褪黑素抑制可卡因诱导的条件性位置偏爱大鼠DNMT1的下调

目的研究褪黑素拮抗大鼠可卡因诱导的条件性位置偏爱的作用和可能机制。方法建立可卡因诱导的条件性位置偏爱模型,诱导前30min给予褪黑素腹腔注射,检测实验大鼠条件性位置偏爱的变化,并应用Western blot、免疫荧光共聚焦激光扫描显微镜及real-time PCR技术,检测褪黑素对大鼠前额叶皮层中可卡因诱导的DMNT1表达的影响。结果褪黑素对可卡因诱导的大鼠条件性位置偏爱效应具有显著的抑制作用。共聚焦显微镜和Western blot结果表明,可卡因诱导大鼠前额叶皮层中DNMT1表达的减少,而褪黑素能够抑制可卡因的这种作用。Real-time PCR检测结果证明,可卡因诱导大鼠前额叶皮层中DNMT1 mRNA的下调,而褪黑素能够抑制这种作用。结论褪黑素可能通过抑制大鼠前额叶皮层中DNMT1表达的下调拮抗可卡因诱导的条件性位置偏爱。     

松果体及褪黑素对大鼠胸腺巨噬细胞酪氨酸激酶受体B表达的影响

目的:研究松果体摘除及补充褪黑素对大鼠胸腺巨噬细胞酪氨酸激酶受体B(trkB)表达的影响.方法:选用2月龄清洁级SD大鼠,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素注射7.5mg·kg~(-1)·d~(-1)组和松果体摘除+褪黑素腹腔15mg·kg~(-1)·d~(-1)组,术后4、 8周取材.应用trkB和单克隆抗体ED1免疫荧光双标显色法观察分析松果体摘除及补充外源性褪黑素后胸腺巨噬细胞trkB表达的变化.结果:与对照组相比,松果体摘除术后4周胸腺双阳性细胞表达减弱,补充褪黑素后无变化.术后8周松果体摘除组与对照组相比无明显差异,而低剂量组双阳性细胞表达异常增高,高剂量组恢复正常.各组平均灰度无明显差异.结论:松果体及褪黑素在影响胸腺细胞分化发育过程中,胸腺巨噬细胞表达的trkB也随之发生变化,其与胸腺细胞表达的trkB共同作用参与胸腺细胞分化发育.胸腺神经内分泌微环境的分泌调节是松果体及褪黑素保护胸腺细胞的通路之一.     

松果体褪黑素对大鼠胸腺CD4~+ CD25~+调节性T细胞发育及其相关基因Foxp3的影响

目的研究松果体摘除及补充褪黑素对大鼠胸腺CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg细胞)产生、输出及其相关基因叉状头/翅膀状螺旋转录子(Foxp3)表达的影响。方法选用雄性清洁级SD大鼠120只,分为正常组、假手术组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素低剂量组[腹腔注射7.5mg/(kg·d)]和松果体摘除+褪黑素高剂量组[腹腔注射15mg/(kg·d)],术后4、8周取材。应用流式细胞检测技术、RT-PCR法及免疫组织化学染色法观察并分析松果体摘除及补充外源性褪黑素后胸腺及外周血CD4、CD25双阳性细胞数量及胸腺Foxp3表达的变化。结果松果体摘除术后无论4周或者8周胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞数量均无明显变化,补充褪黑素后双阳性细胞数量呈时间、剂量依赖性明显增加;松果体摘除术后4周外周血CD4+ CD25+ Treg细胞数量明显增加,但补充褪黑素后恢复正常,而术后8周各组之间无显著性差异;半定量RT-PCR及免疫组织化学结果显示,松果体摘除后4周大鼠胸腺Foxp3表达水平明显升高,补充高低两种剂量褪黑素后均有所下降并达到正常水平,而松果体摘除后8周各组之间Foxp3的表达无明显差异。结论松果体摘除对胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞的产生无明显影响,但导致大鼠胸腺Foxp3的转录和翻译明显增加,胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞的输出增加,而补充外源性褪黑素后能逆转上述异常,长时间作用则其影响逐渐消失。     

松果体摘除及褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞白细胞介素-7表达的影响

目的 探讨松果体摘除及褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞白细胞介素7(IL-7)表达的影响及其意义.方法 1.培养大鼠胸腺上皮细胞,应用广谱角蛋白抗体进行免疫细胞化学显色鉴定;MTT法观察褪黑素(1×10-3～10-9mol/L)干预对细胞生长的影响;细胞分空白对照组、褪黑素10-8mol/L处理组和褪黑素10-6mol/L处理组,RT-PCR法观察细胞IL-7 mRNA的表达;2.选用清洁级雄性SD大鼠110只,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素7.5ms/(kg·d)腹腔注射组和松果体摘除+褪黑素15mg/(kg·d)腹腔注射组.术后4周和8周取材,运用免疫组织化学和RT-PCR方法 观察胸腺上皮细胞IL-7表达的变化. 结果 褪黑素干预对大鼠胸腺上皮细胞的生长无显著影响,但能使IL-7 mRNA的表达水平呈剂量依赖性升高;松果体摘除对大鼠胸腺上皮细胞表达IL-7无显著影响,补充褪黑素15mg/(kg·d)4周后IL-7表达显著增高,8周后均下降至正常水平. 结论 松果体及褪黑素可能通过影响大鼠胸腺上皮细胞IL-7的表达,从而调节胸腺细胞的分化发育.     

c-Fos和FosB/△FosB蛋白在精神分裂症模型小鼠脑内表达的差异

为了观察MK-801引发的精神分裂症模型小鼠脑内c-Fos和FosB/△FosB表达的差异,本实验选用雄性昆明小鼠,随机分为溶剂对照组、MK-801组(建立精神分裂症动物模型),采用免疫组化的方法检测模型动物脑内c-Fos和FosB/△FosB的表达,同时用免疫荧光双标对c-Fos和FosB/△FosB阳性的细胞进行定性分析。结果显示:精神分裂症动物模型组c-Fos蛋白的表达明显较FosB/△FosB广泛,几乎遍布全脑,而FosB/△FosB主要集中于前脑;在丘脑中线核群、板内核群、前核群和腹侧核群及脑桥核主要为c-Fos的表达,FosB/△FosB表达极少;在伏隔核、嗅结节、尾壳核、齿状回等核团主要为FosB/△FosB的表达,c-Fos表达极少。上述结果表明,c-Fos和FosB/△FosB的表达虽有重叠之处,但显示出明显的区域和强度的差异,且FosB/△FosB高度表达的区域与已知的精神分裂症相关脑区吻合,因此FosB/△FosB可能更适用于精神分裂症发病机制的研究。     

松果体及其褪黑素对大鼠胸腺细胞死亡信号通路的影响

目的探讨松果体及其褪黑素对胸腺细胞死亡信号通路的影响。方法选用清洁级SD大鼠,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除 褪黑素腹腔注射7.5 mg/(kg.d)组和松果体摘除 褪黑素腹腔注射15 mg/(kg.d)组。术后4、8周取材。运用免疫细胞化学ABC法染胸腺Fas/FasL、caspase_8、caspase_12阳性细胞,计算机图像分析测量阳性细胞面积及其染色强度。以RT-PCR法检测褪黑素干预原代培养胸腺细胞TNF-β的表达。结果松果体摘除后胸腺细胞Fas染色显示阳性细胞面积显著增大,术后4周皮质阳性细胞面积增加,有统计学意义,术后8周其差异继续扩大。FasL染色结果与Fas类似。松果体摘除后胸腺细胞caspase_8阳性细胞面积术后8周无论皮质还是髓质均显著增加,对caspase_12影响不明显。补充褪黑素后,松果体摘除造成的各种参数的影响逐渐减弱。褪黑素处理后大鼠培养胸腺细胞TNF-β的表达明显减弱。结论松果体能通过影响胸腺细胞死亡信号通路从而调控大鼠胸腺细胞的凋亡,补充褪黑素能缓解相关影响。     

松果体及其褪黑素影响胸腺T细胞发育周期

目的 探讨松果体对胸腺分化发育时细胞周期的影响。方法 选用清洁级SD大鼠,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除、松果体摘除 褪黑素腹腔注射7．5mg／kg组和松果体摘除 褪黑素腹腔注射15mg／kg组。术后4、8周取材。用ABC法染胸腺cyclin A、cyclinE阳性细胞,计算机图像分析仪测量各阳性细胞面积及其染色强度。以碘化丙啶(PI)一步插入性DNA定量荧光染色法,流式细胞术测定胸腺T淋巴细胞不同细胞周期的分布状况。以Rrr-PCR法检测褪黑素对胸腺细胞周期依赖性激酶1β表达的影响。结果 松果体摘除对胸腺cyclin E表达的影响甚于对cyclin A的影响,促进cyclinE的合成,松果体摘除后胸腺细胞周期的变化表现为G1期减少,S期和G2 M期百分比增多。补充褪黑素后上述改变有所恢复,但与剂量不成线性关系,且对皮髓质影响有所不同。褪黑素能促进胸腺细胞表达细胞周期依赖性激酶1β。结论 松果体摘除能显著影响胸腺细胞分化发育,补充褪黑素能缓解相关影响。     

SD大鼠海洛因CPP易感性差异的伏隔核壳区D2受体及DAT机制

目的:建立大鼠海洛因成瘾易感性差异的条件性位置偏爱模型,检测海洛因CPP易感性差异大鼠伏隔核壳区(AcbSH)D2受体(dopamine D2 receptor,D2R)及多巴胺转运体(dopamine transportor,DAT)蛋白表达的动态变化,探讨海洛因精神依赖易感性差异可能机制.方法:130只雄性SD大鼠随机抽取30为生理盐水对照组(SC),其余100只大鼠为海洛因处理组进行条件性位置偏爱(CPP)训练,海洛因处理组根据海洛因诱导的CPP强度不同再分为高CPP组(HP)和低CPP组(LP),各占总数的30%,利用免疫组化方法对高、低偏爱组及生理盐水对照组大鼠末次海洛因注射后30分钟、戒断第1、3、7、14天AcbSH D2R和DAT蛋白表达进行检测.结果:①海洛因处理后大鼠AcbSH区D2R和DAT蛋白表达均显著下降,而在戒断后逐渐回升;②海洛因高偏爱组大鼠在所有检测时点AcbSH区D2R下凋比低偏爱组大鼠更为明显;③海洛因高偏爱组大鼠各脑区所有检测时点DAT表达与低偏爱组大鼠均无明显差别.结论:①海洛因慢性处理后,大鼠AcbSH区D2R和DAT均出现适应性下调;②不同个体D2R敏感性或受体水平存在差异,低D2R可能与海洛因成瘾的高易感性与有关;③未发现不同易感性的大鼠DAT蛋白水平存在差异,海洛因成瘾易感性与DAT的表达可能没有直接的相关性.     

吗啡诱导的CPP复燃大鼠前额叶皮层和海马区EAAT3蛋白表达的变化

目的: 观察吗啡诱导的条件性位置偏爱(CPP)复燃大鼠前额叶皮层和海马区兴奋性氨基酸转运蛋白3(EAAT3)的表达变化,探讨前脑皮层及海马区EAAT3在阿片类药物复吸过程中的作用。方法: 成年雄性SD大鼠40只,随机分为对照组(control)、CPP建立(Es)、消退(Ex)、复燃2 h(Re2)、复燃4 h(Re4)组,每组8只。腹腔注射吗啡(10 mg/kg)连续10 d,建立CPP模型;停止给药使CPP逐渐消退;单次腹腔注射吗啡 2.5 mg/kg诱导已消退的CPP复燃。Western blotting检测各组大鼠前额叶皮层和海马区EAAT3蛋白表达变化。 结果: (1)腹腔注射恒定剂量的吗啡10 mg/kg, Es组大鼠在伴药箱的停留时间比control组明显延长(P<0.05),成功建立CPP模型;待CPP消退后,吗啡2.5 mg/kg腹腔注射诱发Re2和Re4组大鼠在伴药箱的停留时间再次比control组明显延长(P<0.05),CPP复燃。(2)Es组前额叶皮层EAAT3比control组表达减少(P<0.05),CPP消退的Ex组表达回升,在Re4组表达再次减少(P<0.05)。(3)海马区EAAT3在各组表达水平未见明显变化(P>0.05);而Es、Ex组海马CA1区EAAT3比control组表达明显升高(P<0.05)。 结论: 吗啡诱导CPP复燃时,前额叶皮层EAAT3的蛋白表达水平降低,重现CPP建立时的变化,提示阿片类药物复吸行为的形成可能与前脑皮层EAAT3的表达减少有关。     

去松果体对老年大鼠脑神经元脂褐素含量的影响

目的探讨摘除松果体对老年大鼠海马、斜角带神经元脂褐素含量的影响。方法摘除老年大鼠松果体后22天观察其海马CA1区、斜角带垂直支神经元脂褐素含量的变化。结果去松果体后大鼠斜角带垂直支神经元的脂褐素含量明显增多,海马CA1区神经元的脂褐素含量无明显变化。结论松果体对老年大鼠脑神经元具有一定的保护用。     

Rac1信号通路在小鼠可卡因情景线索记忆过程中的作用

目的:探讨Rac1信号通路在小鼠可卡因情景线索记忆过程中的作用。方法:将成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(control)、可卡因配对的条件性位置偏爱组(CPP)和Rac1抑制剂NSC23766处理组(NSC),利用CPP实验检测可卡因是否可诱导小鼠产生CPP,利用立体定位技术注射AAV-GFP病毒于小鼠海马CA1区并做免疫荧光染色观察海马CA1区神经元的形态;利用Western Blot及GST-pull down方式检测蛋白表达及活性变化;采用Rac1抑制剂NSC23766阻断信号通路探讨其对小鼠可卡因诱导的CPP的影响。结果:可卡因可以诱导小鼠形成CPP,并导致Rac1 GTPase活性增强及其下游信号分子cofilin磷酸化活性升高,并最终导致海马CA1区锥体神经元发生神经可塑性变化。结论:Rac1信号通路通过影响小鼠海马CA1区锥体神经元发生结构可塑性,从而参与调控可卡因情景线索记忆。     

BDNF和GDNF在海洛因诱导条件性位置偏爱大鼠mPFC的表达

目的:研究大鼠边缘前区(PrL)和下边缘皮层(IL)BDNF和GDNF在海洛因诱导条件性位置偏爱(CPP)及戒断状态的表达变化.方法:SD大鼠随机分为对照组(control)和海洛因诱导组,海洛因诱导组分为海洛因诱导CPP状态(heroin)和戒断状态(withdrawal).小剂量递增法行海洛因诱导CPP建模,并自然...     

海洛因诱导大鼠伏隔核NMDA受体亚基对GABA表达的影响

目的:研究大鼠伏隔核(NAc)在海洛因诱导条件性位置偏爱(CPP)状态及戒断状态下，NMDA受体亚基NR2B和NR2C对GABA表达的调控，探索GABA能神经元上NR2B和NR2C亚基在海洛因诱导中的作用。方法:将SD大鼠随机分为两组，即对照组和海洛因诱导组。海洛因诱导组又分为海洛因诱导CPP状态和海洛因戒断状态。采用海洛因小剂量递增法皮下连续注射7 d,建立海洛因诱导CPP模型，再自然戒断7 d,免疫组织化学染色检测各组大鼠伏隔核GABA和NR2B、NR2C亚基的位置关系。结果:采用小剂量递增法连续注射7 d海洛因，大鼠形成了稳定的海洛因诱导CPP模型。免疫荧光染色结果可见，各组大鼠伏隔核均有GABA、NR2B和NR2C表达，且GABA与NR2B及NR2C受体均有共表达。免疫组织化学结果显示，海洛因成瘾状态大鼠伏隔核GABA表达量明显高于对照组和戒断状态，具显著性差异(P<0.01)。戒断状态大鼠GABA表达量最低。结论:GABA的表达变化受NMDA受体亚基活性的影响；NR2B亚基对GABA的调控作用可能参与了海洛因依赖的复燃。     

松果体及褪黑素对大鼠胸腺CD4+/CD8+T细胞分化发育的影响

目的：探讨松果体和褪黑素对胸腺T细胞分化发育的影响。方法：实验组为松果体摘除组和松果体摘除 褪黑素组。ABC法染胸腺CD4^ 、CD8^ 细胞。流式细胞术测定胸腺和血液T淋巴细胞CD4^ 、CD8^ T亚类。结果：松果体摘除后胸腺明显萎缩,并随时间延长而加剧,补充褪黑素后胸腺重量逐渐恢复。松果体摘除后胸腺和血液中CD4^ T细胞百分比无明显波动;胸腺CD8^ T细胞比例上升,但血液CD8^ T细胞比例则下降;补充褪黑素后胸腺CD4^ T细胞在低剂量组略有下降,而高剂量组则显著升高,胸腺和血液CD8^ T呈下降趋势,双阳性细胞比例恢复正常,双阴性细胞比例则上升。结论：松果体能显著影响CD8^ T细胞的分化发育和释放,降低血液CD8^ T细胞的比例。补充褪黑素能缓解相关影响。     

吗啡精神依赖大鼠VTA-NAc-PFC神经环路NR1表达的变化

目的:研究吗啡诱导条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)大鼠中脑腹侧被盖区-伏核-前额叶皮质(VTA-NAc-PFC)神经环路各核团中N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚基(NR1)表达的变化。方法:20只大鼠随机分为生理盐水对照组和吗啡条件性位置偏爱模型组,模型组采用大鼠颈背部皮下吗啡剂量递增注射(起始剂量10 mg/kg,每天递增10 mg/kg,至注射10 d时为100 mg/kg),CPP训练10 d,末次训练后48 h CPP检测确认模型建立成功后取材,利用Western Blot方法检测VTA,NAc和PFC内NR1蛋白的表达情况。结果:经CCP检测,模型组大鼠在白箱(吗啡伴药箱)停留时间在训练前和训练后分别为408±93 s和528±81 s,与生理盐水组比较(训练前和训练后分别为393±81 s和416±58 s)明显有所延长(P0.05)。Western Blot检测到吗啡诱导条件性位置偏爱大鼠的NAc核团NR1表达水平较生理盐水组显著增加(P0.05),而VTA和PFC两个核团的NR1表达水平则未见明显改变。结论:NR1在吗啡精神依赖过程中NAc核团中表达增加,而在VTA和PFC核团中没有增加。     

摘除松果体对大鼠学习记忆及基底前脑胆碱能系统的影响

目的　探讨松果体功能减退对大鼠学习记忆及基底前脑胆碱能系统的影响。方法　选用 3月龄SD大鼠 2 4只 ,随机分为对照组、去松果体组和褪黑素 (MT)组。手术摘除松果体。饲养 1个月后用Morris水迷宫测试学习记忆功能 ,同时用组织化学和免疫组化方法测定海马、前额叶皮质AchE纤维和内侧隔核、斜角带核的ChAT神经元的数量。结果　与对照组比较 ,去松果体组逃避潜伏期明显增加 ,海马、前额叶皮质AchE纤维数量明显减少 ,但内侧隔核、斜角带核的ChAT神经元数量变化不明显。结论　大鼠去松果体可引起大鼠学习记忆能力减弱 ,这可能与基底前脑胆碱能神经元的功能下降有关     

腹侧被盖区TLR4在吗啡条件性位置偏爱中的作用

目的研究腹侧被盖区免疫受体TLR4在吗啡成瘾中的作用。方法以成年雄性SD大鼠为研究对象,进行颅骨置管手术,在中脑腹侧被盖区双侧微量注射药物,采用条件性位置偏爱测试(CPP)这一药物成瘾研究的经典实验模型进行测试。结果皮下注射7.5 mg/kg吗啡诱导吗啡成瘾的获得,但单次吗啡注射并不能诱导成瘾;长期吗啡注射诱导的条件性位置偏爱在吗啡给药结束后至少可维持6d;注射TLR4拮抗剂LPS-RS可抑制大鼠吗啡条件性位置偏爱获得;吗啡CPP获得后在大鼠腹侧被盖区内单次注射LPS-RS,无法阻断吗啡CPP表达;CPP获得后连续5d腹侧被盖区内注射LPS-RS可阻断吗啡CPP维持。结论腹侧被盖区TLR4在吗啡CPP的获得和维持中起重要作用,腹侧被盖区TLR4可能是治疗吗啡成瘾的一个潜在靶点。     

去松果体后成年大鼠学习记忆及侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖的变化

目的观察松果体切除对学习记忆及侧脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞增殖的影响。方法将30只成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为非手术、假手术及去松果体组,每组大鼠10只。在建立动物模型16d后,连续5d测定大鼠在Morris水迷宫的学习记忆能力,继之用免疫组织化学方法观察SVZ的增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞的变化。结果去松果体组大鼠在Morris水迷宫泳游的逃避潜伏期及在原平台象限游泳距离的百分比均较非手术组或假手术组大鼠的明显延长或减少(P<0.01)。去松果体大鼠SVZ的PCNA阳性细胞数也明显低于非手术组或假手术组大鼠(P<0.01)。结论本研究首次观察到,去松果体使体内褪黑素减少,可导致学习记忆功能及SVZ神经干细胞增殖能力出现相似的明显下降趋势,说明褪黑素是确保学习记忆及神经发生得以正常进行的重要激素之一;提示褪黑素可能直接通过作用于神经干细胞上的相应受体以及间接通过提高基底前脑胆碱能系统功能来促进神经干细胞增殖,进而提高嗅觉记忆功能。     

米诺环素增加情绪有关脑区ΔFosB的表达来减轻LPS诱导的小鼠神经炎性反应

目的探究转录因子ΔFosB在米诺环素减轻脂多糖(LPS)诱导的神经炎性反应中的作用。方法成年C57BL/6小鼠连续3 d经腹膜内注射0.9%氯化钠溶液或米诺环素(50mg/kg),第3天再分别注射0.9%氯化钠溶液或LPS(0.83 mg/kg),注射后6或24 h取样。用免疫组化实验观察特定脑区小胶质细胞形态和ΔFosB的表达,以分析米诺环素对LPS导致神经炎性反应的抑制作用和ΔFosB的表达分布。用Image-Pro Premier 3D分析图像,用GraphPad Prism进行统计学分析。结果米诺环素可以有效减少蓝斑(LC)中LPS导致的小胶质细胞胞体面积的增加(P0.05),减少中枢的炎性反应。同时,米诺环素增加了抑郁症相关脑区LC(P0.001),臂旁核(LPB,P0.05)和下丘脑室旁核(PVN,P0.05)中ΔFosB的表达。结论米诺环素可能通过增加情绪有关脑区LC,LPB,PVN中ΔFosB的表达来减轻脂多糖诱导的神经炎性反应。     

前边缘皮质Kv7.3钾通道在甲基苯丙胺条件性位置偏爱中的作用

目的 探究前边缘皮质在甲基苯丙胺（methamphetamine,METH）诱导小鼠条件性位置偏爱（conditioned place preference,CPP）中的作用,以及电压门控型钾离子通道Kv7.3在前边缘皮质（prelimbic cortex,Prl）内的调控机制。方法 给予C57BL/6J小鼠腹腔注射METH(2mg/kg)建立CPP成瘾模型。通过化学遗传学技术,在前边缘皮质内注射hM4di-mcherry病毒载体,经N-氧化氯氮平诱导激活小G蛋白Gi信号通路,观察Prl脑区在METH致CPP中的作用。应用PCR、Western Blot检测Prl内Kv7.3的表达情况。在Prl脑区埋置套管,定位注射瑞替加滨（Kv7钾通道激动剂）,观察对CPP评分的影响。结果 METH导致Prl内神经元明显活化并降低Kv7.3表达水平。通过化学遗传学特异性沉默Prl脑区神经元,明显减弱CPP分数,激活Prl脑区的Kv7.3通道亦明显降低CPP评分。结论 前边缘皮质参与了METH诱导CPP的形成,Kv7.3钾离子通道蛋白在该过程中发挥着重要作用。