汉滩病毒重组腺病毒疫苗与DNA疫苗的联合免疫效果分析

汉坦病毒基因组由L、M、S3个负链RNA片段组成，M片段编码囊膜糖蛋白G1和G2，G1和G2在病毒的吸附、病毒膜与细胞膜的融合、中和抗体的产生等方面起着重要作用。以腺病毒为载体的活载体疫苗安全性好，能有效感染呼吸道和肠道等组织细胞，不仅能激发黏膜免疫，还能诱导系统免疫和细胞免疫反应。我们分别以腺病毒和质粒pcDNA3．1为载体，构建了含有完整汉滩病毒基因M片段和单独表达G1的重组腺病毒和重组DNA疫苗。DNA疫苗能够引发体液和细胞介导的免疫应答，但接种后只能引发很弱的免疫应答。为了克服上述疫苗的缺     

Nipah病毒F蛋白的B细胞表位预测

Nipah病毒(Nipah Virus,NiV)是近年来新出现的一种人兽共患的病毒,属副黏病毒科、亨尼帕病毒属,可引起人和动物急性中枢神经系统病变。病毒的六个结构基因从3'端开始依次编码N蛋白、P蛋白、M蛋白、F蛋白、G蛋白和L蛋白。其中,F蛋白(fusionprotein,F protein)为Ⅰ型糖蛋白,它与G蛋白共     

流感病毒A/广州/333/99(H9N2)毒株基因组特性的研究

目的 了解一株再次从流感患儿中分离出禽H9N2流感毒株的基因组特性，并弄清它的来源。方法 病毒在鸡胚中传代，从收获的尿囊液中提取RNA，通过逆转录合成cDNA，cDNA用PCR扩增。PCR产物用纯化试剂盒纯化，接着做核苷酸序列测定，然后用Meg Align(Version 1.03)和Editseg(Version 3.69)软件进行基因进化树分析。结果 A／广州／333／99（H9N2）毒株的基因组属于禽流感病毒，但它明显不同于A／Duck/Hong Kong/Y439/97毒株。同时不含有任何人流感病毒基因节段，其基因组中有4个基因节段（分别编码HA、NA、NP和NS蛋白）来自G9毒株基因系，而其余4个基因节段（分别编码PB2、PB1、PA和M蛋白）来自G1毒株基因系。结论 A／广州／333／99（H9N2）病毒是G9和G1毒株通过基因重配而来的重配株，它最大可能性直接来自禽。进一步证实了禽H9N2毒株能感染人，同时首次证实了H9N2不同基因系毒株间，在自然界中也能发生基因重配。     

汉坦病毒包膜糖蛋白的研究进展

汉坦病毒(Hantavirus,HV)是人类重要的致病病毒,主要引起肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征.HV基因组为分节段的单股负链RNA,由长(L)、中(M)、短(S)三个基因片段组成,分别编码L蛋白、包膜糖蛋白Gn、Gc和核衣壳蛋白N.其生物学活性主要来自Gn、Gc,本文系统阐述了包膜糖蛋白的基因结构和功能,对细胞融合与糖基化这两方面进行了重点叙述.     

汉坦病毒84Fli株S和M片段基因克隆、序列分析及在真核细胞中表达的研究

目的 克隆汉坦病毒84Fli株S，M片段，测定这些基因的核苷酸序列，用瞬时表达了解S和M片段在真核细胞中的表达。方法 以我国分离的汉坦病毒84Fli株感染的Vero-E6细胞提取总RNA，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术扩增其S及M片段的全长cDNA，然后将84Fli株的2，M片段cDNA基因分别克隆入pCR2.1-TOPO载体中，随机挑选其中的3个克隆测定核酸序列，确定汉坦病毒84Fli株S和M片段核苷酸序列，根据S和M片段核苷酸序列设计引物，PCR扩增S及M片段的编码区，构建了真核表达质粒pcDNA3/84SC ey 实验室/84MC。用质脂体法把质粒转入COS7细胞，瞬时表达NP及G1和G2糖蛋白，用免疫荧光（IFA）、Western blot和免疫沉淀方法检测核蛋白及糖蛋白的表达。结果 汉坦病毒84Fli株的基因组S片段长度为1688个核苷酸，编码430个氨基酸，汉坦病毒84Fli株的基因组M片段长度为3616个核苷酸，编码1136个氨基酸，用免疫荧光（IFA）检测S和M片段在COS细胞中的瞬时表达为阳性。Western blot结果显示，存在有相对分子质量为50000左右的核蛋白表达，免疫沉淀法显示有核蛋白、G1和G2糖蛋白的表达。结论 84Fli株病毒和其他汉滩病毒在核苷酸序列上虽有差异。但在氨基酸水平上的同源性仍很高，成功地在COS7细胞中瞬时表达了汉滩病毒的核蛋白及糖蛋白。     

汉滩病毒M、S基因部分片段在大肠杆菌中的融合表达

目的在大肠杆菌中融合表达含主要抗原位点的汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与NP片段。方法将汉滩病毒76118株M基因编码G1的片段与S基因编码区5′端约0.7kb的片段连接,克隆入pGEX4T2,构建嵌合基因原核表达载体pGEX4T2G1S0.7,并在大肠杆菌XL1Blue中,诱导GSTG1S0.7融合蛋白的表达。表达产物用ELISA和Westernblot进行鉴定。结果成功地构建了嵌合原核表达载体pGEX4T2G1S0.7。经IPTG诱导后,ELISA活性测定结果表明,该融合蛋白可与抗汉滩病毒NP及糖蛋白的mAb特异性结合。Westernblot结果显示,诱导出相对分子质量Mr大于1×105的G1S0.7与GST的融合蛋白。结论获得具有特异性结合活性的融合蛋白GSTG1S0.7,为汉滩病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础。     

甲型流感病毒核糖核蛋白复合体的核质转运过程

甲型流感病毒的基因组由8个负链RNA片段组成，共编码10种蛋白质，每一节段RNA都是以不同的核糖核蛋白复合体（RNPs）形式存在。本综述的目的是根据RNPs中各蛋白的结构特点阐述RNPs在病毒核质转运过程中发挥的作用.     

呼吸道合胞病毒的蛋白特征及抗原变异

呼吸道合胞病毒是非节段性的单链负股RNA病毒,是引起婴幼儿下呼吸道感染的重要原因.本文就近年来对呼吸道合胞病毒的蛋白特征和抗原变异的研究作一综述.     

轮状病毒NSP5和NSP6在感染过程中的作用

轮状病毒(RV)是婴幼儿胃肠道疾病的主要病原体,RV基因组由11个分节段的双链RNA组成,分别编码6个结构蛋白和6个非结构蛋白,其中第11基因片段编码NSP5和NSP6两个非结构蛋白.NSP5蛋白较大,含200个氨基酸,分子量约为21Kd.NSP5在病毒感染细胞中以二聚体形式存在,是一个高度磷酸化的蛋白,可与RV其它非结构蛋白或结构蛋白相互作用,具有RNA结合活性,在病毒复制过程中主要通过与NSP2的一系列相瓦作用发挥功能.基因11编码的另一个蛋白是NSP6,大多数RV中NSP6由92个氨基酸组成,分子量约为11Kd.并非所有RV毒株都有NSP6编码区,如Mc323和512C毒株.NSP6在病毒感染细胞中表达量很低.目前,关于NSP6的性质,在细胞中的定位以及在病毒复制过程中的作用研究较少.NSP5和NSP6由同一基因片段编码,对它们的结构和功能及其相互间的关系研究还不多.本文对NSP5和NSP6在RV复制过程中的研究作简要综述.     

A/鹅/广东/2/96(H5N1)流感毒株7和8 RNA节段核苷酸序列测定

目的　弄清A鹅广东296(H5N1)毒株RNA7和8核苷酸全序列及它们与AHK15697(H5N1)毒株RNA7和8之间的内在关系,并为今后流感病毒M和NS基因研究打下基础。方法　病毒粒RNA经逆转录合成cDNA,经聚合酶链反应(PCR)扩增,产物纯化,采用双脱氧链末端终止法进行核苷酸序列测定。结果　A鹅广东296(H5N1)毒株RNA7长度为1027个核苷酸,编码M1(含252个氨基酸)和M2(含97个氨基酸)的蛋白。其RNA8长度为890个核苷酸,编码NS1(含230个氨基酸)和NS2(含121个氨基酸)非结构蛋白。其M1,M2,NS1和NS2蛋白分子上氨基酸序列与AHK15697(H5N1)毒株间同源性分别为976%,928%,657%和769%。结论　A鹅广东296(H5N1)毒株RNA7和8长度分别为1027和890个核苷酸,此两节段RNA均属禽类毒株。AHK15697(H5N1)毒株的RNA7和8不是来自A鹅广东296(H5N1)毒株。     

汉坦病毒疫苗研究进展

汉坦病毒属于布尼亚病毒科的汉坦病毒属,主要引起人的两种疾病肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征.汉坦病毒基因组包括(L M、S)3个负链RNA片段.分别编码RNA聚合酶、囊膜糖蛋白G1和G2和核心蛋白.汉坦病毒基因工程疫苗研究主要包括亚单位疫苗、活病毒载体疫苗和核酸疫苗;传统的灭活疫苗包括鼠脑来源和细胞培养的灭活疫苗,本文就汉坦病毒这两方面的研究进展进行了综述.     

呼吸道合胞病毒G蛋白基因重组质粒诱导小鼠免疫保护性及机制研究

目的 构建编码呼吸道合胞病毒(RSV)G蛋白基因的重组质粒,观察其对RSV感染小鼠的保护性及特异性免疫效应,为研制安全有效的RSV新疫苗提供线索和实验依据.方法 利用基因重组方法构建含RSV G蛋白编码基因的重组质粒,测序和酶切鉴定,Western blot检测目的 基因经体外表达后的免疫原性.重组质粒免疫小鼠后以RSV感染,病毒滴定法检测肺组织标本中RSV滴度,HE染色法检查肺组织病理改变,ELISA检测血清抗体水平,双抗体夹心ELISA测定肺泡灌洗液(BALF)内Th1/Th2细胞因子表达量,流式细胞术检测BALF中T淋巴细胞亚群数量及活化状态.结果 成功构建了编码RSV G蛋白基因的重组质粒pcDNA3.1~G.Western blot证实目的 蛋白在体外具有免疫原性.被免疫小鼠感染RSV后肺组织病毒滴度降低,肺组织中未见明显的炎性细胞浸润.小鼠血清中产生较高滴度的抗RSV-G IgG.小鼠BALF细胞中CD4~+CD25~+T淋巴细胞比例显著增加,并且IFN-γ(Th1)、IL-4(Th2)两类细胞因子表达显示平衡.结论 编码RSV G蛋白基因的重组质粒pcDNA3.1~G能诱导产生CD4~+ CD25~+T细胞亚群,对小鼠具有明显的保护作用.     

人乳头瘤病毒外壳蛋白研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)的晚期转录区(L区)编码病毒的两个外壳蛋白:主要外壳蛋白(L1)和次要外壳蛋白(L2),外壳蛋白具有组装功能、有抗原表位、在宿主细胞表面有蛋白受体。本文就HPV外壳蛋白的分子特性、组装功能、表达、抗原表位及血清学、受体、病毒外壳蛋白的组织等研究进展作一综述。     

北京地区2株人偏肺病毒的P和M蛋白基因序列分析

目的进一步了解北京地区人偏肺病毒(hMPV)编码基因的特征。方法从分属于hMPV的两个不同基因进化簇(即基因型)的2份临床标本BJ1816和BJ1887中扩增P和M全基因，克隆至pBS-T载体中并进行测序，与GenBank中的hMPV的基因序列进行比较分析和种系进化分析。结果经扩增BJ1816和BJ1887的P基因全长为885个核苷酸，编码294个氨基酸；M基因全长765个核苷酸，编码254个氨基酸。BJ1816和BJ1887的P和M蛋白基因与同一基因簇内的hMPV有相当高的氨基酸同源性(91．9％-100％)。BJ1816和BJ1887间P基因的氨基酸同源性仅为85．8％，而M基因的氨基酸同源性为96．9％。结论BJ1816和BJ1887的P和M蛋白基因特征与其他国外文献中所报道的hMPV相似，不同型的hMPV的P基因之间比M基因显示了更强的基因多样性。     

呼吸道合胞病毒的蛋白特征及抗原变异

呼吸道合胞病毒是非节段性的单链负股RNA病毒，是引起婴幼儿下呼吸道感染的重要原因。本文就近年来对呼吸道合胞病毒的蛋白特征和抗原变异的研究作一综述。     

汉坦病毒疫苗研究进展

汉坦病毒属于布尼亚病毒科的汉坦病毒属，主要引起人的两种疾病：肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征。汉坦病毒基因组包括(LM、S)3个负链RNA片段。分别编码RNA聚合酶、囊膜糖蛋白G1和G2和核心蛋白。汉坦病毒基因工程疫苗研究主要包括亚单位疫苗、活病毒载体疫苗和核酸疫苗；传统的灭活疫苗包括鼠脑来源和细胞培养的灭活疫苗，本文就汉坦病毒这两方面的研究进展进行了综述。     

慢性乙型肝炎患者血清前S1抗原检测的临床应用价值探讨

乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)编码区由S、前S1和前S2基因组成，分别编码S、前S1和前S2三种主要蛋白，从而共同构成HBV外壳蛋白。前S1蛋白含有肝细胞膜受体，在HBV感染肝细胞和机体免疫应答反应中起重要作用。作为一项新的HBV血清学检测指标，乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV pre S1-Ag)的检测已被普遍应用于乙型肝炎的实验室诊断和疗效观察。检测慢性乙型肝炎患者乙型肝炎血清标志物(HBV—M)、乙型肝炎前S1抗原(HBV pre S1-Ag)、乙型肝炎病毒DNA定量(HBV-DNA)，     

汉坦病毒东方田鼠分离株ZT10的分子特性研究

目的 测定从东方田鼠分离到的汉坦病毒ZT10株的全基因序列,了解该株分子基础.方法 提取ZT10病毒总RNA,对L、M、S基因进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,回收纯化后,将其克隆至pGEM-T载体中,然后进行核苷酸序列的测定及分析.结果 L基因组片段长度为6530个核苷酸,编码2151个氨基酸,与3株Seoul型汉坦病毒的L片段同源性为95.8%～99.7%,而与HTN型汉坦病毒的同源性则较低.将推导的ZT10株编码的氨基酸序列与其他汉坦病毒L片段氨基酸序列进行比较.显示ZT10编码的RNA聚合酶也有6个比较保守的区域.基因组M片段长度为3651个核苷酸,编码1133个氨基酸.结论 序列分析表明,与Seoul型汉坦病毒的M片段同源性为84.0%～96.3%,而与HTN型汉坦病毒的同源性则较低,与从田鼠分离的汉坦病毒(Prospect Hill virus,Tula virus,khabarovsk virus,Isla vista virus)M片段核苷酸同源性仅为57.5%～60.9%.S基因片段与SEO型病毒核苷酸和氨基酸同源性分别为87.9%～96.0%和96.9%～97.9%,与HTN型病毒株76～118的核苷酸和氨基酸同源性分别为71.3%和81.9%,与其他型汉坦病毒的同源均很低.表明ZT10属于SEO型汉坦病毒.     

汉滩病毒M片段噬菌体表位文库的构建及筛选

目的 通过构建汉滩病毒M片段的噬菌体展示文库，筛选汉滩病毒包膜蛋白的抗原表位。方法 DNaseⅠ随机消化的M片段与载体pComb3连接，转化宿主XL-1Blue，在辅助噬菌体VCSM13存在的条件下，获得M片段的随机噬菌体文库.利用纯化的恢复期病人血清对M片段噬菌体文库进行3轮淘洗，通过ELISA、序列分析对所获得的克隆进行鉴定。并对其中2个阳性克隆的目的片段进行了原核表达和免疫原性分析。结果 筛选获得的5个阳性噬菌体克隆均位于G1蛋白编码区，原核表达的2个阳性：充隆片段蛋白免疫兔，免疫兔血清能与病毒抗原发生特异反应。结论 本技术路线可用于汉滩病毒包膜蛋白抗原表位的研究，为汉滩病毒诊断试剂的研制、亚单位疫苗的设计提供了数据。     

人乳头瘤病毒E7蛋白生物活性研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)是一种小分子DNA病毒，其早期基因E7编码具有多种生物活性的E7蛋白。E7蛋白与腺病毒EIA及多瘤病毒SV40蛋白有相似的结构，可与pRB、P^53反应，改变宿主细胞G1／S期的转化。E7蛋白还能同多种细胞因子发生反应，影响宿主细胞代谢，直接导致宿主细胞中心体的变化。E7蛋白在HPV的致病性方面发挥重要作用。