膜截流分子量在新型生物人工肝免疫安全性中的作用研究

目的 探讨膜截流分子量对新型生物人工肝(bioartificial liver,BAL)支持系统免疫安全性的影响.方法 应用D氨基半乳糖静脉滴注比格犬建立肝功能衰竭模型.急性肝功能衰竭犬根据BAL隔离膜截流分子量的大小分为两组:A组:200 kD组;B组:1200 kD组.两组均接受新型2次BAL治疗,每次6h.观察各组体内IgG、IgM、50％补体溶血单位(CH50)变化及反应器内抗体漏过情况.结果 在第一次BAL治疗后两组的IgG和IgM水平均没有发生明显的变化.在第2次治疗后第7天,1200 kD组的IgG和IgM水平明显升高,200 kD组IgG和IgM水平仍未出现明显上升或下降.在第一次BAL治疗后,两组CH50都出现暂时性的下降,在治疗后1h达到最低值,而后缓步上升,在7d后恢复至治疗前水平.反应器内培养液中IgG、IgM及CH50检测结果显示,1200 kD组在治疗结束后IgG、IgM及CH50含量显著高于200 kD组.结论 膜截流分子量可能是影响BAL异种免疫排斥的重要因素之一.     

采用纳米支架材料的新型多层平板型生物人工肝的免疫安全性研究

目的：探讨新型生物人工肝（BAL）系统的免疫安全性。 方法：采用自制纳米支架材料的新型多层平板型生物反应器与猪肝细胞-骨髓间充质干细胞共培养体系构建新型的BAL系统。正常比格犬接受新型BAL体外循环灌注6 h,期间定时收集BAL系统中的血液及培养液。ELISA法检测培养液及术前、术中、术后血浆中IgG,IgM及CH50（C3）水平;检测外循环前后的血常规情况;免疫荧光法检测术后反应器内细胞材料表面以及犬心、肝、脾、肺、肾等器官免疫蛋白的沉积情况。 结果：经过6 h的体外循环灌注,犬体内IgG,IgM免疫抗体水平术中、术后均未出现明显的升高或下降,而术中补体CH50水平出现一过性下降,但很快恢复至正常水平,且并未发生严重的过敏反应及排斥反应,反应器内培养液中检出极少量的IgG和CH50;血常规检测显示,术后白细胞、血小板及淋巴细胞未出现明显的升高或降低;术后反应器内细胞材料表面仅有微量的IgG与C3沉积,各重要脏器均未检测到IgG,IgM及补体C3的沉积。 结论：新型BAL系统具有良好的免疫安全性。     

猪内源性逆转录病毒透过生物人工肝的影响因素

目的 病毒安全性是猪源性生物人工肝(BAL)不可忽略的安全问题.本研究旨在探讨影响BAL中猪内源性逆转录病毒(PERV)透过的因素.方法 构建双循环的新型猪源性BAL.两循环间采用膜孔径为10 nm、20 nm、30 nm和35 nm的血浆成分分离柱以及500 nm膜孔径的血浆过滤柱分隔两循环.反应器内填充共培养的猪肝细胞-骨髓间充质肝细胞或原代猪肝细胞并连续循环72 h.每12 h抽取内、外循环内培养液检测PERV RNA、逆转录酶(RT)活性以及其体外感染性.结果 血浆过滤柱组中,内外循环内PERV检测结果完全相同,提示500 nm血浆滤过柱对PERV并无阻隔作用.在血浆成分交换柱各组中,各时间点内循环中均能检出RNA和RT活性,但是外循环中并未检出RT活性,而且随着膜孔径减小,RNA的检出时间逐渐延迟,且内循环RNA水平逐渐增加.各培养液均未发现能够体外感染HEK293细胞.结论 膜孔径、循环时间以及内循环病毒浓度是影响BAL中PERV透过的主要原因.     

肝细胞与非实质细胞体外共培养的研究进展

近年来,生物人工肝(bioartificial liver,BAL.)支持系统已成为延长急性肝功能衰竭患者生命,并向肝移植手术过渡的一种替代性治疗手段.     

生物人工肝的研究进展

肝移植是治疗急慢性肝功能衰竭最有效的方法,但是,由于供肝缺乏,必需寻求终未性肝病替代疗法.其中主要方法之一是体外生物人工肝支持系统,简称生物人工肝(bioartificial liver, BAL),发展至今已有40多年.临床试验证明BAL能促进肝功能衰竭病人的恢复,或过渡到肝移植.生物反应器是BAL的核心部件,生物反应器设计的主要目的在于保持肝细胞活力和功能,且不妨碍肝细胞营养及代谢产物的交换,同时还能起到治疗作用.细胞材料是BAL治疗基础,维持细胞活率和功能对BAL功效有决定性作用.本文就生物人工肝装置在实验和临床试验中的研究进展作一综述.……     

异种肝细胞移植缓解大鼠急性肝功能衰竭及其排斥反应观察

目的探讨异种肝细胞移植对大鼠急性肝功能衰竭防治效果及其免疫排斥反应。方法将异种豚鼠肝细胞,90%肝除术前1d植入大鼠脾脏内。观察受试大鼠存活时间,及切肝术后24h血生化改变。另外观察植入肝细胞被排斥情况及受体CH50、异种抗体IgG、IgM水平变化。结果(1)中位存活时间,对照组为21h,同种组为56h,异种组为40h。同种组存活时间较对照组延长(P<0·01),异种组亦延长(P<0·05)。(2)异种组血糖和凝血酶原时间改善较明显(P<0·05),同种组谷丙转氨酶、总胆红素、血糖、凝血酶原时间都有明显改善(P<0·05或P<0·01)。(3)受体CH50和异种抗体IgM水平下降与植入异种肝细胞排斥过程同步。结论异种肝细胞移植对大鼠急性肝功能衰竭有防治作用,补体和异种抗体IgM与排斥反应关系密切。     

猪源性人工肝支持系统的安全性问题

急性肝功能衰竭是一类短期内病死率极高的综合征候群，原位肝移植是目前最为有效的治疗手段。遗憾的是供体的日益匮乏迫使肝移植无法作为急性肝功能衰竭的一线治疗手段，体外人工肝支持系统就此应运而生，为改善急性肝衰竭患者症状、等待供肝向肝移植过渡发挥桥梁作用。但BAL中的异种细胞材料存在异种免疫排斥反应及动物源性病毒感染的潜在风险，本文将对BAL可能引起的异种免疫排斥反应和病毒感染进行逐一阐述介绍，并对未来趋势作一展望。

     

人工生物肝治疗重症急性肝衰(英)

临床证明原位肝移植是治疗重症急性肝衰的唯一有效方法．但许多病人在得到器官以前即死亡。因此，这些病人在获取器官之前迫切需要一种肝支持系统以帮助维持病人的生命和神经功能。为治疗重症急性肝衰，作者根据血浆灌注的原理．通过一循环式中空纤维管，将猪肝细胞用基质固定种植于管内，制备了人工生物肝脏(BAL)本文总结7例重症急性肝衰11例次BAL作为肝移植前过渡治疗的初步临床经验。     

GTKO/hCD55基因工程猪到人异种移植CDC技术的探讨

目的探讨和比较人CD55(hCD55)转基因猪外周血单个核细胞(PBMC)表面表达的hCD55对兔补体和人补体依赖的细胞毒(CDC)的抑制效果。方法选择来自同一品系的3头α1, 3-半乳糖转移酶基因敲除猪(GTKO)。其中两头猪转入了hCD55基因。根据三头猪PBMC表面hCD55表达水平, 分为GTKO、hCD55低表达(GTKO/hCD55Low)和hCD55高表达(GTKO/hCD55High)猪。将3头猪的PBMC分别与灭活补体的混合人血清(20例份)孵育后, 流式细胞仪检测兔补体或人补体依赖的细胞毒以及猪PBMC的抗体(IgM和IgG)结合水平。结果 3头猪PBMC与人血清异种抗体的结合无明显差异。兔补体和人补体对GTKO猪PBMC的细胞毒均较高, 分别为98.97%±0.50%和82.73%±3.20%。与GTKO组相比, 低表达hCD55对兔补体依赖的细胞毒无明显抑制作用97.07%±2.25%比98.9%±0.50%, P=0.2267), 而高表达hCD55对兔补体依赖的细胞毒有轻度的抑制作用(81.70%±5.86%比98.9%±0.50%, P=0.0355)。不...     

人血清中非Gal异种抗体检测方法的探讨

目的  探讨人血清中抗非半乳糖（Gal）异种抗原抗体的最佳检测条件。方法  选用α-1, 3半乳糖基转移酶基因敲除（GTKO）五指山小型猪的外周血单核细胞（PBMC) 作为靶细胞,与健康人血清混合,在不同血清浓度（4.8%、16.7%、100%）和孵育时间（0.5、1.0、2.0、3.0、6.0 h）条件下,利用流式细胞仪检测GTKO猪的PBMC上结合IgM和IgG的水平。结果  在16.7%血清浓度下,孵育时间从0.5 h延长至3.0 h,能显著提高非Gal IgM结合PBMC的水平（P < 0.01）,而IgG水平的提高则差异无统计学意义（P > 0.05）。提高血清浓度也可提高非Gal IgM的结合水平,采用100%的血清浓度孵育3 h,IgM结合PBMC水平最高且有统计学意义（P < 0.01）。采用100%的血清孵育6 h,IgG结合水平升高有统计学意义（P < 0.05）。延长孵育时间和提高血清浓度不会影响PBMC的活力。结论  检测人血清中抗非Gal异种抗原抗体的最佳条件为每1×10⁵个猪PBMC,采用100%人血清浓度孵育3 h检测IgM水平,或加100%人血清浓度孵育6 h检测IgG水平。这一条件的优化有助于筛选非Gal表达抗原低表达的供体猪。     

原位肝移植治疗多囊肝病的临床分析

目的 探讨肝移植治疗多囊肝病中的效果和经验.方法 回顾分析我中心2000年1月至2008年12月9例多囊肝行肝移植的病例,对患者术前MELD评分、肝肾功能,术中输血、失血,手术时间、无肝期以及术后并发症、存活时间等方面进行总结.结果 9例患者术前MELD平均(16±9)分,5例同时患有多囊肾,除1例出现肝硬化外其他8例无明显肝功能损害但因明显的压迫症状而严重影响生活质量,3例有肾功能异常需要透析.术中平均输血(1800±1600)ml,失血(3500±2600)ml,平均手术时间(7.2±1.5)h,无肝期(52.7±15.4)min.术后3例分别因腹腔出血、急性排斥反应及循环衰竭导致多器官衰竭而早期死亡;6例患者均存活1年以上,现最长存活时间8年.本组1年和2年存活率分别为77.8%和66.7%.结论 肝移植是治疗多囊肝疾病的有效方法,比较其他的肝移植受者手术时间长,失血量较大,手术难度较高,但预后良好.     

肝硬化失代偿期并发意外肝癌患者的肝移植及其临床特点

目的探讨肝硬化失代偿期并发意外肝癌患者的肝移植效果及其临床特点。方法11例肝硬化失代偿期患者接受原位肝移植,在术后的病肝病理检查中意外发现癌灶(称之为"意外肝癌"),其原发病,8例为乙型肝炎后肝硬化,丙型肝炎后肝硬化、酒精性肝硬化和原发性硬化性胆管炎各1例。11例术后采用他克莫司、霉酚酸酯及甲泼尼龙预防排斥反应,3个月后撤除霉酚酸酯,6个月后撤除甲泼尼龙。病肝沿水平面作间隔1 cm连续平行切片,对于直径大于1 cm或有灰白色结节者,完整取材。结果11例中,术前仅4例(36.4%,4/11)的甲胎蛋白(AFP)水平超过正常值。除1例肿瘤为多发外,其余均为单发,肿瘤直径最大为2.0 cm,平均直径为1.18 cm;肿瘤TNM分期,Ⅰ期占72.7%,Ⅲ期占27.3%;存在微血管侵犯2例,包膜完整、无血管及淋巴侵犯2例;病理诊断为胆管细胞癌1例,肝细胞癌10例。术后随访12～50个月,1例因肿瘤复发于术后10个月死亡。结论意外肝癌的病理学特点为肿瘤分期早,多为单发,组织分化程度高,肝移植后的1年存活率与良性肝病患者肝移植类似,肿瘤复发率低。     

体外肝切除自体肝移植在复杂肝切除中的应用

目的 评估体外肝切除自体肝移植在巨大肝癌患者复杂肝切除中的临床价值.方法 回顾性分析2008年1月至2010年5月首都医科大学附属北京朝阳医院收治的4例巨大原发性肝癌患者的临床资料.肿瘤最大直径10 ～ 18 cm,病灶不同程度地累及了第一、二、三肝门.患者难以耐受常规肝切除,均行体外肝切除自体肝移植.结果 4例患者顺利完成手术,手术时间690 ～840 min,无肝期250～300 min,术中出血量400～1400 ml,术中无肝期未行门、腔静脉转流术.4例患者在体外肝切除后行下腔静脉或肝静脉及门静脉修复成型,均应用成型异体血管来延长剩余肝脏肝上腔静脉以利于腔静脉吻合及第一肝门的重建.本组患者1例术后肝功能正常,1例出现腹腔出血再次手术止血,1例发生肝功能不全,1例出现肝肾功能不全于术后5d放弃治疗而死亡.3例术后生存的患者术后1～2个月间剩余肝脏均发生不同程度的代偿增生.术后生存的3例患者中2例分别于术后8、9个月发现肺部多发转移瘤,分别于术后13个月及15个月死亡.随访截至2012年4月,1例患者无瘤生存37个月.结论 体外肝切除自体肝移植为复杂肝切除的巨大肝癌患者提供了技术上的可行性,术后肝功能代偿不全及近期肿瘤的复发是限制该手术发展的主要问题.     

肝脏移植在治疗肝脏恶性肿瘤中的作用

目的 探讨我国目前原位肝脏移植在治疗肝脏恶性肿瘤中的作用以及围手术期的处理，进一步提高肝脏移植治疗肝脏恶性肿瘤的疗效。方法 18例肝脏恶性肿瘤肝脏移植病人术后采用全身化疗复发转移灶采用手术切除或介入化疗。结果 肝脏移植术后甲胎蛋白短期内降为正常者6例，虽有下降但未降至正常者2例。术后肝癌肝内复发4例次，肺转移3例次，骨转移1例次，肿瘤复发多在术后6－12个月。结论 （1）小肝癌、胆管细胞癌可行肝脏移植，中晚期肝癌行肝脏移植需综合考虑；（2）肿瘤复发转移灶采用手术切除或介入化疗。     

原发性肝癌与非肝癌病人行肝移植治疗的比较研究

目的：探讨我国目前肝癌与非肝癌病人行肝移植治疗的风险及长期生存效果。方法：回顾性总结21例晚期肝癌病人行肝移植手术治疗风险及长期生存情况，并与同期所行另外19例非肝癌病人的肝移植进行比较。结果：晚期肝癌病人的手术前凝血状态好于因其它非肝癌原因而接受肝移植的病人，与此相应的手术中出血量、需要输血量、术中输液总量均少于非肝癌病人，手术中因出血而导致的低血压时间短，手术后较恢复顺利，围手术期病死率低。虽然肿瘤复发所致的远期死亡率明显高于非肝癌病人，但是，总生存率与非肝癌病人无明显区别，部分病人可长期无瘤生存。结论：现阶段肝移植仍是失去根治性切除机会的肝癌病人的有效治疗手段，术后部分病人有无瘤长期生存的可能性。     

两种肝再生模型肝切除术后肝再生指数和肝再生度的实验研究

【摘要】目的　探讨大鼠肝细胞增殖介导肝再生和卵圆细胞增殖介导肝再生两种不同大鼠肝再生模型肝切除术后肝再生指数和肝再生度变化的情况。方法　SD 大鼠随机分为2组: ①肝细胞增殖介导肝再生模型组(PH)②卵圆细胞增殖介导肝再生模型组(2AAF/PH) ,计算两组模型肝切除术后4、8、12、16、20天残肝肝再生度及肝再生指数。结果　两组肝再生度、肝再生指数均在第4天明显升高,12天左右达到高峰,超过再生总量的2/3以上,至20天基本达到原肝重。在4、8、12天同一时间点内,PH组肝再生度比2AAF/PH组高（P<0.05）,而到16天时,2AAF/PH组肝再生度则比PH组高（P<0.05）。在4、8天同一时间点内,PH组肝再生指数比2AAF/PH组高（P<0.05）。在12、16、20天同一时间点内,两组肝再生指数无显著性差异(P>0.05)。结论　肝再生度与肝再生指数是评价肝再生质量变化较直观和准确的指标,肝再生度在反映肝再生规律方面要比肝再生指数更准确。     

急诊右半肝活体肝移植治疗急性肝衰竭

目的 探讨急诊右半肝活体肝移植（living donor liver transplantation,LDLT）治疗急性肝衰竭（acute liver failure,ALF）的价值。方法 同顾性分析我院自2006年11月至2007年2月6例接受急诊LDLT的ALF患者临床资料,评价转归和疗效。结果 全部供体术后均未发生严重并发症或死亡,3周后恢复日常生活。全部受体均接受不含肝中静脉的右半肝,手术顺利,术后48h内苏醒,未发生神经系统并发症。与术前水平相比,血氨术后第1天明显下降至（53.3±21.6）μmol/L （P〈0.05）;总胆红素（TB）术后第1天即可恢复至（212±130）μmol/L（P〈0.05）,以后呈继续下降趋势;凝血酶原时间（PT）术后1周内即可降至正常水平（13±1）s（P〈0.05）;国际标准化比值（INR）变化与PT类似;丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）术后1周内持续下降,至术后第7天降至较低水平。1例患者术后第10天发生急性排斥反应经激素冲击疗法治愈,其余5例均未发生严重并发症。全组受体均于术后1月内康复出院。结论 急诊右半肝LDLT能有效治疗ALF。     

原位肝移植加人工肝支持疗法治疗暴发性肝功能衰竭

目的 探讨原位肝移植加入人工肝支持疗法对暴发性肝功能衰竭的疗效及非生物型人工肝支持系统在暴发性肝功能衰竭肝移植术前准备中的作用。方法 本组7例暴发性肝功能衰竭患者,均有不同程度的肝昏迷,黄疸,腹水,肝功能损害,出血倾向,在等待供肝的过程中分别接受2-20次非生物型人工肝支持疗法,供肝到达后行原位肝移植术,结果 人工肝支持治疗后患者血清胆红素明显下降,腹水明显减少,部分病人肝性脑病有所好转,7例均顺利行肝移植,5例存活3-290个月,其中3例已存活1年半以上,并已恢复正常工作,2例术前有肝肾综合征者,术后3d死亡,其中1例并发急性重症胰腺炎。结论 原位肝移植加入工肝支持疗法是暴发性肝功能衰竭的有效方法,术前人工肝支持可作为暴发性肝功能衰竭等待供肝期间的桥梁,并可改善病情减少肝移植的危险因素。     

肝脏恶性肿瘤肝移植术后肿瘤复发的临床研究

目的 总结肝脏恶性肿瘤患者行肝移植术后肿瘤复发的临床特点,探讨术后复查的规范方法和治疗复发肿瘤的措施.方法 回顾性分析215例原位肝移植患者的临床资料,分析其中81例复发患者的肿瘤复发时间、复发部位和治疗效果.结果 81例患者的随访时间为6～108个月.首次发现肿瘤复发的时间为肝移植术后3～20个月,常见的复发部位为肺、腹腔种植或淋巴结转移、移植肝内复发和骨转移.复发肿瘤的治疗以局部治疗为主,包括肺转移瘤切除术6例次、伽马刀治疗74例次;腹盆腔转移癌切除术10例次,腹腔淋巴结伽马刀治疗8例次;肝转移癌切除术6例次、消融治疗5例次、伽马刀治疗15例次、TACE 33例次,二次肝移植3例次;骨转移瘤切除术15例、伽马刀治疗16例次以及病理性骨折内固定术3例;脑转移瘤伽马刀治疗4例次.本组患者治愈3例,带瘤生存6例,已存活21～56个月,中位生存时间为39个月.死亡72例,中位生存时间为15个月.结论 肝移植术后对恶性肿瘤患者要进行有针对性的规范检查、积极治疗复发肿瘤,尽量延长患者的生存时间.     

再次肝移植治疗首次肝移植术后肝癌肝内复发的效果分析

目的 探讨肝癌肝移植术后复发肝癌的病理特点及再次肝移植治疗的意义及其预后.方法 回顾性分析肝移植术后21例肝癌复发患者的临床资料,其中9例接受再次肝移植治疗,12例行姑息治疗.所有患者原发病均为乙型肝炎后肝硬化合并肝癌,肝移植术后肿瘤均为肝内复发,无法局部切除.结果 9例患者首次和再次肝移植时肿瘤病理分析,肿瘤均为肝细胞肝癌,最大肿瘤直径分别平均为6.2 cm和4.8 cm,多发肿瘤者分别占67％和89％,有微血管侵犯者分别占100％和56％,肿瘤分化为Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级者分别为33％、67％、0和22％、22％、56％,复发肝脏肿瘤的平均最大直径和分化程度与原发肝脏肿瘤比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).首次肝移植术后再次移植组患者无瘤存活时间中位数为15.0个月,再次肝移植术后无瘤存活时间中位数为2.5个月,再次移植术后存活时间中位数为5.8个月,总体存活时间中位数为21.8个月;姑息治疗组受者肝移植术后无瘤存活时间中位数为13.0个月,总体存活时间中位数为17.6个月;再次移植组和姑息治疗组术后1、2、3年累积存活率分别为89％、44％、33％和91％、45％、9％,两组间存活率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血管侵犯为肝癌复发的高危因素;复发肿瘤分化程度更低;首次肝移植术后肝癌肝内复发可能是术前和术中肿瘤全身播散的早期临床特点和局部表现,不建议再次肝移植治疗肝癌肝移植术后肝癌肝内复发.