bFGF对局灶性脑缺血大鼠脑组织ERK表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后对胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)表达的影响,探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元ERK的调节作用及机制。方法应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2 h再灌注损伤24 h,采用TUNEL法、免疫组化检测海马及皮质内神经元凋亡和ERK的表达。结果 sham组鼠海马及大脑皮质偶见凋亡细胞,大脑皮质及海马神经元内少见ERK免疫反应阳性细胞;I/R组鼠海马及皮质神经元凋亡增加,缺血再灌注损伤后大脑皮质及海马神经元内ERK阳性表达明显高于假手组;bFGF组鼠海马及皮质神经元凋亡减少,皮质及海马神经元内ERK表达较I/R组明显增加。结论 bFGF显著减少缺血神经元凋亡,上调脑缺血诱导的ERK表达,对脑缺血再灌注海马及皮质神经元的具有保护作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对局灶性脑缺血大鼠脑组织C/EBP同源蛋白表达的影响

目的:研究大鼠脑缺血再灌注后对C/EBP同源蛋白(C/EBP homogous protein,CHOP)表达的影响,探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元CHOP的调节作用及机制.方法:应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2h再灌注损伤12 h,采用TUNEL法、免疫组织化学方法检测海马及皮质内神经元凋亡和CHOP的表达.结果:Sham组海马及皮质偶见凋亡细胞,皮质及海马神经元内少见CHOP免疫反应阳性细胞;I/R组海马及皮质神经元凋亡增加,缺血再灌注损伤后皮质及海马神经元内CHOP阳性表达高于假手术组.bFGF组海马及皮质神经元凋亡减少,皮质及海马神经元内CHOP表达较I/R组减少.结论:bFGF减少缺血神经元凋亡,抑制脑缺血诱导的CHOP表达,对脑缺血再灌注海马及皮质神经元具有保护作用.     

bFGF对局灶性脑缺血大鼠脑组织GRP78表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后对葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)表达的影响,探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元GRP78的调节作用及机制。方法应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2h再灌注损伤12h,采用TUNEL法、免疫组化检测海马及皮质内神经元凋亡和GRP78的表达。结果 sham组,海马及皮质偶见凋亡细胞,皮质及海马神经元内少见GRP78免疫反应阳性细胞;I/R组,海马及皮质神经元凋亡增加,缺血再灌注损伤后皮质及海马神经元内GRP78阳性表达明显高于假手术组。bFGF组,海马及皮质神经元凋亡减少,皮质及海马神经元内GRP78表达较I/R组明显增加。结论 bFGF显著减少缺血神经元凋亡,上调脑缺血诱导的GRP78表达,对脑缺血再灌注海马及皮质神经元的具有保护作用。     

碱性成纤细胞生长因子对局灶性脑缺血大鼠脑组织核因子-κB表达的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元NF-κB的调节作用及机制。方法30只Wista大鼠随机分为Sham组、缺血再灌注组(I/R组)和bFGF组。应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2h再灌注损伤24h,采用TUNEL法、免疫组化检测海马及皮质内神经元凋亡和NF-κB的表达。结果sham组海马及皮质偶见凋亡细胞,NF-κBp65在细胞核内无表达,在胞浆内极少表达;I/R组海马及皮质神经元凋亡增加,NF-κBp65在细胞内有所表达,皮质及海马NF-κBp65的表达明显高于sham组。bFGF组大脑皮质及海马NF-κBp65的表达较I/R组明显增多。结论bFGF显著减少缺血神经元凋亡,上调脑缺血诱导的NF-κB表达,对脑缺血再灌注海马及皮质神经元的具有保护作用。     

利福平通过抑制小胶质细胞活化对大鼠全脑缺血发挥保护作用

目的:探讨利福平对大鼠全脑缺血/再灌注损伤的保护作用及对小胶质活化的影响。方法:采用双侧颈总动脉夹闭合并低血压建立全脑缺血/再灌注大鼠模型,成年雄性SD大鼠42只,随机分成3组,假手术组(S),缺血再灌注组(I/R),利福平干预组(I/R+RFP)。利福平(20 mg/kg)在缺血后30 min腹腔注射。采用Morris水迷宫测定大鼠认知功能改变,HE染色观察海马CA1区病理学变化,免疫组织化学方法检测海马CA1区小胶质细胞活化情况,酶联免疫法(ELISA法)测定各组大鼠海马组织IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果:利福平对大鼠急性全脑缺血/再灌注损伤后的行为学有明显的改善作用,I/R+RFP组大鼠的寻台潜伏期明显缩短,同时,该组大鼠海马神经元损伤数目也显著减少。此外,利福平处理后全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区小胶质细胞活化明显受到抑制,海马组织内IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著下调。结论:利福平对全脑缺血/再灌注大鼠脑损伤有明显的保护作用,其机制可能与抑制小胶质细胞活化,减少IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子的释放,从而抑制炎症反应相关。     

脑缺血预处理诱导海马CA1区神经元Bad磷酸化及其蛋白表达的变化

目的: 观察大鼠脑缺血预处理(CIP)后不同时间点海马CA1区胞质及线粒体中Bcl-xl/Bcl-2相关死亡促进因子(Bad)和p-Bad蛋白水平变化,探讨其在缺血耐受机制中的作用.方法: 采用SD大鼠4动脉结扎全脑缺血模型,利用焦油紫染色、免疫印迹法检测神经元的损伤及蛋白表达.结果: 焦油紫染色显示,脑缺血再灌注(I/R)3d,CA1区神经元大量损伤,与I/R组相比,CIP组CA1区存活的神经元增加;免疫印迹结果显示,CIP组胞质中Bad磷酸化水平于再灌注3h和3d出现高峰,而其蛋白表达无明显变化;与I/R对应时间点相比,CIP后再灌注3h和3d p-Bad升高.CIP后线粒体中p-Bad在再灌注不同时间点无明显变化,而其蛋白表达在再灌注后期(6h～3d)逐渐下降.结论: 脑缺血预处理可有效减轻海马CA1区神经元损伤;同时诱导神经元胞质中p-Bad蛋白水平升高,线粒体Bad蛋白表达降低.脑缺血预处理后Bad线粒体转位的降低可能是缺血耐受的重要机制.     

脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区p-JNK表达和Bax的相关性的试验研究

目的:观察大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区活化的JNK蛋白的表达情况,探讨缺血性脑损伤后神经细胞凋亡相关机理.方法:参照Zea Longa报道的线栓法制备缺血再灌注动物模型,随机将雄性SD大鼠分为正常对照组、缺血再灌注组及假手术对照组.并分别在不同时间点断头取脑制作标本,连续切片作p-JNK、Bax免疫组化染色及HE染色.结果:脑缺血再灌注后海马CA1区p-JNK表达与Bax的表达呈正相关(r=0.838,P＜0.01).p-JNK明显表达时间(2h)略早于Bax的表达,且产生的高峰时间亦稍早.结论:海马CA1区p-JNK表达与Bax的表达呈正相关.     

Genistein后处理介导eNOS激活及其对缺血后神经元的保护作用

 目的 研究Genistein后处理 (Genistein Postconditioning, GPC) 对脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区神经元的神经保护作用,及其对eNOS磷酸化水平的影响,从而揭示GPC神经保护作用可能的分子机制。方法 建立大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,采用Western Blot技术检测大鼠海马CA1区eNOS、p-eNOS的表达;NeuN染色和TUNEL技术分别观察海马CA1区神经元的存活和凋亡样损伤。结果 1. Western Blot结果显示,与I/R组相比GPC后再灌注30min和3d p-eNOS水平显著升高,而eNOS蛋白表达在各个时间点没有明显变化。2. 激光扫描共聚焦显微镜技术结果显示,GPC组与对照组相比较,海马CA1区存活的神经元细胞明显增加,而凋亡样损伤的神经元显著减少;3. NOS抑制剂L-NAME不但有效降低p-eNOS水平,而且可显著减弱GPC诱导的神经保护作用。结论 Genistein后处理可抑制大鼠海马CA1区神经元凋亡,其机制可能与p-eNOS表达上调有关。     

去甲肾上腺素和缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:研究去甲肾上腺素预处理(NE-P)和缺血预处理(IP)对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:复制缺血再灌注损伤(IRI),采用末端标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;应用免疫组化SABC法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:I/R组凋亡细胞较多,NE-P组及IP组凋亡细胞明显少于I/R组(P＜0.01)。在I/R组Bcl-2的表达少而Bax的表达较多,NE-P组及IP组Bcl-2的表达明显高于I/R组(P＜0.01),而Bax的表达明显低于I/R组(P＜0.01)。NE-P组与IP组各指标均无显著差异(P＞0.05)。结论:NE-P可抑制I/R诱发的心肌细胞凋亡,Bcl-2和Bax的蛋白表达在心肌凋亡的发生中起重要作用。NE-P与IP两者对心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响的作用相近。     

氯化血红素预处理对全脑缺血/再灌注大鼠海马神经元的保护作用

目的 研究氯化血红素对大鼠全脑缺血/再灌注后海马神经元的保护作用。方法 84只雄性Wistar大鼠采用4血管闭塞法制造大鼠全脑缺血模型,观察不同剂量氯化血红素对大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区神经元形态学的影响,并应用流式细胞仪检测海马神经元凋亡率。结果 氯化血红素预处理组与缺血/再灌组相比海马神经元凋亡率下降,海马CA1区锥体细胞组织学分级明显降低,神经元密度明显升高(p<0.05)。而氯化血红素治疗组与缺血/再灌组相比无统计学意义(p>0.05)。结论 氯化血红素预处理对大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体神经元具有明显的保护作用。     

Inhibition of EphA4 signaling after ischemia–reperfusion reduces apoptosis of CA1 pyramidal neurons

Hippocampal CA1 pyramidal neurons are sensitive to ischemic damage. However, the cellular and molecular mechanisms underlying neuronal cell death caused by ischemia–reperfusion (I/R) are not completely clear. Here, we report that the ephrinA/EphA cell–cell interaction signaling pathway plays an important role in the apoptosis of hippocampal CA1 pyramidal neurons induced by I/R. We found that the expression of ephrinA3 and EphA4 is increased in the CA1 region following transient forebrain ischemia. Blocking ephrinA3/EphA4 interaction by EphA4-Fc, an inhibitor of EphA4, attenuated apoptotic neuronal cell death, likely through the inhibition of caspase-3 activation. These results reveal a novel function of ephrin/Eph signaling in the regulation of apoptosis in CA1 pyramidal neurons after I/R.     

二苯乙烯苷对沙鼠脑缺血/再灌注引发海马损伤的保护作用

目的　研究二苯乙烯苷（tetrahydroxy stilbene glucoside, TSG）对脑缺血/再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）沙鼠脑海马损伤的保护作用及可能机制。 方法 采用结扎沙鼠双侧颈动脉缺血30 min,再灌注5 d复制沙鼠全脑I/R模型。沙鼠随机分为6组,假手术组、模型对照组、TSG大、中、小剂量（6、3、1.5 mg/kg）组和阳性对照药依达拉奉注射组（3 mg/kg）。5 d后通过Morris水迷宫测定沙鼠学习记忆功能;Nissl染色观察沙鼠大脑海马CA1区神经元结构和数量的变化;TUNEL染色法观察沙鼠大脑海马CA1区神经元凋亡的变化;Western blot法检测脑组织active-caspase-3的表达。 结果　与假手术组相比,I/R组沙鼠学习记忆能力明显降低,海马CA1区神经元大量丢失,结构紊乱。同时,I/R组沙鼠CA1区神经元凋亡数量明显增加,脑组织中caspase-3显著活化。TSG中、高（3、6 mg/kg）剂量组和依达拉奉阳性对照组均可以显著改善I/R引发的沙鼠学习记忆能力的降低,抑制海马CA1区神经元的丢失,改善神经元结构;抑制CA1区神经元的凋亡以及caspase-3的活化。而TSG低剂量组对上述变化均没有明显的治疗作用。 结论　TSG对于I/R引发的脑损伤,尤其是海马区神经元迟发性凋亡具有明显的治疗作用,这种作用与其抑制caspase-3的活化相关。     

巴戟天寡糖单体HexB减轻HUVECs缺氧复氧损伤

目的:研究巴戟天寡糖单体HexB减轻缺氧复氧(H/R)损伤诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的分子机制。方法:HUVECs分别用HexB、内质网应激(ERS)抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)和ERS诱导剂毒胡萝卜素(TG)干预,并将培养的HUVECs分为:对照组、HexB组、H/R组、HexB+H/R组、4-PBA+H/R组、TG组和HexB+TG组。CCK-8法和流式细胞术检测细胞活性及凋亡率,Western blot法检测ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)、凋亡相关蛋白caspase-12及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的蛋白水平。结果:与对照组比较,H/R组和TG组的细胞凋亡率明显增加,细胞活力明显降低,GRP78、CHOP、caspase-12及p-JNK的蛋白水平上调(P0.05);与H/R组比较,HexB+H/R组及4-PBA+H/R组的细胞凋亡率显著降低,细胞活力升高,GRP78、CHOP、caspase-12及p-JNK的蛋白水平降低(P0.05);与TG组比较,HexB+TG组的细胞凋亡率显著降低,细胞活力升高,GRP78、CHOP、caspase-12及p-JNK的蛋白水平降低(P0.05);HexB+H/R组与4-PBA+H/R组比较,细胞凋亡率、细胞活力及GRP78、CHOP、caspase-12、p-JNK蛋白水平的差异无统计学显著性。结论:通过抑制内质网应激,HexB可以减轻H/R诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与下调GRP78、CHOP、p-JNK及caspase-12的水平有关。     

养血清脑颗粒对蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的治疗作用

目的 探讨蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后养血清脑颗粒(Yangxueqingnaokeli,YXQNKL)的治疗作用.方法 采用蒙古沙鼠两侧颈总动脉结扎法,缺血30min再灌注5d模型(分为假手术组、缺血再灌注组、养血清脑颗粒治疗组).用Nissl染色法观察海马CA1区神经元的形态和数量,用免疫组织化学方法观察海马CA1区神经元神经钙离子感应蛋白1(NCS-1)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和谷氨酸盐合成酶(Glusyn)的表达情况.结果 与缺血再灌注组比较,缺血再灌注 0.4g/kg养血清脑颗粒治疗组和缺血再灌注 0.8g/kg养血清脑颗粒治疗组Nissl染色显示海马CA1区神经元数量明显增加(P＜0.05);免疫组织化学法显示海马CA1区神经元细胞NCS-1、caspase-3和Glusyn的阳性细胞数明显减少(P＜0.05).结论 全脑缺血再灌注后,给予养血清脑颗粒能显著增加海马CA1区神经元数量,这与其减少海马CA1区神经元NCS-1、caspase-3和Glusyn的表达有密切的联系.     

Co-existence of necrosis and apoptosis in rat hippocampus following transient forebrain ischemia

Morphological changes of CA1 and CA3 pyramidal neurons in rat hippocampus at different intervals following transient forebrain ischemia were examined to determine the nature of post-ischemic cell death in these regions. In the CA1 region, swelling of small dendrites occurred at approximately 24 h reperfusion. At approximately 48 h reperfusion, swelling was found in large dendrites of many CA1 neurons and the mitochondria and endoplasmic reticulum (ER) were dilated. A small portion of neurons showed chromatin aggregation and nuclear indentation without swelling signs. At approximately 60 h reperfusion, swelling of somata was evident in many neurons. Large dense chromatin clumps with round or ovoid contour were found in other neurons. At 72 and 96 h after ischemia, many large vacuoles and glias with active phagocytosis were observed. At 7 days after ischemia, the tissue was compact and many glias were found in the region. Most of the CA3 neurons had normal appearance after ischemia. A total of 5-10% CA3 neurons exhibited shrinking nuclei and chromatin aggregation at approximately 24 h reperfusion. The number of these neurons decreased overtime and disappeared at 72 h after ischemia. These results demonstrate the co-existence of necrosis and apoptosis in the CA1 region after transient forebrain ischemia. Most CA3 neurons remained intact after ischemia while a small portion of them showed apoptotic cell death.     

降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化CREB的上调作用

目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化CREB(p- CREB)表达的影响。方法:制作局灶性脑缺血再灌注模型实验组并给予CGRP,应用免疫组织化学、Western印迹和图像分析方法检测大鼠海马CA1区CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组CA1区CREB表达较假手术组减少,CGRP组CA1区的CREB表达高于缺血再灌注组。缺血再灌注组CA1区p-CREB表达高于假手术组,CGRP组p-CREB表达多于缺血再灌注组。结论:CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和p-CREB的表达,CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的。     

热应激对小鼠海马神经元的保护作用

本文观察了热应激预处理对脑缺血/再灌注昆明小鼠海马神经元的保护作用。实验采用昆明小鼠以双侧颈总动脉夹闭7min后再通制作脑缺血/再灌注模型,在缺血/再灌注前予以热应激预处理。根据不同的处理方法将动物随机分为四组:(1)正常对照组,(2)热应激预处理后缺血再灌注组(HS/IR),(3)缺血再灌注组(IR),(4)单纯热应激组(HS),后3组又分别分为1d、4d和14d三个亚组。水迷宫检测小鼠学习记忆的行为改变,免疫组织化学染色结合图像分析技术检测缺血/再灌注对海马CA1区神经元微管相关蛋白-2(MAP-2)的影响,Nissl染色计数CA1区神经元的数目。结果表明:与正常组、HS和HS/IR组比较,IR组小鼠水迷宫检测逃避潜伏期增加(P<0.01),其搜索策略以边缘式和限制式为主,而其它三组搜索策略则以趋向式和直线式为主。Nissl染色显示IR组和HS/IR组海马锥体细胞减少,且IR组细胞丢失比HS/IR组更多(P<0.05);MAP-2免疫组化染色显示4d时海马CA1区辐射层的树突发生紊乱和断裂,MAP-2有明显减少(P<0.05),14d时IR组MAP-2阳性表达主要聚集于胞浆中。以上实验结果提示,热应激预处理可以通过对海马神经元的保护作用改善动物脑缺血/再灌注引起的学习记忆能力的下降。     

9602对脑缺血再灌大鼠海马CA1区诱发电位与形态学改变的影响

目的:探讨脑缺血再灌注后海马CA1区诱发群峰电位的变化与形态学改变的关系及中药9602的影响。方法:在整体脑缺血再灌注后不同时间制备的海马脑片上,记录CA1区诱发群峰电位(PS)的变化。采用TUNEL,Nissl染色法进行形态学检测。结果:脑缺血再灌组诱发PS的阈强度明显大于假手术组,波幅显著减小;加条件刺激后PS增幅显著低于假手术组,持续时间缩短。上述变化始于脑缺血再灌后8h,随再灌时间的延长而加重。海马CA1区再灌后8h起TUNEL阳性细胞明显增多,24h达高峰,异常细胞8h最多,随后降低并在低水平持续到7d,细胞总数随再灌时间的延长逐渐减少。中药9602明显降低缺血再灌脑片PS阈强度,增大PS波幅;加大条件刺激后PS增幅并延长持续时间;明显减少海马CA1区的TUNEL阳性细胞数,阻止CA1区细胞数的减少。结论:脑缺血再灌后海马CA1区神经细胞兴奋性和反应性降低,与脑缺血再灌后迟发性神经元死亡(DND)有关,细胞凋亡起重要作用。9602明显改善CA1区神经细胞的兴奋性和反应性,可能与其抑制脑缺血再灌诱导的细胞凋亡,减轻DND的发生有关。     

缺血预处理减轻脑皮质缺血再灌注损伤的研究

目的观察缺血预处理对脑皮质缺血再灌注期间神经元凋亡及磷酸化糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）的影响,探讨其保护作用机制。结论雄性Wistar大鼠30只,随机分为假手术组（S）、缺血再灌注组（I/R）及预处理组（IPC）,每组各10只。采用4-VO法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。IPC组分离双侧颈总动脉,夹闭10s,开放30s,反复3次,最后夹闭10min。于术后2d处死大鼠,取出脑组织,采用TUNEL法检测大鼠皮质神经元凋亡情况;TTC法检测大鼠脑部梗死面积;光谱法检测磷酸化的GSK-3β水平（p-GSK-3β）;采用Linear Regression分析GSK-3β活性与大鼠皮质神经元凋亡、脑部梗死面积的相关性。结果与S组相比,I/R组和IPC组皮质神经元凋亡和梗死面积显著增多（P〈0.01）,p-GSK-3β水平降低（P〈0.01）;与I/R组相比,IPC组皮质神经元凋亡和梗死面积显著减少（P〈0.01）,p-GSK-3β水平增高（P〈0.01）;p-GSK-3β与大鼠皮质神经元凋亡、脑部梗死面积之间具有高度相关性（P〈0.01）。结论缺血预处理使p-GSK-3β水平增高,脑皮质神经元凋亡和梗死面积减少,从而减轻脑缺血再灌注损伤。