鬼箭锦鸡儿中紫檀烷类化合物抗真菌活性研究

目的 研究鬼箭锦鸡儿中紫檀烷类化合物的抗真菌活性。方法 在生物活性指导下,利用聚酰胺、硅胶常规色谱和制备型高效液相色谱方法进行化合物分离,采用波谱技术和化学方法鉴定化合物的结构。最低抑菌浓度(MIC)测定参照美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的M27-A方案中的微量肉汤稀释法。结果 鬼箭锦鸡儿整株植物氯仿部分显示好的抗真菌活性,活性追踪分离得到五个紫檀烷类化合物,分别是3-甲氧基高丽槐素(1)、高丽槐素(2)、3-甲氧基-9羟基紫檀烷(3)、3,9-二甲氧基紫檀烷(4)和3-甲氧基-4,9二羟基紫檀烷(5),其中化合物2面对三种念珠菌菌株,显示出潜在的抗真菌活性,最低抑菌浓度范围为6.25~25 μg·mL^-1。结论 所有化合物均为首次从该植物分离得到,并且生物活性结果确认紫檀素类化合物是有效的抗真菌成分。     

鬼箭锦鸡儿中紫檀烷类化合物抗真菌活性研究

目的研究鬼箭锦鸡儿中紫檀烷类化合物的抗真菌活性。方法在生物活性指导下,利用聚酰胺、硅胶常规色谱和制备型高效液相色谱方法进行化合物分离,采用波谱技术和化学方法鉴定化合物的结构。最低抑菌浓度(MIC)测定参照美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的M27-A方案中的微量肉汤稀释法。结果鬼箭锦鸡儿整株植物氯仿部分显示好的抗真菌活性,活性追踪分离得到五个紫檀烷类化合物,分别是3-甲氧基高丽槐素(1)、高丽槐素(2)、3-甲氧基-9羟基紫檀烷(3)、3,9-二甲氧基紫檀烷(4)和3-甲氧基-4,9二羟基紫檀烷(5),其中化合物2面对三种念珠菌菌株,显示出潜在的抗真菌活性,最低抑菌浓度范围为6.25～25 μg·mL-1。结论所有化合物均为首次从该植物分离得到,并且生物活性结果确认紫檀素类化合物是有效的抗真菌成分。     

甘草素缩胺硫脲类衍生物的合成及抗癌活性

目的研究甘草素缩胺硫脲类衍生物的合成方法及抗癌活性。方法酸性条件下,甘草素与肼基二硫代甲酸甲酯在乙醇中回流缩合成腙,同时二硫代甲酸甲酯基水解成硫代甲酸基,然后在二环己基碳二亚胺(dicyclohexylcarbodiimide,DCC)催化下与相应的胺反应得到目标化合物3a-3j。采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法,以五氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)为阳性对照药,评价目标化合物对人白血病细胞(K562)、人前列腺癌细胞(DU-145)、人胃癌细胞(SGC-7901)、人结肠癌细胞(HCT-116)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人肝癌细胞(HepG2)、人宫颈癌细胞(Hela)7个肿瘤细胞株及人肾上皮细胞(293)一个正常细胞株的细胞毒活性。结果合成了10个新化合物,其结构经IR、1 H-NMR1、3 C-NMR和MS确证。体外抗癌活性表明大部分衍生物对K562和DU-145有一定的活性。结论从构效关系看,作者推断在甘草素4-C位接入缩胺硫脲基团可以提高抗癌活性。     

甘草化学成分研究

目的研究甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的化学成分,寻找其天然活性物质。方法采用硅胶柱色谱和Sephadex LH-20柱色谱分离化合物,运用理化性质和波谱技术确定所得化合物的结构。结果从甘草醇提物中分离得到6个化合物,经鉴定为:华良姜素(1)、甘草利酮(2)、芒柄花素(3)、甘草醇(4)、美迪紫檀素-3-O-葡萄糖苷(5)和甘草苷(6)。结论甘草中富含黄酮、香豆素类成分。     

苦马豆果皮中紫檀烷和异黄酮类化合物的分离与鉴定

目的 分离、鉴定苦马豆(Sphaerophysa salsula DC.)果皮乙醇提取物中的化学成分。方法 利用硅胶柱色谱、制备薄层色谱进行分离纯化，根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果 得到4个化合物，分别鉴定为：大豆素二甲醚(4′,7-二甲氧基异黄酮，Ⅰ)、(-)-紫檀素[(-)-(6aR，1laR)-3．甲氧基-8，9-亚甲二氧基紫檀烷，Ⅱ]、(-)-10-甲氧基美迪紫檀素[(-)-(6aR，11aR)-3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀烷，Ⅲ]、毛蕊异黄酮(3′，7-二羟基-4′，甲氧基异黄酮，Ⅳ)。化合物Ⅱ、Ⅲ为首次从该属植物中分得。     

紫檀茋和乙酰紫草素抑制B16F10细胞增殖的协同作用

目的研究紫檀茋和乙酰紫草素对B16F10细胞的增殖抑制的协同作用与相关机制。方法通过系统药理学的方法对紫檀茋和乙酰紫草素的联合作用进行预测,并对可能靶点进行筛选及分析。体外采用MTT法测定紫檀茋、乙酰紫草素及联合用药对B16F10细胞的抑制效应;形态学水平观察细胞核的凋亡情况;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期的变化;RT-PCR法检测细胞内相关基因的表达;体内实验采用C57BL/6小鼠移植瘤方法。结果紫檀茋有14个靶点与周期相关,乙酰紫草素有12个靶点与凋亡相关,且均有靶点与p53信号通路相关。紫檀茋、乙酰紫草素及联合用药对B16F10细胞的增殖均有抑制作用,并呈浓度剂量依赖性,并具有显著协同效果;联合给药组细胞凋亡率最高,且周期阻滞在G1期;单一给药组的p53、Bax及p21基因的表达随给药时间的延长而增加,而Bcl-2、CDK2、Cyclin E基因的表达随给药时间而减少,联合给药组p53,Bax和Bcl-2的变化差异较单独给药组显著;体内抑瘤实验给药组均有不同程度的抑瘤效果,以联合给药组抑瘤率最大。结论紫檀茋和乙酰紫草素对B16F10细胞的增殖有一定协同抑制作用,认为二者协同激活p53信号通路,诱导周期阻滞和凋亡而发挥药效。     

对比评价紫檀芪和白藜芦醇的抗辐射活性

目的对比评价等摩尔当量紫檀芪和白藜芦醇对ICR小鼠的抗辐射作用。方法以6～8周龄ICR雄性小鼠为研究对象,给予6.5 Gyγ-射线一次性全身照射。空白照射组(给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液),阳性对照组(给予茜草双酯100 mg.kg-1),白藜芦醇低、高剂量组(分别给予白藜芦醇50,150 mg.kg-1),紫檀芪低、高剂量组(分别给予紫檀芪56,168 mg.kg-1),均在照射前3 d内连续3次灌胃给药,照射后连续给予5 d,并在照射7 d后眼眶取血,解剖取胸腺、肝、脾、肺及两侧股骨。称重计算相关脏器系数,血清生化分析仪测白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT),以及股骨有核细胞(BMNC)和骨髓DNA,考察目标化合物紫檀芪和白藜芦醇的抗辐射损伤效应。结果与空白对照组比较,各实验组的各项指标均有所增加,且大部分差异有统计学意义(P<0.05),相同摩尔当量的紫檀芪实验组的抗辐射活性优于白藜芦醇组,尤其是紫檀芪低剂量组效果最佳,与白藜芦醇低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论紫檀芪对6.5Gy辐射损伤ICR小鼠的防护作用优于白藜芦醇,且紫檀芪低剂量组辐射防护效果最佳。     

白藜芦醇和紫檀芪体外抗肿瘤转移作用

目的比较白藜芦醇和紫檀芪体外抗肿瘤转移作用。方法白藜芦醇和紫檀芪5～50μmol·L-1分别与小鼠黑色素瘤细胞B16F1和内皮细胞ECV304作用48 h,再分别用磺基罗丹明B染色法测定细胞增殖率。白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1与细胞作用48 h,用划痕实验评价B16F1和ECV304细胞体外迁移能力,用明胶酶电泳和ELISA测定B16F1细胞分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)的活性和含量。用重建基底膜法观察白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1作用24 h对ECV304细胞拟管腔形成的抑制作用。结果白藜芦醇和紫檀芪作用48 h均能显著抑制B16F1和ECV304细胞增殖,抑制B16F1细胞增殖的IC50分别为119.7μmol·L-1和37.3μmol·L-1,抑制ECV304细胞增殖的IC50分别为72.2μmol·L-1和37.2μmol·L-1。白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1作用48 h,B16F1细胞愈合率分别为58.0%和36.8%,ECV304细胞愈合率分别为61.8%和28.9%,明显低于正常对照组的67.7%和88.4%(P<0.01),而且紫檀芪组明显低于白藜芦醇组(P<0.01)。与正常对照组相比,白藜芦醇和紫檀芪10μmo·L-1作用48 h使B16F1细胞MMP-2蛋白表达分别降低7.4%和13.9%(P<0.01),MMP-2活性分别降低19.3%和78.9%(P<0.01)。白藜芦醇和紫檀芪作用24 h均可使ECV304细胞管腔样结构破坏,且紫檀芪的作用较白藜芦醇更加明显。结论白藜芦醇和紫檀芪均具有抑制B16F1和ECV304细胞增殖和转移的作用,并能抑制ECV304细胞拟管腔形成;浓度为10μmol·L-1时紫檀芪的抑制作用强于白藜芦醇。     

HPLC同时测定红芪中4种黄酮类成分的含量

目的:建立HPLC法测定红芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、金雀异黄酮、芒柄花素、美迪紫檀素4种主要黄酮类成分的方法。方法:采用HPLC法,样品经甲醇回流,采用Waters公司Sun Fire C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.2%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为240 nm,柱温为35℃,进样量为20μl。结果:毛蕊异黄酮葡萄糖苷在0.035~1.042μg(r=0.999 6),金雀异黄酮在0.027~0.821μg(r=0.999 7),芒柄花素在0.031~0.941μg(r=0.999 9),美迪紫檀素在0.025~0.745μg(r=0.999 2)范围内均成良好的线性关系。毛蕊异黄酮葡萄糖苷、金雀异黄酮、芒柄花素和美迪紫檀素的加样回收率分别为100.32%(RSD=1.87%),99.3%(RSD=1.76%),100.5%(RSD=1.48%),99.2%(RSD=1.45%)(n=6)。结论:该方法分析时间短、稳定性和准确度良好,对红芪药材的质量控制具有一定的参考价值。     

蜂毒素对人肝癌细胞中HMGB1及VEGF-C表达的影响

目的观察蜂毒素对人肝癌细胞株HepG2中高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)及血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factors C,VEGF-C)表达的影响,探讨其抑制肝癌细胞的作用机制。方法肝癌细胞HepG2体外培养,经蜂毒素处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法了解蜂毒素对肝癌细胞增殖的影响,用Western-blotting、qRT-PCR方法检测HMGB1、VEGF-C的表达。结果蜂毒素在体外能够抑制肝癌细胞的增殖活性;Western-blotting结果显示,蜂毒素可抑制HMGB1的表达,且呈浓度依赖性,但对VEGF-C的蛋白表达无明显影响;qRT-PCR结果显示,蜂毒素在mRNA水平均具有抑制HMGB1、VEGF-C表达的作用。结论蜂毒素可降低肝癌细胞的增殖活性,并可能通过HMGB1、VEGF-C的表达发挥抗肝癌作用。     

刺果甘草化学成分的研究

刺果甘草(Glycyrrhiza pallidiflora Maxim)根及根茎的甲醇提取物经盐酸甲醇反应,柱层析分离,得到五个单体。经理化常数和光谱分析,确定化合物Ⅰ为β-谷甾醇,Ⅲ为macedonic acid methylester,Ⅳ为21-dehydro-macedonic acid methyl ester,命名为刺果酸甲酯(pallidifloric acid methyl ester),Ⅴ为5-羟基-4-甲氧基异黄酮,命名为刺果甘草素(pallidiflorin)。化合物Ⅱ初步确定为具有11,13(18)异环双烯的五环三萜衍生物。其中Ⅳ是首次从植物中分得,Ⅴ为新化合物。     

刺果甘草化学成分的研究

从刺果甘草(Glycyrrhiza pallidiflora Maxim)的根和根茎中分离到五种化合物,经理化性质和光谱方法鉴定,化合物P-2为4-羟基-2,4’-二甲氧基查尔酮,为一新的化合物,命名为刺果甘草查尔酮(glypallichalcone,P-2)。其它分别为4'-O-methyl-coumestrol(P-1),谷氨酸乙酰化物(N-acetylglutamicacid,P-3)和芒柄花素(formononetin,P-4),均为首次从该植物中获得。此外还得到β-谷甾醇(β-sitos-terol,P-5)     

Phylogenetic relationship of six Glycyrrhiza species based on rbcL sequences and chemical constituents

The nucleotide sequences of ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit gene (rbcL) of Glycyrrhiza glabra, G. uralensis, G. inflata, G. echinata, G. macedonica and G. pallidiflora have been determined to construct their phylogenetic tree. Based on these sequences, the six Glycyrrhiza species were divided into two groups: three, G. glabra, G. uralensis, and G. inflata, which produce glycyrrhizin as a major saponin, and the others, G. echinata, G. macedonica and G. pallidiflora, which produce macedonoside C as a major saponin. Among the three glycyrrhizin-producing species, only two nucleotide substitutions were observed between the rbcL sequences of G. glabra and G. uralensis, and the sequence of G. uralensis was identical to that of G. inflata, indicating that G. uralensis and G. inflata are closely related. Among the three macedonoside C-producing species, only one nucleotide substitution was observed between those of G. echinata and G. macedonica, indicating that these two species are also closely related.     

Phylogenetic relationship of Glycyrrhiza lepidota, American licorice, in genus Glycyrrhiza based on rbcL sequences and chemical constituents

Two known saponins, licorice-saponin H2 and macedonoside A, were isolated from the stolons of Glycyrrhiza lepidota (American licorice) as major saponins. Since licorice-saponin H2 and macedonoside A are minor saponins isolated from the three glycyrrhizin-producing species (i.e. G. glabra, G. uralensis, G. inflata) and the three macedonoside C-producing species (i.e. G. macedonica, G. echinata, G. pallidiflora), respectively, the present study suggests that G. lepidota is an intermediate of both glycyrrhizin-producing and macedonoside C-producing species. The phylogenetic tree constructed from the nucleotide sequences of ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit gene (rbcL) of these seven Glycyrrhiza plants indicated that G. lepidota was separated from the other six Glycyrrhiza species, and this phylogenetic relationship was in accordance with their saponin compositions.     

Identification of Fritillaria pallidiflora using diagnostic PCR and PCR-RFLP based on nuclear ribosomal DNA internal transcribed spacer sequences

Fritillaria pallidiflora Schrenk (Liliaceae) is a commonly used antitussive herb. There are 9 species of Fritillaria recorded as herbal drugs in the Chinese Pharmacopoeia. The other species are often marketed as F. pallidiflora, and thus, the therapeutic effects of F. pallidiflora are not achieved. Methods to distinguish F. pallidiflora from the 8 other species of Fritillaria are limited by the current morphological and chemical methods. In this study, we report two molecular authentication methods based on the sequences of nuclear ribosomal DNA internal transcribed spacer (nrDNA ITS) regions. For diagnostic PCR, we designed a pair of species-specific primers to authenticate F. pallidiflora. The PCR program consisted of only two steps for every repeated cycle. For PCR-RFLP, we identified a distinctive site which can be recognized by the restriction endonuclease Eco81I in the nrDNA ITS1 region of F. pallidiflora. PCR-RFLP analysis was established to differentiate F. pallidiflora from the other species of Fritillaria. These methods provide effective and accurate identification of F. pallidiflora.     

咳喘宁提取工艺研究

研究金银花、苦杏仁、板蓝根等的复方水提的最佳提取工艺。采用水提法，用L9（3^4)正交实验，以其出膏率及绿原酸含量为优选指标，采用高效液相色谱测定绿原酸成分含量，筛选最佳条件。     

甘草及其活性成分的表面活性比较研究

目的 研究甘草及其活性成分的表面活性,为更合理地研究甘草中成分的增溶能力提供参考.方法 在不同温度下,采用Wilhelmy吊片法测定溶液的表面张力和溶液的临界胶束浓度(CMC).结果 分析了溶液的表面活性效能、效率和表面过剩浓度,甘草水煎液表面活性较好.结论 甘草中除皂苷组分具有表面活性外,其他组分对表面活性有贡献.     

Pharmacological effects of urinary products obtained after treatment with saiboku-to, a herbal medicine for bronchial asthma, on type IV allergic reaction

To define the anti-allergic components in Saiboku-To, a herbal medicine for bronchial asthma, we examined the effects of 11 compounds found in post-administrative urine of Saiboku-To on concanavalin A-induced human lymphocyte blastogenesis in vitro and picryl chloride (PC)-induced mouse ear swelling in vivo. The urinary products of Saiboku-To were flavonoids and lignans derived from the constitutional herbs and their hydrogenated metabolites. Medicarpin derived from Glycyrrhiza glabra, magnolol and 8,9-dihydroxydihydromagnolol from Magnolia officinalis, baicalein, wogonin and oroxylin A from Suctellaria baicalensis inhibited lymphocyte blastogenesis in dose-dependent fashion with IC50 values ranging from 3.0 to 7.7 micrograms/mL, which corresponded to 20-100 times that of prednisolone IC50 (0.08 microgram/mL). Davidigenin, dihydrowogonin and dihydrooroxylin A, which are hydrogenated metabolites of liquiritigenin, wogonin and oroxylin A, respectively, had no or little effects on lymphocyte blastogenesis. Oral administration of Saiboku-To, medicarpin, baicalein, magnolol and baicalin (100 mg/kg), inhibited PC-induced ear swelling significantly by 23.5, 40.1, 30.5, 23.6 and 20.9%, respectively, though the effects were weaker than that of 5 mg/kg of prednisolone (52.9%). The results suggested that flavonoids and lignans tested in the present study were implicated in anti-asthmatic effect of Saiboku-To through suppression of type IV allergic reaction.     

乌阳补心胶囊质量标准研究

目的建立乌阳补心胶囊的质量标准控制方法。方法采用薄层色谱法对本品中的何首乌、甘草、黄芪、淫羊藿进行薄层鉴别;采用高效液相色谱法对本品中的2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进行含量测定。结果在薄层色谱图中可检出何首乌、甘草、黄芪、淫羊藿;2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.116~2.32μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率为100.40%,RSD=0.64%。结论所建立的方法可靠、准确、专属性强,可有效控制乌阳补心胶囊的质量。     

新疆胀果甘草粗提物和精制物对宫颈癌细胞的影响

目的研究新疆胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Batalin)粗提物和精制物体外抗宫颈癌的活性。方法利用超声辅助乙醇对新疆胀果甘草进行粗提取,得到粗提物后,进一步利用大孔树脂柱层析法对粗提物进行精制,得到精制物,并利用紫外分光光度法对粗提物及精制物总黄酮的含量进行测定,测得粗提物总黄酮含量为5.6%,精制物总黄酮含量为56.4%。将粗提物和精制物分别作为试药,顺铂为阳性药。采用人宫颈癌HeLa和SiHa细胞作为体外实验对象,用MTT法测定对宫颈癌细胞抑制率,用流式细胞仪测定胀果甘草精制物对人宫颈癌细胞的凋亡作用。结果新疆胀果甘草粗提物和精制物均能明显抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的生长,且2种药的抑制效应呈时间和质量浓度依赖性,但在同一质量浓度下,精制物的抑制率更高。流式细胞测定结果显示,甘草粗提物、精制物能够显著诱导宫颈癌HeLa和SiHa细胞凋亡。结论新疆胀果甘草粗提物和精制物能够有效抑制宫颈癌细胞增殖,促进宫颈癌细胞凋亡,且精制物的抗癌活性明显优于粗提物。