原花青素对RAW264.7细胞膜相关前列腺素E2合成酶-1表达的影响

目的探讨原花青素对RAW264.7细胞膜相关前列腺素E2合成酶-1(mPGES-1)表达的影响。方法酶免疫测定法(EIA)检测原花青素对PGE2生成的影响,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mPGES-1mRNA的表达,Western blotting检测mPGES-1蛋白的表达。结果脂多糖(LPS)可以促进RAW264.7细胞PGE2的生成同时上调mPGES-1mRNA和蛋白的表达,而原花青素(4、20 mg.L-1)下调LPS诱导的RAW264.7细胞mPGES-1mRNA和蛋白的表达,从而抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE2的生成。结论原花青素在mRNA和蛋白水平抑制LPS诱导的RAW264.7细胞mPGES-1表达从而减少PGE2的合成,这可能是原花青素抗炎的机制之一。     

山萘酚对脂多糖诱导RAW264.7细胞中COX-2和iNOS表达及产物生成的影响

目的探讨山萘酚对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导RAW 264.7细胞COX-2及iNOS表达的影响。方法四氮唑盐法(monote-trazolium test,MTT)检测山奈酚对RAW264.7细胞生长增殖的影响,放射免疫测定法(RIA)检测山萘酚对PGE2和NO生成的影响,免疫印迹法(western blotting)检测COX-2及iNOS蛋白的表达。结果山萘酚抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞PGE2和NO的生成,同时下调LPS诱导的RAW 264.7细胞COX-2及iNOS蛋白的表达。结论山萘酚抑制2个诱导酶COX-2和iNOS的表达,从而减少炎性产物PGE2和NO的生成,这可能是山萘酚抗炎的机制之一。     

原花青素对脂多糖诱导RAW2647细胞COX-2酶活性、mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨原花青素对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞COX-2酶活性及蛋白表达的影响。方法放射免疫法检测COX-2酶活性，RT-PCR检测COX-2 mRNA表达，Western blotting检测COX-2蛋白表达。结果原花青素(0.8，4和20 mg·L^-1)不影响LPS诱导RAW264.7细胞COX-2酶活性，可下调LPS诱导RAW264.7细胞COX-2 mRNA表达；原花青素(4和20 mg·L^-1)下调LPS诱导RAW264.7细胞COX-2蛋白表达。结论原花青素不影响LPS诱导RAW2647细胞COX-2酶活性，但对LPS诱导RAW264.7细胞COX-2 mRNA及蛋白表达抑制作用明显。     

穿心莲内酯对巨噬细胞环氧化酶2及其产物表达的影响

目的研究穿心莲内酯对巨噬细胞环氧化酶2(COX-2)表达及其主要产物前列腺素E2(PGE2)生成的影响。方法取生长良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7,加入不同浓度的穿心莲内酯(终浓度1、10、50μmol/L)进行预干预,1h后再加入脂多糖(LPS,终浓度1μg/mL)刺激,并设空白组和穿心莲内酯单独作用组作为对照组。取培养18h细胞上清,用Elisa法检测PGE2生成量;取培养24h细胞,提取总蛋白,用WesternBlot法检测穿心莲内酯对COX-2蛋白表达的影响。结果 LPS可以显著诱导RAW264.7细胞COX-2表达和PGE2的生成,与对照组比较P<0.01;穿心莲内酯预干预可以抑制LPS诱导的COX-2蛋白表达,下调PGE2的生成。结论穿心莲内酯可通过降低LPS诱导的巨噬细胞COX-2表达和PGE2生成,发挥抗炎作用,这可能是其抗炎的作用机制之一。     

当归A_3活性部位对小鼠巨噬细胞环氧化酶-2活性及基因表达的影响

目的研究当归A3活性部位对小鼠巨噬细胞RAW264.7环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)活性及基因表达的影响。方法采用酶联免疫法(enzyme-line immu-nosorbnent assay,ELISA)检测前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)产量及COX-2活性,采用RT-PCR和Western blot法检测COX-2 mRNA及蛋白表达水平。结果 A3(20、40、80mg.L-1)剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE2产量、COX-2活性、COX-2 mRNA及蛋白表达水平增高。结论 A3能够直接抑制PGE2产量,此作用可能与抑制COX-2基因表达有关。     

蟛蜞菊内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞环氧化酶2、NO及TNF-α的影响

目的:研究蟛蜞菊内酯对脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞环氧化酶2(COX-2)、NO及TNF-α的作用。方法:ELISA方法检测0.2、2、20μmol/L不同浓度蟛蜞菊内酯对终浓度为10μg/mL LPS诱导RAW264.7细胞产生TNF-α、NO及前列腺素E2(PGE2)的影响,Western blot方法检测蟛蜞菊内酯对LPS诱导COX-2酶蛋白表达的影响。结果:LPS能够明显诱导小鼠RAW264.7细胞产生的COX-2酶蛋白,蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的COX-2酶蛋白表达。PGE2可以被LPS诱导增加,与空白组比有显著差异。蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的PGE2、NO和TNF-α,呈现剂量依赖性。结论:蟛蜞菊内酯抗炎的作用机制可能为抑制COX-2的蛋白表达,进而抑制PGE2的生成,也可能与抑制NO和TNF-α生成有关。     

八肽胆囊收缩素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞AP-1活性及IL-6表达

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对LPS诱导RAW264.7细胞IL-6表达的影响及相关机制。方法用ELISA及RT-PCR法检测RAW264.7细胞IL-6蛋白及mR-NA表达;用EMSA方法检测RAW264.7细胞AP-1 DNA结合活性。结果①LPS可时间依赖性的诱导RAW264.7细胞IL-6蛋白及mRNA表达;②10-10 mol.L-1 CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达无明显影响;10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达;③10-10 mol.L-1 CCK-8未影响LPS诱导的AP-1活性,10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的AP-1活性。结论 CCK-8通过抑制AP-1 DNA结合活性而抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达,这可能是CCK-8发挥抗炎作用的信号转导机制之一。     

八肽胆囊收缩素通过p38MAPK通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对LPS诱导RAW264.7细胞IL-1β表达的影响及相关机制。方法用ELISA及RT-PCR法检测RAW264.7细胞IL-1βmRNA及蛋白表达;用Western blot检测RAW264.7细胞p38 MAPK的磷酸化水平。结果①LPS可时间依赖性的诱导RAW264.7细胞IL-1βmRNA及蛋白的表达,分别于刺激后3 h及6 h达到高峰;②10-10 mol.L-1 CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达无影响;10-8、10-6 mol.L-1CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达;③10-10 mol.L-1 CCK-8未影响LPS诱导的p-p38MAPK水平,10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的p-p38 MAPK水平;④p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达,与CCK-8共同作用后,抑制作用进一步加强。结论 CCK-8通过抑制p38 MAPK磷酸化而抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达,这可能是CCK-8发挥抗炎作用的信号转导机制之一。     

染料木素通过TIPE 2负性调控Akt活性促进脂多糖活化的巨噬细胞凋亡

目的探究染料木素(genistein,GEN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)活化的RAW264.7细胞凋亡的影响及其可能的药理学作用机制。方法GEN预孵育RAW264.7细胞或慢病毒介导的肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(tumor necrosis factor-α-induced protein 8-like 2,TIPE 2)过表达细胞2 h,再与LPS共孵育24 h,采用CCK 8试剂盒检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡水平,qRT-PCR检测TNF-α、IL-6、caspase-8、caspase-3和TIPE 2 mRNA,Western blot检测iNOS、COX-2、caspase-8、caspase-3、TIPE 2、Akt和p-Akt蛋白表达。结果LPS促进RAW264.7细胞TNF-α、IL-6、iNOS、COX-2合成;GEN抑制LPS活化的RAW264.7细胞活力,凋亡细胞增多,并上调caspase-8、caspase-3、TIPE 2 mRNA及蛋白表达;TIPE 2过表达上调活化RAW264.7细胞caspase-8、caspase-3 mRNA及蛋白表达,减少Akt磷酸化,且与GEN具有协同作用。结论GEN可能通过上调TIPE 2抑制Akt活性,激活外源性凋亡途径,促进LPS活化的RAW264.7细胞凋亡。     

PI3K信号通路在LPS诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1中的作用

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路在脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞表达可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,采用相同浓度的LPS在不同时间诱导RAW264.7细胞,应用Western blot法分别检测PI3K蛋白表达水平,RT-PCR法检测PI3K mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养血清中sTREM-1表达水平。用不同浓度PI3K特异性抑制剂LY294002处理细胞,观察上述指标变化。结果 LPS可时间依赖性地诱导RAW264.7细胞PI3K蛋白、PI3K mRNA的表达;LY294002可浓度依赖性地抑制PI3K蛋白、PI3K mRNA的表达;LY294002阻断PI3K信号转导通路后,LPS对sTREM-1表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性。结论 LPS通过PI3K信号通路诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1。