胰腺癌细胞Panc-1中AKT2基因表达对吉西他滨敏感性的影响

目的 探讨胰腺癌细胞Panc-1中AKT2基因表达对吉西他滨敏感性的影响.方法 体外将AKT2特异性shRNA表达载体pAKT2-shRNA转染胰癌细胞株Panc-1.应用RT-PCR、Western blot检测转染shRNA后Panc-1细胞AKT2基因和蛋白的表达变化,应用MTT法检测干扰AKT2后Panc-1细胞对吉西他滨敏感性的变化.结果 转染pAKT2-shRNA后Panc-1细胞AKT2基因和蛋白的表达水平明显下降;吉西他滨对Panc-1细胞的半数抑制量从(1.96±0.22) mg/L降到(0.24±0.03)mg/L,Panc-1细胞对吉西他滨的敏感性明显增加.结论 用pAKT2-shRNA抑制AKT2基因表达,能增加人胰癌细胞株Panc-1对吉西他滨的敏感性.     

Survivin反义寡核苷酸诱导胰腺癌细胞凋亡并增加吉西他滨的化疗敏感性

目的探讨凋亡抑制蛋白Survivin反义寡核苷酸转染对胰腺癌BxPC 3细胞系SurvivinmRNA的表达及细胞增殖、凋亡和对吉西他滨化疗敏感性的影响。方法用脂质体瞬时转染法介导Survivin反义硫代磷酸寡核苷酸处理胰腺癌BxPC 3细胞后用RT PCR检测SurvivinmRNA的表达 ,四唑氮蓝法检测细胞的相对存活率 ,用流式细胞仪和透射电镜检测其对BxPC 3细胞的凋亡诱导作用。结果Survivin反义寡核苷酸作用于BxPC 3细胞后 ,细胞的存活率呈剂量和时间依赖性 ,其中 2 4h的IC50 值为 4 0 0nmol/L ,在此浓度和时间下 ,Survivin反义寡核苷酸可明显降低SurvivinmR NA的表达 ,细胞凋亡率为 (2 5± 3) %。在透射电镜下BxPC 3细胞可呈凋亡的早期改变。Survivin反义寡核苷酸和吉西他滨的联合实验组与单独应用吉西他滨组相比 ,在 4 8h和 72h可使细胞的存活率分别降低 2 76和 4 5 8倍。结论Survivin反义寡核苷酸可诱导胰腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖并增强吉西他滨的化疗敏感性。     

胆囊癌细胞对吉西他滨化疗敏感性的试验研究

目的 探寻胆囊癌细胞对吉西他滨化疗敏感的潜在分子标记物.方法 将两株对吉西他滨敏感性具有较大差异的胆囊癌细胞进行DNA微阵列检测,并进行精巧传导通路分析(IPA),最后采用免疫荧光定量PCR与蛋白印迹实验进一步验证.结果 通过对吉西他滨敏感性截然相反的两株胆囊癌细胞进行DNA微阵列分析,发现表达水平差值在4倍以上的基因有633个,其中PI3K/AKT信号在SGC-996细胞株中处于抑制状态,但其下游信号p70S6K处于激活状态;对有差异的16个基因进行RT-PCR检测,与DNA微阵列检测相比,基因表达趋势基本一致;RT-PCR与蛋白印迹实验表明AKT/ERK信号通路在对吉西他滨不敏感的胆囊癌细胞中处于抑制状态,与精巧传导通路分析结果一致.结论 对吉西他滨敏感性不同的胆囊癌细胞系GBC-SD与SGC-996之间存在着基因表达差异,其中AKT/ERK等可能作为胆囊癌对吉西他滨敏感的预测指标.     

Smac/DIABLO诱导胰腺癌细胞凋亡并增加对TRAIL及吉西他滨化疗的敏感性

目的 探讨外源性Smac/DIABLO对人胰腺癌SW1990细胞生物学特性和对TRAIL及吉西他滨化疗敏感性的影响. 方法 利用脂质体2000介导Smac/DIABLO基因转染胰腺癌SW1990细胞获得细胞SW1990/Smac,转染空载体为对照组(SW1990/neo);在不同浓度和时间下以肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和吉西他滨处理2组细胞株并分为TRAIL组、吉西他滨组和联合组.MTT法检测细胞株的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及凋亡细胞形态,Western blot检测凋亡相关蛋白Smac/DIABLO、抑制凋亡蛋白XIAP、细胞色素C及细胞凋亡因子caspase-3的表达.结果 转染Smac/DIABLO的细胞生长明显落后于转染空载体的细胞.TRAIL浓度为200、500、1000、2500 ng/ml时,作用24 h对SW1990/neo和SW1990/Smac细胞的抑制率分别为11.11％、46.03％、67.08％、76.19％及22.11％、42.67％、56.63％、67.6％ (P ＜0.05).吉西他滨浓度分别为10、20、40、60μmol/L作用24 h对SW1990/neo和SW1990/Smac的抑制率分别为15.2％、34.6％、55.16％、76.4％和22.65％、36.85％、55.11％、79.99％ (P＜0.05).以TRAIL(500 ng/ml)、吉西他滨(20 μmol/L)及TRAIL(500 ng/ml)+吉西他滨(20 μmol/L)作用24 h后,SW1990/neo和SW1990/Smac细胞的凋亡率分别为5.64％、15.30％、27.27％和20.37％、23.27％、67.30％ (P ＜0.05).SW1990/Smac细胞在TRAIL及吉西他滨作用后,细胞内促凋亡蛋白Smac/DIABLO、细胞色素C及caspase-3活化片段表达均显著升高,而抑制凋亡蛋白XIAP表达显著降低(P＜0.05).结论 Smac/DIABLO可诱导SW1990细胞的凋亡、抑制细胞增殖,并增强胰腺癌细胞对TRAIL及吉西他滨的化疗敏感性,其机制可能与Smac/DIABLO、细胞色素C、XIAP及caspase-3的活性有关.     

RNA干扰沉默EZH2基因增强人肝癌多药耐药Bel/Fu细胞对氟尿嘧啶的敏感性

目的 研究沉默人肝癌多药耐药Bel/Fu细胞的EZH2基因表达是否影响癌细胞对氟尿嘧啶( fluorouracil,5-Fu)的敏感性.方法 体外培养肝癌多药耐药Bel/Fu细胞;EZH2 siRNA干扰沉默EZH2基因表达;RT-PCR和Western blot检测干扰后EZH2 mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测细胞生长抑制率;Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;流式细胞仪分析细胞周期;Western blot检测多药耐药相关蛋白MDR1的表达水平.实验设对照组、5-Fu处理组、EZH2 siRNA处理组、5-Fu和EZH2 siRNA联合处理组.结果 EZH2 siRNA干扰24h后,EZH2 mRNA和蛋白的表达水平明显降低.在联合处理组中,MTF法检测其细胞凋亡抑制率为43.17％±3.81％,明显高于其他3组;流式检测联合处理组细胞凋亡率,其细胞凋亡值为30.4％±1.77％,明显高于其他3组.流式检测联合处理组细胞周期,发现联合组G1期细胞的百分比为69.16％±2.31％,明显高于其他3组,S+G2 +M期细胞的百分比为30.76％±1.29％,明显低于其他3组,细胞周期被阻滞于G1期.检测MDR1在联合组中的表达水平,发现MDR1蛋白的表达水平明显低于其他组别.结论 RNA干扰沉默EZH2基因可以增强Bel/Fu细胞对5-Fu的敏感性,其机制可能与MDR1蛋白表达降低有关.     

小干扰RNA抑制肝癌HepG2细胞VEGF表达的研究

目的 观察小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)对肝癌HepG2细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制作用.方法 将VEGF siRNA经LipofectamineTM 2000脂质体转染肝癌HepG2细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot方法分别检测VEGF mRNA和蛋白的表达,ELISA检测细胞培养上清液中VEGF蛋白浓度. 结果细胞培养6 h后siRNA的转染效率为(90.4±2.9)%,转染后肝癌HepG2细胞中VEGF mRNA和蛋白的表达明显减少,细胞培养上清液中VEGF蛋白表达下降. 结论运用RNA干扰技术,可以有效地干扰肝癌HepG2细胞VEGF的表达并能降低VEGF的生成.     

VP3基因联合吉西他滨诱导人膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨鸡贫血病毒VP3基因在人膀胱癌EJ细胞株中的表达,观察VP3基因联合吉西他滨诱导人膀胱癌EJ细胞株凋亡的效应。方法用真核表达载体PcDNA3-VP3转染人膀胱癌EJ细胞株,利用RT-PCR技术检测VP3基因在EJ细胞中的表达状况。观察VP3基因和10^-7mol／L、10^-8mol／L、10^-9mol／L浓度吉西他滨在体外单独或联合用药对人膀胱癌EJ细胞的增殖活性的影响,检测VP3基因和10^-8mol／L浓度吉西他滨在体外单独或联合用药对人膀胱癌EJ细胞的凋亡作用。结果转染PcDNA3-VP3后VP3基因在EJ细胞中表达。转染重组质粒PcDNA3-VP3、吉西他滨各浓度、VP3基因联合吉西他滨各浓度的EJ细胞株的增殖活性明显下降（P〈0．01）。透射电镜下观察到凋亡细胞的典型形态学特征。TUNAL法检测EJ细胞株凋亡率表现为：转染PcDNA3-VP3组高于对照组（P〈0．01）,10^-8mol／L浓度的吉西他滨组高于对照组（P〈0．01）,联合组高于转染PcDNA3-VP3组（P〈0．01）。结论VP3基因表达能高效诱导人膀胱癌EJ细胞株细胞凋亡,联合10^-8mol／L浓度的吉西他滨能增加VP3基因诱导的人膀胱癌EJ细胞株凋亡。     

树突状细胞瘤苗联合吉西他滨对肝癌干细胞的杀伤效应

目的:探讨负载CD133+肝癌细胞抗原的树突状细胞(DC)联合吉西他滨(GEM)在体外对肝癌干细胞的杀伤效应。方法:取对数生长期的人肝癌细胞系Huh-7以CD133作为分子标志进行流式分选,得到肝癌干细胞。将人外周血单个核细胞(PBMC)在体外诱导分化为树突状细胞(DC)。DC负载Huh-7细胞和CD133+细胞抗原后与T细胞共育得到特异性细胞毒性T细胞,将CD133+细胞作为靶细胞进行细胞毒性试验。实验组按处理因素分为:GEM组,CD133+-CTL组,GEM+CD133+-CTL组,Huh7-CTL组和GEM+Huh7-CTL组。CCK-8法检测杀伤率,然后比较各组间差异。结果:对CD133+细胞的杀伤效应以GEM+CD133+-CTL组最强,与其他各组比较差异均有统计学意义(P0.05)。单独就DC瘤苗杀伤率,CD133+-CTL组高于Huh7-CTL组(P0.05)。结论:CD133+肝癌干细胞裂解产物致敏的DC瘤苗联合化疗药物可以有效杀伤肝癌干细胞,进而可能降低肝癌术后和肝癌肝移植后的转移和复发率。     

吉西他滨诱导胰腺癌细胞ABCG2表达其化疗耐药的关系研究

目的：探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞ABCG2的表达及与其化疗耐药的关系。 方法：吉西他滨不同浓度、不同时间作用胰腺癌SW1990细胞后,用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率,并计算吉西他滨不同作用时间的半数抑制浓度（IC50）;根据IC50值选择合适浓度的吉西他滨,作用SW1990细胞24、48、72 h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用Western blot和RT-PCR法检测ABCG2蛋白与mRNA的表达。 结果：吉西他滨作用后,SW1990细胞增殖明显抑制,并呈浓度与时间依赖性,但IC50值呈时间依赖性增加（均P<0.05）;3.9 mg/mL吉西他滨作用24、48、72 h后,SW1990细胞总凋亡率逐渐增加,但晚期凋亡率呈降低趋势,ABCG2蛋白与mRNA的表达明显升高,并呈时间依赖性（均P<0.05）。 结论：吉西他滨能抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖,但作用呈时间依赖性减弱,这可能与其诱导ABCG2上调表达有关。     

紫杉醇和吉西他滨对前列腺癌PC-3细胞的作用

目的 :观察紫杉醇协同吉西他滨对前列腺癌细胞系PC 3的体外作用 ,并探讨其可能的作用机制。　方法 :应用光镜形态学、噻唑蓝 (MTT)法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察 10 -6、10 -7、10 -8mol/L浓度紫杉醇和 10 -7、10 -8、10 -9mol/L浓度吉西他滨在体外单独或协同用药对前列腺癌细胞系PC 3的作用 ,对细胞DNA含量及CyclinD1表达的影响。　结果 :10 -8mol/L以上浓度吉西他滨作用 4 8h ,可增强 10 -7mol/L以上浓度紫杉醇对前列腺癌PC 3细胞系的生长抑制 [抑制率≥ (5 0 .8± 4 .2 ) % ,P <0 .0 5 ]及诱导凋亡作用 [凋亡率≥ (2 2 .9± 2 .3) % ,P <0 .0 5 ],下调CyclinD1的表达 [表达率≤ (9.6± 1.6 ) % ],与阳性对照组CyclinD1表达率 (2 5 .5± 4 .1) %相比差异有显著性 (P<0 .0 1)。吉西他滨使紫杉醇所致的G2 /M期细胞周期阻滞比例由 (70 .3± 9.7) %变为 (38.2± 4 .2 ) % ,部分地逆转了其G2 /M期细胞周期阻滞 (P <0 .0 1)。　结论 :紫杉醇和吉西他滨可以协同增强对前列腺癌细胞系PC 3的生长抑制和诱导凋亡作用 ,显示了紫杉醇和吉西他滨协同用于治疗激素非依赖性前列腺癌的可能性 ,并部分地说明了其作用机制。     

吉西他滨联合CIK细胞对胆管癌QBC939细胞的杀伤作用

目的:观察吉西他滨联合CIK细胞对胆管癌QBC939细胞的杀伤效应。方法:用健康人外周血单核细胞(PBMC)在体外用多种细胞因子诱导成CIK细胞,于培养14 d收获CIK细胞作为效应细胞,流式细胞术分析其表型特征。将不同效靶比的CIK细胞和不同浓度梯度的吉西他滨单独或联合作用于体外培养的人胆管癌QBC939细胞,于培养24 h及48 h后用CCK8法测定CIK细胞、吉西他滨及两者联合对胆管癌细胞的生长抑制率,用蛋白印迹法观察细胞凋亡相关蛋白Bax的表达。结果:CIK细胞体外培养14 d时,CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+HLA-DR+、CD3+CD56+、CD4+CD25+等双阳性细胞所占比例分别为10.89%、60.27%、71.82%、9.03%和4.01%;CIK及吉西他滨对人胆管癌QBC939细胞的抑制率随着效靶比和药物浓度的提高及作用时间的延长而提高(P0.05)。而两者联合对人胆管癌QBC939细胞的杀伤作用明显高于单一因素。蛋白水平检测提示CIK细胞和吉西他滨均可使人胆管癌QBC939细胞的凋亡相关蛋白Bax表达上调,两者联合更为显著。结论:CIK细胞可通过诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡发挥较强的杀伤作用。联合CIK治疗可明显增强吉西他滨对人胆管癌QBC939细胞的杀伤效应。     

乳香胶联合吉西他滨对人胰腺癌BxPc-3细胞的作用及机制初探

目的 研究乳香胶联合吉西他滨对体内、外培养的人胰腺癌BxPc-3细胞的作用及相关机制.方法 四唑氮蓝还原法检测BxPc-3细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡(PI单染色法).Western blot检测不同浓度的乳香胶联合吉西他滨(两药联合组)用药后BxPc-3细胞内测核转录因子-κB(NF-κB) p65亚基以及NF-κB抑制蛋白IkB、凋亡调节蛋白Bcl 2和Bax的表达水平的变化.建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,监测移植瘤体积变化.结果 两药联合组选择乳香胶(40 mg/L)和吉西他滨(10 mg/L)处理72 h后,抑制人胰腺癌细胞株BxPc-3细胞的作用显著优于单独使用(P＜0.01);凋亡比例(45.13±4.01)明显高于乳香胶组或吉西他滨组(P＜0.01)和对照组(5.07±1.37,P＜0.01);乳香胶或两药联合可抑制NF-κB的活性;对人胰腺癌BxPc-3细胞作用48 h后,Bcl-2的蛋白表达明显低于吉西他滨组和对照组(P＜0.01).而IkB和Bax蛋白的表达显著高于吉西他滨组和对照组(P＜0.01).与对照组比较,乳香胶或两药联合组可显著抑制裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长(P＜0.05).结论 乳香胶可通过抑制NF-κB的活性,增加IkB和Bax蛋白表达、抑制Bcl-2的蛋白表达,发挥抗肿瘤作用,并增强吉西他滨的药效.     

吉西他滨治疗膀胱癌的进展

目前吉西他滨已广泛应用于膀胱癌的治疗 ,近来以其为基础的联合化疗更是屡有报道 ,本文就吉西他滨治疗膀胱癌的有效性和安全性作一综述     

吉西他滨诱导胰腺癌细胞PANC-1中survivin基因表达的研究

目的:探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞PANC-1中survivin表达与化疗耐药的关系。方法:胰腺癌细胞株PANC-1用1640液培养，吉西他滨的浓度为1 μg /mL及10 μg/mL，运用RT-PCR和Western blot检测survivin的表达。分析细胞中survivin的表达水平与化疗耐药的关系。结果:用1 μg/mL及10 μg/mL浓度的吉西他滨作用胰腺癌细胞株24 h和48 h，survivin mRNA水平分别上升了(1.34±0.12) 倍,(2.40±0.17)倍和(3.33±0.20)倍,(4.41±0.18)倍;蛋白水平上升了(1.20±0.07)倍,(1.48±0.19)倍和(2.90±0.04)倍,(4.50±0.20)倍，差异有显著性意义(P＜0.05)。结论:胰腺癌细胞株的化疗耐药可能通过吉西他滨的作用上调survivin的表达而增强。     

RNA干扰抑制胰腺癌细胞XIAP表达对化疗敏感性的影响

目的 ：探讨运用载体介导的RNA干扰技术对X-连锁的凋亡抑制蛋白的抑制效率，以及观察抑制XIAP后胰腺癌细胞对化疗药物敏感性的变化。方法 ：应用PBSHHI质粒构建针对XIAP的RNA干扰载体，转染胰腺癌细胞系SW1990;用RT-PCR和Western blot检测XIAP的抑制效率，以gemcitabine处理细胞，流式细胞仪和荧光显微镜观察细胞凋亡的变化;分析XIAP的表达与细胞凋亡之间的关系。结果 ：成功构建4个XIAP的RNA干扰载体，其中2个载体对XIAP的瞬时抑制效率达50％以上。XIAP被抑制后，细胞对化疗药物诱导的凋亡敏感性增强 ( P <0.05),XIAP的表达水平与细胞的凋亡指数之间呈负相关性( r =-0.809, P <0.05)。结论 ：运用针对XIAP的RNA干扰载体可以有效地抑制XIAP的表达，提高胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性。     

吉西他滨治疗膀胱癌的进展

目前吉西他滨已广泛应用于膀胱癌的治疗，近来以其为基础的联合化疗更是屡有报道，本文就吉西他滨治疗膀胱癌的有效性和安全性作一综述。     

吉西他滨动脉插管结合静脉治疗晚期肝癌15例

目的探讨吉西他滨经动脉插管结合静脉治疗晚期肝癌（Ⅲ期）的初步疗效及毒副反应。方法 15例晚期肝癌伴有门脉癌栓患者,第1天经肝动脉插管灌注吉西他滨1000mg＋顺铂60mg,第8天静脉滴注吉西他滨1000mg/m2,30d/周期,治疗后初步评诂疗效及疾病相关症状改善情况,观测毒副反应。结果 15例患者中14例完成2个周期以上;9例获PR（64.3%）,4例获NC（28.6%）。肝癌相关症状改善在用药结束后第1、2周分别为78.6%（11/14）、85.7%（12/14）。结论吉西他滨经动脉插管结合静脉化疗治疗晚期肝癌的初步疗效满意,可减轻肝癌相关症状,毒副反应较轻。     

增殖细胞核抗原小干扰RNA对人结肠癌CaCO2细胞抑制作用

目的 观察增殖细胞核抗原（PCNA）小干扰RNA（siRNA）对人结肠癌CaCO2细胞抑制作用。方法 WST-8法和克隆形成抑制研究No．2和No．4PCNAsiRNA对CaC02细胞的作用；碘化丙锭（PI）单染检测细胞周期，Hochest33258染色观察凋亡形态，膜联蛋白（Annexin）V和PI双染测定捅亡百分率。结果 No.2和No．4PCNA siRNA与CaCO2细胞作用，增殖抑制率分别为（72．24±1.01）％和（74.67±3．35）％；克隆形成抑制率均达90％；两种药物转染细胞均出现明显亚二倍体峰，Sub-G1＋Go／G1期减少，S＋G2／M期增多；siRNA处理组细胞有较多凋亡形态变化；凋亡率随浓度增加而增加，且早期凋亡率持续高于晚期捅亡／坏死率。结论 PCNAsiRNA显著抑制人结肠癌CaCO2细胞增殖及克隆形成；细胞停留于G2／M期，明显诱导细胞凋亡。