G—CSF测定在新生儿疾病诊断中的应用

应用ＥＬＩＳＡ法对本科住院的１５０例新生儿进行了粒细胞集落刺激因子的检测。结果为６０例细菌感染性疾病的新生儿Ｇ－ＣＳＦ阳性检出率为９９％，２５例非细菌感染的新生儿Ｇ－ＣＳＦ阳性率为８％，２０例正常新生儿Ｇ－ＣＳＦ检测全部为阴性，表明Ｇ－ＣＳＦ检测可用于新生儿感染性疾病的鉴别诊断，并对临床应用抗生素有较大的指导意义。     

400例围产胎儿心电图检测分析及异常心电图的处理

本文应用ＦＥＣＧ－Ｄ型仪对４００例围产胎儿进行了ＦＥＣＧ的检测及分析。结果成功３６３例，成功率为９０．８％，正常ＦＥＣＧ３１６例占成功数的８７％，异常ＦＥＣＧ４７例占成功数的１３％。在对异常ＦＥＣＧ的类型及原因的分析中发现，异常ＦＥＣＧ中以ＦＳＴ下移＞５ｕｖ为多占５３．２％，其次为胎儿心动过速２５．６％，胎儿心动过缓１０．６％。胎儿心律不齐６．３％，ＦＱＲＳ时限增宽４．３％。胎儿心电图异常的原因为胎儿窘迫占７８．７％，脐带绕颈１２．８％，提示胎儿宫内缺氧是引起围产ＦＥＣＧ异常的主要原因，２２例（４７％）异常ＦＥＣＧ分别经胎盘给药、吸氧、输液等处理转为正常。     

ELISA法测定粒系集落刺激因子的初步研究

鼠抗人ｒｈＧ－ＣＳＦ单抗为包被抗体。兔抗人ｒｈＧ－ＣＳＦ多抗为酶标抗体。建立Ｇ－ＣＳＦ定量测定的ＥＬＩＳＡ法。试验敏感度为０．０９５ｎｇ／ｍｌ。批内变异系数为７．３％。批间变异系数为１２．７％。临床初步应用证实１８正常人群对照均未检出，３５例ＡＰＬ患检出率为１４．４％（４／３５），６例感染患均检出，平均０．３５±０．２５ｎｇ／Ｌ．     

软骨发育不全FGFR3基因突变的研究

目的了解中国人软骨发育不全患者成纤维细胞生长因子受体３（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ３，ＦＧＦＲ３）基因变异情况。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和限制性内切酶酶切方法，分析辽宁地区７例软骨发育不全（ａｃｈｏｎｄｒｏｐｌａｓｉａ，ＡＣＨ）患者外周血ＤＮＡ标本中ＦＧＦＲ３基因第１０外显子区域。结果７例患者均检测到相同的Ｇ３８０Ｒ点突变。结论表明Ｇ３８０Ｒ为中国人ＡＣＨ患者常见突变。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和限制性内切酶酶切的方法检测ＦＧＦＲ３基因突变是产前诊断和早期诊断ＡＣＨ患者的简便、快速、可靠的手段     

粒细胞集落刺激因子受体检测及其临床意义

目的：研究骨髓单个核细胞粒细胞集落刺激因子受体（Ｇ－ＣＳＦＲ）的测定方法及在急性白血病患者的表达规律。方法：采用Ｃ－ＣＳＦＲ单克隆抗体及流式细胞技术，分别检测２０例正常对照和４９例急性白血病细胞Ｇ－ＣＳＦＲ的表达率；结合患者临床生物学指标进行分析。结果：Ｇ－ＣＳＦＲ测定方法具有较高的特异性；急性白血病患者Ｇ－ＣＳＦＲ表达率明显低于正常对照（Ｐ＜０．０１），Ｇ－ＣＳＦＲ表达与年龄、性别、外周血象中Ｈｂ、ＷＢＣ、ＰＬＴ的数量及ＦＡＢ各亚型无相关性（Ｐ＞０．０５），而与骨髓中原始细胞的比例呈显著负相关（ｒｓ＝－０．６５１，Ｐ＜０．０５）。结论：Ｇ－ＣＳＦＲ测定方法敏感、特异，Ｇ－ＣＳＦＲ在急性白血病中有低水平的表达。     

脑胶质瘤患者脑脊液白细胞介素6和血小板衍化生长因水平的 …

检测了２７例脑胶质瘤病人手术前、后不同时期脑脊液（ＣＳＦ）中白细胞介素６－（ＩＬ－６）和血小板衍化生长因子（ＰＤＩＧＦ）水平，发现脑胶质瘤病人ＣＳＦ中ＩＬ－６、ＰＤＧＦ水平，与对照组相比，差异非常显著。术后一周ＣＳＦ中ＩＬ－６水平较术前升高，ＰＤＧＦ水平较术前下降。术后３业时，ＣＳＦ中ＩＬ－６、ＰＤＧＦ水平均明显地术前水平，但并没有达到对照水平。对１６例次全切除术病人进行随访，发现复发组病人ＣＳＦ     

脑胶质瘤患者脑脊液白细胞介素6和血小板衍化生长因子水平的变化

检测了２７例脑胶质瘤病人手术前、后不同时期脑脊液（ＣＳＦ）中白细胞介素６（ＩＬ－６）和血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）水平，发现脑胶质瘤病人ＣＳＦ中ＩＬ－６、ＰＤＧＦ水平升高，与对照组相比，差异非常显著。术后一周ＣＳＦ中ＩＬ－６水平较术前升高，ＰＤＧＦ水平较术前下降。术后３０天时，ＣＳＦ中ＩＬ－６、ＰＤＧＦ水平均明显低于术前水平，但并没有达到对照组水平。对１６例次全切除术病人进行随访，发现复发组病人ＣＳＦ中的ＩＬ－６、ＰＤＧＦ水平要明显高于未复发组病人和对照组，而且要比临床发现肿瘤复发的时间早３～６个月。因此，动态检测脑胶质瘤病人ＣＳＦ中ＩＬ－６、ＰＤＧＦ水平对判断手术疗效、估计预后、及早发现肿瘤复发均有重要的临床意义。     

癫痫患者血液和脑脊液免疫异常在其发病机制中的作用

对７２例癫痫患者血液中的ＩｇＧ，ＩｇＡ，ＩｇＭ，Ｃ３，ＣＩＣ，白蛋白，ＣＤ４＾＋细胞，ＣＤ８＾＋细胞和脑脊液中的ＩｇＧ进行检测，并计算ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值，ＣＳＦ－ＩｇＧ／Ｓ－ＩｇＧ比率，ＣＳＦ－ＡＬＢ／Ｓ－ＡＬＢ比率和ＩｇＧ指数。结果表明癫痫组血液中的５项参数对比照组低，尤其是原发性和末治疗亚组。而ＣＳＦ呈现病理性的免疫增强反应，表现为原发性亚组ＩｇＧ合成，而继发性亚组患者存在血脑屏障功能     

新生儿心肌炎柯萨奇B病毒感染的研究

用间接ＥＬＩＳＡ、ＭａｃＥＬＩＳＡ检测２６例新生儿心肌炎血清ＣｏｘＢ病毒特异性ＩｇＧ和ＩｇＭ，其中１４例用聚合酶链反应检测血清肠道病毒（ＥＶ）－ＲＮＡ。结果ＣｏｘＢ病毒ＩｇＧ的阳性检出率为３８％，ＩｇＭ的阳性检出率为５４％，ＥＶ－ＲＮＡ的阳性率为５０％，三者阳性率均明显高于对照组。检测了１０例母婴血清的ＣｏｘＢ病毒的ＩｇＭ，提示ＣｏｘＢ病毒可能通过胎盘传播，１４例做了急性期和恢复期双份血清检测，ＩｇＧ有４倍滴度改变者６例。     

McAb检测囊虫病人循环抗原的研究

应用ＭｃＡｂ双抗体夹心－ＥＬＩＳＡ检测脑囊虫病人血清和脑脊液（ＣＳＦ）中循环抗原（ＣＡＧ）。血清经ＰＥＧ沉淀浓缩沸浴和ＣＳＦ经沸浴处理后，ＣＡｇ的阳性率分别为９２．７３％和９０．７４％，总阳性率为９２．０７％，灵敏度６８．７ｎｇ／ｍｌ。对照组中除２例包虫病人血清有交叉反应外，其余均为阴性。平行检测病人ＣＳＦ的ＣＡｇ和ＣＡｂ，以及同步检测血清和ＣＳＦ中的ＣＡｇ，表明它们之间有互补和相互验证的作用，可提高阳性率。对囊虫病人治疗前后血清ＣＡｇ的动态检测，表明血清ＣＡｇ的阴转率随疗程的增加而提高。这些结果说明ＣＡｇ检测不仅可用于囊虫病的诊断，而且可作为疗效考核的重要手段。也说明ＭｃＡｂ双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ＣＡｇ具有敏感性高、特异性强、重复性好等优点。     

人重组粒细胞集落刺激因子突变体的构建、表达和其体内外生物学活性研究

目的为提高人重组粒细胞集落刺激因子（ｈｕｍａｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ,ｒｈＧ－ＣＳＦ）的稳定性和活性,对ｒｈＧ－ＣＳＦ进行改造和体内、外活性研究。方法利用定向点突变技术,将人重组粒细胞集落刺激因子第１７位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列,ＤＮＡ序列分析证明后,在大肠杆菌中表达突变蛋白。利用Ｇ－ＣＳＦ依赖细胞株ＮＦＳ－６０,对在不同温度及在人血浆中保存的Ｇ－ＣＳＦ蛋白（Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７）和野生型的Ｇ－ＣＳＦ进行活性测定。腹腔注射后小鼠外周血白细胞计数检测其体内生物学活性。结果ＤＮＡ序列分析表明１７位半胱氨酸突变为丙氨酸,并在大肠杆菌中表达成功Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７。纯化的突变蛋白对ＮＦＳ－６０细胞具有刺激活性;与野生型Ｇ－ＣＳＦ相比,在各种温度储存的突变蛋白保留更高的活性,与人血浆孵育５０小时后突变蛋白仍保持活性;小鼠一次性体内注射突变蛋白后外周血白细胞数明显高于野生型Ｇ－ＣＳＦ。结论Ｇ－ＣＳＦ突变体（Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７）较野生型的Ｇ－ＣＳＦ具有更高的体外稳定性和体内造血刺激活性。     

人G—CSF新型高效表达克隆的构建与鉴定

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术，自人的脾脏单核细胞ｍＲＮＡ扩增出人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）结构基因，ＤＮＡ序列分析表明与天然ｈＧ－ＣＳＦ一致，将其克隆于表达载体ｐＪＧＷ１中，在大肠杆菌中进行诱导表达研究。结果表明：ｈＧ－ＣＳＦ重组蛋白表达率在２５％以上，并具有与天然ｈＧ－ＣＳＦ一致的生物学活性。     

一种N端缺失的rhGM-CSF(7～127)在大肠杆菌中的表达与调控

在ｈＧＭ－ＣＳＦ结构与功能研究的基础之上，通过应用ＰＣＲ介导的缺失与突变和基因重组等技术，构建了表达ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）的三种原核表达载体ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＧＡ，ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＡＡ和ｐＢＶ２２０／ＧＭ－３′ＵＴＲ。在三种载体内，ｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）ｃＤＮＡ的５′端均缺失６个氨基酸，３′端则分别为天然终止密码ＴＧＡ，突变终止密码ＴＡＡ和ＴＧＡ加３′ＵＴＲ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明三种载体表达ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）的水平分别为２１％，１８．８％和２５％。经过用ＰＣｇｅｎｅ软件和Ｚｕｌｃｅｒ算法分析ｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）－３′ＵＴＲｍＲＮＡ的二级结构，表明３′ＵＴＲ在终止密码ＴＧＡ附近形成两个茎－环结构，它可能与ｐＢＶ２２０／ＧＭ－３′ＵＴＲ载体高表达ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）有关。表达产物ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）经弱阴离子ＤＥＡＥ交换层析纯化后，纯度达到９２％，比活性为８×１０７Ｕ／ｍｇ。     

肺癌癌基因产物C－FOS、C－JUN、Phosphotyrosine表达的研究

对９７例肺癌进行了癌基因产物Ｃ－ＦＯＳ、Ｃ－ＪＵＮ、Ｐｈｏｓｐｈｏｔｙｒｏｓｉｎｅ（以下称Ｐ－Ｔｙｒ）的免疫组织化学研究。结果表明：其表达率为Ｃ－ＦＯＳ＜ＣＪＵＮ＜ｐ－Ｔｙｒ。上述三者均可在核、核膜及细胞质内表达。正常支气管、肺组织Ｃ－ＦＯＳ表达分别占３．８％及１．６％。而在肺癌、Ｃ－ＦＯＳ表达占６０％。Ｃ＋ＦＯＳ及Ｃ－ＪＵＮ同时阳性的５４例（５６％），Ｃ－ＦＯＳ阴性，而Ｃ－ＪＵＮ阳性的３１例（３２％）。Ｃ－ＦＯＳ阳性、Ｃ－ＪＵＮ阴性的４例（４％），两者同时阴性的８例（８％）。虽然Ｃ－ＦＯＳ与Ｃ－ＪＵＮ通过拉锁构造形成杂二聚体，但Ｃ－ＦＯＳ也可单独表达。     

测定重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性的MTT比色法

用粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）的依赖细胞株（ＮＦＳ－６０细胞株）为靶细胞，以ＭＴＴ比色法测定重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）的生物学活性，确定了在ＭＴＴ比色法中ＮＦＳ－６０细胞浓度为３×１０４／孔以及ｒｈＧ－ＣＳＦ浓度与ＮＦＳ－６０细胞有量效关系的范围为２ｎｇ／ｍｌ～７．８ｐｇ／ｍｌ，对几种溶解液进行了比较，选定１０％ＳＤＳ－０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ作为ＭＴＴ结晶的溶解液，对ＭＴＴ比色法的特异性、精密度和方法回收率进行了研究。     

石家庄地区新生儿尿巨细胞病毒感染的临床分析

采用聚合的酶链反应（ＰＣＲ）检测１０５例出生后３日内新生儿尿中巨细胞病毒,同时应用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测脐血特异性ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体。结果,新生儿尿液ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者３３例,阳性率３１．４％,脐血ＩｇＧ抗体阳性率１００％,ＩｇＭ挤体阳性率１．９％。结果表明ＰＣＲ技术检测新生儿尿液ＨＣＭＶ－ＤＮＡ有利于ＨＣＭＶ先天性感染的早期诊断,早预防、早阻断。有利于更好地实行计划生育,有利于优生     

结核性淋巴结炎的组织细胞反应性增性变型

应用结核杆菌ＤＮＡ１２３ｂｐ特异性序列片段为靶序列的多聚酶链反应（Ｍ．ＴＢ－ＰＣＲ）技术，ＢＣＧ免疫组化（ＢＣＧ－ＩＨＣ）技术和抗酸染色（ＡＦ）方法，对３８例呈现组织细胞反应性增生－碎屑样坏死－嗜中性白细胞渗出病变的淋巴结石蜡包埋组织进行了分支杆菌／结核杆菌的回顾性检测。三种方法的综合阳性率为５２．６％（２０／３８例）。ＡＦ，ＢＣＧ－ＩＨＣ和Ｍ．ＴＢ－ＰＣＲ物各自性率分别为０．８％，２６．３％和５     

应用PCR法检测新生儿肝炎综合征患者HCMV－DNA

应用ＰＣＲ法检测新生儿肝炎综合征患者ＨＣＭＶ－ＤＮＡ长春市儿童医院应用ＰＣＲ检测３０例临床诊断为新生儿肝炎综合征（ＮＨＳ）患者和１４例正常新生儿尿中人巨细胞病毒ＤＮＡ（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）。结果阳性率分别为６６．７％和１４．２９％，两者差异显著。ＨＣＭ...     

肺癌癌基因产物C—FOS,C—JUN,Phosphotyrosine表达…

对９７例肺癌进行了癌基因产物Ｃ－ＦＯＳ、Ｃ－ＪＵＮ、Ｐｈｏｓｐｈｏｔｙｒｏｓｉｎｅ的免疫组织化学研究。结果表明：其表达率为Ｃ－ＦＯＳ＜Ｃ－ＪＵＮ＜Ｐ－Ｔｙｒ．上述三者均可在核、核膜及细胞质内表达。正常支气管、肺组织Ｃ－ＦＯＳ表达分别占３．８％及１．６％。而在肺癌、Ｃ－ＦＯＳ表达占６０％。Ｃ－ＦＯＳ及Ｃ－ＪＵＮ同时阳性的５４例（５６％），Ｃ－ＦＯＳ阴性，而Ｃ－ＪＵＮ阳性的３１例（３２％）。Ｃ－ＦＯＳ     

培养的大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体的基因表达及调节

在培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常血压ＷＫＹ大鼠的主动动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）模型，应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，分别检测ＡＳＭＣ中碱性成纤维细胞生长因子（ｈＦＧＦ）和血管紧张素Ⅱ（ＡＮＧⅡ）Ｉ型受体（ＡＴ１Ｒ）的基因表达。结果表明：ＳＨＲＡＳＭＣ中ｈＦＧＦ基因的基础表达和ＡＮＧⅡ刺激后的表达水平元旦明显高于ＷＫＹ大鼠；ｂＦＧＦ（１０ｎｍ／ｍｌ）对两种