自制KYL液和UW液保存大鼠肝脏效果的比较

目的比较自制的KYL液和UW液对大鼠肝脏的保存效果。方法采用大鼠肝脏非循环离体灌注模型(noncirculatedisolatedperfusionofratliver),随机以KYL液和UW液对大鼠肝脏保存0、4、8、16、24和48h,记录胆汁流出量,测定灌注流出液天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)和氧自由基代谢产物丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,检测肝细胞内钙离子浓度,观察肝脏组织形态学变化。同时设生理盐水保存阴性对照组,了解器官保存液对大鼠肝脏有无保护作用。结果KYL液保存的大鼠肝脏在保存16h以内各时相胆汁流出量均较UW液保存者高(P<0.01),灌注流出液AST、ALT和LDH含量与UW液保存者相近,肝细胞内钙离子浓度较UW液保存者低(P<0.01);KYL组保存24及48h时,MDA含量低于UW组,SOD含量高于UW组(P<0.01);光、电镜观察两者形态学变化基本一致。两组所有指标均较生理盐水保存组好,提示KYL保存与UW液一样对大鼠肝脏具有保护作用。结论自制的KYL液对大鼠肝脏的保存效果总体上与UW液相当,在再灌注后肝细胞胆汁分泌方面和钙拮抗方面略优于UW液,而在防止细胞水肿方面较UW液稍差。     

还原型谷胱甘肽在离体肝脏保存中应用的实验研究

目的:研究UW液中加入还原型谷胱甘肽在离体肝脏保存中对肝细胞的保护作用。方法:封闭群雄性Wistar大鼠,采用原位灌注切取肝脏,分别用UW液、改良UW液(加入谷胱甘肽0.95g/L)0～4℃保存12h、24h、36h后行Krebs-Henseleit液离体灌注,记录肝脏胆汁分泌总量,并检测灌注流出液AST、LDH含量。结果:随着保存时限延长,灌洗液中AST、LDH值升高,胆汁分泌总量呈下降趋势。12h、24h,两组之间均无统计学差异(P>0.05)。保存36h,两组差异均无统计学意义(P<0.05)。离体灌注液生化指标显示改良UW液组长时间保存时肝脏细胞损伤程度较低。结论:在离体肝脏保存过程中,UW液中加入还原型谷胱甘肽对肝脏长期保存(36h)有保护作用,但24h内对肝脏保存效果影响不大,临床需在24小时内完成肝移植手术,故保存不需要添加还原型谷胱甘肽。     

自制KYL液对大鼠肝脏低温保存后细胞凋亡影响的研究

目的 研究自制的KYL液对大鼠肝脏低温保存后细胞凋亡的影响。方法 采用大鼠肝脏非循环离体灌注模型（noncirculated isolated perfusion of ratliver，IPRL），随机以KYL液和UW液对大鼠肝脏保存0、4、8、16、24、48h，测定灌注流出液氧自由基代谢产物（丙二醛MDA和超氧化物歧化酶SOD）的含量，检测肝细胞内钙离子浓度，检测肝细胞凋亡率和凋亡相关基因表达，观察肝脏组织形态学变化。同时设生理盐水保存阴性对照组，了解器官保存液对大鼠肝脏有无保护作用。结果 KYL液保存的大鼠肝脏肝细胞内钙离子浓度较UW液保存者低，灌注流出液MDA和SOD含量与UW液保存者相近，两者肝细胞凋亡率及凋亡基因表达情况相近，光、电镜观察两者形态学变化基本一致。两组所有指标均较生理盐水保存组好，说明两种液体对大鼠肝脏均有保护作用。结论 自制的KYL液对大鼠肝脏的保存效果在钙拮抗方面略优于UW液，在抑制细胞凋亡方面与UW液相当，而在防止细胞水肿方面较UW液稍差。     

Celsior液与UW液对无心跳大鼠供肝保存效果的比较

目的 比较Celsior(CS)液与UW液对大鼠无心跳供者(NHBD)供肝的保存效果.方法 选取健康雄性SD大鼠作为肝移植的供、受者.通过阻断大鼠主动脉和膈上下腔静脉10 min的方法,制备和获取NHBD供肝,并采用不同的器官保存液灌注和冷保存供肝.随机将受者分为4组.CS8 h组:受者采用经CS液灌注和冷保存8 h的供肝移植;UW8 h组:受者采用经UW液灌注和冷保存8 h的供肝移植;CS16 h组:受者采用经CS液灌注和冷保存16 h的供肝移植;UW16 h组:受者采用经UW液灌注和冷保存16 h的供肝移植.受者门静脉开放前、开放后1、3及6 h,取各组受者的静脉血检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、内皮素1(ET-1)、白细胞介素1(IL-1)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;观察和比较各组受者的胆汁生成量、移植肝组织病理学改变及术后7 d内的存活率.结果 NHBD供肝经UW液灌注后呈"花斑"状,肝叶边缘灌注不良,经CS液灌注后肝叶边缘灌注良好.CS8 h组和UW8 h组受者的胆汁生成量分别为(0.21±0.01)ml和(0.10±0.02)ml(P<0.05).门静脉开放后1、3及6 h,CS8 h组受者的血清ALT及AST水平明显低于UW8 h组(P<0.05),门静脉开放后1、3h,CS8 h组受者的血清ET-1、IL-1及TNF-α水平均明显低于UW8 h组(P<0.05);CS8 h组受者移植肝肝窦扩张、门静脉充血及炎症细胞浸润等病理学改变明显轻于UW8 h组,CS8 h组和UW8 h组受者术后7 d的存活率分别为58.3%和25.0%(P<0.05).CS16 h组和UW16 h组受者各时点的胆汁分泌量、血清ALT、AST、ET-1、IL-1及TNF-α水平的比较,差异均无统计学意义(P>0.05),两组受者均在术后3 d内死亡,两组受者移植肝组织病理学改变无明显差异.结论 CS液对大鼠NHBD供肝的保存效果优于UW液,这可能与UW液较CS液粘稠及CS液能够减少枯否细胞的激活有关;NHBD供肝的冷保存时间不宜超过16 h.     

自制CMU-1液保存大鼠肝脏的实验研究

目的　探讨CMU 1液保存大鼠肝脏的效果。方法　根据灌注液和保存液的种类将Wistar大鼠分为两组 :UW组和CMU 1组 ,每组分 6h、12h、2 4h 3个保存时限 ,每亚组 6只大鼠。采用离体循环灌注模型 ,研究CMU 1保存液对保存肝脏能量代谢、生化功能、胆汁分泌及形态学方面的影响。结果　随着保存时间延长 ,肝组织TAN含量及AEC逐渐降低 ,CMU 1组较UW组下降略缓慢 ,保存 2 4h后高于UW组 (P <0 0 5 )。再灌注 12 0min后CMU 1组的肝脏分泌胆汁量较UW组多 (P <0 0 5 )。相同时限相比 ,灌出液中ALT、LDH值两组之间无显著差异 (P >0 0 5 )。肝脏组织学变化两组间无明显差异。保存 6h后 ,保存液pH值无明显变化 ;保存 12h后pH值下降 ,两组无明显差异 ;保存2 4h后 ,UW组pH值下降较CMU 1组明显。结论　CMU 1保存液保存大鼠肝脏效果与UW液相似 ,在改善保存肝脏能量代谢、预防细胞内酸中毒、胆汁分泌方面略优于UW液。     

自制肝脏保存液在大鼠原位肝移植模型中的应用

目的研制一种新型的专用于肝脏保存的溶液,以期达到价廉、专用、损伤小并能长时间保存的目标。方法自制肝脏保存液;建立大鼠原位肝移植模型;使用自制肝脏保存液(A组)、UW液(B组)和HC-A液(C组)保存大鼠肝脏2、8、24h后行大鼠原位肝移植,于移植后6 h比较各项肝脏功能。结果对于ALT、AST、HA,自制肝脏保存液组及其亚组与UW液组同步升高(P>0.05),与HC-A液组比较,前者的含量均低,差异有统计学意义(P<0.05)。对于LDH、STB,自制肝脏保存液组及其亚组与HC-A液组同步升高(P>0.05),与UW液组比较,前者的含量均高(P<0.05)。结论经大鼠原位肝移植模型证实,自制肝脏保存液与UW液在保护肝脏功能方面作用相当,优于HC-A液。     

UW液用于大鼠离断肢体灌注保存的实验研究

目的：探讨用 UW液灌注离体断肢以延长其活性的效果。方法：选择雄性健康成年 Wistar大鼠20只,体重300～400 g,手术离断双下肢。实验分两部分。实验一：随机选择10只大鼠,再随机分为灌注组（4℃下采用 UW液自股动脉灌注离断肢体直至灌出液清亮为止）和对照组（不予灌注直接冰箱保存）,每组5只。两组均置于4℃冰箱内低温保存24 h,肢体离断后每间隔6 h取离断肢体肌肉组织行病理学观察。实验二：另10只大鼠随机分为连续灌注组（4℃下以12 ml/h的速度持续灌注 UW液24 h）和间断灌注组（4℃下于肢体离断后4、8、12、16、20和24 h以12 ml/h的速度分别灌注 UW液20 min）,每组5只。离断肢体在4℃冰箱内保存灌注24 h,收集离断后4、8、12、16、20和24 h 的灌注流出液,检测碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸转氨酶（ALT）、葡萄糖（GLU）含量,同时在离体12 h、24 h取肌肉组织标本,行 HE 染色观察组织结构变化,透射电镜观察其细胞超微结构的变化。结果：实验一：在各相同时间点,灌注组较对照组肌纤维水肿程度轻,断裂少,细胞较少发生横纹溶解。实验二：连续灌注组与间断灌注组比较,肌纤维均轻度水肿,细胞出现横纹溶解,线粒体肿胀,发生破裂及空泡化现象,两组病理及超微结构改变程度相似,各时间点两组之间 ALP、ALT、GLU 差异无显著性（P＞0.05）。结论：使用 UW液对离断肢体进行灌注后低温保存效果更好。UW液24 h 间断灌注与24 h 连续灌注两种方法对离断肢体的保护效果相当。     

冷冻保存大鼠肝脏离体再灌注时嘌呤核苷磷酸酶活性和透明质酸吸收率的变化

目的探讨不同保存液保存大鼠肝脏后离体再灌注时嘌呤核苷磷酸酶(PNP)活性和透明质酸吸收率的变化及意义。方法分别采用UW液、HTK液和Celsior液灌洗、冷保存Wistar大鼠肝脏16及24 h,然后用37℃的Kreb-Henseleit液在常温下连续灌注90 min,分别于灌注0、15、30、60和90 min时,从灌注液中取样,测定嘌呤核苷磷酸酶活性和外源性透明质酸吸收率的变化,据此评价肝窦内皮细胞的状况。结果经过16 h的低温保存,在再灌注60 min以前,HTK液组灌注液中PNP的含量明显高于UW液组和Celsior液组(P<0.01);再灌注60 min后,HTK液组和Celsior液组灌注液中PNP的含量明显高于UW液组(P<0.01)。经过24 h的低温保存,在再灌注15 min后,HTK液组灌注液中PNP含量明显高于Celsior液组(P<0.01),而Celsior液组又明显高于UW液组(P<0.01)。透明质酸的吸收率均为负值,说明内源性透明质酸的释放大于外源性透明质酸的吸收,且随着保存时间和再灌注时间的延长,这一趋势更加明显,其中HTK液组最明显,Celsior液组次之。结论随着低温保存和再灌注时间的延长,肝脏中PNP活性逐渐升高,外源性透明质酸的吸收率下降,二者可作为评价肝脏缺血-再灌注损伤的指标。     

SWH液对大鼠肝脏保存有效时间的探讨

目的通过与UW液进行比较,探讨SWH液对SD大鼠肝脏保存的有效时间.方法应用大鼠原位肝移植模型,通过高效液相色谱法（HPLC）,检测肝组织ATP、ADP、AMP,计算总腺苷酸含量（TAN）及Atkinson＇s能量转换（EC）,判断肝脏能量代谢状态;通过检测谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）含量,判定肝脏功能;观察移植术后7d动物存活率,判定SWH液对大鼠肝脏有效保存的时间.结果保存18 h组的ATP、TAN、EC恢复水平明显低于保存8 h组,相差显著,保存12 h组与保存8 h组比较相差不显著;保存18 h组的ALT、AST、LDH明显高于保存8h组,差异显著,保存12 h组与保存8 h组比较相差不显著;SWH液组移植术后7 d动物存活率有高于UW液组的趋势.结论无论使用SWH液还是UW液,SD大鼠肝脏有效保存的时间都不超过12 h.     

大鼠离体肝脏保存再灌注后肝脏中ICAM-1mRNA的表达及丹参对其表达的影响

目的探讨大鼠离体肝脏保存再灌注后肝脏组织中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA的表达变化及丹参对其表达的影响。方法选取健康Wistar雄性大鼠54只,用完全随机方法选6只大鼠作为正常组,切除肝脏后立即灌注;随机选24只大鼠作为对照组,切除肝脏后置入4℃UW液中分别保存8、16、24、32 h后再行肝脏循环再灌注;余下的24只作为实验组,切除肝脏后置入含丹参的4℃UW液中分别保存8、16、24、32 h后再行肝脏循环再灌注。应用RT-PCR方法检测各组大鼠离体肝脏保存再灌注后肝脏组织中ICAM-1 mRNA表达。结果正常组肝脏中的ICAM-1 mRNA表达为3.61±1.56,对照组和实验组8、16、24、32 h时肝脏中ICAM-1 mRNA表达分别为15.71±1.78、33.70±3.35、45.83±4.37、66.98±5.89和11.69±1.25、16.55±1.37、24.73±2.74、32.65±3.39,对照组和实验组各时相均分别明显低于正常组（P〈0.05）,且均随保存时间延长,ICAM-1 mRNA表达逐渐增加（P〈0.05）,实验组16 h后ICAM-1 mRNA表达均分别明显低于对照组相应时相（P〈0.05）。结论丹参能够降低离体肝脏保存再灌注后肝脏组织中ICAM-1 mRNA表达,对肝脏保存再灌注损伤可能具有防护作用。