高浓度葡萄糖对人肾间质成纤维细胞增殖及PAI-1基因表达的影响

目的：探讨高糖环境下成纤维细胞的增殖情况以及I型纤溶酶原激活物抑制物（PAI－1）在介导肾小管一间质损伤过程中的作用。方法：采用MTT方法分别检测正常糖浓度和高糖浓度下细胞的增殖，RT－PCR方法观察PAI－1mRNA的表达。同时将细胞培养于25mmol/L甘露醇中，观察高糖中渗透压所起的作用。结果：培养24h后，高糖以剂量依赖形式抑制细胞增殖，与正常对照组相比，高糖可以增加PAI－1的表达，甘露醇也抑制细胞增殖，同时对PAI－1的表达产生作用。结论：高糖可抑制成纤维细胞增殖，刺激PAI－1的表达。PAI－1在糖尿病肾病肾小管一间质纤维化过程中，可能具有主要的介导作用。     

高糖及己酮可可碱对肾间质成纤维细胞作用的研究

目的：探讨糖尿病肾病肾间质病变的机理以及己酮可可碱对肾间质成纤维细胞的作用。方法：为研究高糖对肾间质成纤维细胞的作用,应用MTT比色法检测细胞的增殖,应用流式细胞仪检测细胞周期变化,并应用ELISA法检测细胞上清液中的纤维连接蛋白。同时,本研究也观察了己酮可可碱（Pentoxifylline),一种非选择性的磷酸二酯酶抑制剂对肾间质成纤维细胞的作用。结果：高糖和己酮可可碱均可抑制细胞增殖,影响细胞周期,但高糖可促进成纤维细胞分泌细胞外基质纤维连接蛋白,而己酮可可碱可减少其分泌,且可抑制高糖对成纤维细胞的作用。结论：高糖可能通过促进肾间质成纤维细胞分泌细胞外基质在糖尿病肾病的间质病变中起作用。而己酮可可碱抑制细胞增殖及细胞外基质的分泌将有利于肾间质病变的防治。     

血竭提取物对人成纤维细胞增殖的影响

目的: 观察血竭提取物对体外培养成纤维细胞增殖的影响,探讨血竭促进创面愈合的机制. 方法: 将血竭经过氯仿、乙酸乙酯、乙醇回流提取得到的3种提取液,分别加入培养液并进行成纤维细胞的培养,MTT法检测不同血竭提取物在不同浓度以及不同时间点对体外培养成纤维细胞增殖的影响, 并绘制最适浓度条件下细胞生长曲线. 利用流式细胞仪分析最适浓度培养条件下成纤维细胞的细胞周期变化. 结果: 血竭乙酸乙酯提取物在0.5～2.0 g/L浓度范围内,促进成纤维细胞增殖,且呈剂量依赖性,在浓度为2.0 g/L时促进作用最为显著,此条件下处于S期的细胞较对照组增加18.3% (P＜0.01). 结论: 血竭乙酸乙酯提取物能显著促进成纤维细胞增殖,可能与血竭促进创面愈合的机制有关.     

地塞米松对肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的"探讨糖皮质激素在肾脏病治疗中可能的作用机理. 方法"采用MTT比色法和L-3H-脯氨酸掺入法,观察地塞米松对体外培养的肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的影响. 结果"一定浓度范围内的地塞米松抑制成纤维细胞的胶原合成,但未见其对细胞增殖有影响. 结论"糖皮质激素可作用于肾间质成纤维细胞,抑制胶原的合成,从而可延缓肾间质纤维化的进程.     

血管紧张素II2型受体抑制成纤维细胞增殖和纤维连接蛋白分泌

目的 研究血管紧张素Ⅱ２型受体（ＡＴ２）对１型受体（ＡＴ１）介导的细胞增殖和纤维连接蛋白分泌的影响。方法 分别从ＡＴ２受体基因缺失和正常基因型的１６天孕龄胎鼠培养皮肤成纤维细胞,观察两种成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ（１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ）刺激下细胞增殖和产生纤维连接蛋白的情况。结果 在血管紧张素Ⅱ刺激下,ＡＴ２受体缺失组的成纤维细胞（０．４６２±０．０２６）增殖能力明显增强于正常组成纤维细胞（０．３８     

血管紧张素Ⅱ对肾成纤维细胞增殖及分泌白细胞介素—6的影响

目的 研究血管紧张素（Ang)Ⅱ对人肾成纤维细胞（KFB）增殖及分泌白细胞介素（IL－6）的影响，为完善Ang Ⅱ致肾纤维化机理提供新实验依据。方法 分离培养人胎肾成纤维细胞，经鉴定后分别采用MTT法和放射免疫分析法（RIA）检测AngⅡ对KFB增殖及分泌IL－6的影响。结果 10^-6mol/L Ang Ⅱ作用于KFB后48及72小时，可明显促进细胞增殖；无AngⅡ刺激时，体外培养的正常人KFB可分泌微量的IL－6，且呈时间依赖性，10^-7-10^-6mol/L Ang Ⅱ作用于细胞6小时，即可迅速而显著地刺激细胞分泌IL－6，10^-6mol/L AngⅡ作用24－48小时，均可显著增加细胞IL－6的分泌。结论 不同浓度的Ang Ⅱ（10^-7-10^-6mol/L)作用于人KFB后，可促进细胞增殖，提高细胞对IL－6的分泌量。推测这可能是在各种肾脏疾病进展时，AngⅡ 参与肾小管间质病变、促进肾纤维化的机制之一。     

5味中药对体外培养原代人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的 利用原代培养的人外阴正常皮肤成纤维细胞,观察中药对人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响.方法 胰蛋白酶消化、分离及培养人外阴皮肤成纤维细胞;倒置显微镜下观察成纤维细胞生长状态;HE染色观察细胞爬片下的形态及着色;免疫组织化学染色观察成纤维细胞中间丝波形蛋白;测定细胞生长曲线;MTT法测定莪术、黄芪、丹参、川穹及当归5种中药作用后细胞增殖能力.结果 生长曲线测定结果显示:传6代内以及传6代内复苏人外阴皮肤成纤维细胞增殖能力均很强.MTT检测结果显示:5种药物在特定浓度范围内均能抑制人外阴皮肤成纤维细胞的增殖.分别作用于人外阴皮肤成纤维细胞72 h后,莪术5、10、100 mg/L浓度组,黄芪500、1 000 mg/L浓度组,丹参1 000 mg/L浓度组,川穹500、1 000 mg/L浓度组,当归100、500、1 000 mg/L浓度组均显示抑制增殖作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中莪术和川穹的抑制强度呈剂量依赖性.结论 成功建立了体外人外阴皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定方法;特定浓度范围内的莪术、黄芪、丹参、川穹和当归能够抑制人外阴皮肤成纤维细胞的体外增殖.     

HGF对高糖诱导肾间质成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对高糖诱导肾间质成纤维细胞损伤的修复作用。方法 将人肾脏间质成纤维细胞培养于不同浓度的葡萄糖中，其中25mmol／L葡萄糖组培养液中加入不同浓度的rhHGF，分别于不同时间段收集细胞，采用MTT法检测细胞增殖．流式细胞仪检测细胞周期结果高糖作用早期细胞增殖旺盛，随着高糖的持续刺激，细胞增殖发生停滞，同时细胞出现肥大外源性加入HGF后，对高糖造成的细胞损伤具有修复作用。结论 高糖作用下的肾间质成纤维细咆早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞，出现肥大HGF可以通过促进细胞增殖，抑制由于高糖诱导的细胞肥大。     

灯盏花对体外培养人牙龈成纤维细胞增殖的影响

目的 体外评价中草药灯盏花对正常人体牙龈成纤维细胞增殖和量效关系的影响.方法 分离、培养正常人体牙龈成纤维细胞.将浓度为45、90、135、180、225、270、315、360mg/L的灯盏花注射液分别作用于第5代正常人体牙龈成纤维细胞,采用四唑盐比色试验(MTT试验),检测细胞的增殖,并测出各组的光吸度值(OD值).结果 与对照组OD值相比,各灯盏花组随浓度升高其OD值依次下降,且有统计学差异(P<0.05).结论 中草药灯盏花对体外培养的人牙龈成纤维细胞有抑制作用,提示灯盏花有防止牙龈纤维化的作用.     

松花粉对人肺成纤维细胞增殖活性影响的实验研究

目的 :研究松花粉对人肺成纤维细胞增殖的影响 ,探讨中药松花粉可能的作用机理。方法 :松花粉作用于人肺成纤维细胞不同时间后观察细胞生长速度 ,应用台盼蓝对细胞进行染色 ,测定细胞死亡率。松花粉浓度分别为 10 0、2 0 0、40 0、80 0mg·L-1,以未经松花粉处理的细胞为对照。结果 :松花粉作用于人肺成纤维细胞能够明显促进细胞群体倍增水平 ,降低死亡细胞数目 ,且呈剂量依赖关系。结论 :松花粉可通过促进细胞生长而影响细胞增殖。     

人肾间质成纤维细胞的培养与鉴定

目的:探讨体外培养人肾间质成纤维细胞(humanrenalinterstitialfibroblasts,hRIFs)的方法。方法:取人肾乳头组织培养,通过细胞形态、免疫细胞化学染色和右旋缬氨酸选择性培养基培养等手段进行细胞鉴定。结果:培养细胞呈梭形、单个核,表达波形蛋白,在选择性培养基内逐渐死亡。结论:该培养方法能获高纯hRIFs。     

KGF在成纤维细胞促进表皮细胞增殖中的作用

目的  研究成纤维细胞产生的角质细胞生长因子（KGF）对表皮细胞增殖的影响。方法  自包皮分离培养成纤维细胞和表皮细胞,采用逆转录-聚合酶链反应法(RT PCR)、酶联免疫吸附法(ELISA)、MTT法和免疫荧光等方法分别检测成纤维细胞KGF基因的转录水平、培养液中KGF的浓度、成纤维细胞培养液对表皮细胞增殖的促进作用。结果  RT-PCR结果显示,成纤维细胞中KGF转录水平显著,ELISA法可检测到成纤维细胞培养液中存在较高水平的KGF,细胞计数结果和MTT结果表明,含有KGF的成纤维细胞培养液能够促进表皮细胞增殖,保持表皮细胞的活性,免疫荧光观察到KGF与表皮细胞表面的特异性受体结合。结论  成纤维细胞能够合成和分泌较高水平的KGF,成为其促进表皮细胞增殖的重要因素。     

碘化钾对人体皮肤成纤维细胞增殖活性的影响

目的探讨不同浓度的碘化钾（KI）对人体皮肤成纤维细胞(HSF)增殖活性的影响。方法将体外培养的ＨＳＦ分成7组含不同浓度的KI（0、1?000、3?000、5?000、7?000、9?000、11?000?μg/L）,每组含8个平行样本。完全培养基分别培养24?h后,观察HSF形态变化,用流式细胞术和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测HSF增殖活性。结果KI的浓度在1?000、3?000、5?000?μg/L时成纤维的增殖活性随着碘浓度的增加而升高（P＜0.05）;5?000、7?000?μg/L组细胞增殖活性最高,两组间增殖活性差异无统计学意义（P＞0.05）;7?000、9?000、11?000?μg/L?时HSF增殖活性随着KI浓度的增加而降低（P＜0.05）。结论KI浓度在5?000?μg/L以下会促进HSF增殖活性,高于7?000?μg/L时反而会抑制HSF增殖活性。     

抗增殖蛋白抑制转化生长因子-β1诱导的肾脏成纤维细胞增殖和表型改变

目的 研究抗增殖蛋白（prohibitin,PHB）在肾间质纤维化发生中的作用。方法（1）检测48例原发性肾小球肾炎患儿肾组织中PHB蛋白表达,并比较其与肾小管间质损伤程度的相关性。（2）观察PHB在大鼠肾脏成纤维细胞（NRK-49F）中亚细胞定位,以Western印迹和RT-PCR测定NRK-49F受到转化生长因子B1（TGF-β1）刺激后PHB表达的变化。（3）构建PHB表达质粒并转染,观察PHB对NRK-49F细胞周期以及表达α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白质和mRNA的影响。结果 （1）PHB蛋白主要表达于肾间质细胞和肾小管上皮细胞的胞质,随肾小管间质损伤程度加重而逐渐减弱（组间比较,均P〈0．01）,PHB表达量与肾小管间质损伤程度显著负相关（r=-0．802,P〈0．01）。（2）激光共焦显微镜下见PHB主要分布于NRK49F的细胞质,细胞核亦有较弱表达。TGF-β1刺激后PHB蛋白和mRNA表达均下调,呈现时间和剂量依赖关系（组间比较,P〈0．01）。（3）成功构建PHB真核表达质粒,转染48h细胞中PHB蛋白量升高约2．54倍（与未转染组比较,P〈0．01）。（4）转染PHB基因明显抑制TGF—β1所诱导的细胞增殖,使更多的细胞处于G0／G1期（与TGF-β1组比较,P〈0．01）,而对未受刺激的细胞无影响（P〉0．05）。（5）转染PHB基因明显抑制TGF—β1所诱导的α-SMA蛋白质和mRNA表达（与TGF-β1组比较,P〈0．01）,而对α-SMA基础表达无影响（与TGF-β1组比较,P〉0．05）。结论 PHB在肾组织中的表达水平可以反映肾小管间质损伤程度．外源性PHB显著抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖和表型改变。     

苦参素对NIH/3T3成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的 观察苦参素对NIH／3T3成纤维细胞增殖及其细胞外基质(ECM)合成的影响,探讨苦参素抗肝纤维化的可能作用机制。方法 采用噻唑蓝比色法、流式细胞技术检测苦参素对NIH／3T3成纤维细胞增殖及细胞周期的影响,采用放射免疫方法检测苦参素对其合成透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)等ECM的影响。结果 苦参素可抑制NIH／3T3成纤维细胞的增殖,减少S期细胞,降低细胞增殖指数,抑制ECM的合成,并呈剂量依赖关系。结论 苦参素可能通过影响成纤维细胞的增殖、抑制成纤维细胞的分裂和ECM的合成发挥其抗肝纤维化作用。     

芍药苷对增殖性瘢痕成纤维细胞增殖抑制作用及机制研究

目的探索芍药苷对增殖性瘢痕(HS)成纤维细胞增殖抑制作用及机制研究。方法 0(对照组),200,400,800μmol/L的芍药苷作用HS成纤维细胞24、48、72 h后,MTT法检测细胞活力,Hoechst染色法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞Ⅰ型胶原(COLⅠ)和Ⅲ型胶原(COLⅢ)含量,Western blot检测转化生长因子-β(TGF-β)/Smad信号通路相关蛋白及基质金属蛋白酶1(MMP1)、MMP13表达。结果 200,400,800μmol/L芍药苷能显著降低HS成纤维细胞活力(P0.01),使细胞核发白,皱染,使细胞周期阻滞在G1期(P0.01),能显著降低细胞中COLⅠ、COLⅢ含量(P0.01),下调MMP1、MMP13、TGF-β1、pSmad2及p-Smad3表达(P0.01)。结论芍药苷能明显抑制HS成纤维细胞增殖及胶原合成,可能是通过抑制TGF-β1/Smad信号通路实现的。     

三种中药有效成分对瘢痕成纤维细胞生长影响研究

目的 探讨积雪草甙、苦参碱、川芎嗪等中药有效成分对皮肤瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法 体外培养瘢痕疙瘩成纤雏细胞，分别加入不同浓度的积雪草甙、苦参碱、川芎嗪。通过倒置显微镜观察、MTT法测定细胞活力、乳酸脱氢酶检测等方法分别观测三种中药有效成分对瘢痕成纤维细胞生长的影响。结果 与空白对照组相比，实验组中加入积雪草甙0.5mg/ml、苦参碱1．0mg/ml、川芎嗪1．9mg/ml后成纤维细胞数量均明显减少；OD值降低（P〈0．05）；当积雪草甙浓度高于5mg/ml时乳酸脱氢酶含量超出正常范围。结论 有效浓度下，三种中药有效成分均能抑制皮肤瘢痕成纤维细胞生长，其作用强度积雪草甙〉苦参碱〉川芎嗪。     

脂质体介导的PRX-2转染对人成纤维细胞增殖特性的影响

目的 探讨PRX-2转染对人成纤维细胞增殖特性的影响.方法 取烧伤整形外科手术中所取的全厚皮片的剩余皮片,男5例,女3例.年龄6 ～41岁,平均24岁,均取自腹部.细胞培养采用组织块法,实验用第4代细胞.皮肤组织进行成纤维细胞的培养、传代,利用脂质体介导的基因转染技术,将PRX-2基因转染至人成纤维细胞中,形成稳定表达,利用MTT法、流式细胞仪等方法,观察转染前后人皮肤成纤维细胞增殖特性的变化情况.结果 PRX-2转染后成纤维细胞形态与正常成纤维细胞类似,增殖能力明显增强,G0-G1期细胞比例减少,而S期和G2-M期细胞比例增多.PRX-2基因成功转染到了人成纤维细胞中;细胞增殖指数增高.结论 脂质体介导的同源异形框基因PRX-2转染可以增强人成纤维细胞的增殖能力,PRX-2和人皮肤创面愈合有密切的关系.     

来氟米特抑制结缔组织生长因子诱导的肾间质成纤维细胞增殖和胶原合成的研究

目的探讨来氟米特（LEF）对人肾间质成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法在体外培养的人肾间质成纤维细胞中，加入不同浓度来氟米特活性代谢产物A771726和重组人结缔组织生长因子（rhCTGF），MTT法测定两者单独及同时干预下细胞增殖情况；ELISA法测定细胞合成Ⅰ、Ⅳ型胶原的含量。结果经不同浓度的rhCTGF刺激，成纤维细胞增殖和细胞合呈Ⅰ型、Ⅳ型胶原均成剂量依赖性增加（P〈0．01）：而来氟米特作用细胞后，细胞增殖及胶原合成均呈剂量依赖性减少（P〈0．01）；在来氟米特与结缔组织生长因子（CTGF）共同作用下，细胞的增殖和胶原的合成较单用同剂量的CTGF时减少（P〈0.05）。结论rhCTGF能够促进人肾间质成纤维细胞的增殖及Ⅰ、Ⅳ型胶原合成；来氟米特则抑制细胞的增殖及细胞合成Ⅰ、Ⅳ型胶原；来氟米特对rhCTGF诱导的胶原合成增加有一定的拮抗作用。