具有保护性及诊断价值的弓形虫单克隆抗体的研制

目的 :寻找具有保护性的弓形虫功能性表位 ,为疫苗制备和免疫诊断提供科学依据。方法 :通过杂交瘤技术建立了抗弓形虫单克隆抗体的细胞株 ,观察了体内、外单克隆抗体的保护性效果 ;用夹心ELISA法检测了感染兔血清中的CAg ,并观察了其与日本血吸虫抗原和弓形虫ME4 9株抗原的交叉反应。结果 :建立了 7个分泌弓形虫McAb的细胞株 ,Western blot显示 7个McAb可识别 4种不同分子量的抗原 ,体外保护性实验证明这些单抗均可明显抑制弓形虫对细胞的侵袭及在细胞内的繁殖。在感染后第 3d即可检测到CAg,未发现其与日本血吸虫抗原间的交叉反应 ,但是与弓形虫ME4 9株出现了交叉反应带。结论 :7个McAb对弓形虫感染具有一定的保护力 ,有潜在的诊断价值     

具有保护性及诊断价值的弓形虫单克隆抗体的研制

目的：寻找具有保护性的弓形虫功能性表位。为疫苗制备和免疫诊断提供科学依据。方法：通过杂交瘤技术建立了抗弓形虫单克隆抗体的细胞株，观察了体内，外单克隆抗体的保护性效果；用夹心ELISA法检测了感染兔血清中的CAg，并观察了其与日本血吸虫抗原和弓形虫ME49株抗原的交叉反应。结果：建立了7个分泌弓形虫McAb的细胞株，Western-blot显示7个McAb可识别4种不同分子量的抗原，体外保护性实验证明这些单抗均可明显抑制弓形虫对细胞的侵袭及在细胞内的繁殖，在感染后第3d即可检测到CAg，未发现其与日本血吸虫抗原间的交叉反应，但是与弓形虫ME49株出现了交叉反应带。结论：7个McAb对弓形虫感染具有一定的保护力，有潜在的诊断价值。     

日本血吸虫成虫分泌抗原的鉴定

目的制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原,对其免疫原性以及免疫反应性进行初步鉴定。方法日本血吸虫尾蚴感染家兔,42 d后剖杀获取成虫,将虫体置无血清DMEM培养基中,5%CO2孵箱37℃培养4 h,得到成虫分泌代谢抗原;用该抗原免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体反应;用该抗原包板,ELISA法检测血吸虫感染人血清抗体效价;采用十二烷基硫酸钠聚丙酰烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其组分进行分析,然后用Western blot分析其对抗成虫分泌代谢抗原单抗发生反应的蛋白条带。结果成功制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原;免疫小鼠可产生较高滴度(1∶16 000)抗体反应;急性血吸虫病患者、慢性血吸虫病患者、晚期血吸虫病患者和钩虫病患者血清抗该抗原的抗体效价分别为1∶800、1∶400、1∶800和1∶100,华支睾吸虫患者和正常人血清均为阴性;SDS-PAGE显示其具有4条蛋白条带,分子量分别是13、40、60和180 ku左右;Westernblot结果表明该抗原能够被抗成虫分泌代谢抗原单抗在5ku左右处识别。结论制备的日本血吸虫成虫分泌代谢抗原具有较强的免疫原性和免疫反应性。     

广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原分析及其诊断价值的探讨

目的分析广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原,探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫成虫匀浆后沉渣经尿素溶解,与成虫水溶解性抗原同时进行SDS-PAGE和Western-blot,分析蛋白谱与抗原谱;用ELISA检测不同样本中相应抗体。结果SDS-PAGE结果显示尿素抗原蛋白条带少于水溶解性抗原;尿素抗原与感染大鼠血清、免疫兔血清和广州管圆线虫病患者血清在32000Mr处均出现强反应带,尿素抗原的反应带条数较水溶性抗原少。两种抗原包被ELISA检测广州管圆线虫病疑似病人血清和感染大鼠血清的阳性率相同;尿素抗原用于检测血吸虫感染小鼠血清的交叉阳性率明显低于水溶性抗原,检测正常大鼠血清、献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较水溶性抗原少。结论广州管圆线虫成虫尿素抗原含有32000Mr抗原;广州管圆线虫尿素抗原用于诊断时,与水溶性抗原有同样的敏感性,而特异性高于水溶解性抗原。     

Identification of excreted and metabolic antigens from adult worms of Schistosoma japonicum

目的 制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原,对其免疫原性以及免疫反应性进行初步鉴定.方法 日本血吸虫尾蚴感染家兔,42 d后剖杀获取成虫,将虫体置无血清DMEM培养基中,5% CO2孵箱37℃培养4 h,得到成虫分泌代谢抗原;用该抗原免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体反应;用该抗原包板,ELISA法检测血吸虫感染人血清抗体效价;采用十二烷基硫酸钠聚丙酰烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其组分进行分析,然后用Western blot分析其对抗成虫分泌代谢抗原单抗发生反应的蛋白条带.结果 成功制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原;免疫小鼠可产生较高滴度(1:16 000)抗体反应;急性血吸虫病患者、慢性血吸虫病患者、晚期血吸虫病患者和钩虫病患者血清抗该抗原的抗体效价分别为1:800、1:400、1:800和1:100,华支睾吸虫患者和正常人血清均为阴性;SDS-PAGE显示其具有4条蛋白条带,分子量分别是13、40、60和180 ku左右;Western blot结果 表明该抗原能够被抗成虫分泌代谢抗原单抗在5 ku左右处识别.结论 制备的日本血吸虫成虫分泌代谢抗原具有较强的免疫原性和免疫反应性.     

单克隆抗体检测循环血吸虫抗原的实验研究

将血吸虫成虫多糖抗原的单克隆抗体应用于ELISA直接法检测血清中的循环抗原.重感染兔血清35份、中感染兔血清7份及低感染兔血清10份,阳性率分别为100%,57.1%及20%,健康兔血清25份,弓形虫感染兔血清10份,均未见阳性反应.重感染兔于感染后5周OD均值明显上升,是感染前的2.95倍,以后逐周上升.中感染兔5周后,OD均值开始上升,5周和6周时的OD均值是感染前的1.27倍和3.49倍.低感染兔OD均值一直维持较低水平,至9周时OD均值才是感染前的2.56倍.结果表明,血吸虫病兔血清中的循环抗原出现时间或阳性率均与血吸虫尾蚴的感染度密切相关.     

抗日本血吸虫循环抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

为检测日本血吸虫宿主循环抗原提供有价值的McAb,用小鼠骨髓瘤细胞SP2/O株与日本血吸虫循环抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞进行融合,融合率90.20%。经用ELISA和IFA检测,总阳性率34.13%。经多次筛选和克隆化后,获得2株分泌McAb的细胞株:G-A12和H-E9。它们均属IgG2a亚类。Western blot结果表明G-A 12所针对的靶抗原为sjCAg31KD,H-E9为SjAW 31 KD。IFA检测发现H-E9主要定位于成虫表膜;G-A12主要定位于成虫肠道。这2株杂交瘤细胞在体外培养下稳定地分泌特异性抗体迄今已达6个月。     

用三氯醋酸和酚提取血吸虫多糖的比较

血吸虫循环抗原已证明属于多糖。多糖抗原的提取方法颇多。已用于提取血吸虫循环抗原的方法有三氯醋酸法,及酚法。我们初步比较了二法提取血清多糖抗原的效果,用酚法提取了冻干成虫及重感染兔各种脏器的多糖,并作了抗原活性测定。现将方法及结果报告如后。     

SjAWMMcAb对吡喹酮杀虫效果的影响

目的 :制备日本血吸虫成虫表膜单克隆抗体 (SjAWMMcAb) ,探讨其与吡喹酮在宿主体内的联合杀虫作用。方法 :用SP2 / 0骨髓瘤细胞与日本血吸虫成虫表膜抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合 ,经筛选和克隆化后建立分泌日本血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,通过单层细胞培养法和小鼠体内接种法收集单克隆抗体 ;采用Westernblotting和免疫荧光测定 (IFA)对其进行鉴定 ;小鼠实验观察单抗与吡喹酮的联合杀虫作用。结果 :建立了 3个分泌SjAWMMcAb的细胞株 ,Westernblotting显示 3个McAb可识别 5种不同分子量的蛋白 ,IFA表明 3个McAb均能与血吸虫成虫表膜发生特异性反应 ,3B6和 1C2两株McAbs与吡喹酮联用杀虫率分别可提高 4 1.78%和 2 4 .12 %。结论 :某些SjAWMMcAb与吡喹酮可发挥联合杀虫作用     

单克隆抗体夹心ELISA定量检测日本血吸虫循环抗原

目的反映日本血吸虫病活动性感染程度,探讨建立定量测定循环抗原的方法。方法筛选和制备单克隆抗体,将其进行优化组合,建立双抗体夹心ELISA,计算标准曲线,测试检测能力,检测样本。结果获6个抗日本血吸虫单克隆抗体,经优化组合试验,选择其中3个抗日本血吸虫虫卵TCA可溶性抗原和成虫TCA可溶性抗原进行搭配,用于检测日本血吸虫病患者血清中循环抗原效果较理想。检测慢性血吸虫病118例,阳性61例,阳性率51．7％;急性患者30例,全部阳性;正常人187例,5例阳性,特异性97．3％。单盲法检测一批血清,结果也较满意。法论定量检测日本血吸虫病患者血清中循环抗原,对提示活动性感染的程度和疫苗保护作用的评估具有一定的应用价值。     

血吸虫和姜片虫交叉反应抗原初步分析

本文报告了应用比较对流免疫电泳技术对日本血吸虫和姜片虫的交叉反应抗原进行初步分析。日本血吸虫成虫,虫卵和姜片虫成虫生理盐水粗提物,在对兔抗血吸虫成虫血清或兔抗姜片虫成虫血清所作的比较对流免疫电泳分析的结果证明血吸虫和姜片虫有交叉反应抗原存在;同源抗原及抗体的反应较异源抗原及抗体反应为强,本文最后讨论了在血吸虫病血清学诊断的研究中,应用纯化抗原的必要性和重要性。     

单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的制备抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,用于广州管圆线虫循环抗原（CAg）的检测。方法广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB／c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／0）融合,用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,双抗体（单抗3F1和4H2）夹心ELISA法检测实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠和广州管圆线虫病人血清中的CAg。结果获得了3株稳定分泌抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单抗的杂交瘤细胞株,经鉴定2株为IgG1（3F1、4H2）,1株为IgM（2A2）,杂交瘤细胞培养上清效价分别为1：25600、1：25600和1：12800,诱生腹水ELISA效价分别为1：80000、1：80000和1：40000。3株单抗均识别广州管圆线虫成虫相对分子量约为15000的蛋白。实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠血清CAg检出率分别为84．2％（48／57）和87．2％（41／47）,广州管圆线虫病人血清CAg检出率为86,4％（19／22）,与日本血吸虫、囊虫、肺吸虫、旋毛虫病人血清无交叉反应。实验感染小鼠血清CAg第2周即呈阳性反应,第4周A。。值达到高峰。结论建立了敏感性高、特异性强的3P1、4H2双抗体夹心ELISA检测广州管圆线虫循环抗原法,可用于广州管圆线虫病的临床诊断、疗效考核和流行病学调查。     

日本血吸虫成虫抗原检测先天性感染仔兔血清抗体动态的研究

目的 观察仔兔血清抗体动态变化，探讨家兔日本血吸虫病先天性传播的免疫学规律。方法 5只怀孕晚期母兔分别人工感染500条日本血吸虫尾蚴／只，仔兔出生后43天起每2周采血收集血清，至仔兔发育成熟(约出生后113天)。分别运用日本血吸虫成虫抗原(AWA)和可溶性虫卵抗原(SEA)，ELISA法检测血清中特异性IgG、IgM抗体，观察动态变化。结果 仔兔先天性感染率为60％(12／20)，其中5只双性感染，7只单性感染。20只仔兔，抗AWA-IgG、抗AWA-IgM抗体检测始终呈阴性；抗SEA-IgG检测，5只双性感染仔兔有4只于出生后57天起陆续呈阳性，其余16只始终为阴性；20只仔兔抗SEA-IgM也始终呈阴性。结论 先天性感染日本血吸虫病的仔兔呈低免疫应答状态，可能存在免疫耐受。     

日本血吸虫循环免疫复合物中抗原的鉴定

用低浓度ＰＥＧ（ＭＷ６０００）提取的日本血吸虫感染兔血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）直接免疫家兔，制备ＣＩＣ兔血清。采用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析鉴定日本血吸虫ＣＩＣ中抗原成份。结果表明，ＣＩＣ中成虫及其排泄分泌物源性抗原成份有１７种，虫卵源性抗原成份有５种。且ＩＦＡＴ方法分析ＣＩＣ中抗原成份定位于成虫表膜及肠腔上皮。     

日本血吸虫成虫31/32KD 诊断蛋白—与血吸虫单克隆抗体和病人血清的免疫印斑反应

有关血吸虫抗原的分离和纯化已有不少报道和综述。本研究应用免疫印斑技术观察日本血吸虫成虫蛋白与感染日本血吸虫病人和病鼠血清的反应,证实日本血吸虫成虫31/32KD诊断蛋白的存在,并进一步研究了其特性和诊断价值,以期为日本血吸虫病的诊断提供特异的抗原。采用免疫印斑试验进行比较观察,发现日本血吸虫和曼氏血吸虫具有相同的31/32诊断蛋白;应用成虫冰冻切片进行间接免疫荧光抗体试验,检查31/32KD诊断蛋白的形态学定位,证实两者均来源于成虫肠管;与抗血吸虫单克隆抗     

肺吸虫抗原与日本血吸虫病兔血清的交叉反应

肺吸虫成虫粗抗原与日本血吸虫病兔血清可出现交叉反应,煮沸后的成虫粗抗原与血吸虫病兔血清也存在交叉反应。成虫粗抗原经Sephadex G-200过柱后得到两个蛋白峰,环状沉淀试验、对流免疫电泳和间接血凝试验证实,第1个蛋白峰与血吸虫病兔血清存在交叉反应,第2个蛋白峰无交叉反应。成虫粗抗原、煮沸的成虫粗抗原和过柱后得到的两个蛋白峰,分别经圆盘电泳后作过碘酸雪夫(PAS)染色,证实第2个蛋白峰不含糖蛋白。由此推断,肺吸虫成虫粗抗原与抗血吸虫血清发生交叉反应的成分是一类热稳定的糖蛋白。     

日本血吸虫循环免疫复合物中抗原的鉴定

用低浓度ＰＥＧ（ＭＷ６０００）提取的日本血吸虫感染兔血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）直接免疫家兔，制备抗ＣＩＣ兔血清。采用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析鉴定日本血吸虫ＣＩＣ中抗原成份。结果表明，ＣＩＣ中成虫及其排泄分泌物源性抗原成份有１７种，虫卵源性抗原成份有５种。用ＩＦＡＴ方法分析ＣＩＣ中抗原成份定位于成虫表膜及肠腔上皮。     

基于IgY的ELISA用于日本血吸虫病循环抗原的检测

目的 以鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)替代哺乳动物来源的IgG抗体,建立双抗体夹心ELISA用于日本血吸虫病的诊断.方法 制备并纯化抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的卵黄抗体IgY和抗SEA的兔多克隆IgG抗体;以抗SEA的IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体的双抗体夹心ELISA诊断方法,共检测血清443份,其中急性血吸虫病患者血清68例,慢性血吸虫病患者180例,正常人100例,肺吸虫感染者20例,华支睾吸虫感染者48例和钩虫感染者血清27例.探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值.结果 成功制备并鉴定了特异性IgY和lgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为79.4%和64.4%,最低灵敏度为9.3μg/L;正常人血清的阴性率为92%;与肺吸虫、华支睾吸虫、钩虫感染者血清的交叉反应分别为20%、20.8%、14.8%.结论 建立了基于lgY的双抗夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫SEA的检测具有一定特异性和较高的敏感性,可试用于日本血吸虫病的辅助诊断.     

抗肝吸虫成虫单抗的制备及其在感染豚鼠血、尿循环抗原检测中的初步应用

目的：制备抗肝吸虫成虫单抗，用于检测肝吸虫宿主血、尿中肝吸虫循环抗原（CAg)。方法：采用杂交瘤技术，制备抗肝吸虫成虫单抗，经鉴定、筛选后，以特异性、敏感性均高的单抗做双抗体夹心ELISA，检测肝吸虫动物宿主－感染豚鼠血、尿中的肝吸虫CAg。结果：获得4株稳定分泌抗肝吸虫成虫单抗的杂交瘤细胞株D2G8、D2E11、E11H8和H3B4，其Ig类型鉴定结果均为IgG1,κ(kappa）型；其腹水单抗效价分别为1：64000、1：128000、1：32000及1：2000；其中D2G8、D2E11和E11H8的免疫组化显示均定位于肝吸虫成虫的皮层。其中，D2G8、D2E11和E11H8与血吸虫、肺吸虫、姜片虫、牛丝虫成虫抗原和棘球蚴囊液、囊虫抗原均无交叉反应，H3B4则仅与血吸虫成虫抗原有弱阳性交叉反应。以混合D2E11、E11H8株单抗作包被抗体，以D2G8株单抗作酶标抗体，建立ELISA夹心法进行检测。感染豚鼠血、尿中肝吸虫CAg检出率分别为95．4％和90．9％，CAg均检出量分别为0．337μg/ml和0.134μg/ml。血、尿CAg联合检测检出率则可达100％。结论：抗肝吸虫单抗D2E11、E11H8及酶标D2G8联合ELISA检测肝吸虫宿主血、尿中肝吸虫CAg具有高度的敏感性和特异性，对肝吸虫病活动性感染的诊断可能具有重要价值。     

SjAWMMcAb对吡喹酮杀虫效果的影响

目的：制备日本血吸虫成虫表膜单克隆抗体(SjAWMMcAb)，探讨其与吡喹酮在宿主体内的联合杀虫作用。方法：用SP2／0骨髓瘤细胞与日本血吸虫成虫表膜抗原免疫的BALB／c小鼠脾细胞融合，经筛选和克隆化后建立分泌日本血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株，通过单层细胞培养法和小鼠体内接种法收集单克隆抗体；采用Western b1otting和免疫荧光测定(IFA)对其进行鉴定；小鼠实验观察单抗与吡喹酮的联合杀虫作用。结果：建立了3个分泌SjAWMMcAb的细胞株，Western blotting显示3个McAb可识别5种不同分子量的蛋白，IFA表明3个McAb均能与血吸虫成虫表膜发生特异性反应，386和1C2两株McAbs与吡喹酮联用杀虫率分别可提高41．78％和24．12％。结论：某些SjAWMMcAb与吡喹酮可发挥联合杀虫作用。