无琼脂糖培养细胞的石蜡包埋方法

鉴于培养细胞的细胞爬片或涂片的HE染色、特殊染色和免疫组化染色存在缺陷,吴惠茜和高洁等[1,2]摸索了细胞的石蜡切片方法,证明细胞石蜡切片的HE和免疫组化染色均比细胞爬片和涂片的结果优良。近3年来,广东医学院病理学教研室在对鼻咽癌细胞系CNE2Z以及其他细胞株进行研究时,运     

干细胞球石蜡蜡块的制备流程及注意事项

正科学研究中许多实验需要进行群体细胞的结构观察。目前,使用细胞爬片、细胞涂片的HE染色和细胞免疫组化染色技术应用甚广,但已有学者证明细胞石蜡切片的HE和免疫组化染色均比细胞爬片和涂片的结果优良[1,2],且细胞爬片和涂片均只能观察到细胞的表面结构,未能观察细胞形成的内部结构。此外细胞球呈球状分布,彼此间连接疏松,常规细胞石蜡包埋法导致细胞球呈分散状态,不易聚集。因此,本科室在细胞球结构不被破坏的基础上,兼顾染色结果     

细胞阵列的制备及其应用

细胞培养技术是分子生物学研究的重要手段,对细胞爬片进行蛋白和核酸水平的原位检测则是细胞学研究的常用方法。但是,目前对细胞爬片样本进行的免疫细胞化学、原位杂交等原位染色过程中,一般均为单张手控式染色,由于细胞爬片面积小、难固定、易破碎、染色效率低等成为制约细胞爬片快速检测的重要因素。随着生物芯片技术的快速发展和生物芯片家族的壮大,特别是抗体芯片（阵列）、组织芯片（阵列）等以高通量、高效率、     

细胞凋亡的几种形态学观察方法

细胞凋亡是病理学上新的研究热点。细胞在形态学上的特征性改变是证实其发生凋亡的有力证据。本研究在阿霉素诱导的ＨＣＣ－９２０４细胞系细胞凋亡的模型中，利用病理学中常用的几种技术，观察了细胞凋亡的形态学改变，其中包括细胞爬片的ＨＥ染色，活细胞的ＡＯ染色，以及透射电镜观察。这些方法可从不同角度反映细胞凋亡的形态学变化。结果提示，ＨＥ染色及ＡＯ染色快速、简便，可作为判定有无细胞凋亡的最初手段；电镜结果是判定     

介绍一种将科研培养细胞制作成细胞块的方法:琼脂糖模具法

<正>细胞块技术的基本操作过程是将液体样品离心形成沉淀物,使用或不使用细胞块支架,再经10%中性福尔马林固定、常规脱水、包埋、切片并染色进行诊断。细胞块技术为细胞学标本进一步检查提供良好的媒介。细胞是科研工作的重要工具,然而细胞块制作方法少有报道。传统实验中常将贴壁细胞进行爬片以行HE染色、免疫细胞化学、FISH等检测,爬片细胞具有浪费试剂、增加耗材、背景不干净等缺点,因此将临床病理的细胞块技术引入科研工作中,我们通过总结实际工     

大批量培养细胞爬片染色的简易装置

<正> 细胞培养技术越来越被当今许多学科所重视与应用[1]。显示培养细胞形态结构的染色方法因此也受到人们的关注。长期以来研究者们使用的方法取得了较好的结果[2,3]。但是应用到大批量的实验上时,就显得比较麻烦,且有染色结果有反应不一致的缺憾。我们经过多次摸索,利用普通染色架制作出一种简易装置,可一次染几十瓶培养细胞的爬片,取得良好效果,现介绍如下。     

培养细胞的石蜡包埋切片用于免疫组织化学染色的优越性

以往组化染色或免疫组化染色都是在培养细胞的爬片上进行的，效果有时不理想。我们经过反复摸索，发现把培养细胞制成蜡块再制片，既保存了细胞形态的完好，又便于进行免疫组化和组织化学染色。对于培养细胞的病理研究工作具有重要的价值。一、方法步骤：（１）常规收获贴壁培养细胞或悬浮培养细胞（约５×１０６）；（２）ＤＨａｎｋｓ液清洗２遍；（３）最后一次吸出上清液后，沿离心管管壁慢慢地加入１滴蛋清甘油（蛋清∶甘油＝１∶１），用弯头滴管轻轻地把细胞与蛋清甘油混匀，并加入适量９５％乙醇固定，低速离心（约１００ｇ）５分…     

细胞培养抗原片的简易快速制备与应用

用细胞涂片作抗原进行免疫细胞化学染色,其阳性清晰度,对比度都不如组织切片。原因是涂片细胞干燥时,易固缩而造成细胞着色后结构不清,以及涂片中所含死细胞、细胞碎片、蛋白质成份可引起高度背景着色,给单细胞应用于免疫细胞化学技术及单克隆抗体筛选造成一定困难。采用细胞盖片培养做免疫细胞化学染色效果很好,不仅可以通过洗涤去除死细胞、碎片、蛋白质而消除背景着色,而且还能使细胞舒展,着色后的细胞轮廓、结构较清晰、但盖片培养时,因盖     

应用流式细胞术测定CD24表达鉴定人髓核细胞

背景：CD24是成熟髓核细胞表面表达的特异性分子,测定CD24的表达是否可以作为鉴定髓核细胞的一种方法？ 目的：验证流式细胞仪测定髓核细胞CD24表达鉴定髓核细胞的方法。 方法：采用酶消化法分离培养人髓核细胞,取生长旺盛的第2代人髓核细胞爬片进行Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,RT-PCR测定Ⅱ型胶原及SOX9的表达,流式细胞仪检测其CD24阳性表达率,分析来自同一批细胞的免疫组织化学染色、RT-PCR结果与CD24阳性率的相关性。 结果与结论：体外分离培养的7例第2代髓核细胞爬片Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性,RT-PCR结果阳性,流式细胞仪测定CD24其阳性率均为50%以上,髓核细胞分泌胞外基质Ⅱ型胶原与SOX9的表达与CD24阳性率结果有相关性。提示采用流式细胞仪测定CD24表达可以快速、简便地鉴定髓核细胞。     

大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及向脂肪细胞分化的实验研究

目的探讨体外大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离培养及向脂肪细胞的分化潜能。方法从大鼠骨髓中获得间充质干细胞,体外培养传代。通过地塞米松、胰岛素等诱导MSCs向脂肪细胞分化,采用苏丹Ⅳ染色鉴定。结果诱导培养4d后,细胞胞浆内开始出现细小脂滴,12 d后在可观察到大量细胞由长梭形变为圆形或多边形,胞浆内形成高折光性的脂滴,苏丹Ⅳ脂肪染色后显示克隆中心的细胞胞浆内大量的颗粒状红色脂滴形成。细胞爬片显示约有60%骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞。结论大鼠骨髓间充质干细胞能进行体外分离培养并能诱导分化为脂肪细胞。     

猪兔鼠肾生物支架制备及体外细胞共培养探究

目的　 灌注制备家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾去细胞生物支架,探究三种肾支架对共培养种子细胞HEK的影响。 方法　取健康成年家猪10头、新西兰白兔28只、SD大鼠28只,分别将取出的肾脏随机均等分为正常组和支架组,支架组由肾动脉依次灌入肝素、1% Triton X-100和1% SDS溶液完成去细胞化。两组肾分别作组织形态学鉴定并检测机械力学性质。去细胞支架作组织爬片与人胚肾上皮细胞共培养,观察细胞在支架爬片上的生长状况,免疫荧光检测人胚肾上皮细胞PCNA及DAPI表达量作灰度分析。 结果　家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾脏经灌注去细胞后HE核染色阴性, Masson染色显示胶原蛋白阳性,Collagen I和Collagen IV荧光染色阳性,电镜扫描可见去细胞支架内蜂窝状孔洞结构,并可见典型的肾小球龛样结构;支架组弹性模量与正常组肾弹性模量差异无显著性,支架组PCNA/DAPI值均高于空白对照组,而三种支架组之间PCNA/DAPI值无显著性差异。 结论　本研究灌注去细胞方法可去除家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾内的细胞及细胞核,保留细胞外基质,维持细胞外基质的三维空间结构和机械力学强度,是一种可靠有效的制备三者肾去细胞生物支架方法,灌注制备的去细胞支架均可提高异种共培养人胚肾上皮细胞HEK的增殖活性,且这种提高作用在家猪、新西兰白兔和SD大鼠之间并无物种差异性。     

原代培养大鼠皮质神经元中β-Tubulin的表达

目的观察原代培养大鼠皮质神经元生长过程中-βTubulin的表达变化并进行图像分析。方法取孕13~14天胚鼠大脑皮质接种于覆有多聚赖氨酸的爬片上,培养液为添加了B27(v/v%:2%)和Glutamax(v/v%:1%)的Neurobasl Medium(Gibco)。细胞爬片进行免疫细胞化学染色,显微镜观察,LeicaD MR Q550图像分析系统进行图像分析。结果-βTubulin表达和分布随着神经元发育成熟而变化,生长初期主要分布于核周附近,随神经元的成熟散在分布于胞质及突起内,构成细胞骨架,维持细胞形态。结论在神经元生长过程中伴随有-βTubulin的表达变化,随神经元的成熟而构成细胞骨架,维持细胞形态。     

术中印片快速病理检查常用染色方法的应用比较

手术中快速病理诊断对临床手术方案的制定起重要的指导作用.细胞印片技术具有简单、快速的优点,可辅助甚至部分代替冷冻切片诊断,起到提高准确率和加快诊断速度的作用,目前已经被许多医院视为常规的术中诊断技术与冰冻切片同时进行.细胞印片染色最常用的染色方法包括HE染色、瑞-姬姆萨染色、甲苯胺蓝染色法等.染色方法的不同直接影响细胞印片的质量,并影响其在诊断中的应用价值.本文结合实际工作经验,对以上3种术中印片染色方法进行比较,并评价各种染色方法的优缺点.     

绵羊多核绒毛膜滋养层细胞的分离培养与鉴定

目的探索绵羊多核绒毛膜滋养层细胞的分离和培养方法,并进行鉴定。方法采用胰蛋白酶和胶原酶两步消化法分离培养滋养层细胞,倒置相差显微镜观察滋养层细胞的形态学特点;应用常规HE染色和免疫组织化学染色,透射电镜技术进行绵羊多核绒毛膜滋养层细胞鉴定。结果倒置相差显微镜下,滋养层细胞为双核及多核细胞,细胞形态为上皮样,呈片状铺展生长;绵羊胎盘子叶与培养的滋养层细胞爬片的细胞角蛋白免疫组织化学染色均显示多核滋养层细胞胞质为棕色阳性信号,透射电镜可见滋养层细胞表面微绒毛发达,胞质内有较多膜包小泡及丰富的微丝和脂滴。结论建立了胰蛋白酶和胶原酶两步消化法分离培养绵羊多核绒毛膜滋养层细胞的方法,获得了较高纯度的具有生物学活性的多核绵羊绒毛膜滋养层细胞。     

固定剂对胸腹水细胞涂片染色的影响

固定剂对胸腹水细胞涂片染色的影响黄莺王康敏陈晓黎胸腹水涂片中细胞种类多，常出现背景不清晰的现象，特别是用自动涂片离心机时，细胞密集成堆，如因不当则易造成染色不佳，直接影响诊断。为此，我们采用不同的固定剂，对５０例胸腹水涂片固定进行对比染色，结果发现，...     

人胚食管上皮凝集素结合部位的观察

选用四种凝集素对人胚食管采用ＡＢＣ法进行石蜡切片的标记。结果发现四种凝集素对不同胚龄的食管呈不同反应。ＬＣＡ在８月开始于基底层细胞出现微弱阳性反应。在３月，ＷＧＡ已能与基底层细胞膜明显结合，ＵＥＡ和ＢＳＡ可与非纤毛区细胞结合，而不与纤毛区细胞结合。出生时，四种凝集素的染色均未达到成人食管的染色强度。本研究结果提示，上述凝集素在人胚食管上皮的结合部位的分布情况及染色强度，可作为该上皮细胞的发育、分化     

M细胞及其周围滤泡相关上皮细胞生物学特性的研究

目的:探索肠滤泡相关上皮细胞和M细胞的生物学特性.方法:取大鼠小肠PP结滤泡相关上皮细胞和M细胞进行培养,培养细胞分为对照组、内毒素组和灭活大肠杆菌组,分别予内毒素和灭活大肠杆菌干预,培养细胞爬片以抗细胞角蛋白-8抗体免疫荧光染色观察,培养液用ELISA检测TNF-α、IL-18、IL-27水平.结果:内毒素组TNF-α和IL-27水平升高,大肠杆菌组IL-18和IL-27升高,培养细胞部分呈抗细胞角蛋白-8抗体免疫荧光阳性.结论:肠滤泡相关上皮细胞和M细胞不仅在呈递抗原方面发挥作用,也可通过其分泌细胞因子,对机体局部和全身免疫功能产生影响.     

纤维蛋白胶与兔角膜3种细胞构建组织工程细胞片研究

目的： 观察兔角膜3种细胞能否在体外构建的纤维蛋白胶体上良好生长，探讨纤维蛋白胶作为组织工程细胞片支架材料的可行性。方法: 将培养扩增的兔角膜3种细胞分别接种于纤维蛋白胶表面,采用倒置显微镜,HE染色和扫描电子显微镜,观察兔角膜3种细胞在纤维蛋白胶表面生长情况。结果: 制备的薄层纤维蛋白胶支架光滑、透明，随培养细胞的生长部分降解，可获得仅带少量纤维蛋白胶的细胞片。角膜3种细胞在纤维蛋白胶表面生长良好，可保持生理状态的细胞形态。角膜上皮细胞可形成单层和复层，细胞间连接紧密。角膜内皮细胞呈圆形或多角形，细胞大小一致，排列紧密。角膜基质细胞拉长生长，呈三角形或树枝状，细胞间连接明显，可形成网状连接。结论: 体外构建的纤维蛋白胶与角膜3种细胞有组织相容性,纤维蛋白胶有望作为角膜3种细胞的生长载体构建可供移植的组织工程细胞片。     

流体剪应力对大鼠破骨细胞骨吸收活性的影响

探讨流体剪应力对大鼠破骨细胞骨吸收活性的影响。我们采用低温离心法获取6月龄健康雌性SD大鼠椎骨骨髓细胞,以1.6×106细胞密度种植于血盖片上,采用1,25-(OH)2维生素D3体外诱导获取破骨细胞。于破骨细胞诱导的第7d取出细胞爬片,置于流体剪应力装置中,分别加载5.97、11.36、16.08、20.54dyne/cm2大小的流体剪应力,持续30min,以未加载流体剪应力的破骨细胞为对照组。实验结束时,以2.5%戊二醛固定细胞爬片,置于0.25mol/L氢氧化铵液超声处理10min,清除细胞爬片上的破骨细胞,经1%硪酸固定,梯度酒精脱水,醋酸异戊酯置换酒精,CO2临界点干燥,喷金后扫描电镜观察骨吸收陷窝并计数,图像分析法测定骨吸收陷窝的面积;同时分别收集每次灌流液10ml,冻干,用1ml复溶后,紫外分光光度仪检测抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)活性的变化。结果显示:在本实验中所选用的流体剪应力可增强破骨细胞TRAP活性,而骨吸收陷窝的数量和面积也增加,尤其是剪应力在16.08dyne/cm2时,破骨细胞TRAP活性增强以及骨吸收陷窝的数量和面积增高最为明显。结果表明,一定范围内的流体剪应力可以增强破骨细胞的骨吸收活性。     

纤维蛋白胶为载体构建人羊膜上皮细胞植片的实验研究

目的： 探讨利用纤维蛋白胶作为支架构建组织工程人羊膜上皮细胞(HAECs)植片重建眼表的可行性。方法：取足月剖宫产胎盘羊膜,经胶原酶和胰蛋白酶消化后,获得HAECs。在体外构建的纤维蛋白胶片上培养HAECs，细胞融合成片后，利用气液界面复层化，采用倒置显微镜、组织切片、HE 染色、细胞角蛋白免疫组织化学染色和扫描电子显微镜观察HAECs的生长情况。结果：HAECs在纤维蛋白胶表面生长良好，细胞呈圆形或多角形,长满后呈上皮细胞特有的铺路石样外观，扫描电镜观察细胞表面有丰富的微绒毛，细胞广谱角蛋白单克隆抗体染色阳性。细胞有复层生长趋势，植片较为透明。结论：以纤维蛋白胶为载体构建组织工程人 HAECs 植片，具有眼表重建的潜在运用价值。