羟基喜树碱对人肝癌BEL-7402细胞毒性的评价

目的 评价羟基喜树碱对人肝癌BEL-7402细胞的细胞毒性。方法 将羟基喜树碱以不同终浓度作用于人肝癌BEL-7402细胞。用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜检测凋亡细胞的形态改变并记数凋亡指数,流式细胞仪定量分析细胞凋亡率。结果 羟基喜树碱以剂量依赖的方式抑制BEL-7402细胞的生长;荧光显微镜和透射电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形成等凋亡特征性的形态学改变;流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰;以浓度为12.5、25、50、100、200μg/ml的羟基喜树碱处理48 h后,细胞凋亡率分别为(14.68±2.17)％、(21.24±3.76)％、 (31.54±4.58)％、(40.21±5.26)％和(48.35±6.70)％,与对照组(2.09±0.42)％比较差异均有极显著性意义(P<0.01)。结论 羟基喜树碱既能抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖,又能诱导其凋亡,显示出较强的细胞毒性。     

重组人TFAR19蛋白对羟基喜树碱诱导人7721肝癌细胞凋亡 …

目的：探讨新的人凋亡相关基因产物ＴＦＡＲ１９蛋白对羟基喜树碱诱导人７７２１肝癌细胞凋亡的增敏作用。方法：将不同浓度的ｒｈＴＦＡＲ１９蛋白单独或与羟基喜树碱（ｈｙｄｒｏｘｙ ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ,ＨＣＰＴ）同时加入处于指数生长期的７７２１肝癌细胞中共同培养,通过透射电镜、ＤＮＡ片段化分析,ＰＩ及Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ标记进行流式细胞仪分析,观察细胞的形态学和细胞凋亡的变化。结果：不同质量浓度的ｒｈＴ     

10羟基喜树碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其机制的初步研究

目的 :研究 10 羟基喜树碱 (10 HCPT)诱导人肝癌细胞凋亡的作用。方法 :用 10 HCPT以不同终浓度、不同作用时间诱导SMMC 772 1人肝癌细胞。分别以倒置相差显微镜、电镜、荧光显微镜观察其形态学改变 ,提取细胞内小分子DNA进行琼脂糖凝胶电泳 ,并对这些细胞的P5 3蛋白进行免疫组织化学染色。结果 :当 10 HCPT终浓度 >2 .0 μmol·L-1时 ,部分细胞可见典型的凋亡特征 :核固缩、凋亡小体、梯状电泳带。随着 10 HCPT浓度或作用时间增加 ,凋亡率逐渐升高。各组细胞P5 3蛋白免疫组化染色均为阴性。结论 :10 HCPT可诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,其作用效果呈剂量、时间依赖性     

小白菊内酯诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

小白菊内酯属于倍半萜内酯,是墨西哥、印度药用植物的活性成分,也是欧洲小白菊这一常用草药的活性成分[1],主要用于治疗偏头痛、炎症和各种肿瘤。20世纪90年代末,中国学者从中国特有药用植物观光木树皮中分离得到这一抗肿瘤活性物质,并且经过体外抑瘤实验证实,小白菊内酯(10.0μg/mL)对人肝癌细胞的体外抑制率为67.17%,可见其对人肝癌细胞抑制作用比较明显[2]。近年来,随着医学技术和分子生物学技术的发展及各种检测手段的出现,发现小白菊内酯可抑制NF-κB的激活[3,4],诱导细胞凋亡[1],产生细胞毒作用[5,6]。但有关从分子生物学水平研究小…     

二甲基亚砜诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的研究

目的 :研究二甲基亚砜 (DMSO)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法 :用不同浓度的DMSO处理体外培养的人肝癌细胞BEL 74 0 2 ,应用普通光镜、荧光显微镜、MTT分析方法和流式细胞技术 (FCM )检测肝癌细胞凋亡的形态学变化、细胞存活率、凋亡百分率和细胞周期分布的变化。结果 :DMSO诱导BEL 74 0 2细胞核DNA凝缩和核片段化 ,最后形成凋亡小体 ;随着DMSO浓度的增加和处理时间的延长 ,细胞存活率明显下降 ,其IC50 为 1.9% ;2 %的DMSO处理细胞 12h ,凋亡率达 17.2 1% ,同时S期细胞明显增加 ,G2 M期细胞明显下降。结论 :DMSO可诱导人肝癌细胞凋亡 ,并使细胞受阻于S期而进入凋亡程序。     

10-羟基喜树碱诱导人肝癌细胞SMMC-772l凋亡及其机制的初步研究

目的研究10-羟基喜树碱(10-HCPT)诱导人肝癌细胞凋亡的作用。方法用10-HCPT以不同终浓度、不同作用时间诱导SMMC-721人肝癌细胞。分别以倒置相差显微镜、电镜、荧光显微镜观察其形态学改变,提取细胞内小分子DNA进行琼脂糖凝胶电泳,并对这些细胞的P53蛋白进行免疫组织化学染色。结果当10-HCP终浓度>2.0μmol·L-1时,部分细胞可见典型的凋亡特征核固缩、凋亡小体、梯状电泳带。随着10-HCPT浓度或作用时间增加,凋亡率逐渐升高。各组细胞P53蛋白免疫组化染色均为阴性。结论10-HCPT可诱导SMMCC-7721细胞凋亡,其作用效果呈剂量、时间依赖性。     

羟基喜树碱诱导非小细胞肺癌细胞株凋亡实验研究

目的 应用流式细胞仪观察羟基喜树碱对非小细胞肺癌细胞株体外生长的影响,了解羟基喜树碱对非小细胞肺癌细胞株的效应,为临床治疗非小细胞肺癌提供理论依据.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,测定HCPT对非小细胞肺癌细胞株EBC-1和A-549的生长及集落形成的抑制作用,并绘制量-效曲线.流式细胞仪检测羟基喜树碱诱导非小细胞肺癌细胞株凋亡.结果 羟基喜树碱对非小细胞肺癌细胞株的集落形成抑制试验明显呈剂量依赖性,HCPT和DDP对EBC-1(鳞状上皮)和A549(腺癌)的24h的50%抑制浓度(IC50)分别为67ng/L和154ng/L;4 950ng/L和58 101ng/L,明显高于顺铂(P＜0.01),羟基喜树碱可诱导EBC-1和A549细胞株发生S G2/M期阻滞,HCPT引起凋亡,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 羟基喜树碱可显著诱导非小细胞肺癌细胞株发生凋亡,对EBC-1和A549细胞株体外增殖有明显抑制作用.     

羟基喜树碱通过线粒体途径诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的观察

目的:研究羟基喜树碱是否可通过线粒体途径诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡. 方法: 将不同浓度的羟基喜树碱作用于肝癌细胞SMMC-7721,用MTT法检测细胞增殖,光镜观察细胞形态;用荧光染料MitocaptureTM检测线粒体跨膜电位、用Western blot法检测细胞色素C从线粒体的释放;用Annexin Ⅴ-FITC,hoechst法及电镜检测细胞的凋亡状况. 结果:羟基喜树碱对肝癌细胞SMMC-7721的增殖有明显的抑制作用,IC50约是80 mg/L. 当用80 mg/L羟基喜树碱作用不同时间后:线粒体膜跨电位下降并伴随有细胞色素C从线粒体至细胞质的释放;细胞膜的磷脂酰丝氨酸外翻;细胞核染色质固缩,呈致密浓染的凋亡状态. 结论:羟基喜树碱通过线粒体途径引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一.     

羟基喜树碱诱导人T24膀胱癌细胞凋亡的研究

目的研究羟基喜树碱对膀胱癌细胞的作用,探讨其抑制膀胱癌的机制。方法将不同浓度的羟基喜树碱作用于人Ｔ２４膀胱癌细胞,利用流式细胞仪、透射电子显微镜、荧光染色技术及ＤＮＡ分析,对所作用的Ｔ２４细胞进行动态分析以及细胞形态变化的观察。结果０．００５ｍｇ／Ｌ的羟基喜树碱,主要是通过阻止Ｔ２４细胞由Ｓ期进入Ｇ２／Ｍ期,并不诱导人Ｔ２４膀胱癌细胞的凋亡;０．０１～０．１０ｍｇ／Ｌ时,凋亡的细胞数随着其浓度增加及作用时间的延长而增加。羟基喜树碱能够诱导人Ｔ２４膀胱癌细胞的凋亡。结论羟基喜树碱作用机制之一是诱导人Ｔ２４膀胱癌细胞的凋亡。     

羟基喜树碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨羟基喜树碱在体外对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,为乳腺癌的临床用药提供实验依据。方法：将不同浓度（10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）的羟基喜树碱作用于人乳腺癌MCF-7细胞48 h,并设不加羟基喜树碱溶液的MCF-7细胞作为对照组,用MTT法测定MCF-7细胞的增殖情况,用Hoechst33258染色检测MCF-7细胞的凋亡情况,以RT-PCR检测羟基喜树碱对MCF-7细胞Casepase-3 mRNA表达的影响。结果：与对照组比较,50μmol/L、100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱对细胞增殖均有抑制作用（P〈0.05、P〈0.01）,尤以200μmol/L的抑制作用最明显,其抑制率呈浓度依赖性增加。荧光显微镜观察显示,100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱处理组中可见典型的凋亡形态学改变。与对照组比较,各羟基喜树碱处理组中MCF-7细胞Caspase-3 mRNA表达水平均升高（P〈0.05、P〈0.01）,并呈浓度依赖性升高趋势。结论：羟基喜树碱可在体外抑制MCF-7细胞增殖,并通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡,达到抑制肿瘤细胞生长的作用。     

根皮素诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的 研究根皮素诱导肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡.方法 MTT法测定BEL-7402细胞毒性,荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化.发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性变化.结果 根皮素对BEL-7402细胞IC50在89.23 μg/mL.BEL-7402细胞生长曲线表明,根皮素浓度增高,生长率明显下降.细胞凋亡可在40～160 μg/mL根皮素处理后24 h出现.凋亡细胞主要表现为核染色质固缩,荧光染色增强.根皮素阻断细胞于G1期,线粒体膜电位降低.Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9被激活,呈时间依赖性改变.根皮素处理BEL-7402细胞12 h Caspase-9活性最高,而Caspase-6活性在18 h达峰值,Caspase-3活性峰值时间在24h后.结论 根皮素可以诱导BEL-7402细胞发生凋亡,途径可能是通过线粒体旁路.     

人参皂苷肠道代谢物诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的探讨一种新的人参稀有皂苷20-O-(β-D-吡喃葡萄糖)-20(S)-原人参二醇皂苷(IH-901)对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡作用。方法以0、6.25、12.5、25、50、75、100μmol/L的IH-901作用于体外培养的BEL-7402细胞,通过MTT法检测IH-901对细胞生长的抑制作用,相差显微镜观察细胞形态变化,AO/EB的荧光核染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果MTT实验显示IH-901抑制BEL-7402细胞的生长,呈时间及浓度依赖的方式;显微镜下观察到典型的凋亡形态变化和生化特征:细胞固缩,核染色质凝聚,出现凋亡小体;AO/EB的荧光核染色后,观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在G0/G1期。结论IH-901能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制人肝癌BEL-7402细胞的生长,稀有人参皂苷IH-901可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

三氧化二砷联合羟基喜树碱治疗晚期原发性肝癌的临床观察

目的探讨三氧化二砷(AS2O3)联合羟基喜树碱(HCPT)治疗晚期原发性肝癌的近期疗效和毒副反应。方法收治34例患者,AS2O3 6mg/m2静脉滴注d1～5;HCPT 6mg/m2静脉滴注d6～10,化疗周期每21d重复。根据WHO标准评价疗效和毒副反应。结果有效率28.1%,毒副反应常见的是骨髓抑制,发生率为31.3%。结论AS2O3联合HCPT治疗晚期原发性肝癌毒副作用小,疗效较高,值得临床上进一步研究和推广应用。     

EGF-Linker-TCS融合蛋白诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的表达和纯化由人表皮生长因子、柔性肽和天花粉蛋白组成的融合蛋白(EGF-Linker-TCS),检测其对肿瘤细胞的杀伤能力并探讨其在肿瘤治疗中的可能作用。方法诱导、表达EGF-Linker-TCS嵌合毒素,使用HiTrap Chelating亲和层析纯化,采用生长曲线、结晶紫法、电镜和流式细胞仪等技术研究EGF-Linker-TCS对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。结果EGF-Linker-TCS纯度达到95%,细胞活性检测证明EGF-Linker-TCS能够明显抑制肝癌细胞的生长和集落形成,0.1μg/mlEGF-Linker-TCS和1μg/mlEGF-Linker-TCS作用于肝癌BEL-7402细胞,集落形成率分别为(15.17±1.19)%和(7.83±1.32)%,明显低于对照组(31.23±3.98)%(P<0.05)。EGF-Linker-TCS对BEL-7402细胞有较强的细胞毒作用,IC50为10.98μg/ml。结论EGF-Linker-TCS嵌合毒素对肝癌BEL-7402细胞有增殖抑制和诱导细胞凋亡作用,具有治疗肝癌的潜在价值。     

绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞株BEL-7402的杀伤效应

目的探索绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402的杀伤效应。方法采用MTT法检测不同浓度的绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402增殖的作用,同时利用电子显微镜、透射电镜观察细胞BEL-7402的形态学变化。结果MTT检测表明：绿脓杆菌制剂为10×107/mL、5×107/mL、2.5×107/mL时对肝癌细胞生长杀伤作用与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）;电子显微镜、透射电镜观察发现肝癌细胞BEL-7402于12、24 h出现凋亡形态学改变,40 h形态学表现为凋亡与坏死并存。结论绿脓杆菌制剂对肝癌细胞BEL-7402生长有抑制作用,诱导细胞凋亡及坏死可能是主要作用机制。     

人肝癌细胞系BEL-7402的放射敏感性

目的　评估人肝癌细胞系ＢＥＬ－７４０２的放射敏感性。方法　体外培养人肝癌细胞系ＢＥＬ－７４０２,应用集落形成法测　　　　定经０～１０Ｇｙ　６　ＭＶ　Ｘ线照射后细胞的存活率并计算细胞放射敏感性参数。结果　　ＢＥＬ－７４０２的Ｄ０为　１．６　Ｇｙ,Ｄｑ为　１．３　　　　Ｇｙ,ｎ为２．４,ＳＦ２为（０．６３±０．０５）Ｇｙ。结论ＢＥＬ－７４０２具有较高的放射敏感性。     

亚砷酸体外对人肝癌细胞株BEL-7402影响的初步研究

目的 体外培养人肝癌细胞株BEL－7402,从多个角度探讨三氧化二砷（As2O3）的抗肿瘤作用及其机制。方法 应用倒置相差显微镜、电子显微镜、透谢电镜、流式细胞仪,分别对不同浓度加药组及对照组BEL－7402细胞的存活。形态学改变,细胞DNA含量的分布进行了观察和测定。结果 0.5、1、2μmol/L As2O3均能抑制人肝癌细胞株BEL－7402细胞的生长增殖。流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0／G1期细胞减少,S期细胞增多;电镜下,对照组细胞核质比大、核大、核膜有明显切迹,0.5μmol/L As2O3组细胞核质比减少、核变圆、胞浆内出现分化良好的细胞器, 0.5、1、2μmol/L As2O3组均可见细胞膜完整、核固缩、凋亡小体形成。结论 三氧化二砷不仅抑制人肝癌细胞增殖,而且诱导细胞凋亡。     

冬凌草甲素抑制人肝癌BEL-7402细胞生长及诱导细胞凋亡的机制研究

目的探讨冬凌草甲素体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制作用及诱导细胞凋亡作用机制。方法以8、16、24、32μmol/L冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法和DNA凝胶电泳观察细胞凋亡时的形态学变化。应用Westernblotting观察caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果冬凌草甲素可显著地抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用60h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时Westernblotting显示32000的caspase-3酶原蛋白的激活,出现20000的亚单位,凋亡过程中伴有Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论冬凌草甲素能通过降低Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长;冬凌草甲素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。