Effect of moxibustion on expression of HSP70 and apoptosisrelated factors in rats with acute gastric mucosal damage

目的：观察艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞凋亡相关因子的影响,探讨艾灸诱导HSP70与上述因子的关系,从细胞凋亡线粒体信号转导途径探讨艾灸预处理保护胃黏膜损伤的机制。方法：将32Wister大鼠随机分为4组,即捆绑组、模型组、艾灸穴位组、艾灸非穴组。艾灸穴位组和艾灸非穴组大鼠艾灸预处理8d,捆绑组和模型组大鼠只捆绑,不艾灸。除捆绑组外,其余各组制备大鼠急性胃黏膜损伤模型。采用Western—blot方法检测大鼠胃黏膜细胞色素C（Cyt—c）的表达,免疫组织化学方法检测胃黏膜HSP70,胃黏膜细胞凋亡,Apaf-1,Caspase-9,Caspase-3,Bcl-2和BaX的表达。结果：与捆绑组相比,模型组大鼠胃黏膜HSP70表达,胃黏膜细胞凋亡指数,胞浆Cyt—C,Apaf-1,Caspase-9,Caspase-3,Bcl-2和Bax含量明显增加（P〈0．05或P〈0．01）。与模型组相比,艾灸穴位组大鼠胃黏膜HSP70表达和Bcl-2明显增加（P〈0．01）,而细胞凋亡指数,胞浆Cyt—C,Apaf-1,Caspase-9,Caspase-3,Bax均显著降低（P〈0．01）。与艾灸穴位组相比,艾灸非穴组大鼠胃黏膜HSP70表达和Bcl-2显著降低（P〈0．01）,而凋亡指数,Cyt—c,Apaf-1,Caspase-9,Caspase-3,Bax显著升高（P〈0．05或P〈0．01）。结论：艾灸通过上调大鼠胃黏膜细胞HSP70表达,并影响细胞凋亡线粒体信号转导途径相关因子Cyt—C,Apaf-1,Caspase-9,Caspase-3,Bcl-2和Bax,由此抑制胃黏膜细胞凋亡,达到保护胃黏膜损伤的作用。     

艾灸血浆对GES-1热休克蛋白70及细胞凋亡细胞周期的影响

目的：探讨艾灸血浆对乙醇损伤的人胃粘膜上皮细胞（GES-1）热休克蛋白70（HSP70）及细胞凋亡、细胞周期的影响。方法：24名健康人（男女各半）随机分为艾灸穴位组12名、艾灸非穴位组12名。两组分别于艾灸前和艾灸后采取静脉血提取灸前血浆和灸后血浆。将GES-1细胞分为A空白组、B模型组、C艾灸穴位血浆组、D艾灸非穴位血浆组,采用含8%乙醇的培养液造成GES-1细胞损伤模型,观察艾灸血浆对GES-1 HSP 70及细胞凋亡、细胞周期的影响。结果：与模型组和艾灸非穴位血浆组比较,艾灸穴位血浆组GES-1中HSP70含量明显上调（1.1084±0.0771 vs 0.6387±0.0322,0.7220±0.0708,P〈0.01）、细胞凋亡率下降（1.238±0.084 vs7.418±0.156,1.565±0.186,P〈0.01）;细胞周期中G1期下降：49.18±1.72 vs 57.9±1.42,52.5±2.83,P〈0.01）;S期上升（25.93±1.18 vs 21.5±0.35,23.55±1.54,P〈0.01）;G2/M期升高（24.88±1.17 vs 20.53±1.24,23.95±1.58,P〈0.01）。结论：艾灸血浆可诱导GES-1中HSP70含量升高,以达到对抗细胞凋亡,促进细胞增殖的作用。     

艾灸预处理对大鼠应激性胃黏膜损伤中保护因子的调节作用

目的:观察艾灸预处理对应激性胃黏膜损伤大鼠血清前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP),胃黏膜金属硫蛋白(metallothion,MT)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP 70)的影响,探讨艾灸预处理对大鼠应激性胃黏膜损伤中保护因子的调节作用。方法:将48只健康SD大鼠随机分为4组,即正常组、模型组、艾灸非穴组、艾灸穴位组。束缚冷应激法制作大鼠应激性胃黏膜损伤模型,在造模之前,艾灸组选取足三里、中脘、脾俞和胃俞等穴位行艾灸预处理8 d,艾灸非穴组选取非穴对照点进行预处理。以Guth法计算胃黏膜损伤指数,放射免疫法测定血清PGE2与CGRP的含量,酶免法检测胃黏膜组织中MT与HSP 70的含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜损伤指数显著增加(P0.01),血清PGE2、CGRP含量明显降低(P0.01);与模型组和艾灸非穴组比较,艾灸足三里、中脘等穴位可使应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜损伤明显减轻(P0.01),血清PGE2、CGRP含量升高(P0.05),胃黏膜组织MT、HSP 70含量升高(P0.05)。结论:艾灸足三里、中脘等穴位预处理可减轻束缚水浸应激所造成的大鼠胃黏膜损伤,通过上调胃黏膜损伤过程中保护因子(PGE2、CGRP、MT和HSP 70)而达到其保护胃黏膜的作用,这可能是艾灸温补脾胃的作用机制之一。     

槲皮素阻断热休克蛋白70表达对艾灸预处理抑制胃黏膜损伤细胞凋亡的影响

目的通过槲皮素灌胃阻断热休克蛋白（HSP）70表达,观察艾灸预处理对大鼠急性胃黏膜损伤指数及细胞凋亡的影响,以进一步探明艾灸的细胞保护作用及其与HSP70的关系。方法40只大鼠随机分为捆绑对照组（A组）、模型组（B组）、艾灸＋模型组（C组）、槲皮素＋艾灸＋模型组（D组）、槲皮素＋模型组（E组）。D、E组每日采用槲皮素灌胃。C、D组每日艾灸足三里、梁门,以上处理共8 d。第9日,B、C、D、E组均采用无水乙醇灌胃制作大鼠急性胃黏膜损伤模型。采用western-blot方法检测胃黏膜HSP70蛋白表达;TUNEL法检测胃黏膜细胞凋亡指数（AI）。结果与A组比较,模型组大鼠胃黏膜AI明显增高（P〈0.05）,胃黏膜HSP70表达升高（P〈0.01）。与B组相比,C组大鼠AI明显降低（P〈0.05）,HSP70表达显著升高（P〈0.01）;D组大鼠胃黏膜AI值明显增加（P〈0.01）,HSP70表达未见上调。与C组相比,D组大鼠胃黏膜AI值升高明显（P〈0.01）,HSP70表达明显下调。结论艾灸预处理上调胃黏膜HSP70表达,急性病胃黏膜损伤所致的细胞凋亡被抑制。槲皮素阻断HSP70合成后,艾灸预处理抑制急性胃黏膜...     

艾灸对急性胃黏膜损伤大鼠热休克蛋白与相关炎性细胞因子的影响

目的探讨艾灸对急性胃黏膜损伤的保护作用及其炎症反应的抑制机制。方法健康SPF级SD大鼠,随机分对照组、模型组、艾灸组和艾灸非穴位组。采用无水乙醇灌胃制备急性胃黏膜损伤模型。艾灸足三里、中脘穴,按GUTH法计算胃黏膜损伤指数（UI）,HE染色观察胃黏膜组织形态学变化,免疫组织化学法检测胃黏膜细胞中HSP70的表达,放免法测定血清中炎性细胞因子的含量。结果与对照组比较模型组胃黏膜损伤指数、血清中炎性细胞因子含量明显升高（P〈0.01）,胃黏膜组织炎性浸润明显。与模型组相比,艾灸组胃黏膜损伤指数、血清中炎性细胞因子含量明显降低（P〈0.01或P〈0.05）,胃黏膜组织形态较为完好,HSP70大量表达（P〈0.01）。结论艾灸足三里、中脘穴对大鼠急性胃黏膜损伤具有一定的保护作用,其机制可能与诱导机体产生大量HSP70抑制炎性细胞因子的释放有关。     

艾灸对应激性胃溃疡大鼠胃粘膜细胞增殖和凋亡的影响及其与热休克蛋白表达关系的研究

目的:观察艾灸“足三里”等穴对应激性胃溃疡大鼠胃粘膜细胞增殖及凋亡的影响,分析热休克蛋白70基因表达(HSP70 mRNA)与上述效应的关系,探讨艾灸促进胃粘膜损伤修复的细胞分子生物学机制。方法:60只健康SD大鼠随机分为4组,即束缚对照组、模型组、艾灸“足三里”-“梁门”穴组和艾灸非穴对照点组。束缚水浸应激法制备胃溃疡模型,采用放射免疫方法测定胃粘膜转化生长因子(TGFα-)的含量,RT-PCR法测定HSP70 mRNA,免疫组织化学方法检测胃粘膜增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞凋亡指数。结果:束缚水浸应激法造模后可致胃粘膜损伤指数升高,胃粘膜TGFα-含量下降,PCNA下降,细胞凋亡指数、HSP70 mRNA增加(P<0.05或P<0.01)。艾灸“足三里”“梁门”可降低胃粘膜损伤指数,增加胃粘膜TGFα-含量,促进HSP70 mRNA和PCNA的表达,降低胃粘膜细胞凋亡指数,与模型组和对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:艾灸“足三里”“梁门”对应激性胃溃疡的胃粘膜具有保护作用,其机制可能是促进了TGFα-合成,刺激胃粘膜细胞增殖,抑制细胞凋亡,而这一过程可能与艾灸诱导HSP70表达有关。     

Effect and Mechanism of Moxibustion on Acupoints Zusanli （ST 36） and Liangmen （ST 21） in the Prevention and Treatment of Stress Ulcer

目的观察艾灸足三里等穴对应激性溃疡大鼠胃粘膜细胞增殖及凋亡的影响,探讨艾灸促进胃粘膜损伤修复的细胞分子生物学机制.方法60只SD大鼠随机分为4组,即束缚对照组、模型组、艾灸足三里和梁门穴组和艾灸非穴对照点组.束缚水浸应激法制备胃溃疡模型,放射免疫方法测定胃粘膜转化生长因子(TGF-α)的含量,免疫组织化学方法检测HSP70蛋白,胃粘膜增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞凋亡指数.结果束缚水浸应激法造模后可致胃粘膜损伤指数升高,胃粘膜TGF-α含量下降;PCNA下降,HSP70蛋白增加;细胞凋亡指数增加(P＜0.01).艾灸足三里和梁门可降低胃粘膜损伤指数,增加胃粘膜TGF-α含量,促进HSP70和PCNA的表达,降低胃粘膜细胞凋亡指数,与模型组和对照组比较有显著性差异(P＜0.01).结论艾灸足三里和梁门对应激性溃疡胃粘膜具有保护作用,机制可能是促进TGF-α合成、刺激胃粘膜细胞增殖、抑制细胞凋亡,而这一过程与艾灸诱导HSP70表达有关.     

参芪复方对GK大鼠骨骼肌线粒体膜电位及相关促凋亡蛋白的影响研究＊

目的 探讨参芪复方对自发性糖尿病（Goto-Kakizaki，GK）大鼠骨骼肌线粒体膜电位及相关凋亡蛋白的影响。方法 采用高脂饲料喂养GK大鼠，建立糖尿病大鼠动物模型，造模成功后将GK大鼠随机分为模型组、罗格列酮组、参芪复方组，每组10只；10只Wistar大鼠作为空白对照组，普通饲料喂养。罗格列酮组灌胃给予0.67 mg/（kg·d）罗格列酮混悬液，参芪复方组灌胃给予14.33 g生药/（kg·d）参芪复方混悬液，空白对照组、模型组均每日灌胃给予同等体积生理盐水，连续给药8周。采用流式细胞检测线粒体膜电位；RT-qPCR和Western blot检测大鼠腓肠肌凋亡诱导因子（Aapoptosis inducing factor，AIF）、细胞色素C（Cytochrome c，Cyt c）、第二个线粒体衍生的半胱天冬蛋白酶激活因子（Second mitochondrial activator of caspase/direct IAP binding protein with low PI，Smac/DIABLO）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（Cysteinyl aspartate specific proteinase-9，Caspase-9）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3）的蛋白和mRNA表达情况。结果 与空白对照组比较，模型组GK大鼠腓肠肌线粒体膜电位降低（P < 0.05），AIF、Cyt c、Smac/DIABLO、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达增加（P < 0.05）；与模型组比较，罗格列酮组和参芪复方组线粒体膜电位均升高（P < 0.05），罗格列酮组AIF、Cyt c、Smac/DIABLO、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达均降低（P < 0.05），参芪复方组AIF、Cyt c、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达降低（P < 0.05），Smac/DIABLO 蛋白表达降低（P < 0.05），Smac/DIABLO mRNA表达具有下降趋势，但差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 参芪复方可通过上调线粒体膜电位，抑制促凋亡蛋白AIF、Cyt c、Smac /DIABLO从线粒体内释放出来，进而抑制Caspase-9、Caspase-3表达，减少骨骼肌细胞凋亡，发挥骨骼肌保护作用。     

艾灸对幽门螺杆菌胃炎大鼠血清免疫学作用研究

目的:探讨艾灸保护胃黏膜损伤的免疫学机制。方法:将40只健康SD大鼠随机分为4组,即空白组、模型组、艾灸穴位组(模型+艾灸穴位)、艾灸非穴组(模型+艾灸穴位对照点),每组10只。艾灸穴位组和艾灸非穴组于造模前8天即予艾灸干预,穴取"足三里""中脘""关元""脾俞""胃俞"穴或以上穴旁开对照点,模型组仅捆绑不治疗,均每日1次,连续16d。采用幽门螺杆菌(Hp)灌胃建立大鼠Hp胃炎模型,观察大鼠胃黏膜苏木精-伊红(HE)染色镜检炎性反应程度,酶联免疫法(Elisa)检测各组大鼠血清热休克蛋白72(HSP72)及胃组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)含量,实时定量聚合酶链式反应(PCR)法检测外周血单核细胞Toll样受体(TLR2mRNA、TLR4mRNA、CD14mRNA)、髓样分化因子88(MyD88mRNA)的表达,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测外周血单核细胞NFκB核因子κB、IκBα核因子κB的抑制蛋白的含量。结果:与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜涂片革兰氏染色检测出Hp,胃黏膜组织HE染色镜检炎性反应程度评分积分值增高,血清HSP72含量及胃组织TNF-α、IL-1β含量明显升高,单核细胞TLR2mRNA、4mRNA、CD14mRNA、MyD88mRNA、NFκB表达增加(P0.01),IκBα表达降低(P0.05);经艾灸"足三里"等穴预处理者,艾灸穴位组大鼠胃黏膜组织HE染色镜检炎症程度积分值减低,血清HSP72含量升高,胃组织TNF-α、IL-1β含量及单核细胞TLR2、4mRNA、CD14mRNA、MyD88mRNA、NFκB表达降低(P0.01),IκBα表达升高(P0.05);艾灸非穴组与模型组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:艾灸穴位预处理可诱导血清HSP72的高表达,通过与TLR2、4受体结合启动受体后信号转导途径,调控下游信号物质的释放,从而调节机体相关免疫物质的释放,减轻Hp胃炎大鼠胃黏膜损伤。     

艾灸对大鼠应激性胃黏膜损伤修复及p-ERK1/2蛋白表达的影响

目的:探讨艾灸促进大鼠应激性胃黏膜损伤修复作用及细胞机制。方法:SD大鼠48只随机分为空白组、模型组、艾灸穴位组、艾灸非穴组,每组12只。束缚冷应激法制作应激性胃黏膜损伤大鼠模型,在造模之前,艾灸穴位组选取足三里、中脘、脾俞、胃俞等穴位行艾灸预处理8d。按Guth法计算胃黏膜损伤指数(UI),免疫组化、蛋白质印迹法(Western Blot)检测胃黏膜磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylating extracellularsignal-regulated kinase1/2,p-ERK1/2)蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠UI值显著增高(P0.01)、胃黏膜细胞p-ERK1/2蛋白表达加强(P0.05,P0.01);与模型组、艾灸非穴组比较,艾灸穴位组大鼠UI值明显下降(P0.01)、胃黏膜细胞p-ERK1/2蛋白表达增强(P0.01)。结论:艾灸足三里、中脘等穴位预处理可促进束缚水浸应激所造成大鼠胃黏膜损伤的修复,其作用机制可能与上调胃黏膜p-ERK1/2蛋白表达有关。     

艾灸“肺俞”“心俞”对慢性心力衰竭大鼠心肌组织髓样分化因子、半胱氨酸天冬氨基酸特异性蛋白酶-3表达水平的影响

目的:观察艾灸"肺俞""心俞"对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌组织髓样分化因子(MyD 88)及半胱氨酸天冬氨基酸特异性蛋白酶-3(Caspase 3)mRNA表达水平的影响,从分子和基因层面初步探讨艾灸对CHF心肌保护作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常组和建模组,采用盐酸多柔比星隔日腹腔注射的方法复制模型。造模成功后,建模组随机分为艾灸组、西药组、艾西组(艾灸与西药联用)和模型组,每组8只。艾灸组及艾西组用艾条温和灸双侧"肺俞""心俞"穴,西药组给予卡托普利混悬液灌服(25mg/kg),艾西组先给予卡托普利混悬液(25mg/kg)灌服后再施灸,每日1次,连续3周。苏木精-伊红(HE)染色观察心肌病理学变化,蛋白免疫印迹技术检测心肌组织MyD 88蛋白含量,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测心肌组织Caspase 3mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌病变较明显,心肌组织MyD 88蛋白及Caspase 3mRNA表达水平明显升高(P0.01);与模型组比较,艾灸组、西药组及艾西组均可改善心肌病变状况,下调MyD 88蛋白及Caspase 3 mRNA表达水平(P0.05);3个治疗组间比较,各指标的差异无统计学意义(P0.05)。结论:艾灸"肺俞""心俞"可能通过下调心肌组织MyD 88蛋白及Caspase 3mRNA表达,调控免疫信号转导通路,抑制免疫炎性反应,减轻心肌损伤。     

ACUPUNCTURE-MOXIBUSTION, HEAT SHOCK PROTEIN 70 AND CYTOPROTECTION

Heat shock protein 70 (HSP70) is a kind of non-specific cytoprotective protein, and its generation can be induced by acupuncture and moxibustion. In the present paper, the authors review the protective actions of HSP70 on the heart, gastric mucosa, liver, brain tissues, kidney, etc., and the relationship among acupuncture/moxibustion, heat shock protein and the cytoprotective actions. It is worth studying the cytoprotective effect of acupuncture and moxibustion by way of the resultant generation of HSP70 in the organism.     

艾灸联合免疫肠内营养对新辅助化疗胃癌患者营养状况、免疫功能及热休克蛋白70的影响

目的观察艾灸联合免疫肠内营养(IEN)对新辅助化疗胃癌患者营养状况、免疫功能及血清热休克蛋白70(HSP70)的影响。方法选取接受3个周期新辅助化疗并行胃癌根治术的88例进展期胃癌患者,随机分为对照组和观察组,每组44例。对照组于每次化疗当天开始予IEN支持,连续7 d,观察组在对照组基础上联合艾灸治疗。比较两组患者化疗前、化疗后及术后第7天的营养指标[包括体质量、转铁蛋白(TRF)、前清蛋白(PA)、白蛋白(ALB)]、体液免疫指标(IgA、IgM、IgG)、细胞免疫指标(CD3﹢、CD4﹢、CD4﹢/CD8﹢)以及血清HSP70的变化。结果化疗后及术后第7天,两组患者体质量、TRF、PA、ALB、体液免疫和细胞免疫指标下降(P<0.05),血清HSP70水平均升高(P<0.05);观察组体质量、TRF、PA、ALB、细胞免疫指标高于对照组(P<0.05),两组体液免疫指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论艾灸联合IEN可改善患者营养状况,提高免疫细胞水平,达到保护机体免疫功能的作用。     

小檗胺对多药耐药K562/Adr细胞作用的研究

目的研究小檗胺诱导人白血病K562／Adr细胞凋亡及逆转多药耐药的作用及机理。方法采用MTT法测IC50值,流式细胞仪Annexin V FITC-PI法检测细胞凋亡发生率,PI染色法检测凋亡峰及细胞周期,同时以FCM检测Caspase-3、P-GP蛋白表达及细胞内药物积聚能力,RT-PCR法检测mdr-1基因表达。结果小檗胺能抑制人白血病K562／Adr细胞生长且呈剂量依赖关系,并能诱导细胞凋亡,使Caspase-3蛋白表达及细胞药物外排能力增加,同时降低mdr-1基因mRNA和蛋白表达水平。结论小檗胺能激活Caspase-3以诱导人白血病K562／Adr细胞凋亡,同时能通过降低mdr-1表达逆转多药耐药。     

艾灸对胃荷瘤大鼠瘤体增长的抑制作用＊

目的 观察艾灸对胃荷瘤大鼠瘤体增长的抑制作用。方法 50只健康SD大鼠，随机分为空白组、假手术组、模型组、艾灸组、红外组5组，每组10只。采用Walker-256细胞实体瘤组织移植胃部制备动物模型。成模后，艾灸组、红外组分别施以温和灸、红外线治疗20 min，每日1次，持续21 d。实验期间，观察大鼠的生存状态，记录饮食、体重等变化。治疗结束后，摘取胃部，测量肿瘤体积、计算生长抑制率。采用免疫组化法，观测肿瘤细胞增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen, PCNA）的表达，TUNEL观测肿瘤细胞凋亡。结果 实验期间，模型组动物生存状态持续变差，成模5 d后生存状态积分明显低于空白组（P < 0.01）；艾灸组动物生存状态自治疗10 d后开始改善，治疗15 d后积分明显高于模型组（P < 0.01）。治疗结束后，与模型组比较，艾灸组瘤体增长抑制率达41.89%，瘤体内出现大量坏死灶，血管较少，肿瘤细胞增殖减少、凋亡增多（P < 0.01）。与红外组比较，艾灸组在改善生存状态、抑制肿瘤体积增长、减少肿瘤细胞增殖及转移、促进肿瘤细胞凋亡上作用更明显（P < 0.05）。结论 艾灸可明显改善荷瘤大鼠的生存状态，通过减少肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞的凋亡以抑制瘤体的增长。