抗人gp130分子单克隆抗体的制备和鉴定

ｇｐ１３０可与许多细胞因子受体（ＩＬ－６Ｒ,ＩＬ－１１Ｒ,ＯＳＭＲ,ＬＩＦＲ,ＣＮＴＦＲ和ＣＴ－１Ｒ）组成受体复合物,并在这类细胞因子的信号转导中的起着重要的作用。方法以痘苗病毒为载体构建获得的可溶性ＣＤ１３０（ｓＣＤ１３０）为免疫原,通过融合的方法。得到４株稳定分泌抗ＣＤ１３０单克隆抗体（ｍＡｂ）Ｌ２,Ｌ４ａ,Ｌ４ｂ和Ｌ５）的杂交瘤细胞株。结果本组ｍＡｂ对靶细胞具有识别特异性,不但可识别相对分子     

抗人层黏连蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗人层黏连蛋白(laminin,LN)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:以人LN免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人的mAb;同时采用间接ELISA法柃测mAb的腹水效价及mAb的相对亲和力;采用ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、进行表位分析及特异性鉴定。结果:获得4株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞2A3、2C6、3G7和4H2,其腹水mAb 的效价为3.6 × 104～2.1×106;4株mAb的Ig亚类为IgG1,轻链均属κ型;相对亲和力2C6在1012以上,2A3、3G7和4H2在106以上;其中2株与1个表位结合,另2株与另外的1个表位结合。结论:成功地制备出抗人LN的mAb,为进一步研究LN在一些疾病中的作用提供了工具。     

抗人CD100单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的：研制可识别天然CD100分子的单克隆抗体（mAb)。方法：采用真核表达的CD100分子免疫BALB/c小鼠，以间接ELISA法筛选阳性杂交瘤，并分别用人急性T淋巴细胞性白血病细胞系MOLT-4，猿T淋巴细胞系MLA-144及猴EB病毒转化的B淋巴细胞系（BLCL），进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性。结果：共获得7株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株。所有mAb均可识别人和猴细胞系的膜表面天然CD100分子，其中6株可识别猿细胞系膜表面的天然CD100分子，结论：成功地制备了7株抗CD100分子的特异性mAb。为研究人和猿，猴CD100分子的结构与功能提供了新的手段。     

抗TPO单克隆抗体的制备及初步鉴定

抗ＴＰＯ单克隆抗体的制备及初步鉴定徐荣佳，刘军权，方蕾，姚仁南，陈晓英，徐广奎，陈复兴甲状腺过氧化物酶（ＴＰＯ）现已证明是甲状腺微粒体（ＴＭ）的主要抗原成份［１］。国外就其分子已作了较为深入的研究，并重组了其分子和产生了单克隆抗体。它对研究甲状腺自身...     

抗人F蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

Ｆ蛋白是存在于哺乳动物肝细胞质中的一种水溶性不稳定的单链蛋白质,相对分子质量（Ｍｒ）为４４０００。正常人肝组织中大约含Ｆ蛋白２７４ｍｇ／ｇ〔１,２〕,而血清中仅含０．２ｍｇ／Ｌ,提示血清Ｆ蛋白作为判断肝损伤程度的可能性。为对Ｆ蛋白进行深入研究,并提高对其检测的灵敏度,１９９５年以来,我们先后制备了３株抗人Ｆ蛋白的单克隆抗体（ｍＡｂ）,并进行了初步鉴定。１材料和方法１．１材料人Ｆ蛋白抗原的制备〔３〕：取肝外伤手术切除的新鲜肝组织５０ｇ,剪成约５ｍｍ３的组织碎块后,置于含有１ｇ／ＬＩＶ型胶原酶（Ｓｉｇｍａ）…     

抗HBeAg单克隆抗体的制备及初步鉴定

为获得能替代抗ＨＢｅＡｇ多克隆酶标记抗体做ＥＬＩＳＡ,我们用纯化的ＨＢｅＡｇ阳性血清,免疫Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠,采用杂交瘤技术,获得８株能稳定分泌小鼠抗ＨＢｅＡｇｍＡｂ的杂交瘤细胞。对其特性进行了初步鉴定,并就这些单克隆抗体（ｍＡｂ）在ＥＬＩＳＡ反应中的特性进行了分析。１　材料和方法１－１　材料　ｅ抗原阳性的人血清经亲和层析纯化的ＨＢｅＡｇ,由本室收集并纯化。Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠,购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞,由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。１－２　杂交瘤细胞株的…     

抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

Ｆａｓ／Ａｐｏ１／ＣＤ９５抗原的发现,始于对两株单克隆抗体（ｍＡｂ）的功能观察,即抗Ａｐｏ１ｍＡｂ和抗ＦａｓｍＡｂ〔１,２〕。由于二者都能识别细胞膜上ＣＤ９５蛋白抗原,且能诱导敏感细胞凋亡,才导致今天对Ｆａｓ抗原的生物医学研究。制备抗ＦａｓｍＡｂ对于Ｆａｓ抗原的深入研究,尤其是对Ｆａｓ抗原信号传导机制的阐明,以及生物医学应用都有重要的意义。本文利用Ｆａｓ＋的细胞作为免疫原,制备了１株鼠抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１。１材料和方法１．１材料１．１．１细胞系Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞、Ｊｕｒｋａｔ人Ｔ淋巴…     

抗PAA合成肽单克隆抗体的制备与鉴定

抗ＰＡＡ合成肽单克隆抗体的制备与鉴定王振明吴轰（湖南医科大学附属第二医院中心实验室，长沙４１００１１）ＴＡＮＧＨｏｎｇ，ＪｉｎＳａｎ（ＺｙｍｅｄＬａｂ．ＩＮＣ，ｓｏｕｔｈｓａｎｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ９４０８０，ＵＳＡ）以组织病理形态学法，检测肿...     

抗人NGF单克隆抗体的制备及初步鉴定

神经营养因子（　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｆａｃｔｏｒｓ，　ＮＴＦｓ）是一类对中枢和外周神经系统均有营养活性的蛋白质，其主要功能是促进神经系统的发育，保护并修复受损神经元，以及促进生长和增进认知记忆过程中神经元之间的连结［］。神经生长因子（ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，　ＮＧＦ）是发现最早、研究最多的一种ＮＴＦ。制备抗ＮＧＦ单克隆抗体（ｍＡｂ）可为研究其在体内组织中表达及分布提供一种工具，并可为基因工程制备ＮＧＦ提供检测方法。我们受澳大利亚Ｆｌｉｎｄｅｒ大学周兴福教授委托，研究制备了分…     

抗人CD38单克隆抗体的制备、鉴定及其功能的初步研究

目的：研制抗人CD38抗原分子的单克隆抗体,进一步研究其生物学功能。方法：采用高表达CD38抗原的Daudi细胞免疫Balb/c小鼠;取其脾细胞与SP2/0细胞融合;用间接免疫荧光法进行杂交瘤筛选;流式细胞术、免疫沉淀法与CD38分子原核表达产物的Western-blot分析鉴定单克隆抗体的特异性。以MTT（四甲偶氨唑盐）法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能。结果：获得了一株抗人CD38分子的单克隆抗体1C6,流式细胞术显示它具有CD38抗原特异的细胞反应谱,其识别的抗原分子质量为45000u。与CD38分子原核表达产物的Western-blot分析表明,其可特异识别CD38分子胞外结构域。MTT法显示其可介导补体杀伤靶细胞。结论：成功制备了抗人CD38分子的单克隆抗体,并进行了初步的功能研究。     

Preparation and characterization of monoclonal antibodies against human apolipoprotein E

Laboratory of Lipoproteins, All-Union Research Center for Preventive Medicine, Ministry of Health of the USSR. Laboratory of Molecular and Cellular Cardiology, All-Union Cardiologic Scientific Center, Academy of Medical Sciences of the USSR, Moscow. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR V. N. Smirnov.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 112, No. 8, pp. 179–181, August, 1991.     

抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb ,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件     

抗人滋养细胞单克隆抗体的制备及其免疫生物学特性鉴定

研制抗人滋养细胞单克隆抗体并分析其免疫生物学特性。方法采用滋养细胞免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠;用细胞ＥＬＩＳＡ法鉴定ｍＡｂ的特异性;用补体依赖的溶细胞作用测定ｍＡｂ的细胞毒性。结论利用细胞免疫法所获该组ｍＡｂ所针对的抗原表位,可能是诱发免疫性流产的滋养细胞膜特异性抗原。     

抗人SSX2分子单克隆抗体的制备及初步应用

目的　制备抗滑膜肉瘤X断点 2 (Synovialsarcoma,Xbreakpoint2 ,SSX2 )分子的单克隆抗体 ,探讨SSX2的组织分布及其与肿瘤的关系。方法　应用淋巴细胞杂交瘤技术制备小鼠源性抗人SSX2mAb。应用间接ELISA测定腹水效价 ,间接免疫荧光胞内染色检测抗体与肿瘤细胞系的反应性。用酶免疫组织化学技术 ,对SSX2分子在人正常睾丸组织和直肠癌组织的分布进行了鉴定。结果　获得 1株分泌抗SSX2mAb的杂交瘤细胞株LX SSX2 ,间接ELISA测定腹水效价达 1× 10 - 5,为IgG1(κ)亚类 ,能识别K5 6 2胞内天然及变性SSX2分子。在酶免疫组织化学技术应用中获得较满意效果 ,SSX2分子表达于睾丸精原细胞的细胞核内 ,并在直肠癌标本中检出到SSX2的表达。结论　LX SSX2mAb有很好的特异性 ,为进一步研究SSX2分子的分布及其与肿瘤的关系奠定了基础     

一株鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

研制特异性鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。以高表达人PD-1分子的基因转染细胞L929/PD-1作为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以L929/PD-1作为抗体筛选细胞,L929/mock为对照细胞,经间接免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选和多次克隆化培养,筛选出分泌特异性鼠抗人PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用Western blot、Ig亚型快速定性试纸法、间接免疫荧光法、竞争结合抑制试验和MTT增殖实验对单抗进行生物学特性的分析。结果表明,成功获得1株特异、稳定分泌鼠抗人PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6E2。对6E2生物学功能的研究结果提示,该单抗能够识别活化T细胞表达的PD-1分子,且在体外能够显著抑制T细胞的增殖和细胞因子的分泌。获得的特异性鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体,通过激发PD-1负性途径能够有效抑制T细胞的功能,为进一步研究PD-1信号奠定了物质基础。     

一组抗人肺癌单克隆抗体的制备及初步鉴定

本文报告用人肺腺癌细胞株A549细胞为免疫原,用常规细胞融合技术获得了5株抗人肺癌单克隆抗体WLA-1B4、WLA-2D1、WLA-1G7、WLA-1G9和WLA-2C4。前4株均为IgM型,后1株为IgG1型。添加试验表明WLA-2D1和WLA-1G9识别同一抗原决定簇,WLA-2C4,WLA-1B4识别不同的抗原决定簇。ABC法免疫组织化学研究表明,5株单抗与肺癌组织均呈阳性反应,而与正常组织交叉反应较少。     

抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及初步鉴定

目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb)。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Westernblot鉴定mAb的特异性。结果:获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3,其Ig亚类均为IgG2a,腹水mAb1G5、5E3的ELISA效价分别为1∶1600000,1∶120000。在Dot-ELISA试验中,这2株mAb均只与表达His-ChIFN-γ及GST-ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,与未表达这2种IFN-γ的其他8种菌株均不发生反应。在蛋白质印迹试验中,2株mAb均能与融合蛋白GST-ChIFN-γ、His-ChIFN-γ发生反应,出现特异性条带。结果表明,mAb1G5、5E3是针对鸡γ-干扰素的特异性mAb。结论:成功地制备抗鸡γ-干扰素的mAb,它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应用价值。     

Characterization of murine monoclonal antibodies against the Ro52 autoantigen

Immunization of BALB/c mice with purified recombinant human Ro52 protein resulted in three anti-Ro52 MoAbs termed 2E7, 4C6 and 4F11. All anti-Ro52 MoAbs specifically reacted with recombinant human Ro52 protein, and also with Ro52 protein in total extracts of all human cell lines analysed, including the epithelial cell line HeLa, the B cell line Raji, the bladder carcinoma cell line RT112, and a fibroblast cell line derived from patients with xeroderma pigmentosum. The anti-Ro52 MoAbs were able to immunoprecipitate the recombinant human Ro52 protein expressed in wheat germ extract, but failed to precipitate hY RNAs from cell extracts. The staining pattern of the MoAbs strongly differed between the RT112 cells and the fibroblast cell line. RT112 cells displayed an intense cytoplasmic staining and in addition distinct fine nuclear speckles. In contrast, in the fibroblast cell line no cytoplasmic staining but only staining of distinct nuclear speckles was observed. Using deletion mutants of Ro52 the epitopes recognized by the anti-Ro52 MoAbs 2E7, 4C6 and 4F11 were partially mapped. All three MoAbs appeared to recognize distinct epitopes, that are located in the regions of Ro52 bordered by amino acids 136–164, 208–363 and 136–190, respectively. These MoAbs can be of great use in studying the cellular processes in which the Ro52 protein is involved.