重组人促红细胞生成素对心梗大鼠HIF-1α与Survivin表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rHuEPO)对心梗大鼠心肌缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与生存素(Survivin)表达的影响。方法 45只SD大鼠,随机分为假手术组、心肌梗死组和rHuEPO治疗组。用Western blot方法检测各组大鼠梗死区周围心肌中HIF-1α与Survivin的表达水平,RT-PCR方法检测梗死区周围心肌HIF-1αmRNA与Survivin mRNA表达变化。结果心肌梗死组大鼠心肌梗死区周围心肌HIF-1α蛋白与mRNA的表达水平显著高于假手术组,而Survivin蛋白与mRNA的表达水平则显著降低(P0.01);与心肌梗死组相比,rHuEPO治疗组心肌梗死区周围心肌HIF-1α蛋白与mRNA的表达水平明显降低,而Survivin蛋白与mRNA的表达水平则显著升高(P0.01)。结论 rHuEPO能够抑制心梗大鼠心肌梗死区周围心肌HIF-1α过表达并上调Survivin的表达。     

重组人促红细胞生成素对心梗大鼠IL-6与IL-8表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rHu EPO)对心梗大鼠心肌白介素-6(IL-6)与白介素-8(IL-8)表达的影响。方法 45只SD大鼠,随机分为假手术组、心肌梗死组和r HuEPO治疗组。用western blot方法检测各组大鼠梗死区周围心肌中IL-6与IL-8的表达,RT-PCR方法检测梗死区周围心肌IL-6 mRNA与IL-8 mRNA表达变化。结果心肌梗死组大鼠心肌梗死区周围心肌IL-6与IL-8蛋白与mRNA的表达水平显著高于假手术组,与心肌梗死组相比,rHuEPO治疗组心肌梗死区周围心肌IL-6与IL-8蛋白与mRNA的表达则明显降低(P0.01)。结论 rHuEPO下调心梗大鼠心肌梗死区周围心肌IL-6与IL-8的表达。     

重组人促红细胞生成素对心梗大鼠Fas与caspase-9表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rHuEPO)对心梗大鼠心肌Fas与caspase-9表达的影响。方法 45只SD大鼠,随机分为假手术组、心肌梗死组和rHuEPO治疗组。用Western blot方法检测各组大鼠梗死区周围心肌中Fas与caspase-9的表达水平,RT-PCR方法检测梗死区周围心肌Fas mRNA与caspase-9 mRNA表达变化。结果心肌梗死组大鼠心肌梗死区周围心肌Fas与caspase-9蛋白与mRNA的表达水平显著高于假手术组,与心肌梗死组相比,rHuEPO治疗组心肌梗死区周围心肌Fas与caspase-9蛋白与mRNA的表达则明显降低(P0.01)。结论 rHuEPO下调心梗大鼠心肌梗死区周围心肌Fas与caspase-9的表达。     

LY294002对糖尿病肾病大鼠肾组织IL-1β与IL-6表达的影响

目的研究经静脉注射PI3K抑制剂LY294002对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织白介素-1β(IL-1β)与白介素-6(IL-6)表达的影响。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(10)、模型组组(10)和PI3K抑制剂(LY294002)处理组。参照Anderson's方法制作糖尿病肾病大鼠模型。采用Western blot方法检测三组大鼠肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达;RT-PCR方法检测三组大鼠肾组织IL-1βmRNA与IL-6mRNA的表达。结果 Western blot结果显示,模型组与LY294002处理组肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达量均显著高于假手术组(0.05),而LY294002处理组比模型组肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达量明显降低(0.05)。RT-PCR结果显示,与假手术组比较,模型组与LY294002处理组肾组织IL-1βmRNA与IL-6mRNA的表达量均显著升高(0.05),而LY294002处理组肾组织IL-1βmRNA与IL-6 mRNA的表达则明显低于模型组(0.05)。结论 PI3K抑制剂LY294002能够下调DN大鼠肾组织IL-1β与IL-6的表达。     

GSK-3β/β-catenin信号通路对大鼠脑出血后神经炎症反应的调控作用

目的:研究糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路在脑出血大鼠出血灶周围组织中的表达水平,并探讨其对神经炎症反应的调控作用。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(sham)、脑出血模型组(ICH)和GSK-3β抑制剂组(SB216763)应用自体血右侧基底节区注入法建立大鼠脑出血模型,GSK-3β抑制剂组于手术前通过侧脑室注入抑制剂SB216763,用干湿重法检测脑组织含水量,ELISA法检测大鼠脑脊液中炎症细胞因子TNF-α、IL-1β及IL-6的含量,real time RT-PCR法检测脑出血大鼠出血灶周围组织中GSK-3β的mRNA表达水平,Western Blot检测GSK-3β、p-GSK-3β(tyr216)和β-catenin的蛋白水平。结果:与假手术组大鼠相比,脑出血组大鼠脑组织含水量增加,脑脊液中TNF-α、IL-1β及IL-6的含量明显增加,出血灶周围组织中GSK-3βmRNA和蛋白表达增加,p-GSK-3β(tyr216)的水平明显升高,β-catenin蛋白表达显著下降。与脑出血模型组相比,SB216763处...     

LY294002对糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1与Nephrin表达的影响

目的研究经静脉注射PI3K抑制剂LY294002对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与肾小球足细胞跨膜蛋白(Nephrin)表达的影响。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(10)、模型组组(10)和PI3K抑制剂(LY294002)处理组。参照Anderson's方法制作糖尿病肾病大鼠模型。采用Western blot方法检测3组大鼠肾组织MCP-1与Nephrin蛋白的表达,RT-PCR方法检测三组大鼠肾组织MCP-1 m RNA与Nephrin m RNA的表达。结果模型组肾组织MCP-1蛋白和m RNA的表达量显著高于假手术组(P0.05),而LY294002处理组明显低于模型组(0.05)。模型组肾组织Nephrin蛋白和m RNA的表达量显著低于假手术组(0.05),而LY294002处理组显著高于模型组(0.05)。结论 PI3K抑制剂LY294002能够下调糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1的表达,上调Nephrin的表达。     

多不饱和脂肪酸改善小鼠心肌脂质成分及缺血再灌注后线粒体功能

目的 探讨增加不饱和脂肪酸摄入比例对心脏ω-6/ω-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)比值及心肌缺血-再灌注时缺血区炎症状态及线粒体功能的影响.方法 C57BL/6小鼠80只,随机分为普通饮食组及植物油脂组(n=40).喂养1个月后,建立心脏缺血再灌注模型.气相色谱法检测心脏ω-3及ω-6 PUFAs含量.TTC染色检测心肌梗死面积.差速离心法分离心肌线粒体,氧电极法测定线粒体呼吸控制率.实时定量PCR检测缺血区心肌肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达,ELISA法检测心肌TNF-α及白细胞介素-1(IL-1)蛋白含量.结果 与普通饮食组相比,植物油脂组小鼠心脏ω-6/ω-3 PUFAs比值显著减低(P＜0.05),心肌梗死面积显著减小(P＜0.01),缺血区心肌线粒体呼吸控制率显著改善(P＜0.05),TNF-αmRNA表达、TNF-α及IL-1蛋白含量均显著降低(P＜0.05).结论 不饱和脂肪酸改善小鼠心肌脂质成分及缺血再灌注后线粒体功能.     

乙型肝炎病毒X蛋白通过激活ERKs和NF-κB上调大鼠系膜细胞表达TNF-α

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因转染大鼠系膜细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)高表达的细胞外蛋白调节激酶(ERKs)、核因子κB(NF-κB)、P38 MAPK信号传导机制.方法 将含有HBV X基因的质粒pCI-neo-X导入体外培养的大鼠系膜细胞,分别采用特异性抑制剂U0126阻断ERK1/2通路,Lactacystin阻断NF-κB通路和SB203580阻断P38 MAPK通路,观察培养细胞TNF-α及其mRNA表达,以不加抑制剂作为对照.RT-PCR检测TNF-α mRNA表达,ELISA检测培养上清液中TNF-α表达.Western blot检测乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)表达.结果 转染pCI-neo-X后,系膜细胞TNF-α mRNA及上清液TNF-α表达均增高,通过阻断ERK1/2或NF-κB通路,细胞TNF-α mRNA及上清液TNF-α表达均下降.而阻断P38 MAPK通路对系膜细胞TNF-α mRNA及上清液TNF-α表达无明显影响.结论 HBx蛋白通过激活ERKs和NF-κB信号通路使系膜细胞高表达TNF-α,而与P38 MAPK通路无关.     

Wortmannin对糖尿病肾病大鼠肾组织IL-1与IL-6表达的影响

目的研究糖尿病肾病(DN)大鼠模型经静脉注射PI3K抑制剂Wortmannin后肾组织白介素-1(IL-1)与白介素-6(IL-6)表达的变化。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(10)、模型组组(10)和Wortmannin处理组(10)。参照Anderson's方法制作糖尿病肾病大鼠模型。采用Western blot方法检测三组大鼠肾组织IL-1与IL-6蛋白的表达;RT-PCR方法检测三组大鼠肾组织IL-1m RNA与IL-6m RNA的表达。结果模型组与Wortmannin处理组肾组织IL-1与IL-6蛋白和m RNA的表达量均显著高于假手术组(0.05),而与模型组相比,Wortmannin处理组肾组织IL-1与IL-6蛋白和m RNA的表达量明显降低(0.05)。结论 PI3K抑制剂Wortmannin能够下调DN大鼠肾组织IL-1与IL-6的表达。     

雷公藤甲素对感染性休克大鼠脑的保护作用

目的探讨雷公藤甲素对感染性休克大鼠的脑保护作用及其可能机制。方法将SPF级SD大鼠50只,体重200-250 g,随机均分为假手术组(Sham组)、感染性休克组(LPS组)、雷公藤甲素组(TR组)、PI3K抑制剂组(LY294002组)、雷公藤甲素联合PI3K抑制剂组(TR+LY294002组)。尾静脉注射5 mg/kg脂多糖(LPS)制备大鼠感染性休克模型,TR组于造模前腹腔注射TR 200μg/kg,分别于感染性休克发生后12 h处死大鼠。HE染色观察大鼠脑组织病理变化;检测脑组织中NO、ROS、SOD及MDA水平;TUNEL法检测大鼠脑内细胞凋亡;实时PCR法检测各组大鼠脑组织中Bax、Bcl-2及Caspase-3 mRNA表达水平;Western blot法检测大鼠PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt及p-Akt表达情况。结果 LPS组大鼠脑组织损伤严重,脑组织中SOD水平降低,ROS、NO及MDA水平升高。TR可以抑制LPS引发的大脑损伤及神经细胞凋亡,与LPS组相比,TR组大鼠脑组织中SOD, PI3K、p-Akt蛋白的表达水平升高,ROS、NO/MDA及Bax/Bcl-2 mRNA比率及Caspase-3 mRNA表达水平降低。但是,给予PI3K抑制剂后,TR的抗凋亡作用被抑制。结论 TR对感染性休克大鼠的脑保护作用与激活PI3K/Akt信号通路相关。     

塞来昔布对膝关节炎大鼠肿瘤坏死因子α信号通路及关节滑膜细胞的影响*

目的：探究塞来昔布对膝关节炎大鼠肿瘤坏死因子α（ TNF-α）信号通路及关节滑膜细胞的影响。方法： SD大鼠随机分为模型组、假手术组和治疗组,治疗组大鼠制作膝关节炎模型后给予塞来昔布进行治疗。通过 TUNEL 法、qRT-PCR 法、CCK-8 法、免疫印迹等方法检测3 组大鼠滑膜细胞凋亡情况、TNF-α mRNA表达含量、 TNF-α 蛋白含量、关节炎指数及细胞增殖情况。结果：模型组、治疗组、假手术组关节滑膜细胞凋亡率分别为 89.38%、46.84%、13.68%。模型组与假手术组、治疗组相比较,细胞凋亡率显著升高,治疗组细胞凋亡数量多 于假手术组。假手术组、治疗组细胞增殖OD值比模型组高,差异具有统计学意义,假手术组关节滑膜细胞的增 殖数量最多,模型组关节滑膜细胞的增殖数量最少,治疗组关节滑膜细胞的增殖情况比假手术组相比明显减少。 与假手术组、治疗组比较,模型组关节滑膜细胞中TNF-α 蛋白表达水平显著上升,治疗组TNF-α 蛋白表达水平较 假手术组明显升高。与假手术组、治疗组比较,模型组TNF-α mRNA含量显著升高,治疗组TNF-α mRNA表达 量较假手术组明显升高。治疗组和模型组大鼠关节炎指数相近,随着给药时间的增加,治疗组大鼠膝关节炎情况 逐渐好转,而未服用药物的模型组大鼠病情逐渐恶化。结论：塞来昔布胶囊治疗膝关节炎大鼠效果显著,能够显 著降低TNF-α 信号通路的表达水平,改善关节滑膜细胞的凋亡情况。     

磷脂酰肌醇3激酶对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡和转化生长因子β1表达的影响

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3-K）对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖、凋亡和转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响.方法 以肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及PI3-K特异性抑制剂wortmannin作为工具药,分别将TNF-α、TNF-α＋wortmannin接种ASMC,置37℃,5%CO2培养箱中培养.逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测PI3-Kp85α、TGF-β1 mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测PI3-Kp85α、PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位,Sandwich ELISA检测NF-κB活性,四甲基偶氮唑蓝（MTT）微量比色法测定ASMC增殖,AnnexinV/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡,ELISA测定TGF-β1蛋白质含量.结果 （1）培养的ASMC PI3-K p85α的阳性定位在胞浆.TNF-α组ASMC PI3-Kp85α mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α＋wortmannin组（P＜0.01）;（2）TNF-α组ASMCNF-κB活性与对照组相比显著增高（P＜0.01）,TNF-α＋wortmannin组NF-κB活性与TNF-α组相比显著降低（P＜0.01）;（3）TNF-α组ASMC的增殖反应与对照组及TNF-α＋wortmannin组相比显著增加（P＜0.01）;TNF-α组细胞凋亡率与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）,TNF-α＋wortmannin组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组（P＜0.01）.（4）TNF-α组ASMC的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组及TNF-α＋wortmannin组（P＜0.01）;（5）TNF-α组ASMC的TGF-β1的mRNA表达水平、培养液上清TGF-β1的蛋白质含量均显著高于对照组及TNF-α＋wortmannin组（P＜0.01）.结论 PI3-K可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β1的表达和分泌,NF-κB作为PI3-K的下游信号参与此过程.     

5-Aza诱导BM-MSCs移植对大鼠 心肌梗死面积、相关细胞因子及钾离子通道蛋白的影响

目的观察5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对大鼠心肌梗死面积、相关细胞因子及钾离子通道蛋白表达的影响。方法大鼠随机分为对照组、模型组、阴性对照组(细胞培养液)、BM-MSCs组和5-Aza-BM-MSCs组。冠状动脉结扎建立心肌梗死模型,采用4点注射法进行细胞移植。HE染色观察梗死心肌组织病理,免疫组化检测梗死区caspase-3、beclin-2、VEGF、PGI_2、超氧化物歧化酶(SOD)、IL-3、IL-6和TNF-α的表达;Western blot检测钾离子通道Kv1.2和Kv1.5蛋白的表达。结果 1)与对照组相比,模型组心肌梗死面积明显增大,caspase-3、beclin-2、VEFG、PGI_2、IL-3、IL-6和TNF-α表达水平提高(P0.05);SOD、Kv1.2和Kv1.5表达水平降低(P0.05);2)与模型组相比,BM-MSCs组和5-Aza-BM-MSCs组心肌梗死面积明显减小,caspase-3、beclin-2、IL-3、IL-6和TNF-α表达水平降低(P0.05),Kv1.5、VEGF、PGI_2、和SOD表达水平提高(P0.05),Kv1.2 BM-MSCs组表达降低而5-Aza-BM-MSCs组表达提高(P0.05);3)与BM-MSCs组比较,5-Aza-BM-MSCs组心肌梗死面积减小,caspase-3、和IL-6表达水平降低(P0.05),Kv1.2、VEGF和SOD表达水平均提高(P0.05)。结论 5-Aza-BM-MSCs可以更有效的减少炎性反应与细胞凋亡,促进新生血管生成,提高心肌抗氧化能力,减少心肌梗死面积,促进钾离子通道蛋白Kv1.2的表达。     

前列腺素D2受体调节PGD2诱导的人气道黏液高分泌

目的研究前列腺素D2(PGD2)通过D类前列腺素受体2(DP2)对人气道上皮细胞黏液分泌的效应及其作用机制。方法用PGD2刺激人气道上皮16HBE细胞,以DP2拮抗剂AZD6430、DP1拮抗剂BWA868C及三磷酸肌醇蛋白激酶(PI3K)抑制剂LY294002为干预因素,将细胞分为对照组、PGD2刺激组、PGD2刺激+AZD6430组、PGD2刺激+BWA868C组、PGD2刺激+LY294002组。ELISA检测细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-4和IL-13的蛋白含量,激光共聚焦技术检测细胞内黏蛋白(MUC)5AC含量;Western blot检测DP2、DP1、PI3K和磷酸化AKT(p-AKT)表达水平;实时荧光定量PCR检测TNF-α、IL-4、IL-13和MUC5AC mRNA表达水平。结果 PGD2刺激后MUC5AC、TNF-α、IL-4、IL-13、DP2、PI3K和p-AKT表达显著高于对照组(P0.05);AZD6430拮抗组中MUC5AC、TNF-α、IL-4、IL-13、PI3K及p-AKT表达较PGD2刺激组明显减弱(P0.05);LY294002组TNF-α、IL-4、IL-13和MUC5AC表达较PGD2组亦显著减弱(P0.05)。结论 PGD2激活人气道上皮细胞的DP2受体,活化PI3K/AKT引起黏液高分泌。     

α-亚麻酸在缺血性心衰中的保护作用及其对缺血早期炎症小体NLRP3的抑制作用

目的探讨α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)在缺血性心衰中的保护作用及其对TNF-α、IL-6和炎症小体NLRP3(pyrin domain containing 3)等炎症介质的影响。方法通过结扎冠状动脉建立大鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型,给予ALA或其对照,监测MI后1周、2周和4周大鼠血清中TNF-α和IL-6炎症因子变化,检测MI后1周心肌组织中NLRP3相关蛋白及和MI后4周心脏功能的变化。结果与假手术组比较,血清中TNF-α和IL-6水平在MI后1周和2周均显著增加。MI后1周缺血区心肌组织中NLRP3表达显著增加,半胱氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific protease-1,caspase-1)活性升高,IL-1β和TNF-α蛋白含量显著升高。补充ALA不仅显著降低大鼠MI后1周和2周血清中TNF-α和IL-6水平,而且减少MI后1周心肌组织中的NLRP3含量和caspase-1活性,进而降低了IL-1β和TNF-α含量,减少了中性粒细胞在心肌组织中的浸润,改善了MI 4周后的心脏功能。结论 MI前补充ALA可减少MI后1周炎症小体NLRP3相关蛋白表达,抑制TNF-α、IL-1β及IL-6炎症因子的生成,改善MI 4周后的心脏功能,延缓缺血性心衰的发生发展。     

脑缺血再灌注损伤后大鼠脑皮质TNF-α及其mRNA的时程变化

为了观察大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质TNF-α及其mRNA表达的时程变化,本实验采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,用免疫组化染色法检测不同再灌注时间大脑皮质TNF-α的蛋白表达水平,以及用逆转录-多聚酶链反应法(RT-PCR)检测脑皮质内TNF-αmRNA的表达情况。结果显示:脑缺血1h,再灌注12h后大脑皮质内TNF-α及其mR-NA的表达开始升高,24h后达到高峰,随后逐渐下降。两组大脑皮质TNF-α及其mRNA的表达水平差异有统计学意义(P<0.01),模型组的TNF-α及其mRNA的表达水平明显高于假手术组。本研究结果表明,TNF-α在大鼠脑缺血再灌注损伤的调节过程中发挥重要作用。     

骨髓间充质干细胞注射抑制败血症大鼠的炎症反应

目的探索骨髓间充质干细胞(BMSC)对败血症大鼠的治疗作用。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、治疗组。利用盲肠结扎造瘘术(CLP)制备大鼠败血症模型,提取BMSC培养至第三代,治疗组大鼠尾静脉注射BMSC,模型组大鼠注射等剂量的PBS。观察各组大鼠术后72 h后存活率,取大鼠肺脏组织HE染色观察病变情况,心脏采血应用实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、叉头盒蛋白3(Foxp3)、CC趋化因子配体2(CCL2)的mRNA水平,ELISA检测IL-6、IL-17、TNF-α的蛋白水平。结果空白组大鼠与假手术组大鼠的存活率以及肺组织形态均未见明显异常、大鼠血培养未见细菌生长;IL-6、IL-17、TNF-α、CCL2、Foxp3 mRNA和蛋白水平无明显差别。模型组中大鼠存活率明显低于假手术组,组织病变明显,大鼠血培养可见大量肠杆菌生长。外周血单个核细胞IL-6、IL-17、TNF-α、CCL2 mRNA和IL-6、IL-17、TNF-α蛋白的表达水平较假手术组明显增高,而Foxp3的mRNA表达水平较假手术组明显降低。治疗组中大鼠存活率明显高于模型组,肺组织病变明显减轻,IL-6、IL-17、TNF-α和CCL2 mRNA和蛋白的表达水平较模型组明显降低,而Foxp3的mRNA表达水平较模型组组明显增高。结论 BMSC治疗可增加败血症大鼠存活率,降低炎性细胞因子水平。     

TLR3在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达及其意义

目的观察Toll样受体3(Toll like receptor-3,TLR3)在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达的变化,探讨其在心肌缺血再灌注损伤中可能的作用与意义。方法 72只实验SD大鼠随机分3组(n=24):假手术组、缺血再灌注组、预处理缺血再灌注组。假手术组为冠状动脉左前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)放置穿线但不结扎,缺血再灌注组压迫结扎LAD 30 min后再灌注2 h。预处理缺血再灌注组为压迫结扎LAD 5 min松开5 min,共3个循环,再停灌30 min,最后再灌注120 min。模型成功后进行心肌梗死面积(TTC)、RT-PCR、Western blots、ELISA、免疫组化学检测。结果假手术组TLR3 mRNA及蛋白呈微弱表达;缺血再灌注组中缺血区心肌细胞肿胀,周围大量中性粒细胞浸润,血清LDH(lactate dehyhrogenase)、CK(creatine kinase)活性及TNF-α水平升高(P0.01,vs假手术组),缺血区心肌细胞TLR3 mRNA及蛋白呈强烈高表达(P0.01,vs假手术组);与缺血再灌注组相比,预处理缺血再灌注组缺血区心肌细胞TLR3 mRNA及蛋白表达明显减低(P0.01,vs缺血再灌注组),血清LDH、CK活性及TNF-α水平也明显下降(P0.01,vs缺血再灌注组)。免疫组化结果显示,假手术组TLR3呈微弱表达于胞浆,而缺血区TLR3主要强烈表达分布于细胞核与细胞浆。同时免疫荧光结果提示,TNF-α与TLR3部分细胞有共表达。结论心肌缺血再灌注损伤模型中,TLR3的基因和蛋白表达水平明显升高,TLR3表达水平与心肌缺血再灌注损伤的进展有一定相关性。     

TLR3在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达及其意义

目的观察Toll样受体3(Toll like receptor-3,TLR3)在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达的变化,探讨其在心肌缺血再灌注损伤中可能的作用与意义。方法 72只实验SD大鼠随机分3组(n=24):假手术组、缺血再灌注组、预处理缺血再灌注组。假手术组为冠状动脉左前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)放置穿线但不结扎,缺血再灌注组压迫结扎LAD 30 min后再灌注2 h。预处理缺血再灌注组为压迫结扎LAD 5 min松开5 min,共3个循环,再停灌30 min,最后再灌注120 min。模型成功后进行心肌梗死面积(TTC)、RT-PCR、Western blots、ELISA、免疫组化学检测。结果假手术组TLR3 mRNA及蛋白呈微弱表达;缺血再灌注组中缺血区心肌细胞肿胀,周围大量中性粒细胞浸润,血清LDH(lactate dehyhrogenase)、CK(creatine kinase)活性及TNF-α水平升高(P0.01,vs假手术组),缺血区心肌细胞TLR3 mRNA及蛋白呈强烈高表达(P0.01,vs假手术组);与缺血再灌注组相比,预处理缺血再灌注组缺血区心肌细胞TLR3 mRNA及蛋白表达明显减低(P0.01,vs缺血再灌注组),血清LDH、CK活性及TNF-α水平也明显下降(P0.01,vs缺血再灌注组)。免疫组化结果显示,假手术组TLR3呈微弱表达于胞浆,而缺血区TLR3主要强烈表达分布于细胞核与细胞浆。同时免疫荧光结果提示,TNF-α与TLR3部分细胞有共表达。结论心肌缺血再灌注损伤模型中,TLR3的基因和蛋白表达水平明显升高,TLR3表达水平与心肌缺血再灌注损伤的进展有一定相关性。     

Ghrelin抑制大鼠心肌梗死后心室重构

目的:探讨Ghrelin对大鼠心肌梗死后心室重构的影响及其机制。方法:结扎SD大鼠前降支造成急性心肌梗死(AMI)模型,并设假手术组。结扎24h后,存活大鼠给予Ghrelin(100μg/kg)或生理盐水皮下注射,每天两次。4周后,超声心动图和血流动力学方法检测心功能,实时定量PCR检测梗死心肌白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达,Western-blot检测核转录因子-κB(NF-κB)活性。结果:与假手术组相比,AMI模型组左室收缩内径(LVESD)、左室舒张内径(LVEDD)、左室舒张末压力(LVEDP)都明显增加(P<0.01);而左室收缩压(LVSP)、压力变化值最大值(dp/dtmax)、左室短轴缩短率(FS)都显著降低(P<0.01)。与AMI模型组相比,Ghrelin治疗组LVEDP、LVEDD以及LVESD明显变小(P<0.01),而dp/dtmax及FS显著增加(P<0.01)。梗死后心肌IL-1β、TNF-αmRNA表达增强,Ghrelin治疗后IL-1β、TNF-αmRNA表达明显降低(P<0.01)。AMI模型组心肌核蛋白P65表达明显增加,而胞浆蛋白I-κBα含量显著减少(P<0.01),Ghrelin治疗明显降低梗死心肌核蛋白P65表达(P<0.01),同时增加胞浆蛋白I-κBα含量(P<0.01)。结论:Ghrelin能够抑制心肌梗死后心室重构,改善心功能,可能与其抑制炎症介质表达及NF-κB活性有关。