锌对神经病理性疼痛小鼠脊髓bax表达和行为学的影响

目的研究锌对神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)模型小鼠脊髓后角bax表达和动物行为学的影响。方法 24只C57/BL6小鼠随机分为4组,足底注射辣椒素(0.5%,5μl)制备NPP模型。对照组(喂养普通饲料,锌30mg/kg/d,2周后于足底注射溶剂吐温80、酒精和生理盐水混合液),适锌喂养组(N-NPP,饲喂普通饲料,锌30mg/kg/d,2周后制备NPP),低锌喂养组(L-NPP,饲喂低锌饲料,锌0.85mg/kg/d,2周后制备NPP),高锌喂养组(H-NPP,饲喂硫酸锌水溶液227mg/L/d,2周后制备NPP)。应用动物行为学观察、免疫组织化学和图像分析技术研究脊髓后角bax表达和动物行为学变化。结果高锌喂养能显著改善NPP后的痛觉过敏,提高机械痛阈,降低脊髓后角bax表达水平(0.01);低锌喂养则加重行为学改变,使机械痛阈更低,脊髓后角bax表达水平更高(0.01)。结论高锌能抑制NPP模型小鼠脊髓后角bax的表达,改善动物行为学。     

锌对辣椒素致痛模型小鼠脊髓c-fos表达和动物行为学的影响

目的研究锌对辣椒素致痛模型小鼠脊髓c-fos表达和动物行为学的影响。方法 48只C57/BL6小鼠随机分为4组,采用足底注射辣椒素(0.5%,5μl)制备神经病理性疼痛(NPP)小鼠模型:对照组(Con)给予适锌饲料(锌30mg/kg/d)喂养2周后,右后足底注射溶剂(吐温80、酒精和生理盐水混合液);适锌喂养组(N-NPP)给予适锌饲料(锌30mg/kg/d)喂养2周后足底注射辣椒素;低锌喂养组(L-NPP)给予低锌饲料(锌0.85mg/kg/d)喂养2周后注射辣椒素;高锌喂养组(H-NPP)给予硫酸锌水溶液(227mg/L/d)喂养2周后注射辣椒素。应用原子吸收光谱技术、动物行为学观察、免疫组织化学和图像分析技术检测注射辣椒素后7d锌对脊髓cfos表达和动物行为学的影响。结果高锌喂养能显著增加血清和脊髓中锌的含量,使脊髓c-fos表达下调,机械痛阈增高,痛敏减弱(0.01);而低锌喂养加重血清和脊髓的缺锌状态,脊髓c-fos表达上调,机械痛阈降低,痛敏增强(0.01)。结论锌能抑制辣椒素致痛模型小鼠脊髓c-fos的表达,降低痛敏。     

锌对神经病理性疼痛模型小鼠脊髓后角磷酸化的细胞外信号调节激酶表达的影响

目的:研究锌对神经病理性疼痛(NPP)模型小鼠脊髓后角磷酸化(p)的细胞外信号调节激酶(ERK)表达的影响.方法:C57/BL6小鼠随机分4组,对照组正常喂养2周后足底注射生理盐水;正常喂养2周后足底注射辣椒素;低锌喂养(锌0.85 mg/kg)2周后足底注射辣椒素;高锌喂养(227mg/L)2周后足底注射辣椒素.应用原子吸收光谱、热痛阈检测、免疫组织化学和图像分析技术检测注射后7d锌对动物行为学以及脊髓后角pERK表达的影响.结果:对照组小鼠血清和脊髓中含有丰富的锌离子,脊髓后角有少量pERK表达;当足底注射辣椒素致痛后,血清和脊髓中的锌减少,热痛敏增加,脊髓后角pERK表达增多;低锌喂养能加重缺锌和热痛敏,脊髓后角pERK表达更多;高锌喂养能使血清和脊髓锌增多,降低热痛敏和脊髓后角pERK表达.结论:锌能抑制NPP模型小鼠热痛敏和脊髓后角pERK的表达,锌可能参与了神经病理性疼痛的形成与维持.     

氟代柠檬酸对神经病理性疼痛镜像痛大鼠行为学及星形胶质细胞激活的影响

目的:探讨氟代柠檬酸(FC)对神经病理性疼痛镜像痛的镇痛作用。方法:制备大鼠脊神经选择性结扎(SNL)镜像痛模型,随机分为实验组和对照组;实验组神经鞘内注射FC;对照组注射等剂量生理盐水;于术前1 d,术后1、12、24、48h测定大鼠的机械痛阈和热痛阈;测定完毕后处死大鼠,取第4~5腰椎(L4~L5)脊髓,进行免疫组织化学检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,并计算平均荧光强度。结果:注射FC后,实验组大鼠镜像侧机械痛阈和热痛阈12 h后较术前1 d和对照组相比明显升高,免疫组织化学检测显示实验组镜像侧GFAP表达较对照组明显降低,平均荧光强度与对照组相比较差异具有统计学意义。结论:FC对神经病理性疼痛镜像痛具有一定镇痛作用,可能与抑制星形胶质细胞的激活有关。     

加巴喷丁对神经病理性疼痛小鼠脑皮层组织内差异表达基因的影响

目的观察加巴喷丁对神经病理性疼痛小鼠脑皮层基因表达差异的影响。方法120只小鼠随机分为对照(C)、假手术(S)和模型(M)组,各组再按不同给药分为生理盐水(P)和加巴喷丁(G)两个亚组(最终分为C P、C G、S P、S G、M P、M G六组)。部分坐骨神经结扎2周后开始腹腔给药,给药4周后留取大脑皮层。通过手术侧足行为学和机械痛阈的改变来确认神经病理性疼痛模型成功及观察加巴喷丁的疗效。选择S P、M P和M G三组做基因表达差异检测,并用实时PCR验证部分表达有显著差异的基因。结果M P和S P相比较,脑源性神经生长因子、神经肽Y、Pleiotrophin等基因显著下调。M G和M P相比较,上述基因显著上调。结论加巴喷丁镇痛的脑机制可能与脑源性神经生长因子、神经肽Y、Pleiotrophin等基因的上调有关。     

p38MAPK抑制剂对神经病理性疼痛大鼠脊髓TNF-α合成的影响

 摘要：目的：通过建立坐骨神经慢性压迫损伤模型,研究p38丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK,p38）与TNF-α在神经病理性疼痛发生与发展中的相互作用。方法：SD大鼠分5组：1）空白对照组,2）假手术组,3）CCI手术未治疗组,4）CCI手术生理盐水治疗组,5）CCI手术SB203580（p38抑制剂）治疗组。上述治疗组中,生理盐水或SB203580分别于术前1天、术后第1天,和术后第7天鞘内注射。各组大鼠分别于术后3、7、14天测定机械痛阈。采用Western blot和免疫组化方法测定脊髓中TNF-α含量及p38活化水平。结果：与假手术组相比,CCI手术后3、7、14天磷酸化p38（p-p38）水平明显增加（p<0.05）。外周神经损伤后引起机械性触诱发痛,并且使脊髓中TNF-α浓度增加（p<0.05）。预先或术后立即给予SB203580抑制p38活化可以减少脊髓TNF-α合成,从而有效缓解病理性疼痛(p<0.05)。结论：外周神经损伤后,作为信号转导通路之一的p38可能通过促进脊髓TNF-α合成,引发神经病理性疼痛。     

神经干细胞移植对小鼠脊髓损伤的影响

目的观察神经干细胞(NSCs)移植对脊髓损伤(SCI)小鼠功能恢复的影响。方法分离、培养、增殖和纯化E14-17d小鼠的NSCs,并通过免疫荧光法对其进行鉴定。将绿色荧光蛋白转基因小鼠的NSCs移植到小鼠脊髓损伤模型体内,术后进行行为学和病理学检测,观察小鼠功能恢复情况。运用改良Allen's法制备小鼠T10-T11脊髓损伤动物模型,动物分为假手术组(12只)、模型组(12只),治疗组(12只)和对照组6(12只)。治疗组每只小鼠自眶静脉注射NSCs悬液200μl(2×10个细胞),对照组只注射DMEM/F12培养基200μl。术后1d、3d、7d、14d、21d、28d和56d,进行BBB运动功能评分和病理学检测,观察植入区细胞生长变化情况。结果 BBB评分显示:治疗组明显高于对照组(<0.01),治疗组与假手术组相比没有明显差异(>0.05),说明NSCs移植后小鼠的行为学得到了明显改善,功能有所恢复。病理学检测发现,移植后NSCs不仅迁移到脊髓损伤区,而且与宿主细胞较好地整合。结论移植的E14-17d胚胎小鼠NSCs不仅可在脊髓损伤部位存活并和宿主细胞整合,而且可促进小鼠后肢运动功能恢复。     

小鼠脊髓损伤模型的行为学评估方法

目前已存在多种针对小鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)模型的行为学评分方法,常用的包括Basso Mouse Scale(BMS)法、单帧运动分析、爬梯实验和斜面实验等。其中,BMS和单帧运动分析属运动学分析,前者的评分与损伤程度有较高一致性,但是较为复杂,后者观察指标简单,但是只能做粗略的评估;爬梯实验和斜面实验是观察小鼠完成某一任务的能力而评分,指标客观,但前者应用前提是小鼠已恢复到可负重行走,并需要事先对小鼠进行训练,后者的敏感性可能有品系差异。     

锌缺乏导致小鼠睾丸游离锌离子和附睾精子数量减少

目的研究锌缺乏对小鼠睾丸游离锌离子和附睾精子数量的影响。方法锌缺乏饲养小鼠5周后,应用ZnSe金属自显影技术对小鼠睾丸和附睾进行染色,观察睾丸和附睾锌离子的分布,同时计数附睾精子数量,并与对照组小鼠的精子数量做对比。结果缺锌喂养后的小鼠睾丸游离锌离子明显减少,并且睾丸生精小管管腔狭小,生殖细胞层厚度增加,此外,附睾精子数量也明显低于对照组。结论睾丸和附睾内游离锌离子减少是锌缺乏小鼠精子数量下降的原因,本结果有助于改善男性生殖健康的状况。     

Proteomic analysis of the dorsal spinal cord in the mouse model of spared nerve injury-induced neuropathic pain

Peripheral nerve injury often causes neuropathic pain and is associated with changes in the expression of numerous proteins in the dorsal horn of the spinal cord. To date, proteomic analysis method has been used to simultaneously analyze hundreds or thousands of proteins differentially expressed in the dorsal horn of the spinal cord in rats or dorsal root ganglion of rats with certain type of peripheral nerve injury. However, a proteomic study using a mouse model of neuropathic pain could be attempted because of abundant protein database and the availability of transgenic mice. In this study, whole proteins were extracted from the ipsilateral dorsal half of the 4th–6th lumbar spinal cord in a mouse model of spared nerve injury (SNI)-induced neuropathic pain. In-gel digests of the proteins size-separated on a polyacrylamide gel were subjected to reverse-phase liquid-chromatography coupled with electrospray ionization ion trap tandem mass spectrometry (MS/MS). After identifying proteins, the data were analyzed with subtractive proteomics using ProtAn, an in-house analytic program. Consequently, 15 downregulated and 35 upregulated proteins were identified in SNI mice. The identified proteins may contribute to the maintenance of neuropathic pain, and may provide new or valuable information in the discovery of new therapeutic targets for neuropathic pain.     

脐带间充质干细胞移植对脊髓损伤小鼠运动功能的修复和镇痛作用

目的：探讨人脐带间充质干细胞（ hUC-MSCs）移植缓解脊髓损伤神经病理性痛,并促进功能恢复的效果及 其与脊髓损伤小鼠胶质细胞活化及炎症因子水平的调控关系。方法：建立ICR 小鼠脊髓损伤模型,同时构建慢病毒 载体介导绿色荧光蛋白（ GFP）标记体外培养的 hUC-MSCs ;将模型小鼠分为模型组和治疗组,治疗组于脊髓损 伤1 周后采用局部注射 hUC-MSCs 移植到脊髓中,每周进行运动功能（ BBB）评分及机械性痛觉过敏检测,持续8 周后行组织学评价与炎症因子检测。结果：治疗组脊髓组织中 GFP 荧光有表达。BBB检测结果显示,治疗组和模 型组小鼠随时间延长运动功能均逐渐恢复,其中治疗组运动功能恢复速度要显著快于模型组;机械触诱发痛检测显 示,小鼠脊髓损伤后痛阈值降低,随着时间延长痛阈值逐渐升高。同一个时间点治疗组的痛阈值显著高于模型组。 与模型组相比,治疗组小鼠脊髓组织的白细胞介素-6（ IL-6）、肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）表达下降,胶质细胞源 性神经营养因子（ GDNF）表达升高,同时脊髓组织巨噬细胞激活抗原1（ ED1/CD68） 荧光表达显著降低。结论： 脊髓损伤小鼠中hUC-MSCs 移植可能通过降低炎症因子 IL-6 和TNF-α 的分泌,提高 GDNF 的表达水平来促进受损 脊髓组织的修复,并发挥镇痛效应。     

全脑照射后对小鼠血脑屏障通透性和室管膜下区细胞增殖的影响

目的:探讨60Co-γ射线(Gy)全脑照射后对小鼠血脑屏障通透性和室管膜下区神经干细胞增殖的影响。方法:112只健康小鼠随机分成0 Gy组(对照组),5 Gy照射组(小剂量照射组),15 Gy照射组(中等剂量照射组)和30 Gy照射组(大剂量照射组),每组28只。各组随机取出7只分别于照射后1周和4周测定各组小鼠脑组织伊文思蓝的含量,7只观察室管膜下区的BrdU+细胞形态和数量。结果:(1)照射后1周,15 Gy组和30Gy组脑组织伊文思蓝含量明显升高(P<0.05),室管膜下区的BrdU+细胞数明显降低(P<0.05);(2)照射后4周,15 Gy剂量照射组脑组织伊文思蓝含量和室管膜下区的BrdU+细胞数均恢复到对照组水平(P>0.05),而30Gy剂量照射组脑组织伊文思蓝含量仍明显升高(P<0.05),BrdU+细胞数也未见恢复(P<0.05)。结论:全脑照射后血脑屏障破坏可能对室管膜下区的细胞增殖有进一步抑制作用。     

锌转运体-1在小鼠肾脏的表达

目的研究锌转运体-1(zinc transporter1,ZnT-1)在小鼠肾脏的定位分布。方法应用免疫组织化学技术和免疫印迹技术检测小鼠肾脏中ZnT-1的分布。结果 ZnT-1在肾脏内有丰富表达,其主要分布于远曲小管上皮细胞的近腔侧和基底侧的细胞膜上,而在肾小体、肾小管的其它部分以及髓质中的分布较少。结论小鼠肾脏内含有丰富的ZnT-1,ZnT-1可能参与了锌离子在肾脏的排泄和重吸收过程。     

脊髓刺激术对神经病理性痛模型大鼠痛行为和脊髓背角内小胶质细胞激活的影响

目的:探讨脊髓刺激术(spinal cord stimulation,SCS)对神经病理性痛(neuropathic pain,NP)模型大鼠痛行为及脊髓背角内小胶质细胞激活的影响。方法:成年大鼠20只,随机分为4组:(1)正常对照组(control组);(2)SCS组:正常大鼠给予SCS刺激;(3)脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)假刺激组(SNL+shamSCS组):SNL且植入SCS装置,但不刺激;(4)SNL+SCS组:SNL且给予SCS刺激。术前连续3 d、术后第5 d检测各组大鼠足底机械痛敏阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)。SCS组和SNL+SCS组术后第2-5 d给予SCS刺激,每d持续8 h;且在每次给予SCS 8 h刺激前进行90 min行为学测试,即SCS刺激30 min,以及刺激结束后的60 min内(共90 min),每15 min测量一次MWT。在第5 d给予SCS 8 h刺激结束后处死动物,利用免疫组织化学染色结合平均光密度(average optical density,AOD)分析的方法检测各组大鼠腰5节段脊髓背角内小胶质细胞特异性标志物OX-42的表达情况。结果:(1)行为学结果显示:术后第5 d,SNL+shamSCS组和SNL+SCS组大鼠手术侧后爪的MWT由术前26.00±0.0 g分别降至5.50±0.96 g和6.40±0.40 g(P<0.05);SNL+SCS组给予SCS刺激30 min后大鼠手术侧后爪的MWT明显有所提高,达16.20±2.60 g,与刺激前(6.40±0.40 g)相比有显著性差异(P<0.05);但停止SCS刺激60 min后,大鼠的MWT明显有所下降,与刺激前几乎没有明显差别。(2)免疫组化染色结果显示:术后第5 d,SNL+SCS组脊髓背角内OX-42的表达明显弱于SNL+shamSCS组,但二者都强于control组和SCS组;AOD结果也证实:SNL+SCS组大鼠脊髓背角内OX-42的AOD(1.29±0.28)明显低于SNL+shamSCS组(2.66±0.38),但仍高于control组(0.14±0.21)和SCS组(0.24±0.08)。结论:SCS对SNL模型大鼠的神经病理性痛有较好的镇痛效果;该作用可能与SCS刺激显著抑制脊髓背角内小胶质细胞的激活密切相关。     

Rostral ventromedial medulla control of spinal sensory processing in normal and pathophysiological states

Complex networks of pathways project from various structures in the brain to modulate spinal processing of sensory input in a top-down fashion. The rostral ventromedial medulla (RVM) in the brainstem is one major final common output of this endogenous modulatory system and is involved in the relay of sensory information between the spinal cord and brain. The net output of descending neurons that exert inhibitory and facilitatory effects will determine whether neuronal activity in the spinal cord is increased or decreased. By pharmacologically blocking RVM activity with the local anesthetic lignocaine, and then measuring evoked responses of dorsal horn neurons to a range of applied peripheral stimuli, our aim was to determine the prevailing descending influence operating in normal anesthetized animals and animals with experimental neuropathic pain. The injection of 0.8 microl 2% lignocaine into the RVM caused a reduction in deep dorsal horn neuronal responses to electrical and natural stimuli in 64% of normal animals and in 81% of spinal-nerve-ligated (SNL) animals. In normal animals, responses to noxious input were predominantly reduced, while in SNL animals, reductions in spinal cord activity induced by intra-RVM lignocaine further included responses to non-noxious stimuli. This suggests that in terms of activity at least, if not number, descending facilitations are the predominant RVM influence that impacts the spinal cord in normal animals. Moreover, the increase in the proportion of neurons showing a post-lignocaine reduction in dorsal horn activity in SNL rats suggests that the strength of these facilitatory influences increases after neuropathy. This predominant inhibitory spinal effect following the injection of lignocaine into the RVM may be due to blockade of facilitatory On cells.     

脊髓刺激术对神经病理性痛模型大鼠脊髓背角内NR2B受体和星形胶质细胞激活的影响

目的:探讨脊髓刺激术(spinal cord stimulation,SCS)对L5脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)诱导的神经病理性痛(neuropathic pain,NP)大鼠脊髓背角内NMDA受体亚单位NR2B的表达和星形胶质细胞激活的影响。方法:成年雄性SD大鼠48只,随机分为4组:正常组(不做任何处理);SCS组(植入SCS装置并给予SCS刺激);SNL+sham SCS组(给予SNL手术并植入SCS装置,但不进行刺激);SNL+SCS组(SNL手术并给予SCS刺激)。SCS刺激是在SNL术后第6～10 d进行(8 h/d),第10 d刺激结束后处死动物。运用行为学方法检测慢性痛状态下大鼠后肢对机械性刺激的反应阈值;采用免疫组织化学染色和Western blot方法分别检测脊髓背角内NR2B和星形胶质细胞的标志物GFAP的表达变化。结果:(1)SNL术后大鼠手术侧后足机械性痛敏显著增加,第6～10 d给予SCS刺激后,可观察到大鼠的痛行为学表现有明显缓解;(2)免疫组化结果显示:与SNL+sham SCS组相比,SNL+SCS组大鼠脊髓背角内NR2B和GFAP免疫阳性细胞的数量显著减少;(3)Western blot结果显示:给予SCS刺激后,SNL大鼠腰膨大段脊髓背角内NR2B的表达量显著下调,同时GFAP的表达量也明显有所降低。结论:给予SCS刺激可以有效地缓解SNL模型大鼠的神经病理性痛的行为学表现;该作用可能与SCS刺激抑制脊髓背角内NR2B的表达和星形胶质细胞的激活密切相关。     

Altered discharges of spinal wide dynamic range neurons and down-regulation of glutamate transporter expression in rats with paclitaxel-induced hyperalgesia

Changes in the signaling of wide dynamic range neurons and the expression of glutamate transporters in the lumbar spinal dorsal horn of rats with Taxol-induced hyperalgesia are detailed in this report. Deep spinal lamina neurons have significantly increased spontaneous activity and after-discharges to noxious mechanical stimuli, increased responses to both skin heating and cooling, and increased after-discharges and abnormal windup to transcutaneous electrical stimuli. The expression of glutamate transporter proteins in the dorsal horn is decreased at the time point corresponding to the physiological changes. These results suggest a state of increased excitability develops in spinal pain-signaling neurons as a consequence of decreased glutamate clearance. These changes in dorsal horn neurobiology likely in turn contribute to the hyper-responsiveness to sensory stimuli seen in animals treated with Taxol and may play a role in the pain seen in cancer patients receiving Taxol.