人牙本质磷蛋白对小型猪修复性牙本质形成作用的实验研究

目的　观察人牙本质磷蛋白 (dentinphosphoprotein ,DPP)对修复性牙本质形成的诱导作用 ,进一步研究DPP的功能。方法　用人DPP粉作盖髓剂 ,对小型猪健康恒牙进行盖髓实验 ,对照组采用氢氧化钙和空白对照 (氧化锌丁香油糊剂盖髓 ) ,通过组织病理学观察牙本质桥的形成。结果DPP盖髓术后 2周 ,穿髓孔下固有牙髓细胞分化为类造牙本质细胞 ,分布在已形成的修复性牙本质团块周围 ;术后 1个月有完整的修复性牙本质桥形成 ;术后 3个月修复性牙本质桥增厚且结构致密 ,主要是管样牙本质 ,其下方排列分化好的造牙本质细胞。氢氧化钙盖髓组 ,术后 2周界面有炎症坏死区 ,只有少量的钙质团块形成 ,1～ 3个月逐渐形成完整的修复性牙本质桥 ,但较DPP盖髓后形成修复性牙本质的速度慢且量较少。结论　人DPP对牙髓刺激性小 ,可以直接诱导牙髓细胞分化及修复性牙本质形成 ,提示DPP在牙本质发育和修复的生物矿化中起重要作用。     

人牙本质磷蛋白的提取与特性分析

目的 建立人牙本质磷蛋白的提取方法并分析其特性。方法,将人牙本质粉用０．６ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ脱矿后,用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ６Ｂ离子交换层析柱分离纯化ＤＰＰ,取纯化的ＤＰＰ,用紫外分光光度计检测其吸光度值;用等离子发射光谱分析其磷含量;ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测量相对分子质量;并在水解后进行氨基酸含量分析。结果 用０．６ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ脱矿,可以有效地提取人ＤＰＰ。所提取的ＤＰＰ是磷含量较高     

早期牙髓损伤修复中牙本质涎磷蛋白表达的免疫组化研究

目的：衬步探讨牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP)在早期早贿损伤修复中的作用。方法：制备大鼠牙髓损伤模型,分别对损伤后6h,12h,1d,2d,3d,7d及正常大鼠牙髓标本进行HE和免疫组织化学染色,检测各实验组标本中DSPP的表达。结果：正常大鼠牙髓中仅在成牙本质细胞层有DSPP的阳性着色;牙髓损伤后6h,12h,DSPP在成牙本质细胞层的染色明显减弱;损伤后1-3d,梁色较正常牙增强。此时,牙尖及富细胞区的牙髓细胞也有了性着色;损伤后7d,染色与正常对照无明显差异。结论：DSPP在牙髓损伤的早期阶段表达下调;随后在成牙本质细胞及富细胞区牙髓细胞中表达增强;7d时表达趋于正常。提示：它可能在牙髓损伤早期的自身修复中起作用。     

rhBMP2与纤维蛋白粘结剂复合物诱导修复性牙本质形成的动物实验

目的　观察基因重组人骨形成蛋白 2 (recombinanthumanbonemorphorgeneticprotein 2 ,rhBMP2 )与纤维蛋白粘结剂 (fibrinsealant,FS)复合物对狗修复性牙本质形成的影响。方法　采用直接盖髓术 ,常规制备牙 颌骨联合切片 ,光学显微镜下观察rhBMP2及rhBMP2 /FS复合物诱导修复性牙本质形成的情况。结果　单纯rhBMP2盖髓 ,牙髓出血多 ,炎性反应重 ,牙本质桥形成多但较晚 ;rhBMP2 /FS复合物盖髓 ,牙髓无出血 ,炎性反应轻 ,牙本质桥形成早于rhBMP2组 ,且管样牙本质形成多于rhBMP2组。结论　rhBMP2有较强的牙本质诱导活性 ;FS具有良好的保护牙髓组织创面的能力并对rhBMP2有协同作用 ,FS与rhBMP2复合物是一种比较理想的生物活性盖髓剂     

表皮生长因子与胶原蛋白复合物对小型猪修复性牙本质形成作用的实验研究

目的：观察表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)与胶原蛋白海绵(col1agen sponge,CS)复合物对小型猪修复性牙本质形成的影响。方法：选用实验用小型猪牙齿36颗,采用EGF／CS复合物为材料进行直接盖髓术,通过组织病理学方法常规制备牙-颌骨联合切片,光学显微镜下观察修复性牙本质形成情况,并与氢氧化钙糊剂直接盖髓对照。结果：小型猪牙用EGF／CS直接盖髓术后2周,穿髓孔周边可见修复性牙本质团块形成,团块周围有成牙本质细胞样细胞围绕;术后4周有完整的修复性牙本质桥形成;术后12周修复性牙本质桥增厚且结构致密,严密封闭穿髓孔,桥体近髓腔面形成明显的管样牙本质,下方为整齐排列的典型成牙本质细胞。用氢氧化钙糊剂直接盖髓,术后2周可见穿髓孔处有炎症坏死区,只有少量钙化团块形成,术后4～12周逐渐形成完整的修复性牙本质桥,但形成速度较慢且牙本质桥厚度较薄。结论：EGF与胶原蛋白复合物显著促进牙髓细胞分化和修复性牙本质形成,是一种有临床应用价值的生物活性盖髓剂。     

表皮生长因子与胶原蛋白复合物对小型猪修复性牙本质形成作用的实验研究

目的:观察表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)与胶原蛋白海绵(collagen sponge,CS)复合物对小型猪修复性牙本质形成的影响.方法:选用实验用小型猪牙齿36颗,采用EGF/CS复合物为材料进行直接盖髓术,通过组织病理学方法常规制备牙-颌骨联合切片,光学显微镜下观察修复性牙本质形成情况,并与氢氧化钙糊剂直接盖髓对照.结果:小型猪牙用EGF/CS直接盖髓术后2周,穿髓孔周边可见修复性牙本质团块形成,团块周围有成牙本质细胞样细胞围绕;术后4周有完整的修复性牙本质桥形成;术后12周修复性牙本质桥增厚且结构致密,严密封闭穿髓孔,桥体近髓腔面形成明显的管样牙本质,下方为整齐排列的典型成牙本质细胞.用氢氧化钙糊剂直接盖髓,术后2周可见穿髓孔处有炎症坏死区,只有少量钙化团块形成,术后4～12周逐渐形成完整的修复性牙本质桥,但形成速度较慢且牙本质桥厚度较薄.结论:EGF与胶原蛋白复合物显著促进牙髓细胞分化和修复性牙本质形成,是一种有临床应用价值的生物活性盖髓剂.     

人牙本质磷蛋白功能片段的原核表达

目的本研究旨在利用分子生物学技术原核表达包含功能区的人DPP片段.方法首先构建带有人DPP基因5'端序列的GST融合蛋白表达质粒.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳.结果人牙本质磷蛋白基因5'端序列可在原核表达系统中进行不溶性表达,表达的融合蛋白分子量约为43KDa,进行初步纯化后,经SDS-PAGE证实,在预期位置出现了纯化蛋白条带.结论利用GST融合蛋白表达系统表达了人DPP功能片段.为进一步通过对人DPP功能片段的研究揭示DPP在牙齿发育和牙髓修复中的作用及其机制奠定基础.     

牙本质磷蛋白诱导矿化作用的研究

目的：探讨牙本质磷蛋白（dentin phosphoprotein,DPP)诱导矿化的作用。方法：在体外矿化系统中利用入DPP与EAH－Sepharose 4B凝胶颗粒结合进行诱导矿化实验，通过扫描电镜观察生成物的形貌变化，X线衍射及等离子发射光谱分析生成物的组分和结构。结果：结合有人DPP的凝胶颗粒表面有矿化物形成，该矿化物钙磷比约为1．33，其X线衍射结果与羟基磷灰石更为相似。结论：人DPP与一定的支持物紧密结合后具有诱导矿化的作用。     

牙本质磷蛋白对牙本质再矿化的影响

目的　探讨牙本质磷蛋白 (dentinphosphoprotein ,DPP)与脱矿牙本质再矿化的关系。方法　 (1 )用氯化钠提取脱矿牙本质中的易溶性DPP并鉴定。 (2 )用氯化钠去除和未去除易溶性DPP的脱矿人牙根牙本质磨片 ,经再矿化后通过原子吸收光谱、扫描电镜和显微放射照相的观测比较两组再矿化程度。结果　 (1 )证明了 1mol/L氯化钠可以提取脱矿牙本质中的易溶性DPP ;(2 )去除和未去除易溶性DPP的磨片组相比再矿化液的钙离子浓度显著减少 (P <0 0 1 ) ;磨片上生成较多量的矿物质沉积 ;显微射线照片平均吸光度值显著降低 (P <0 0 1 )。结论　易溶性DPP对脱矿牙本质再矿化有明显的抑制作用 ,在根面龋的再矿化中去除易溶性DPP能提高其再矿化的潜能。     

内毒素对大鼠牙髓组织形成修复性牙本质的影响

目的：探讨局部内毒素刺激对大鼠牙髓形成修复性牙本质的影响。方法：以内毒素注射于火鼠牙阍组织,内f蟮豢试剂盒检测血液中及逆行进入牙髓组织中的内毒素浓度,HE染色观察修复性牙本质形成情况。结果：血液中实验组勺埘照纰间内毒素的含量差别有统计学意义,P〈0．001。牙髓中实验组与阴性对照组,以及与窄白对照组问内毒素的含量麓川仃统计学意义,P〈O．001。HE染色可见注射位点附近修复性牙本质形成明显,髓腔变窄,牙本质小管排列紊乱。结论：内薄素仡一定条件下能刺激夫鼠牙髓组织,使其发生保护性反应,从而促进其矿化作用,加速修复性牙本质形成。     

牙本质中可溶性磷蛋白对再矿化的抑制作用

目的 研究去除牙本质中可溶性磷蛋白后对进一步再矿化的影响，了解磷蛋白在牙本质矿化中的作用机制。方法 用EDTA脱矿法去除牙本质中的固有可溶性磷蛋白，获得脱矿的牙本质籽晶，进行再矿化实验，并与以正常牙本质和乙酸脱矿法（可保留可溶性磷蛋白）获得的牙本质再矿化过程对照。实验应用等组分晶体生长体系，记录再矿化过程添加液何种随时间的增加量，以计算再矿化速率。结果 经EDTA脱矿0.5h及2h的牙本质籽晶的再矿化速率比正常牙本质粉明显增快，在200min时观察到的速率增加可超过100%，而脱矿5h和10h以及所有乙酸脱矿牙本质籽晶的再矿化速率均较正常未脱矿籽晶慢。结论 牙本质固有的可溶性磷蛋白具有抑制脱矿牙本质再矿化的作用。     

修复性牙本质形成的机理与调控

修复性牙本质的形成是牙体组织重要的保护性防御行为,在牙体组织遭受龋损、外伤、严重磨耗等损伤时,对于保护牙髓的活性和功能具有重要意义。修复性牙本质形成的机制较为复杂,有多种细胞参与,并受各类因子调控。本文就修复性牙本质的形成机制及其促进因素作一综述。     

人牙本质磷蛋白基因全序列的亚克隆及其5''''端序列的克隆和分析

目的:本研究旨在鉴定质粒pBlueBacHis2-DPP上所携带的外源基因序列;建立带有人DPP基因的稳定克隆株;构建人DPP基因5'端序列重组质粒,为表达纯化人DPP蛋白及其5'端序列提供可参考的数据.方法:用限制性内切酶分析并进行DNA序列测定质粒pBlueBacHis2-DPP上所携带的外源基因序列;以质粒pBlueBacHis2-DPP为模板,构建人DPP基因5'端序列重组质粒,并用蛋白序列分析软件包ANTHEPROT 4.5分析预测人DPP蛋白N端序列.结果和结论:质粒pBlueBacHis2-DPP上所携带的外源基因序列与基因文库上的人DPP基因序列相符合,建立带有人DPP基因的稳定克隆株pBV222-DPP;蛋白序列分析软件包分析预测人DPP蛋白N端序列氨基酸组成特点与人DPP全序列一致,体外即将表达的蛋白可能具有人DPP生物学功能的重组蛋白.     

外源性TGF—β1在体内诱导修复性牙本质形成的作用

目的：探讨ＴＧＦ－β１作为牙髓暴露点的外敷药物和牙髓中的植入体诱导修复性牙本质形成的能力。方法：狗磨牙和尖牙机械开髓,将含ＴＧＦ－β１的药物植入暴露点内并覆盖露髓外,术后４、８、１２周处死动物,制备标本,组织学观察。结果：术后４周,在ＴＧＦ－β１－ＨＡ的表面看到成牙本质样细胞和其他形成细胞相连的新的牙本质样基质的沉积,而对照的ＨＡ表面未见形成细胞和基质沉积现象。术后８、１２周,ＴＧＦ－β１－ＨＡ颗     

外源性TGF-β_1在体内诱导修复性牙本质形成的作用

目的 :探讨 TGF- β1 作为牙髓暴露点的外敷药物和牙髓中的植入体诱导修复性牙本质形成的能力。方法 :狗磨牙和尖牙机械开髓 ,将含 TGF- β1 的药物植入暴露点内并覆盖露髓处 ,术后 4、8、12周处死动物 ,制备标本 ,组织学观察。结果 :术后 4周 ,在 TGF- β1 - HA的表面看到成牙本质样细胞和其他形成细胞相连的新的牙本质样基质的沉积 ,而对照的 HA表面未见形成细胞和基质沉积现象。术后 8、12周 ,TGF- β1 - HA颗粒周围有厚层的牙本质样基质及与其相连的高柱状成牙本质样细胞 ,邻近的周围及洞口部位也看到修复性牙本质明显沉积和牙本质桥形成。结论 :外源性 TGF- β1 在体内可诱导成牙本质细胞分化和修复性牙本质的形成。     

层粘连蛋白在修复性牙本质形成中的免疫定位

目的 研究层粘连蛋白（laminin,LN）在牙髓修复中的免疫定位和分布特征。方法 在大鼠第一磨牙制备单面洞,分别观察3d、15d和30d后修复性牙本质的形成情况。以免疫组化技术检测LN的免疫反应。结果 术后3d,修复性牙本质尚未形成。牙髓内成牙本质细胞呈阳性染色,前期牙本质为弱阳性。术后15d,可见修复性牙本质形成和成牙本质细胞样细胞的出现,成牙本质细胞样细胞和牙髓细胞免疫染色呈阳性。术后30d,已形成的修复性牙本质内LN染色阳性,免疫活性特别集中于修复性牙本质与牙髓交界处,成牙本质细胞样细胞染色呈强阳性。结论 LN的分布特征提示,在修复性牙本质形成过程中,LN可能是牙髓细胞附着的一个有利因素。     

牙本质涎磷蛋白反义核酸对牙胚超微结构的影响

目的　探讨牙本质涎磷蛋白(DSPP)在牙胚发育和矿化中的作用及其机制。方法　胎龄为17 d Balb/C 胎鼠上颌第一磨牙,分为2组,对照组牙胚置于无血清BGJb半固定培养基中培养;DSPP反义核酸组牙胚置于含有 30μmol/L,长15 bp的DSPP反义寡核苷酸的半固体培养基中培养。牙胚体外培养10 d后,进行透射电镜观察。结果　2组牙胚牙尖处成牙本质细胞中均含有大量的细胞器,线粒体肿胀,粗面内质网扩张,且DSPP反义核酸组成牙本质细胞中粗面内质网扩张更为明显;胞外基质超微结构显示:对照组胶原纤维聚集成束,排列具有一定的方向, 牙尖基质带平均厚度为3μm ;DSPP反义核酸组胶原纤维粗细不等,排列紊乱,牙尖基质带平均厚度为2·5μm。结论　DSPP可能通过控制成牙本质细胞正常的分泌功能、胶原纤维的正常形态和排列在牙胚生长、矿化中起重要作用。     

牙本质涎磷蛋白反义核酸对体外培养牙胚发育、矿化的影响

目的：探讨牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein，DSPP)在牙胚发育及矿化中的作用。方法：胎龄为17dBalb／c胎鼠上颌第一磨牙，对照牙胚置于无血清BGjb半固定培养基中培养；其余牙胚分别置于含有30μmol／L长15bp的DSPP反义或正义寡核苷酸的BGjb半固体培养基中培养。牙胚体外培养16d后，分别进行HE和von Kossa检测。结果：体外培养16d后，对照组和正义组牙胚生长良好，大小和形态相似。von Kossa染色显示沿牙本质基质走向有明显的矿化线；而反义组牙胚体积明显小于对照组，且在根方上皮根鞘转折处，上皮细胞分化程度低于对照组。von Kossa染色为阴性。结论：本研究用直接的实验结果说明DSPP反义核酸可以影响牙胚的生长，抑制牙胚的矿化。研究证实：DSPP在牙齿矿化中起着重要作用。同时，研究结果还提示：DSPP在维持牙齿的正常生长中也起着重要的作用。     

Ⅰ型和Ⅲ型胶原在修复性牙本质形成中的免疫定位

目的：研究Ⅰ型和Ⅲ型胶原在修复性牙本质形成中的免疫定位和分布特征。方法：在大鼠第一磨牙制备单面洞,观察修复性牙本质形成,免疫组化ＳＡＢＣ法检测Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的免疫反应。结果：在术后３ｄ,修复性牙本质尚未形成。Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原均分布于牙髓内,前期牙本质为弱阳性,术后１５ｄ,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原在牙髓细胞内呈阳性染色。Ⅰ型胶原在前期牙本质中呈弱阳性,术后３０ｄ,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的旨阳性染色集中于     

卵黄高磷蛋白调控生物玻璃对牙本质的再矿化

目的:探讨卵黄高磷蛋白(PV)调控生物活性玻璃对脱矿牙本质再矿化的能力.方法:制备120片牙本质切片,随机分为6组,A组为对照组(SBF模拟体液),B组为100 mg/L PV,C组为500 mg/L PV,D组为SBF+生物活性玻璃(BG),E组为100 mg/L PV+BG组,F组为500 mg/L PV+BG组....