橘红素对大鼠成骨细胞增殖、分化和成骨功能的影响

目的 研究橘红素(TG)对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化和成骨功能指标基因蛋白表达的影响。方法 选取出生24 h内的SD大鼠乳鼠颅骨，通过酶消化法培养原代成骨细胞，倒置显微镜下观察细胞形态和状态，并以碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红(ARS)染色法进行细胞鉴定；分别采用噻唑蓝(MTT)法、ALP染色法、ARS染色法检测TG对原代成骨细胞的存活率、评价成骨细胞分化能力和矿化能力的影响；采用Western印迹检测TG对原代成骨细胞成骨相关转录因子(OSX)、ALP、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和骨桥蛋白(OPN)等成骨功能指标基因的蛋白表达。结果 与Control组相比，TG作用浓度为5、10、15、20μmol/L时可明显促进成骨细胞的增殖(P<0.01);TG共培养7 d后，与Control组比较，TG作用浓度为5、10、15、20μmol/L时ALP染色明显增加，说明TG能明显促进成骨细胞分化(P<0.05);TG共培养21 d后，与Control组比较，TG浓度为5、10、15、20μmol/L时ARS染色明显增加，说明TG能明显促进成骨细胞的矿化功能(P&...     

亚麻木酚素促进绝经期妇女种植体骨结合机制

目的观察亚麻木酚素(SDG)对成骨细胞的增殖分化及护骨素(OPG) mRNA表达的影响。方法将成骨细胞在不同浓度的SDG环境下进行培养,采用噻唑蓝(MTT)法和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法检测细胞增殖情况及ALP活性;利用SDG培养成骨细胞24 h后,Phalloielin染色观察细胞骨架的形态变化;利用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OPG mRNA的表达水平。结果高浓度SDG抑制成骨细胞增殖(P0.05),低浓度SDG促进成骨细胞增殖(P0.05)。与空白组相比,低浓度SDG组ALP活性高(P0.05),高浓度SDG浓度组ALP活性明显下降(P0.05)。在SDG浓度10~(-9)～10~(-7) mol/L范围内,随浓度的增高细胞铺展面积增大且内部框架结构更加清晰,而10~(-5) mol/L组细胞内部结构不清晰。SDG浓度为10~(-6)、10~(-7) mol/L时,OPG mRNA的表达明显增加(P0.05)。结论 SDG在成骨细胞增殖、分化的促进上具有一定效果。     

17β-雌二醇和1,25-二羟维生素D3对成骨细胞MC3T3-E1增殖和分化的影响

目的 探讨雌激素和维生素D对成骨细胞MC3T3-E1增殖和分化的协同调节作用及其机制.方法 小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞用无酚红α-MEM完全培养基培养;用MTT法检测细胞增殖率;用实时荧光定量PCR法检测干预前后MC3T3-E1细胞中细胞周期相关基因[细胞周期素E( cyclin E)、增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期素依赖性激酶抑制物(Cdkn2b)]和成骨细胞分化标志物[Ⅰ型胶原( COL Ⅰ)、碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)]基因的表达.ALP活性染色用BCIP/NBT显色法.结果 单用雌激素17β-雌二醇(E2)可促进MC3T3-E1细胞的增殖,尤其在生理浓度时作用最强,单用维生素D活性产物1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH) 2D3]对MC3T3-E1细胞的增殖无影响,1,25 - (OH)2 D3不影响E2对MC3T3-E1细胞的促增殖作用.E2上调MC3T3-E1细胞中cyclin E和PCNA的表达,同时下调Cdkn2b基因的表达,1,25-(OH)2D3单独应用不能影响上述基因表达的变化,也不影响E2对上述基因的调节作用.E2可促进MC3T3-E1细胞中分化标志物(COLⅠ、ALP和OPN)基因的表达,加用1,25-(OH)2D3后可增强此作用.结论 雌激素和维生素D作为两种重要的调节骨代谢的激素,在促进成骨细胞增殖方面可能无协同作用,而在促进其分化方面可能有协同作用.     

氟化物对成骨细胞增殖和分化的影响

目的研究不同浓度氟化物对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响.方法经酶消化法从24h新生Wister乳鼠颅盖骨分离得到的成骨细胞经不同浓度的氟化钠(NaF)作用后,采用MTT法检测细胞增殖;PNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;放射免疫法测定培养液中骨钙素(BGP)含量.结果低浓度NaF(10-7mol/L～10-5mol/L)可刺激细胞增殖;高浓度NaF(10-4mol/L～10-3mol/L)则抑制细胞增殖.NaF对成骨细胞分化的影响则呈多样性.ALP的活性改变基本与细胞增殖率的变化相同,即各浓度NaF均促进细胞骨钙素分泌,与对照组相比有统计学意义.结论氟化物对成骨细胞的增殖及早期分化呈双向调节,即小剂量促进,大剂量抑制.但对其晚期分化呈一致性,即促进作用.     

17β-雌二醇对大鼠骨髓基质细胞PPAR-γ2 mRNA表达的影响

目的　研究 17β 雌二醇 (E2 )对大鼠骨髓基质细胞过氧化物酶增殖物活化受体γ2 (PPAR γ2 )mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　用 1,2 5 (OH) 2 D3 和地塞米松 (DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化 ,应用半定量RT PCR及Western印迹技术 ,观察不同浓度E2 对骨髓基质细胞分化过程中PPAR γ2 mRNA及蛋白表达的影响 ,这些细胞的碱性磷酸酶 (ALP)活性和Ⅰ型胶原含量也被测定。结果　E2 能显著促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR γ2 mRNA及蛋白的表达 ,且呈剂量依赖性。E2 浓度为 10 -6mol/L时 ,PPAR γ2 mRNA的表达从 (1.3± 0 .5 ) %增至 (17.7± 2 .5 ) % (P <0 .0 1) ;PPAR γ2 蛋白的表达从 (1.16± 0 .10 ) %增至 (4 .0 8± 0 .13 ) % (P <0 .0 1)。细胞ALP活性明显受E2 的抑制 ,在上述E2 浓度时ALP的活性从 (4 2 .6± 2 .5降至 3 .6± 0 .7)mU/mg蛋白 (P <0 .0 0 1)。Ⅰ型胶原含量均随E2 浓度增加而降低。结论　E2 促进体外培养的骨髓基质细胞向脂肪细胞分化而抑制其向成骨细胞分化。     

持续性与间歇性低载荷机械振动对成骨细胞增殖与分化的影响

目的观察不同低载荷振动方式对成骨细胞增殖与分化的影响。方法应用振动加载器给予培养的成骨细胞MC3T3-E1以强度为0.25 g、频率35 Hz的振动载荷,设置空白组(A组),持续振动10 min(B组)及振动5 min间歇5 min再振动5 min(C组)两种加载模式组,加载结束后分别检测各组MC3T3-E1细胞的增殖能力(CCK-8法)、碱性磷酸酶(ALP)活性及Runx-2蛋白的表达变化。结果 3组之间成骨细胞增殖情况无明显统计学意义(P=0.742),B组与C组ALP活性及Runx-2蛋白的表达明显高于A组,C组的ALP活性及Runx-2蛋白的表达显著高于B组(P<0.05)。结论低载荷机械振动对成骨细胞的增殖并无影响,然而低载荷机械振动可以促进成骨细胞的分化,特别是适当的间歇低载荷机械振动能够更加明显的促进成骨细胞的分化。     

依普拉芬对大鼠成骨细胞增殖分化及一氧化氮合成的影响

目的研究依普拉芬对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖分化以及一氧化氮(nitric oxide,NO)合成的影响。方法体外分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,将不同浓度的依普拉芬加入培养液,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙化结节以及培养基中NO浓度。结果与阴性对照组相比,依普拉芬可增加成骨细胞数量(P<0.01),提高细胞的ALP活性和促进钙化结节形成,增加培养液中NO浓度(P<0.01)。其中,依普拉芬浓度在10~8~10~5mol/L之间作用最为显著。结论一定浓度的依普拉芬可以促进体外培养成骨细胞的增殖、分化的作用,这种作用可能是通过增加细胞内NO合成进行调控的。     

重组人结缔组织生长因子对人成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响

目的 研究重组人结缔组织生长因子(rCTGF)对人成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响.方法 用rCTGF干预体外培养的人成骨细胞,采用[3H]-TdR掺入法检测人成骨细胞增殖率,α-磷酸萘酚法测定细胞内碱性磷酸酶活性变化,放射免疫法测定骨钙素含量的变化,Western印迹法检测Ⅰ型胶原表达的变化,应用流式细胞仪检测rCTGF埘成骨细胞凋亡的影响.结果 rCTGF呈剂量依赖性促进人成骨细胞增殖,200 ng/ml rCTGF达最大效应;rCrrGF干预显著促进人成骨细胞分化,rCTGF旱剂量依赖性增加Ⅰ型胶原、骨钙素表达及碱件磷酸酶活性;rCTGF干预可显著减少成骨细胞凋亡.结论 rCTGF可显著促进人成骨细胞增殖、分化,并抑制人成骨细胞凋亡.     

细胞外信号调节激酶调控乙醛对肝星状细胞的影响

目的 观察PD98059(特异性丝裂原细胞外信号反应激酶阻断剂)调控乙醛刺激大鼠肝星状细胞(HSC)周期，影响细胞增殖、Ⅰ型胶原蛋白分泌及转化生长因子(TGF)β1 mRNA表达。方法 不同浓度PD98059对乙醛刺激的HSC进行处理；流式细胞仪检测细胞周期，MTT法检测细胞增殖变化，ELISA法检测HSC内Ⅰ型胶原蛋白分泌，RT-PCR法检测HSC内TGFβ1 mRNA表达。结果 PD98059能剂量依赖性地影响乙醛刺激的HSC周期，使G0／G1期细胞百分比增高，S期细胞减少，从而抑制乙醛刺激的HSC增殖、HSC内Ⅰ型胶原蛋白分泌及TGFβ2mRNA表达。结论 细胞外信号调节激酶信号通路影响乙醛刺激的大鼠HSC增殖Ⅰ型胶原蛋白分泌及TGFβ1mRNA表达。     

含骨碎补总黄酮血清对新生SD大鼠成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的 探讨骨碎补总黄酮含药血清对新生SD大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化的影响及其作用机制.方法 (1)骨碎补总黄酮含药血清的制备:选用12月龄雌性SD大鼠,药物灌胃,每日1次,连续12 d,末次灌药1.5 h后腹主动脉取血,分离血清备用.(2)实验模型的建立:采用二次酶消化法从新生SD大鼠颅骨获取成骨细胞,传代培养,取第3代成骨细胞为实验模型.(3)指标测定:①细胞增殖:用MTr法;②细胞分化:碱性磷酸酶(ALP)活性(PNPP法);骨钙素含量(放射免疫分析法);③细胞矿化:采用茜素红染色法,在40倍光镜下计矿化结节.结果 骨碎补总黄酮含药血清可刺激体外培养新生SD大鼠成骨细胞增殖,促进成骨细胞合成分泌ALP,且能增加成骨细胞骨钙素的分泌,促进矿化结节的形成.结论 骨碎补总黄酮可促进成骨细胞的增殖、分化和矿化,从而促进骨形成.     

二甲双胍对骨骼的影响及其分子机制

研究发现二甲双胍可对抗骨量丢失,减少糖尿病患者的骨折风险,其确切机制尚未阐明.目前的研究主要集中于骨髓间充质干细胞和成骨细胞,认为二甲双胍可促进成骨细胞的增殖、分化和矿化,提高碱性磷酸酶(ALP)和I型胶原蛋白(Col I)的表达和分泌.已有的证据认为二甲双胍可通过AMP活化蛋白激酶(AMPK)通路、细胞外信号调节激酶(ERK)通路及对过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)/核转录因子α1(Cbfα1)的调控,实现对成骨细胞生物学行为的调节,并具有拮抗高糖毒性的作用.对其进行深入研究,可能为糖尿病患者骨质疏松的防治提供有价值的用药参考.     

卡托普利对体外新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的 观察卡托普利对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化的影响。方法 应用酶序列消化分离培养法培养新生大鼠颅骨成骨细胞。在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的卡托普利,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、碱性磷酸酶染色法、紫外分光光度法、原子吸收光谱法鉴定成骨细胞,观察卡托普利对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶含量、钙和羟脯氨酸含量的影响。结果卡托普利能促进成骨细胞增殖,实验中最佳作用浓度是10^-11 mol/L,最佳作用时间是24h。卡托普利促进成骨细胞表达碱性磷酸酶,实验是最佳作用浓度是10^-11 mol/L,最佳作用时间是3d。卡托普利降低成骨细胞上清液中钙含量,对细胞内差劲脯氨酸的含量没有影响。结论 卡托普利有促进成骨细胞增殖和促进碱性磷酸酶表达的作用。     

1α，25-二羟维生素D3对成骨细胞增殖分化、Ⅰ型胶原及核心结合因子α-1基因表达的影响

目的研究1α,25-二羟维生素D3[1α,25-（OH）2D3]对体外培育SD大鼠成骨细胞（OB）增殖分化以及核心结合因子α-1（Cbfa-1）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）mRNA表达的影响。方法采用胰蛋白酶和胶原酶消化法从24h内新生SD乳鼠颅盖骨分离得到OB,设置0、1、10、100nmol／L1α,25-（OH）2D3干预组,干预24、48、72h后分别采用噻唑蓝比色法（MTT）检测OB增殖率,采用PNPP法测定碱性磷酸酶（ALP）活性,采用逆转录-聚合酶链反应法检测细胞cbfa-1和ColImRNA表达。结果 在1α,25-（OH）2O3干预24、48h和72h后,与0nmol／L组比较,1nmol／L组吸光度（A值）均显著增加（P〈0．05）;1α,25-（OH）2D3干预细胞ALP活性、ColⅠ和Cbfa-1基因mRNA表达呈时间依赖性和剂量依赖性增高,且在24h、48h和72h,100nmol／L组与0nmol／L组比较,以上指标差异均显著性增高（P〈0．05）。结论低浓度1d,25-（OH）2D3可促进OB增殖和分化;高剂量对OB增殖无明显作用,但可促进OB分化,提高其ALP活性,增强ColⅠ及Cbfa-1基因mRNA表达而影响骨代谢。     

Tigogenin inhibits adipocytic differentiation and induces osteoblastic differentiation in mouse bone marrow stromal cells

We investigated the effect of tigogenin on adipocytic and osteoblastic differentiation in mouse bone marrow stromal cells (BMSCs). Tigogenin enhanced the proliferation of BMSCs significantly. Tigogenin treatment reduced the adipogenic induction of lipid accumulation, visfatin secretion, and the expressions of peroxisome proliferation-activated receptor (PPAR)γ2 and adipocyte fatty acid-binding protein (ap)2. Moreover, tigogenin had no effect on the mitotic clonal expansion. On the other hand, tigogenin significantly elevated alkaline phosphatase (ALP) activity and the expressions of Cbfa1, collagen type I (COL I) and osteocalcin (OCN), as well as the content of matrix calcium in BMSCs. Further, SB-203580 antagonized the tigogenin-promoted osteogenesis. These observations suggested that tigogenin may modulate differentiation of BMSCs to cause a lineage shift away from the adipocytes and toward the osteoblasts, which is at least mediated by inhibition of PPARγ and via p38 MAPK pathway, and is a potential drug preventing the development of osteoporosis and the related disorders.     

Glimepiride induces proliferation and differentiation of rat osteoblasts via the PI3-kinase/Akt pathway

Glimepiride is a third-generation sulfonylurea agent and is widely used in the treatment of type 2 diabetes mellitus. In addition to the stimulatory effects on pancreatic insulin secretion, glimepiride has also been reported to have extrapancreatic functions including activation of PI3 kinase (PI3K) and Akt in rat adipocytes and skeletal muscle. PI3-kinase and Akt are important signaling molecules in the regulation of proliferation and differentiation in various cells. This study investigated the actions of glimepiride in rat osteoblasts and the role of PI3K/Akt pathway. Cell proliferation was determined by measuring absorbance at 550 nm. Supernatant assay was used for measuring alkaline phosphatase activity. Western blot analysis was used for determining collagen I, insulin receptor substrate-1/2, PI3K/Akt, and endothelial nitric oxide synthase expression. We found that glimepiride significantly enhanced proliferation and differentiation of osteoblasts and led to activation of several key signaling molecules including insulin receptor substrate-1/2, PI3K/Akt, and endothelial nitric oxide synthase. Furthermore, a specific inhibitor of PI3K abolished the stimulatory effects of glimepiride on proliferation and differentiation. Taken together, these observations provide concrete evidence that glimepiride activates the PI3K/Akt pathway; and this activation is likely required for glimepiride to stimulate proliferation and differentiation of rat osteoblasts.     

高铁环境对成骨细胞生物活性的影响

目的探讨高铁环境对人成骨细胞(hFOB1.19)活性指标的影响。方法采用细胞贴壁法培养成骨细胞(hFOB1.19)后,将不同浓度枸橼酸铁铵(50、100、200μmol/L)加入细胞培养基,用MTT法检测成骨细胞增生活性;碱性磷酸酶活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性;流式细胞仪检测成骨细胞凋亡情况;Vonkossa染色法行钙结节染色;用RT-PCR和Western blotting分别检测Ⅰ型胶原(COL1)的基因及蛋白表达变化。结果用不同浓度枸橼酸铁铵干预成骨细胞后,与对照组相比,48 h与72 h组成骨细胞增生活性呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(P0.05);48 h组成骨细胞凋亡率呈浓度依赖性升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);不同浓度枸橼酸铁铵干预10 d和14 d时各组成骨细胞碱性磷酸酶活性均随枸橼酸铁铵浓度增高而降低,差异有统计学意义(P0.05);与对照组相比,枸橼酸铁铵干预17 d后钙结节染色结果显示,矿化面积和钙结节形成随铁离子浓度增加而减少;枸橼酸铁铵干预3 d后呈剂量依赖性下调Ⅰ型胶原基因和蛋白的表达。结论高铁环境使成骨细胞成骨活性指标均受到抑制。