小檗碱对冈田酸拟AD大鼠空间学习记忆的改善作用及其机制

目的:探讨小檗碱(berberine,Ber)对冈田酸拟阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠学习记忆的改善作用及其可能机制。方法:36只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和Ber组,用侧脑室微量注射冈田酸(okadaic acid,OA,0.4 mmol/L,1.5μl/次,共3次)建立AD模型,Ber组是在模型制作前后灌胃(100mg/kg/d,共4周);采用Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆能力,用Bieischowsky镀银改良法观察脑内神经原纤维缠结(neurofibrillary tangle,NFTs)的变化;用免疫组织化学方法检测pTau-Ser396和pTau-Ser404蛋白的表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠各时间段的逃避潜伏期均延长,脑内出现较多NFTs,皮层和海马神经元pTau-Ser396/404的表达明显增高(P<0.01);Ber组大鼠潜伏期较模型组明显缩短,脑内NFTs的数量减少,pTau-Ser396/404的表达明显下调(P<0.01,P<0.05)。结论:小檗碱可明显改善AD模型大鼠空间学习记忆障碍,其机制可能与降低Tau磷酸化水平,减少NFTs有关。     

银杏叶对阿尔茨海默病(AD)治疗作用的实验研究

目的　探讨银杏叶对AD的治疗作用。方法　 30只SD大鼠随机均分为模型组、对照组和银杏叶治疗组 ,用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力 ,用旷场实验观察大鼠探究活动能力和紧张度 ,用硫磺素 S法和镀银法检测大鼠海马中老年斑和神经原纤维缠结形成情况。结果　模型组大鼠的学习、记忆功能和探究活动与对照组和银杏叶治疗组相比均明显下降 (P <0 .0 5 ) ,银杏叶治疗组与对照组相比无明显差异(P >0 .0 5 )。模型组大鼠海马可见到老年斑沉积和神经原纤维缠结形成 ,银杏叶治疗组仅有少量的老年斑沉积和神经原纤维缠结形成 ,而对照组大鼠未见老年斑沉积和神经原纤维缠结形成。结论　银杏叶提取物可提高大鼠的学习和记忆能力并明显减少老年斑沉积和神经原纤维缠结形成。     

神经生长因子预处理对拟AD模型大鼠脑内神经原纤维缠结形成和ChAT表达的影响

为了探讨神经生长因子(NGF)预处理对拟Alzheimer病(AD)模型大鼠海马CA1区和顶叶皮层内神经原纤维缠结(NFT)和胆碱乙酰基转移酶(ChAT)表达的影响,本研究将动物分为拟AD组和NGF预处理组。将冈田酸(OA)微量注射至拟AD组大鼠海马CA1区(0.4mmol/L,0.5ml/次;隔天1次,共7次)建立拟AD大鼠模型,NGF预处理组于制模前10d将NGF(0.1mg/ml,5ml/次;隔天1次,共10次)注射至侧脑室。通过Morris水迷宫观察上述大鼠的行为学变化,分别用改进的Bielschowsky染色和免疫组化法观察海马及顶叶皮层内NFT和ChAT表达的变化。结果显示:拟AD模型组大鼠出现认知、学习记忆能力减退,海马CA1区及顶叶皮层出现较多的NFT,而ChAT表达减少;NGF预处理组大鼠的上述症状明显改善。这些结果提示OA的神经毒性可以导致拟AD模型大鼠的学习记忆能力降低,并且出现胆碱能神经元损伤和功能低下;NGF预处理可以显著改善拟AD模型大鼠的学习记忆能力,抑制海马CA1区和顶叶皮层内NFT的形成,减轻对胆碱能神经元的损伤。     

异丙酚预处理对拟阿尔茨海默病模型大鼠神经行为学和神经原纤维缠结及胶质纤维酸性蛋白的影响

目的:观察异丙酚预处理对拟阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的神经行为学及海马损伤神经原纤维缠结(NFT)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,分析异丙酚的脑保护作用。方法:大鼠海马CA1区微量注射冈田酸(OA),建立拟AD大鼠模型。异丙酚预处理组大鼠于拟AD模型制作前30min,腹腔注射异丙酚100mg/kg。并以Morris水迷宫实验观察大鼠行为学变化,Bielschowsky染色观察NFT及免疫组织化学方法观察GFAP表达的变化。结果:与对照组大鼠相比,模型组大鼠学习记忆能力显著降低;Bielschowsky染色观察海马CA1区域出现大量NFT的特征性病理变化,GFAP免疫组织化学阳性细胞明显增多。与模型组大鼠相比,异丙酚预处理组大鼠学习记忆能力明显提高;海马CA1区NFT明显减少或消失,GFAP免疫组织化学阳性细胞明显减少。结论:拟AD模型建立前30min异丙酚预处理能改善拟AD模型大鼠学习记忆能力,降低NFT和GFAP的表达,有明显的脑保护作用。     

神经生长因子预处理阿尔茨海默病大鼠海马神经原磷酸化Tau蛋白的变化

背景：神经生长因子能够促进胆碱能神经元的分化,决定轴突的生长,并可参与损伤神经的再生和功能修复。 目的：进一步验证神经生长因子预处理对拟阿尔茨海默病模型大鼠脑内神经原纤维缠结和磷酸化Tau蛋白表达的影响。 方法：将3-5月龄雄性Wistar大鼠随机分为3组：模型组将冈田酸微量注射至拟大鼠海马CA1区建立拟阿尔茨海默病大鼠模型;预处理组于造模前将神经生长因子注射至侧脑室;对照组用同样方法注入等体积的二甲亚砜作为对照。通过Morris水迷宫观察上述大鼠的行为学变化,分别用改进的Bielschowsky染色观察海马CA1区神经原纤维缠结,用免疫组织化学和免疫印迹法观察海马区磷酸化Tau蛋白表达的变化。 结果与结论：拟阿尔茨海默病模型组大鼠出现认知、学习记忆能力减退;与对照组比较,模型组海马CA1区出现较多神经原纤维缠结, 而且磷酸化的Tau蛋白表达增多;神经生长因子预处理组大鼠的上述症状明显改善。提示神经生长因子预处理可以显著改善拟阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力,抑制神经原纤维缠结的形成,减少磷酸化Tau蛋白的表达。     

西红花苷对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马LTP的影响

目的:探讨西红花苷对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠空间学习记忆能力对海马LTP的影响。方法:健康成年SD大鼠,随机分为正常对照组、AD模型组、西红花苷(低、中、高剂量)组Morris水迷宫实验检测空间学习记忆能力,电生理实验检测海马LTP,Western Blot检测海马GAP-43蛋白表达。结果:AD模型组大鼠寻找水下平台的潜伏期时间较对照组延长(P0.01),西红花苷各剂量组寻找水下平台的潜伏期时间从第二天起,较AD模型组均缩短(P0.01),西红花苷中剂量组和高剂量组的潜伏期时间均短于低剂量组(P0.05),中、高剂量组间的潜伏期时间在各实验日均未见有无显著性统计学差异。强直性高频刺激海马诱发电位的幅值比较,AD模型组低于对照组(P0.01),西红花苷各剂量组高于AD模型组(P0.05),且西红花苷中、高剂量组高于低剂量组(P0.05)。西红花苷各剂量组海马GAP-43表达低于对照组(P0.01),高于AD模型组(P0.01)。结论:西红花苷对AD大鼠学习记忆能力有一定改善作用,增强海马LTP和GAP-43的表达。     

D-半乳糖联合染铝大鼠海马结构Aβ及相关蛋白的表达

目的:探讨D-半乳糖联合染铝的阿尔茨海默病大鼠海马结构Aβ及其相关蛋白的表达及其分布。方法:30只雄性SD大鼠随机分为2组,即:对照组和模型组(n=15)。模型组每日腹腔注射D-半乳糖60 mg/kg和灌胃三氯化铝500 mg/kg,连用60 d;对照组给予等量生理盐水进行腹腔注射和灌胃。铃木镀银法观察神经原纤维缠结的形成,确定模型是否成功。免疫组织化学法观察海马结构三个亚区的Aβ、β分泌酶(BACE)和早老素-1(PS-1)蛋白的表达。结果:铃木镀银染色可见模型组大鼠颞叶、顶叶皮层及海马神经元内的神经原纤维缠结。模型组大鼠海马CA1、CA3区及齿状回Aβ表达较强,与对照组相比差异显著(P<0.01);模型组海马CA3区神经元的BACE和PS-1蛋白表达量较对照组明显增加(P<0.01)。结论:D-半乳糖联合染铝的阿尔茨海默病大鼠海马结构Aβ、BACE及PS-1表达均明显上调,可能是导致AD大鼠功能障碍的主要原因。     

阿尔茨海默氏病动物模型的建立

目的　建立大鼠阿尔茨海默氏病动物模型 ,观察大鼠病理学和行为学改变。方法　 2 4只Wis tar大鼠被随机分为实验组 (12只 )和对照组 (12只 ) ,实验组用ALZET微型渗透泵侧脑室内缓慢灌注Aβ1-42 ,对照组灌注等量的磷酸缓冲液。 2 8天后用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力 ;用硫磺素 S法和镀银法检测大鼠海马、大脑皮质中老年斑和神经原纤维缠结形成情况。结果　实验组大鼠的学习、记忆功能与对照组相比均明显下降 (P <0 .0 5 ) ,实验组大鼠海马和皮层可见老年斑沉积和神经原纤维缠结形成 ,而对照组大鼠未见老年斑沉积和神经原纤维缠结形成。结论　通过微型渗透泵侧脑室内慢性灌注Aβ1-42 是一种成功的Alzheimer’s病动物模型。     

帕金森病大鼠模型学习记忆能力与左旋多巴的关系

背景:帕金森病治疗的经典药物是左旋多巴,但是长期应用会产生异动症等并发症。目的:观察左旋多巴对帕金森病模型大鼠学习记忆能力的影响,并探讨其机制。方法:应用6-羟多巴胺制作帕金森病大鼠模型。将228只造模成功的帕金森病大鼠分为对照组和实验组,实验组大鼠分别按10,20,30 mg/(kg·d)腹腔注射左旋多巴,连续28 d,然后分别于腹腔注射后1,3,5,7,14,28 d测定其学习记忆能力及血浆同型半胱氨酸和叶酸水平。测定大鼠海马区乙酰胆碱酯酶活性,并应用Bielschowsky染色观察海马神经原纤维缠结。结果与结论:随左旋多巴剂量增大、应用时间延长,可明显降低大鼠学习记忆能力(P0.001);升高血浆同型半胱氨酸水平,降低叶酸水平(P0.001);降低大鼠海马区乙酰胆碱酯酶活性(P0.001);增多大鼠海马区神经原纤维缠结(P=0.000)。提示大量使用左旋多巴可造成帕金森病模型大鼠学习记忆能力明显下降,引起海马区乙酰胆碱酯酶活性下降,促进海马区神经原纤维缠结增多,其机制可能与升高同型半胱氨酸有关。     

MAPK的抑制剂SB203580和PD98059对N2a细胞神经细丝磷酸化的影响

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一种常见的神经退行性疾病，临床表现为进行性的学习记忆及认知功能障碍，其两大特征性病理改变是老年斑(senile plaque，SP)和神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFTs)。已经发现NFTs是由过度磷酸化的神经元骨架蛋白成分(tau蛋白和神经细丝NF形成的。     

雌激素对阿尔茨海默病去势雌性SD大鼠学习记忆能力的影响

目的观察雌激素对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响。方法首先采用Aβ1～40,1μL(10μg/μL)立体定位SD大鼠单侧海马内注射建立AD动物模型,二周后双侧卵巢切除术(OVX)制备去卵巢大鼠模型后给予雌激素替代治疗(ERT),最后通过Morris水迷宫观察动物模型的学习、记忆能力变化情况。结果 ERT组AD动物模型的水迷宫逃避潜伏期和目标象限游泳时间比OVX组明显缩短(P0.05)。结论雌激素具有改善AD大鼠模型认知功能的作用。     

银杏内酯对拟老年痴呆模型大鼠学习记忆能力的影响

目的:探讨银杏内酯对拟老年痴呆大鼠学习记忆能力影响的可能机制。方法:大鼠海马微量注射冈田酸(OA),银杏内酯灌胃。水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;银染观察大鼠脑内神经原纤维缠结(NFT);免疫组化观察大鼠脑内bax、bcl-2的表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠学习记忆能力下降,NFT表达增多明显,bcl-2免疫阳性神经元减少明显,bax免疫阳性神经元增多明显;与模型组相比,银杏内酯组大鼠学习记忆能力明显提高,NFT表达减少明显,bcl-2免疫阳性神经元增多明显,bax免疫阳性神经元减少明显。结论:银杏内酯提高拟老年痴呆大鼠的学习记忆能力可能与其抑制OA对tau蛋白的磷酸化,减少神经细胞的凋亡,从而对神经元产生保护作用有关。     

雌激素对阿尔茨海默病大鼠模型MAPK蛋白表达的影响

目的探讨雌激素对阿尔茨海默病(AD)大鼠模型学习记忆能力及丝裂霉原活化的蛋白激酶(MAPK)蛋白表达的影响。方法30只大鼠行卵巢切除术(OVX)后,均分成OVX组和雌激素替代治疗组(ERT),然后采用1μlofAβ1～40(10μg/μl)立体定位单侧海马内注射建立AD动物模型,通过水迷宫实验检测动物模型的学习、记忆能力;免疫组化检测MAPK蛋白表达情况。结果ERT组AD动物模型的水迷宫逃避潜伏期较OVX组明显缩短(P<0.05),同时ERT组AD动物模型的海马CA1、CA3区的MAPK表达上调(P<0.05)。结论雌激素可以改善AD动物模型的认知功能,其神经保护作用可能与上调海马MAPK表达有关。     

Accumulation of C-terminally truncated tau protein associated with vulnerability of the perforant pathway in early stages of neurofibrillary pathology in Alzheimer's disease

Neurofibrillary pathology is a characteristic hallmark of Alzheimer's disease that is closely correlated with cognitive decline. We have analysed the density and distribution of neurofibrillary tangles (NFTs) that are immunoreactive with the monoclonal antibody (mAb) 423 in a prospectively analysed population of Alzheimer's disease (AD) cases and age-matched controls. NFTs were examined in allocortical and isocortical areas and correlated with Braak pathological stage and clinical severity of dementia. The mAb 423 was used as it recognises a C-terminally truncated tau fragment that is a major constituent of NFTs. Our results show that extracellular NFTs and, to a lesser extent, intracellular NFTs, correlated significantly with both Braak stages and the clinical index of severity. Furthermore, a differential distribution of the two types of tangles indicates that layer II of the entorhinal cortex and the transentorhinal area are particularly vulnerable to neurofibrillary degeneration. These areas serve as a point of connection between isocortex and hippocampus. Our findings, therefore, suggest that the perforant pathway may be substantially affected by the accumulation of truncated tau protein in AD and that this represents a neuropathological predictor for the clinical severity of dementia. When neurofibrillary pathology was examined by combined labelling with mAbs 423 and Alz-50 and the dye thiazin red, we were able to demonstrate various stages of tau aggregation. The different stages may represent a sequence of conformational changes that tau proteins undergo during tangle formation in the allocortex during the early development of dementia in AD.     

β淀粉样蛋白1～42与D-半乳糖联合作用建立复合阿尔茨海默病样模型

目的 探讨β淀粉样蛋白1～42(Aβ1-42)及D-半乳糖(D-gal)联合应用构建复合阿尔茨海默病(AD)样模型的可行性.方法 采用44只2月龄雄性SD大鼠,共分4组,即腹腔及侧脑室注射生理盐水的假手术组,腹腔注射D-gal或侧脑室注射Aβ1-42分别建立的D-gal组和Aβ1-42组,腹腔注射D-gal联合侧脑室注...     

Glial heme oxygenase-1 expression in Alzheimer disease and mild cognitive impairment

We determined whether oxidative stress is an early event in the pathogenesis of sporadic Alzheimer disease (AD), and correlated oxidative stress with neuropsychological functions and neurofibrillary pathology in AD and mild cognitive impairment (MCI). Oxidative stress was measured as the percentage of astrocytes expressing heme oxygenase-1 (HO-1) in post mortem temporal cortex and hippocampus after dual HO-1/glial fibrillary acidic protein (GFAP) immunohistochemistry. Glial HO-1 expression in the MCI temporal cortex and hippocampus was significantly greater than in the non-demented group and did not differ from AD values. Astroglial HO-1 expression in the temporal cortex was associated with decreased scores for global cognition, episodic memory, semantic memory and working memory. Hippocampal astroglial HO-1 expression was associated with lower scores for global cognition, semantic memory and perceptual speed. Glial HO-1 immunoreactivity in the temporal cortex, but not hippocampus, correlated with the burden of neurofibrillary pathology. Cortical and hippocampal oxidative stress is a very early event in the pathogenesis of sporadic AD and correlates with the development of specific cognitive deficits in this condition.     

半枝莲黄酮抑制复合Aβ所致大鼠皮层细胞NFT沉积及其调节机制

目的:探讨半枝莲黄酮(SBF)对复合Aβ,即β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)联合三氯化铝(AlCl_3)和重组人类转化生长因子-β1(RHTGF-β1)所致大鼠脑内神经元纤维缠结(NFT)沉积,tau蛋白磷酸化的影响及糖原合成激酶(GSK)3β和蛋白磷酸酶(PP)2A的调节机制。方法:雄性SD大鼠,脑室注射复合Aβ建立拟阿尔茨海默病(AD)大鼠记忆障碍模型,Morris水迷宫进行记忆障碍模型筛选,模型成功大鼠灌胃35、70和140 mg/kg的SBF和140 mg/kg的阳性对照药银杏叶黄酮(GLF),持续37 d。硝酸银法测定大鼠大脑皮层的NFT,Western blot法检测大鼠海马、皮层中总tau蛋白、Ser199和Ser214位点磷酸化的tau蛋白水平以及相关GSK3β和PP2A蛋白的表达水平。RT-PCR法检测海马、皮层中GSK3β和PP2A的mRNA水平。结果:大鼠脑室注射复合Aβ可以引起大鼠脑内NFT生成增加、Ser199和Ser214位点磷酸化tau蛋白、GSK3β蛋白和mRNA表达水平皆明显增加,PP2A的蛋白和mRNA表达水平明显降低。3种剂量的SBF灌胃37 d不同程度地逆转复合Aβ所致大鼠脑内上述异常改变。GLF也表现出与SBF相似的结果。结论:SBF能够抑制复合Aβ所致大鼠脑内NFT沉积,该作用可能是通过抑制GSK3β活性、增加PP2A活性从而降低tau蛋白磷酸化而实现的。