肠道菌群法研究延胡索、白芷配伍对延胡索乙素代谢的影响

目的 :考察大鼠肠道菌群对延胡索总碱(TA)中延胡索乙素(tetrahydropalmatine, TET)的代谢情况及白芷香豆素(coumarin,Cou)和白芷挥发油(volatile oil,VO) 两种提取物与TA 配伍对延胡索乙素在大鼠体内代谢的影响,探讨元胡、白芷有效组分配伍规律。方法:分别将TA,TA-Cou,TA-VO,TA-Cou-VO 4组药物与新鲜配制的大鼠肠内容物混悬液在37 ℃孵化,采用HPLC-FLD测定孵化不同时间大鼠肠内容物混悬液中TET的浓度。 结果: TA-Cou组明显减缓了TET的降解速度。 结论 :从代谢的角度证实了元胡白芷配伍的合理性。     

大鼠肝微粒体中钩吻素子UPLC-MS/MS法测定与酶促反应动力学研究

目的建立UPLC-MS/MS法测定大鼠肝微粒体中钩吻素子的浓度及其酶促反应动力学研究。方法优化钩吻素子与肝微粒体的反应体系,采用UPLC BEH C18色谱柱,流动相为甲醇-水(两者均含0.1%甲酸),梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量为1μL,质谱采用正离子,MRM模式检测孵育体系中钩吻素子的浓度,并应用Linewearve-Burk作图分析数据,计算酶促动力学常数。结果钩吻素子在0.5～30μM范围内线性良好,回归方程为y=0.1544x-0.0593(r=0.9939,n=5)。钩吻素子的酶促反应动力学参数Km为14.2μmol/L,Vmax为303.03pmol/(min.mg.pro)以及肝清除率CLint(Vmax/Km)为21.37μL/(min.mg.pro)。结论该方法简单、快速、可靠,适应于钩吻素子的体外代谢研究。     

延胡索、白芷炮制配伍对元胡止痛方中延胡索乙素、欧前胡素含量以及镇痛作用的影响

目的 探讨延胡索、白芷炮制配伍对元胡止痛方中延胡索乙素、欧前胡素含量以及镇痛作用的影响.方法 延胡索、白芷按不同比例炮制配伍,比较单味药及其不同配伍复方中延胡索乙素、欧前胡素含量,比较单味药及其不同配伍复方对小鼠醋酸扭体反应、小鼠热板法镇痛和缩宫素诱发大鼠痛经模型的影响.结果 延胡索经醋炙后延胡索乙素质量分数增加,配伍...     

延胡索伍用白芷对延胡索乙素药动学的影响

 目的探索中药配伍对中药复方药效成分药动学的影响。方法采用反相高效液相色谱法测定延胡索乙素的血药浓度,非房室模型拟合药动学参数,统计学处理采用t检验法。结果延胡索提取物组和延胡索白芷提取物组的主要药动学参数:ρ_max分别为(0.484±0.30)和(0.853±0.52)mg·L^-1,AUC_0-∞分别为(1.822±1.0)和(5.542±3.8)mg·h·L^-1,t_max分别为(1.06±0.83)和(1.88±1.6)h,两组药动学参数的差异具有显著性统计学意义(P<0.05)。结论延胡索与白芷配伍对延胡索乙素的药动学特征有显著影响,提示该配伍可能是导致延胡索乙素的药动学特征变化的原因。     

延胡索川芎配伍对延胡索乙素含量的动态影响

目的研究延胡索川芎配伍后对延胡索乙素含量的动态变化规律,探讨中药配伍的合理性。方法以延胡索乙素为指标,用HPLC法测定,采用正交试验方法确定提取两药配伍后延胡索乙素的最佳工艺。结果最佳工艺为川芎延胡索药粉比例1:1,甲醇—氨水(20:1),冷浸1h,提取1h。结论在最佳工艺条件下,随着延胡索和川芎总量的增大,延胡索乙素的含量有下降的趋势。     

三物黄芩汤组分(群)配伍在大鼠肝微粒体孵育模型中的相互作用

目的研究三物黄芩汤组分(群)配伍在大鼠肝微粒体孵育模型中的相互作用。方法以高丽槐素和麻黄碱为内标,HPLC法分别同时测定7个时间点(0、15、30、45、60、90、120 min)全方组分(群)配伍及单味药材部位(群)中黄芩总黄酮(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A)和苦参总生物碱(氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱)的含有量,并计算其体外代谢率。结果在全方组分(群)配伍中,黄芩苷、汉黄芩苷含有量先升高(0~0.5 h)后降低(0.5~2.0 h),黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A含有量呈升高趋势(0.5 h内更明显);各生物碱代谢稳定平缓,在20 min内达到平衡。结论三物黄芩汤中黄芩总黄酮与苦参总生物碱、地黄总多糖配伍后,可改善其生物利用度,增强其药效。     

Transcutol P对痛宁凝胶中延胡索乙素在大鼠体内的药代动力学影响

[目的]建立一种快速灵敏的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法测定大鼠血浆中延胡索乙素含量,研究含7%单乙基二甘醇油醚(Trans P)的痛宁凝胶在大鼠体内的药代动力学过程,考察其透皮吸收促进效果。[方法]采用血药浓度法,UPLC-MS/MS测定大鼠体内痛宁凝胶中延胡索乙素含量,同时与空白痛宁凝胶体内药代动力学参数进行比较。[结果]7%Trans P组的Tmax、Cmax与空白对照组相比差异具有显著性(P0.05),药时曲线下面积AUC(0→24 h)和AUC(0→∞)与空白对照组相比差异具有显著性(P0.05)。[结论]应用UPLC-MS/MS技术测定痛宁凝胶中延胡索乙素的血药浓度,药代动力学参数表明7%Trans P组促渗效果明显优于空白对照组,可进一步应用于痛宁凝胶制剂中。     

延胡索乙素对映体对人肝微粒体细胞色素P450酶抑制作用机制研究

目的考察延胡索乙素(tetrahydropalmatine,THP)对映体对人肝微粒体中主要细胞色素P450酶(cytochrome P450,CYP450)的抑制作用及其机制。方法采用Cocktail探针药物法分别考察左旋延胡索乙素[(-)-tetrahydropalmatine,(-)-THP]和右旋延胡索乙素[(+)-tetrahydropalmatine,(+)-THP]对人肝微粒体中主要I相药物代谢酶CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A4、CYP2E1和CYP2D6活性的影响;采用两步孵育法考察(-)-THP对人肝微粒体中CYP2D6的底物右美沙芬脱甲基活性的影响,研究其对CYP2D6的抑制机制;采用时间依赖性实验考察(-)-THP对CYP2D6的酶动力学参数。结果 (+)-THP对CYP450各亚型无明显抑制作用,而(-)-THP对CYP2D6的抑制作用强(IC50=0.46μmol/L);在加或不加NADPH[(+)NADPH/(-)NADPH]预孵育体系中,(-)-THP对CYP2D6的IC50值分别为2.40、0.46μmol/L,即IC50(-)NADPH/IC50(+)NADPH=5.22;(-)-THP对CYP2D6的酶动力学参数Ki和Kinact分别为0.690μmol/L和0.084 6 min-1。结论 (-)-THP对CYP2D6的抑制作用强,抑制类型为基于机制抑制(MBI),提示在临床应用中需注意(-)-THP可能引起显著的代谢性药物相互作用。     

延胡索与不同药物配伍中总生物碱含量测定的临床意义

目的测定延胡索和不同药物进行亘己伍后总生物碱的含量,以指导临床的合理用药。方法应用水煎煮法来提取延胡索、白芷与延胡索、当归与延胡索配伍后总生物碱,再以盐酸滴定法提取出其游离生物碱以及生物碱盐类,并调节其pH值,使其于碱性条件下能够用有机溶剂进行萃取,之后将其生物碱提取出并以硫酸的消耗来测定其总生物碱。对比延胡索的配伍中其总生物碱的含量差异。结果所测不同配伍中的延胡索、白芷同延胡索、以及当归同延胡索的总生物碱其含量分别为1．79mg·g-1、2．41mg·g-1、2.01mg·g-1。结论总生物碱其含量最高的为白芷同延胡索的配伍,其次为当归同延胡索的配伍,而延胡索中的总生物碱含量在三者中则最少,为指导临床的合理用药提供初步的根据。     

蛇床夫内酯在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学研究

 目的 研究蛇床夫内酯在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学。方法 以回芹内酯为内标,采用液质联用（LC/MS）的方法测定蛇床夫内酯在体外代谢中的代谢产物3″,8- 甲氧基异欧前胡内酯（M1）和5″- 羟基-8- 甲氧基异欧前胡内酯（M2）。用Linewrave-Burk作图分析数据,计算酶促动力学常数。结果 代谢物M1的V_max=1.152 5 μmol·(min·mg pro)-1, K_m=133.156 6 μmol·L-1,M2的V_max=1.630 8 μmol·(min·mg pro)-1, K_m=292.857 1 μmol·L-1。 结论 该方法简单、快速、可靠,适用于蛇床夫内酯的体外代谢研究。     

复方元胡止痛贴中延胡索、白芷乙醇回流提取工艺研究

目的优选延胡索、白芷乙醇提取工艺条件。方法以延胡索乙素的提取量为考察指标，用高效液相色谱法测定其含量，采用L9（3^4）正交试验优选提取工艺。结果优选工艺为：以3倍量75％乙醇提取3次，每次提取1．5h。结论优选的提取工艺合理，转移率高。     

白芷挥发油镇痛、镇静作用实验研究

目的 观察白芷挥发油镇痛、镇静作用.方法 选择雌雄小鼠各半,随机分成对照组,吗啡组,白芷香豆素低剂量组（0.05mL/kg）、中剂量组（0.1mL/kg）、高剂量组（0.2mL/kg）,白芷挥发油低剂量组（0.05mL/kg）、中剂量组（0.1mL/kg）、高剂量组（0.2mL/kg）,采用热板法、辐射热刺激法、甩尾法、扭体法观察白芷挥发油的镇痛、镇静作用.结果 白芷挥发油各组起效时间更快,作用时间更长,扭体次数更少,且中剂量组（0.1mL/kg）镇痛、镇静效果明显好于低剂量组与高剂量组.结论 白芷挥发油镇痛、镇静作用明显,作用机制有待更深入的研究.     

An Exploration in the Potential Substance Basis and Mechanism of Chuanxiong Rhizoma and Angelicae Dahuricae Radix on Analgesia Based on Network Pharmacology and Molecular Docking

Objective: The objective was to study the potential substance basis and action mechanism of Chuanxiong Rhizoma(CX) and Angelicae Dahuricae Radix(AD) on analgesia through network pharmacology and molecular docking. Materials and Methods: The active components and targets of CX and AD and pain-related genes were retrieved through Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform(TCMSP) and GeneCards database. Then, the co-action targets were found, protein–protein interaction network was constructed by the String database. The Cytoscape 3.7.1 was used to construct "CX-AD-active components-pain" network. Further enrichment analysis of Gene Ontology(GO) and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG) was carried out to predict its mechanism of action, the top four active components in the network were docked with the targets. Results: There are 26 compounds, 45 targets in the network. Among them,(Z)-ligustilide and beta-sitosterol, respectively, have more potential targets in CX and AD, and prostaglandin-endoperoxide synthase(PTGS2), PTGS1 have more ligands. GO analysis shows that molecular functions of CX and AD mainly performed through the G protein-coupled amine receptor activity, adrenergic receptor activity, and catecholamine binding. KEGG analysis indicates that they could exert analgesic effect on the pathways of regulating neuroactive ligand-receptor interaction, serotonergic synapse, and cGMP-PKG signaling pathway. Molecular docking results show that the active compounds are highly compatible with the structure of the protein receptor, and they interact through the hydrogen bond and π–π bond between the ligand and the active site residues. Conclusions: Through network pharmacology and molecular docking, this study preliminarily revealed the main active components, targets, and potential regulation network of CX and AD, providing a reference for the subsequent experimental research.     

川芎-白芷药对不同配比不同剂型对 偏头痛动物模型的影响

目的:观察川芎-白芷药对不同配比、不同剂型对偏头痛动物模型的影响。方法:利用硝酸甘油(10 mg.kg-1)ip一次造成大鼠偏头痛模型,sc利血平(0.4 mg.kg-1)7 d造成小鼠偏头痛模型,川芎-白芷药对3.5 g.kg-1.d-1进行治疗,对模型动物脑组织中5-羟色胺(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)、降钙素基因相关肽(CGRP)含量进行检测。结果:偏头痛大鼠模型组脑组织中5-HT含量(720.44±92.1)ng.g-1,CGRP含量(618.32±139.3)pg.g-1;与模型组比较,川芎-白芷药对不同配比、不同剂型3.5 g.kg-1.d-1可升高偏头痛大鼠脑组织中5-HT 48.41%～73.18%,降低头痛大鼠脑组织中CGRP 38.02%～50.02%(P<0.01);与小鼠偏头痛模型组比较,川芎-白芷药对不同配比、不同剂型5 g.kg-1.d-1可升高偏头痛小鼠脑组织中5-HT 36.60%～69.52%(P<0.05,P<0.01)。结论:川芎-白芷药对不同配比、不同剂型主要是通过影响单胺类递质的释放,缓解神经源性炎症而改善偏头痛的症状。     

基于药效成分丹酚酸B和阿魏酸在大鼠血浆的药代动力学研究丹参与川芎配伍

通过研究丹参和川芎的药效成分丹酚酸B与阿魏酸在大鼠体内的药代动力学规律,进而探讨丹参和川芎配伍机制.将大鼠随机分为3组尾静脉推注给药:丹参纯化物组(以丹酚酸B计给药50 mg·kg-1)、川芎纯化物组(以阿魏酸计给药0.5mg·kg-1)、丹参与川芎纯化物联合用药组(以阿魏酸计给药0.5mg.kg-1+丹酚酸B计给药50 mg·kg-1);于不同时间点采集血样,血浆经乙酸乙酯液液萃取纯化;以氯霉素为内标,采用超高效液相色谱(UPLC)测定血浆中丹酚酸B和阿魏酸的血药浓度;利用WinNonlin 6.2软件计算动力学参数,并用SPSS 19.0统计软件进行分析.建立包括线性方程、稳定性、重复性、精密度及回收率等在内的测定大鼠血浆中阿魏酸与丹酚酸B的UPLC分析方法,所建立的样品处理和分析方法均稳定可靠;所得到的主要药代动力学参数如药时曲线下面积(AUC)、平均滞留时间(MRT)、半衰期(t1/2)等均有显著性差异.实验结果表明丹参和川芎配伍能显著影响药效成分在大鼠体内的药动学过程,2药配伍可以促进丹酚酸B分布更广泛、消除减缓、体内作用时间延长;能促使阿魏酸的血药浓度提高,体内清除加快.     

石膏知母人参配伍对人参皂苷Rb1含量变化的影响

目的研究知母人参与不同比例石膏配伍后人参皂苷Rb1含量变化。方法采用C18-ODS柱(4.6mm×150 mm,5μm),以乙腈-水系统(30∶70)洗脱,流速1.0 mL/m in,检测波长203 nm。结果知母人参加入不同比例的石膏后,人参皂苷Rb1含量发生变化。结论一定比例条件下,石膏可增加人参皂苷Rb1含量。     

表小檗碱体外大鼠肝微粒体孵育代谢产物鉴定及对CYP2D6酶活性的抑制作用

表小檗碱是黄连中一种主要的异喹啉类生物碱,具有多种重要的药理活性。该实验利用体外大鼠肝微粒体孵育体系,采用LC-MS/MS分析鉴定表小檗碱体外大鼠肝微粒体(RLM)共孵育后的Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物,采用cocktail探针药物法,通过同时测定美托洛尔、氨苯砜、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲的含量变化,评价不同浓度表小檗碱对大鼠肝微粒体CYP2D6,CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9亚型活性的影响。结果表明,表小檗碱在大鼠肝脏可发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢,从表小檗碱的大鼠体外肝微粒体温孵体系中鉴定出2个Ⅰ相代谢产物和3个Ⅱ相代谢产物;表小檗碱对肝脏CYP2D6酶呈显著抑制作用,半数抑制浓度IC50为35.22μmol·L-1,而对CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9酶的活性没有明显的影响,提示表小檗碱可能存在基于CYP2D6酶的药物相互作用。该研究可为合理开发利用表小檗碱提供实验依据。     

从AMPK/mTOR通路探讨人参-三七-川芎提取物对糖尿病小鼠心脏老化的保护作用机制

目的:从AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的活化及心脏病理形态学变化、相关衰老蛋白的改变,探讨人参-三七-川芎提取物(GNC)对糖尿病小鼠心脏老化的保护作用机制。方法:C57BL/6雄性小鼠,SPF级,随机分为正常组和高糖组。高糖组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)联合喂食高脂饲料,造模成功后再次随机分为模型组,GNC低剂量组(0. 819 g·kg~(-1)),GNC高剂量组(1. 638 g·kg~(-1))及二甲双胍组(150 mg·kg~(-1))。每天1次,灌胃给药,连续9周,监测血糖变化。4周龄雄性C57BL/6小鼠正常喂养1周,为青年组。观察小鼠一般情况,苏木素-伊红(HE)染色结合透射电镜(TEM)观察小鼠心脏病理形态学变化,冯库萨(Von Kossa)染色判断小鼠心脏微血管钙盐沉积程度,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠心脏组织中AMPK/mTOR信号通路活化状态,以及衰老相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2),抑癌基因p53(p53),磷酸化抑癌基因p53(p-p53)表达。结果:与正常组比较,模型组血糖显著升高(P 0. 01);与模型组比较,各给药组血糖明显下降(P 0. 05,P 0. 01)。HE,TEM,Von Kossa 3个病理形态学实验结果显示:与正常组比较,模型组小鼠心肌细胞肥大,心肌纤维排列紊乱、灶性溶解坏死,线粒体肿胀、变性、嵴断裂、空泡变,心脏微血管结构紊乱、染色不均匀、中内膜有大量钙盐沉积;与模型组比较,各给药组小鼠病理形态学变化均有不同程度的改善。与正常组比较,模型组MMP-2,p53和p-p53蛋白表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01),p-肝激酶B1 (LKB1)/LKB1,p-AMPK/AMPK蛋白明显降低(P 0. 05,P 0. 01),p-mTOR/mTOR,p-核糖体蛋白S6激酶p70S6K/p70S6k蛋白显著升高(P 0. 01);与模型组比较,各给药组MMP-2,p53和p-p53蛋白表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01),p-LKB1/LKB1,p-AMPK/AMPK蛋白明显升高(P 0. 05,P 0. 01),p-mTOR/mTOR,p-p70S6k/p70S6k蛋白明显降低(P 0. 05,P 0. 01)。结论:STZ联合高脂饲料能够诱导小鼠心脏老化,GNC能够改善糖尿病小鼠心脏老化,其作用机制可能与调控AMPK/mTOR通路相关蛋白表达有关。     

芪归药对对气虚血瘀型早期糖尿病肾病患者血清NO和NOS的影响

目的:观察早期糖尿病肾病(DN)患者血清一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)水平,探讨黄芪与当归不同配伍比例治疗早期DN的作用机制,确定最佳量效关系。方法:选取气虚血瘀型DN患者42例,随机分为7组,包括对照组、小剂量芪归5∶1组、大剂量芪归5∶1组、小剂量芪归3∶1组、大剂量芪归3∶1组、小剂量芪归3∶2组、大剂量芪归3∶2组,每组各6例。对照组给予常规治疗,各芪归药对组在常规治疗基础上加服不同剂量、不同配比的黄芪、当归,各组均治疗90 d。治疗后,比较各组血清NO、NOS水平,肝肾功能及不良反应情况。结果:治疗后,与对照组比较,各芪归药对组血清NO、NOS水平均下降,其中以大剂量芪归3∶2组下降最为明显,差异有统计学意义(P0.05);且相同配比情况下,大剂量组的血清NO、NOS水平明显低于小剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。各组治疗前后肝肾功能均未见明显异常,治疗过程中均未出现不良反应。结论:黄芪当归3∶2配比能更好地改善早期DN患者血清NO和NOS水平,该配比具有良好的临床安全性,可用于治疗早期DN。     

基于GC-TOF-MS研究威灵仙总皂苷对佐剂性关节炎大鼠血清代谢谱的影响

观察威灵仙总皂苷(TSCR)对佐剂性关节炎(AA)大鼠血清代谢谱的变化,探讨其治疗AA可能的作用机制。采用弗氏完全佐剂诱导AA大鼠模型,观察大鼠的组织病理学变化。利用气相色谱-飞行时间质谱(GC-TOF-MS)结合主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),对正常组、AA模型组和TSCR组3组之间的代谢谱进行分析,通过变量重要性投影(VIP)1结合P0.05筛选血清中潜在的生物标志物。与正常组相比,模型组大鼠血清中发现并鉴定出天冬氨酸、肌醇、苯乙醛等17个潜在生物标志物;与模型组相比,给予威灵仙总皂苷治疗16 d后,上述潜在生物标志物均有向正常水平回归的趋势。代谢组学分析揭示威灵仙总皂苷对AA大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与调节脂代谢、氨基酸代谢和能量代谢等有关。