细胞凋亡过程中，凋亡抑制蛋白c-IAP-2表达水平下降。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响

目的:研究同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响。方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法,检测不同浓度Hcy(10μmol.L-1、30μmol.L-1、100μmol.L-1和300μmol.L-1)与HUVEC共同培养后,细胞内eNOSmRNA和蛋白表达、eNOS活性和一氧化氮(NO)生成的变化。结果:HUVEC经不同浓度Hcy处理24h后,其细胞内eNOS蛋白表达减少,活力降低,NO生成抑制。但只有100μmol.L-1Hcy与HUVEC作用72h时,才引起eNOSmRNA表达的减少。结论:提示Hcy可能通过抑制eNOS转录、蛋白表达及eNOS活力减少内皮源性NO的生成。     

同型半胱氨酸诱导PC12细胞凋亡的研究

目的：研究同型半胱氨酸（Hcy）在生理浓度铜离子（10 μmol/L Cu²⁺）作用下能否诱导PC12细胞凋亡及对bcl-2、bax基因表达的影响。 方法: 将细胞随机分成对照组和处理组，采用MTT法检测细胞活力；倒置相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡；半定量RT-PCR分析bcl-2和bax mRNA的表达水平。 结果: 0.125-1.0 mmol/L Hcy在Cu²⁺的作用下可以导致PC12细胞凋亡，具有明显的剂量-效应关系；bcl-2 mRNA表达降低，bax mRNA表达升高，且效应与Hcy浓度相关。 结论: 高浓度Hcy在生理浓度Cu²⁺作用下可诱导PC12细胞凋亡，且凋亡作用与Hcy浓度相关。其机制可能是通过调节bcl-2和bax mRNA的比值起作用的。     

S-腺苷同型半胱氨酸对大鼠主动脉内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究S-腺苷同型半胱氨酸（AdoHcy）对大鼠主动脉内皮细胞增殖和凋亡的影响,以及对细胞培养上清液中VCAM-1含量的影响。方法 将不同浓度的AdoHcy水解酶抑制剂3-deazaadenosine（DZA）作用于鼠主动脉内皮细胞(SVAREC) 24、48和72 h后,荧光偏振免疫分析法测定同型半胱氨酸（Hcy）浓度,反相高效液相色谱法测定AdoHcy浓度,WST-1法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,ELISA法检测细胞培养上清液VCAM-1含量。结果 SVAREC经不同浓度DZA处理后,Hcy浓度降低而细胞内AdoHcy浓度上升,细胞增殖能力下降并出现凋亡,细胞培养上清液中VCAM-1含量升高。结论 AdoHcy可抑制SVAREC增殖,促进其凋亡及诱导炎性因子VCAM-1的表达,从而致主动脉内皮细胞损伤,参与动脉粥样硬化的形成。     

同型半胱氨酸对培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对培养的人脐静脉内皮细胞(hUVEC)凋亡的影响。方法:原代培养hUVEC,通过Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态改变,琼脂糖凝胶电泳检测 DNA片段,流式细胞术检测Annexin V/PI联合标记的细胞凋亡率, Western blot检测P53、Bax的表达及比色法测定caspase 3活性。 结果: 同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC出现明显的凋亡形态学改变。琼脂糖凝胶电泳检测可见明显的"DNA ladder"图谱。Hcy诱导凋亡细胞数明显增加。同时促进Bax、P53的表达,使caspase 3活性显著增强。结论: 同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC凋亡。     

同型半胱氨酸对脐静脉内皮细胞线粒体膜电位及活性氧生成的影响

目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤作用及机制.方法 培养(HUVEC),以不同浓度Hcy(0 mmol/L、0.01 mmol/L、0.1 mmoVL、1 mmol/L、3 mmol/L和5mmol/L)和不同的作用时间(3 h、6 h、12 h、24 h)进行干预.流式细胞仪观察...     

人endostatin体外诱导血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的 探讨人endostatin抑制血管内皮细胞增殖的作用机制。方法 在含重组人endostatin蛋白和10%小牛血清的DMEM培养基中，培养人脐静脉内皮细胞ECV304。72h后，采用透射电镜，流式细胞术细胞周期分析和细胞核DNA的1.5%琼脂糖凝胶电泳，检测重组人endostatin蛋白作用后，血管内皮细胞的凋亡。结果 透射电镜下可见实验组ECV304细胞核染色质浓缩，边集，核碎裂及胞浆浓缩等，呈典型的凋亡细胞的形态学表现，流式细胞术细胞周期分析显示，在G1期峰前存在1个凋亡峰（20.6%)，1.5%琼脂糖凝胶电泳显示，细胞核DNA呈梯状，对照组ECV304细胞表达正常。结论 重组人endostatin蛋白可诱导血管内皮细胞凋亡，是其抑制血管内皮细胞增殖的原因之一。     

KDR反义寡核苷酸对人血管内皮细胞的作用

VEGF及其受体KDR在肿瘤血管生成中起重要作用。我们用KDR特异性反义寡核苷酸作用于人血管内皮细胞，以阻断VEGF的自分泌作用通路，观察对细胞增殖的影响、细胞超微结构的变化及检测细胞DNA含量，测定细胞分泌VEGF的能力，并检测作用后KDR mRNA和KDR蛋白的水平。结果发现未经处理的人血管内皮细胞能分泌一定量的VEGF，KDR ASODN能抑制人血管内皮细胞内KDR基因的表达，并显著抑制细胞的增殖，在一定剂量下还可诱导凋亡。结果说明KDR ASODN能显著抑制血管内皮细胞的增殖，VEGF受体KDR在人血管内皮细胞的增殖和凋亡的凋控中起重要作用。     

胰岛素对滋养层细胞凋亡的调节作用及机制

目的 :探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制。方法 :将培养的妊娠早期滋养层细胞 ,分为正常对照组(细胞 +培养液 )、H2 O2 组 (细胞 +培养液 +H2 O2 )和胰岛素 +H2 O2 组 (细胞 +H2 O2 +胰岛素 )。采用透射电镜观察及流式细胞术 ,观察H2 O2 诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2 O2 诱导的细胞凋亡的抑制作用。并检测胰岛素对滋养细胞caspase 3的活性及Bcl 2蛋白表达的影响。结果 :H2 O2 可诱导培养的滋养细胞凋亡 ,透射电镜下可见特征性的细胞核改变。胰岛素可显著抑制H2 O2 诱导的细胞凋亡 ,流式细胞仪检测其凋亡率较H2 O2 组显著下降 (P <0 .0 1)。H2 O2 组滋养细胞中caspase 3的活性较对照组显著增高 (P <0 .0 1) ,而Bcl 2蛋白的表达则较对照组显著下降 (P <0 .0 1)。结论 :胰岛素可明显抑制H2 O2诱导的滋养细胞凋亡 ,其机制可能与降低caspase 3的活性和促进Bcl 2蛋白的表达有关     

普罗布可对同型半胱氨酸致脑血管内皮细胞损伤的拮抗作用

 目的：观察同型半胱氨酸（Hcy）对大鼠脑微血管内皮细胞（CMEC）的损伤和药物拮抗作用。方法： （1）将CMEC细胞分正常组、损伤组和普罗布可干预组，观察各组在相差显微镜下、透射电镜下结构改变；（2）采用白细胞计数法计算每瓶细胞中每毫升活细胞数来观察每组细胞的生长曲线。结果：损伤组细胞呈团簇状，轮廓不清，细胞内颗粒多，部分内皮细胞坏死，电镜下线粒体高度肿胀。损伤组的细胞生长受抑制。干预组未见细胞脱失，细胞肿胀、颗粒多及线粒体肿胀均较损伤组明显减轻。结论：Hcy对CMEC有毒性损伤作用，普罗布可对Hcy所致CMEC损伤有拮抗作用。     

马兜铃酸通过ERK1/2信号传导途径诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡

 目的 探讨马兜铃酸(AA)是否通过ERK1/2信号传导途径诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡。方法 通过MTT法检测细胞增殖能力;通过Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变;通过Annexin V-FITC/PI染色采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;通过Western blotting法测定细胞内p-ERK1/2的水平。结果 马兜铃酸呈浓度和时间依赖方式抑制了内皮细胞增殖。马兜铃酸可引起内皮细胞出现凋亡形态学改变,且呈浓度依赖方式增加了内皮细胞凋亡率。同时,马兜铃酸可降低内皮细胞内p-ERK1/2的水平。应用ERK1/2抑制剂PD98095预处理后,细胞内p-ERK1/2的水平与AA (10 mg/L)组相比显著增加,马兜铃酸诱导的内皮细胞凋亡率亦被明显抑制。结论 马兜铃酸可诱导血管内皮细胞凋亡,其机制可能是通过抑制ERK1/2信号传导途径。     

血管平滑肌细胞凋亡在血管再狭窄中作用的研究进展

血管平滑肌细胞构成新生内膜增生的重要部分,且在血管腔内治疗术后再狭窄的心血管疾病的发生和发展中具有重要作用。血管平滑肌细胞凋亡能有效抑制血管球囊损伤和血管旁路移植术后新生内膜增生,从而可为血管术后再狭窄提供治疗手段。     

人VEGF165基因真核表达质粒的构建及其对血管内皮细胞增殖的影响

目的 :构建人VEGF16 5基因的真核表达质粒pBudCE4 .1/VEGF16 5 ,观察其在血管内皮细胞 (VEC)中的表达和表达产物对VEC增殖的影响。方法 :用RT PCR法从引产胎儿心脏组织中克隆VEGF16 5基因 ,并将其克隆至真核表达质粒pBud CE4 .1中 ,对重组真核表达质粒pBudCE4 .1/VEGF16 5进行酶切鉴定和测序。以脂质体转染法将pBudCE4 .1/VEGF16 5导入VEC中 ,用Northernblot和免疫细胞化学染色法 ,分别从mR NA水平和蛋白质水平检测它们在转染的VEC中的表达 ,并检测表达产物对VEC增殖的影响。结果 :人VEGF16 5基因的RT PCR产物为 5 76bp。测序结果显示 ,扩增的VEGF16 5基因的序列与基因文库中登录的序列完全一致。经HindⅢ和BamHI酶切鉴定证实 ,VEGF16 5基因已成功地克隆至真核表达质粒pBudCE4 .1中。以其转染血管内皮细胞 (VEC)后 ,经Northernblot杂交和免疫细胞化学染色法检测均证实VEGF16 5基因表达。表达产物对VEC增殖有明显的促进作用。结论 :所构建的pBudCE4 .1/VEGF16 5真核表达质粒可在VEC中表达 ,表达产物可明显促进VEC增殖 ,为通过VEGF16 5基因转染防治移植器官内血管的狭窄奠定了基础     

汉坦病毒诱导人脐静脉内皮细胞HSP70的表达及意义

目的: 研究人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)感染汉坦病毒(Hantavirus, HTV)后应激反应的规律及意义。方法: 采用免疫细胞化学染色法和核酸分子原位杂交, 检测热休克蛋白 70(HSP70)的表达; 用RT --PCR观察HSP70mRNA水平变化的规律。结果: HTV感染HUVEC后, 免疫细胞化学染色法可检出HSP70呈高表达, 原位杂交发现细胞质内有HSP7mRNA的阳性信号。感染后不同时间点RT- PCR的结果表明与对照组相比较, HSP70mRNA的水平在感染后迅速升高并持续高表达 (P<0. 05 )。结论: HTV可诱导HUVEC高表达HSP70。HSP70可能具有抑制病毒复制和保护内皮细胞的作用。     

尼古丁促人脐静脉内皮细胞凋亡

目的研究不同浓度尼古丁对人脐静脉内皮细胞的促凋亡作用及作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,根据尼古丁浓度分组为10-6、10-7和10-8mol/L组及对照组。尼古丁作用24 h后,用CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V-FITC荧光双染色法检测细胞凋亡。Western blot检测Bax、Bcl-2和PARP-1蛋白表达,对其作用机制进行研究。结果与对照组相比,10-6、10-7mol/L尼古丁组细胞增殖活性下降(P0.05);凋亡数目增多(P0.01)。促凋亡蛋白Bax的表达量增加(P0.01);抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减少(P0.01);PARP-1表达增加(P0.01)。结论一定浓度的尼古丁对血管内皮细胞具有促凋亡作用,加速动脉粥样硬化性疾病的发生发展。