GAD预防NOD鼠胰岛炎的机理研究

目的研究本室自制猪脑ＧＡＤ是否能保护ＮＯＤ鼠胰岛β细胞免遭破坏及其意义。方法在４周龄ＮＯＤ鼠注射ＧＡＤ，对照组注射等量牛血清白蛋白（ＢＳＡ），分别于１９周龄、２５周龄和４７周龄处死，胰腺组织常规制成石蜡切片，ＡＢＣ免疫组化染胰岛β细胞并光镜下计数。结果同周龄ＧＡＤ组发生胰岛炎程度和胰岛炎评分均明显低于ＢＳＡ组：同周龄ＧＡＤ组胰岛β细胞计数明显高于ＢＳＡ组，均有显著性差异（Ｐ＜０．００１）；胰岛炎分值与胰岛β细胞阳性率存在密切负相关（Ｐ＜０．００１）。结论本室自制猪脑ＧＡＤ能减轻ＮＯＤ雌鼠胰岛炎的发生和保护胰岛β细胞免遭破坏的作用。     

谷氨酸脱羧酶预防NOD小鼠胰岛炎的机制

谷氨酸脱羧酶 (ＧＡＤ)预防ＮＯＤ小鼠胰岛炎和糖尿病(ＤＭ) 〔1,2〕的机制尚未阐明。本研究探讨ＧＡＤ在预防ＮＯＤ鼠胰岛炎过程中 ,对胰岛 β细胞凋亡和Ｆａｓ及其配体ＦａｓＬ及ｂｃｌ ｘ表达的影响。一、材料和方法ＮＯＤ小鼠 ,ＧＡＤ ,动物实验及胰岛炎的检测方法均同先前报道〔1〕。细胞凋亡染色试剂盒、抗Ｆａｓ、抗ＦａｓＬ、抗ｂｃｌ ｘ抗体、生物素标记羊抗鼠ＩｇＧ(1/30 0 )和ＡＢＣ试剂 (1/5 0 0 )均由武汉博士德公司提供 ,二氨基联苯胺由瑞士进口分装。1.β细胞凋亡计数 :用ＴＵＮＥＬ原位末端标记法染色凋亡细胞 ;用ＡＢＣ免…     

GAD预防NOD鼠胰岛炎和糖尿病的机理研究——胰岛细胞Bcl-2、PCNA表达及意义

目的　应用自制猪脑ＧＡＤ研究其预防ＮＯＤ鼠胰岛炎和糖尿病作用及其机理。方法　ＮＯＤ鼠动物模型、病理形态学研究及胰岛细胞Ｂｃｌ－２、ＰＣＮＡ免疫组化研究。结果　ＧＡＤ能明显地减轻ＮＯＤ鼠胰岛炎发生程度和糖尿病发生率,ＧＡＤ能诱导或维持胰岛β细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达水平,且ＧＡＤ在维持ＮＯＤ鼠早期胰岛β细胞增殖与凋亡动态平衡方面可能有重要作用;胰岛β细胞增殖主要与β细胞本身增生代偿能力有关,与ＧＡＤ无明显关系。结论　我们自制猪脑ＧＡＤ能减轻胰岛炎和β细胞破坏的程度,其机理可能与抑制细胞凋亡的Ｂｃｌ－２蛋白表达水平有关。     

完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎和糖尿病的机理研究

目的　研究Ｂａｘ 蛋白和热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ 在完全弗氏佐剂（ＣＦＡ）预防ＮＯＤ 鼠胰岛炎和糖尿病中作用及意义。方法　给４ 周龄雌性ＮＯＤ 鼠后脚板注射５０ μｌ ＣＦＡ 和生理盐水（ＮＳ组） ，于３０ 周龄或糖尿病发生时处死，胰腺组织置１０ ％ 中性福尔马林固定后常规制成石蜡切片，ＨＥ染色后行光镜下胰岛炎评分，ＡＢＣ免疫组化染色Ｂａｘ 蛋白和ＨＳＰ７０ 并光镜下计数。结果　ＣＦＡ 组鼠胰岛内炎计数和胰岛炎评分均数均明显低于ＮＳ组鼠（Ｐ＜ ０．０１）；ＣＦＡ 组鼠无１ 只发生糖尿病，ＮＳ组鼠中有３ 只（６０％ ）发生糖尿病；ＣＦＡ 组鼠胰岛细胞Ｂａｘ 蛋白阳性率明显低于ＮＳ组鼠，而ＨＳＰ７０ 阳性率明显高于ＮＳ组鼠，均有极显著性差异（Ｐ＜ ０．０１） ； 胰岛炎分值与Ｂａｘ 蛋白阳性率呈正相关（ｒ＝０．６１３） ，与ＨＳＰ７０ 阳性率呈负相关（ｒ＝ － ０．９１３）。结论　ＣＦＡ 能减轻ＮＯＤ 鼠胰岛炎发生程度和预防糖尿病发生，ＣＦＡ能抑制胰岛细胞Ｂａｘ 蛋白表达和诱导胰岛细胞ＨＳＰ７０ 表达。     

完全费氏佐剂预防非肥胖糖尿病鼠胰岛炎和糖尿病的效应

目的 探讨完全费氏佐剂（CFA）在预防非肥胖糖尿病（NOD）鼠胰岛炎和糖尿病机制中的作用。方法 将3周龄NOD雌鼠随机分入CFA组、磷酸盐缓冲液（PBS）对照组,分别给予后足板一次性注射CFA50μl、PBS50μl,于6周龄、12周龄、30周龄时观察胰岛β细胞凋亡、胰岛炎程度和糖尿病发病率。结果 6周、12周时CFA组胰岛炎积分、β细胞凋亡率均明显低于周期PBS组（P＜0.05,P＜0.01）,6周龄、12周龄胰岛炎积分与β细胞凋亡率存在正相关。到30周龄时,CFA组11只鼠只有1只发生糖尿病（1／11）,明显低于PBS组[11只中有9只（9／11）] ,P=0.001。结论 早期给予NOD鼠CFA可明显减轻其胰岛炎和糖尿病的发生,其机制与抑制β细胞凋亡有关。     

完全弗氏佐剂预防非肥胖糖尿病鼠胰岛炎和糖尿病的效应

目的探讨完全弗氏佐剂(CFA)在预防非肥胖糖尿病(NOD)鼠胰岛炎和糖尿病机制中的作用.方法将3周龄NOD雌鼠随机分入CFA组、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,分别给予后足板一次性注射CFA 50 μl、PBS 50 μl,于6周龄、12周龄、30周龄时观察胰岛β细胞凋亡、胰岛炎程度和糖尿病发病率.结果 6周、12周时CFA组胰岛炎积分、β细胞凋亡率均明显低于同期PBS组(P＜0.05, P＜0.01), 6周龄、12周龄胰岛炎积分与β细胞凋亡率存在正相关.到30周龄时,CFA组11只鼠只有1只发生糖尿病(1/11),明显低于PBS组[11只中有9只(9/11)],P=0.001.结论早期给予NOD鼠CFA可明显减轻其胰岛炎和糖尿病的发生,其机制与抑制β细胞凋亡有关.     

谷氨酸脱羧酶抗体和胰岛细胞抗体在妊娠糖尿病患者中的变化

妊娠糖尿病包含孕前已诊断的糖尿病即糖尿病合并妊娠和在妊娠期首次发生的任何程度的糖耐量异常即妊娠期糖尿病(GDM)。谷氨酸脱羧酶抗体(GAD)和胰岛细胞抗体(ICA)是诊断和预测1型糖尿病的经典免疫学标志之一。我们对我院近8年来收治的15例糖尿病合并妊娠和15例妊娠期糖尿病患者在妊娠24～28周时的GAD、ICA阳性和阴性例数进行观察。对象与方法1.对象:我院1999～2006年门诊及住院的糖尿病合并妊娠(I组)和GDM患者(Ⅱ组)各15例,两组的年龄、孕前体重指数(BMI)等比较差异无显著性(P>0.05)。在孕24～28周测定GAD和ICA,观察GAD阳性、…     

NOD小鼠胰岛β细胞凋亡及完全弗氏佐剂的预防效应

目的　探讨NOD小鼠胰岛 β细胞凋亡的规律及完全弗氏佐剂 (CFA)在预防胰岛炎和糖尿病中的作用。方法　计数 12天龄、6周龄、12周龄未处理的NOD雌鼠胰岛 β细胞的凋亡。将 3周龄NOD雌鼠随机分入CFA组、PBS对照组 ,分别给予后足板一次性注射CFA 5 0 μl、PBS 5 0 μl,于 6周龄、12周龄、30周龄时 ,观察胰岛 β细胞凋亡率 ,胰岛炎程度和糖尿病发病率。 结果　未处理组 12天龄胰岛 β细胞凋亡率分别高于 6周龄、12周龄 (P <0 .0 1)。 6周、12周时CFA组胰岛炎积分 ,β细胞凋亡率均明显低于同期PBS组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,6周龄、12周龄胰岛炎积分与 β细胞凋亡率存在正相关 (r =0 .5 9,P <0 .0 1)。到 30周龄时 ,CFA组糖尿病发病率 (9.1% )较PBS组 (81.8% )明显降低 (P=0 .0 0 1)。结论　早期给予NOD鼠CFA可明显减轻胰岛炎和预防糖尿病的发生 ,其机制与抑制 β细胞凋亡有关。     

谷氨酸脱羧酶特异调节的T细胞抑制NOD小鼠的自身免疫性糖尿病

目的 探讨抗原特异调节的T细胞在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠自发性糖尿病中的作用。方法 应用流式细胞计数仪辅以荧光标记组织相容性抗原Ⅱ类分子四聚体染色，从自发性糖尿病的NOD小鼠和非糖尿病的BALB／c小鼠中分离出谷氨酸脱羧酶(GAD)多肽特异性T细胞。分别应用抗原刺激试验、酶联免疫反应、细胞内细胞因子染色检测上述T细胞的细胞因子表达。最后将上述T细胞给NOD／scid小鼠静脉注射，检测这些T细胞对糖尿病发生的影响。结果 当用不同多肽诱导同一品系时，NOD小鼠T细胞分泌不等量的干扰素-γ，相似量的白介素(IL)-4和IL-10；BALB／c小鼠T细胞分泌类似量的细胞因子。当同一多肽诱导不同品系时，NOD小鼠T细胞较BALB／c小鼠T细胞分泌较少量的IL-2但较大量的IL-4和IL-10。这些NOD小鼠T细胞均可以有效地抑制NOD／scid小鼠的糖尿病发生。结论 两种毗邻的GAD多肽诱导NOD小鼠产生的T细胞表达不同的细胞因子分泌类型，但这些NOD小鼠T细胞均可以有效地抑制NOD／scid小鼠的糖尿病，因此推论这些细胞为分泌独特细胞因子且抑制糖尿病的T调节细胞。     

LADA患者胰岛β细胞功能的前瞻性研究

目的 探讨成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)患者胰岛功能变化的特点及其影响因素。方法 2型糖尿病(DM)中谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)阳性的LADA患者16例和GAD-Ab阴性的2型DM患者24例，分别于第0、6、12、30、36、42和48个月进行随访，测定空腹C肽(FCP)和100g馒头餐后2hC肽(2hCP)及糖代谢指标。采用放免     

己酮可可碱预防NOD鼠1型糖尿病的机理研究

目的 探讨己酮可可碱（Pentoxifylline,PTX)对非肥胖糖尿病（NOD）小鼠1型糖尿病发病率，胰岛素的影响及其机制。方法 采用动物模型NOD鼠，注射环磷酰胺（CP）加速其发病。给PTX药物后计算糖尿病发病率，HE染色观察胰岛炎，并用逆转录（RT）PCR法检测脾细胞干扰素γ（IFN－γ），肿瘤坏死因子α（TNF－α），白介素10（IL－10）mRNA的表达。结果 PTX组糖尿病发生率（30．00％）明显低于对照组（67．86％）（P＜0．1）；胰岛炎程度也明显减轻（P＜0．001）；脾细胞IFN－γ，TNF－αmRNA的表达较对照组明显降低（P＜0．05），IL－10mRNA的表达无明显改变。结论 PTX可预防NOD鼠发生糖尿病，其机制可能与纠正Th1与Th2型细胞因子比例失衡有关。     

吡格列酮对NOD鼠糖尿病的预防作用及其机制探讨

目的探讨吡格列酮（PIO）对NOD鼠糖尿病发病率和胰岛炎的影响及其作用机制。方法4周龄NOD雌鼠随机分为2组，分别摄食0．02％PIO混合饲料（PIO，n=26）和普通饲料（对照组，n=25），观察30周龄时的糖尿病累积发病率。各组另取12周龄未患病NOD鼠（n=15）胰腺H～E染色观察胰岛炎；ELISA法测血清、脾细胞培养上清干扰素γ（IFN-γ）和白细胞介素4（IL～4）水平；RT-PCR检测脾脏IL-4、IFN～γmRNA的表达水平。结果30周龄时，PIO组发病率较对照组明显降低（P〈0．05）。12周龄时，PIO组胰岛炎平均积分低于对照组（P〈0．05）；血清、脾上清IL～4水平，脾脏IL-4mRNA表达水平显著性高于对照组（P〈0．05）；PIO血清、脾上清IL-4／IFN-γ比值水平高于对照组（P〈0．05）。结论PIO通过上调IL～4水平，促使免疫平衡向Th2方向偏移，从而使NOD鼠胰岛炎减轻，而在一定程度上预防和延缓NOD鼠糖尿病的发生。     

继发性磺脲类药物失效糖尿病患者谷氨酸脱羧酶抗体与胰岛β细胞功能的关系

我们通过对继发性磺脲类药物失效的2型糖尿病患者GAD抗体与胰岛β细胞功能的关系研究，以期对继发性磺脲类药物失效的机制进行探讨。     

胰岛自身抗体与β细胞功能关系的研究

目的分析胰岛自身抗体与β细胞功能关系,探讨胰岛细胞抗体(ICA)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)在类似2型糖尿病的成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)中的诊断价值,指导临床糖尿病分型诊断和治疗。方法初诊2型糖尿病病人70例,正常糖耐量者70例,测定ICA、GADA及胰岛素释放,计算胰岛素分泌指数(HOMA-IS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及ICA、GADA阳性率。初诊2型糖尿病自身抗体阳性组与阴性组进行年龄、体重指数(BMI)、腰臀比值(WHR)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹和餐后2h胰岛素(FINS、餐后2hINS2h)、HOMA-IS及HOMA-IR等临床特征比较。结果初诊2型糖尿病组ICA阳性率为11.4%,正常糖耐量组为0.0%(P<0.01);GADA阳性率在糖尿病组为18.6%,正常糖耐量组为4.3%(P<0.01)。空腹及餐后2h胰岛素在抗体阳性组明显低于阴性组(P<0.001);HOMA-IS指数及HOMA-IR指数在抗体阴性组、抗体单阳性组及双阳性组依次降低。结论临床诊断为2型DM病人中可能有LADA病人,抗体阳性者胰岛功能明显低于抗体阴性者,提示其胰岛功能有明显损伤,而抗体阴性组胰岛素抵抗明显,提示胰岛自身抗体结合胰岛β细胞功能对LADA病人早期诊断有帮助。     

血清谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛细胞抗体在肝源性糖尿病诊断中的价值

谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛细胞抗体(ICA)是两种针对胰岛细胞的特异性自身抗体,是1型糖尿病实验室诊断的重要指标。我们对2 17例慢性乙型肝炎(CH)、肝硬化(LC)患者进行GADA及ICA检测,探讨GADA、ICA在肝源性糖尿病诊断中的价值。对象与方法一、研究对象2 17例CH、LC患者均系近两年我科住院患者,男171例,女4 6例,平均年龄( 4 4±15 )岁,平均体重指数(BMI)( 2 2 .33±3.34)kg/m2 。其中CH12 6例,LC91例,均符合2 0 0 0年(西安)病毒性肝炎防治方案诊断标准[1] 。所有患者否认肝病前有糖尿病史及糖尿病家族史。糖尿病诊断按1997…     

谷氨酸脱羧酶抗体和胰岛细胞抗体联合检测对1型糖尿病早期诊断的意义

目的　对９８４ 例糖尿病患者的胰岛细胞抗体（ＩＣＡ） 、谷氨酸脱羧酶抗体（ＧＡＤＡ） 和血清Ｃ肽进行了检测与分析,了解ＩＣＡ 和ＧＡＤＡ 阳性率以及阳性患者的胰岛功能情况,以明确ＩＣＡ 和ＧＡＤＡ检测对１ 型糖尿病早期诊断的意义。方法　采用免疫组化法检测ＩＣＡ,ＥＬＩＳＡ 法定量检测ＧＡＤＡ, 放射免疫法检测血清空腹和餐后Ｃ 肽。结果　ＩＣＡ 和（或）ＧＡＤＡ 阳性（ 阳性组）１６８ 例（１７ ．０％ ） 高于ＩＣＡ 阳性率（１０．５ ％） 和ＧＡＤＡ 阳性率（１２．０ ％ ,Ｐ＜ ０ ．０５） 。成年患者ＧＡＤＡ 阳性率（１０ ．５％ ） 高于ＩＣＡ（７．７ ％ , Ｐ＜ ０ ．０５） , 青少年患者ＩＣＡ 阳性率（４６．５ ％） 高于ＧＡＤＡ（３１．０％ ,Ｐ＜０．０１）。抗体阳性患者的空腹和餐后Ｃ肽〔（３２５ ±３６８）ｐｍｏｌ／Ｌ和（７４５±７６７）ｐｍｏｌ／Ｌ〕明显低于抗体阴性患者〔（７０１ ±４３４）ｐｍｏｌ／Ｌ和（１ ６１４ ±９６７）ｐｍｏｌ／Ｌ,Ｐ＜０ ．００１〕。结论　自身抗体阳性患者的胰岛功能明显低于阴性患者,提示自身抗体阳性患者胰岛功能有明显损伤。在成年糖尿病患者中ＧＡＤＡ检测较ＩＣＡ 更为重要,而在青少年糖尿病患者中则ＩＣＡ阳性     

人胰岛素原DNA疫苗预防非肥胖糖尿病鼠胰岛β细胞凋亡的机制探讨

目的探讨人胰岛素原DNA疫苗预防非肥胖糖尿病（NOD）小鼠胰岛β细胞凋亡的机制。方法（1）4周龄NOD雌鼠随机分为磷酸盐缓冲液（PBS）、质粒载体PcDNA3．1（PcDNA）、胰岛素原（Pins）3组，由胫前肌分别注射PBS、质粒PcDNA3．1、人胰岛素原DNA疫苗50pg，1周后重复1次。（2）各组取12周龄未发病的NOD鼠10只，分离胰腺，HE染色观察胰岛炎；TUNEL＋SABC法检测胰岛β细胞凋亡；取脾制成细胞悬液培养72h，ELISA法测定血清白介素4（IL-4）和γ干扰素（IFN-γ）水平；MTT法检测脾细胞增殖反应。结果（1）12周龄时Pins组正常胰岛比例高于PBS组和PcDNA组（均P〈0．01），胰岛周围炎比例低于PcDNA组（P=0．02），胰岛内炎比例则低于PBS组（P〈0．01）和PcDNA组（P=0．006）；（2）Pins组胰岛β细胞凋亡率低于PBS组和PcD—NA组（均P〈0．01）；（3）PIns组血清IL-4／IFN-γ比值显著高于PBS组（P=0．014）和PcDNA组（P=0．036）；（4）PIns组脾细胞对人胰岛素增殖反应的刺激指数（SI）低于PcDNA组（P=0．021）。结论人胰岛素原DNA疫苗通过上调IL-4／IFN-γ比值，使免疫平衡向Th2偏移，致NOD鼠胰岛炎减轻，胰岛β细胞凋亡减少。     

胰岛素对谷氨酸脱羧酶抗体阳性老年糖尿病胰岛β细胞的作用

目的 探讨老年谷氨酸脱羧酶抗体（GADAb）阳性患者早期胰岛素治疗对β细胞功能衰竭的延缓作用.方法 将首次确诊的2型糖尿病中GADAb阳性的老年（≥60岁）患者102例随机分为胰岛素治疗组（48例）,口服降糖药治疗组（54例）.胰岛素治疗组给予皮下胰岛素治疗,口服降糖药组即给予常规口服降糖药治疗.在入组时（0个月）及随访12个月后进行空腹C肽（FCP）和100 g馒头餐餐后2 hC肽（2 hCP）水平测定.结果 治疗前两组GADAb阳性患者空腹C肽和餐后2 hC肽水平无显著差异,但经过不同的治疗方法治疗12个月后,胰岛素治疗组FCP和2hCP较治疗前均无明显降低,而口服降糖药组FCP和2 hCP较治疗前均明显降低（P＜0.05）,且显著低于胰岛素治疗组（P＜0.05）.结论 GADAb阳性的老年糖尿病患者早期使用胰岛素对胰岛β细胞功能有一定的保护作用.     

空腹C-P、INS及胰岛细胞自身免疫抗体诊断儿童1型糖尿病的价值

为探讨儿童初发1型糖尿病（T1DM）的诊断指标，对33例T1DM患儿（观察组）分别测定其空腹血糖（FPG），糖化血红蛋白（HbA1c)，C－肽（C－P），胰岛素（INS），胰岛细胞抗体（ICA）及谷氨酸脱羧酶抗体（GAD），并与33例年龄，性别配对的健康儿童（对照组）作比较。结果显示，观察组除FPG，HbA1c显著升高外，C－P，INS，C－P／FPG，INS／FPG均显著低于对照组，以C－P／FPG最明显。提示空腹C－肽，INS，C－P／FPG，INS／FPG测定对诊断儿童初发T1DM有重要价值；胰岛细胞自免疫抗体测定对诊断T1DM有重要价值。     

成人隐匿性自身免疫性糖尿病的临床特点和诊断要点

目的 探讨ＬＡＤＡ的临床及诊断要点。方法 观察ＬＡＤＡ、成人１型ＤＭ、重症２型ＤＭ的临床、血糖、Ｃ肽水平、ＧＡＤＡｂ、ＩＣＡ等。结果 ＬＡＤＡ组自发性酮症１０例,ＧＡＤＡｂ阳性率１００％,高于ＩＣＡ。结果 ＬＡＤＡ的诊断依据主要是：（１）成人以２型ＤＭ起病方式发病和治疗,β细胞功能逐渐衰退,最终需胰岛治疗;（２）ＧＡＤＡｂ、ＩＣＡ阳性。