小檗碱和环孢素联用对大鼠肝脏肿瘤及免疫相关基因表达影响的基因芯片研究

目的:研究小檗碱和环孢素联用时大鼠肝组织中肿瘤及免疫相关基因表达谱的影响。方法:大鼠予以盐酸小檗碱ig 6 d,最后一天予以环孢素单次ig给药。取肝脏提取总RNA。用Cy3和Cy5两种荧光物质分别标记阴性时照组,环孢素组和环孢素 盐酸小檗碱组肝脏mRNA,制备成探针与表达谱芯片进行杂交。结果:在被检测的4 096个基因中,环孢素组与肿瘤及免疫相关的差异表达基因共3个,均为表达下调。环孢素 盐酸小檗碱组与肿瘤及免疫相关的盖异表达基因共14个,其中表达上调的相关基因5个,表达下调的相关基因9个。结论:小檗碱和环孢素联用可影响大鼠肝组织中肿瘤及免疫相关基因的表达。     

盐酸小檗碱致大鼠肝脏代谢相关基因表达变化的基因芯片研究

目的　研究小檗碱对大鼠肝脏基因表达谱的影响。方法　大鼠予以盐酸小檗碱灌胃 6d ,摘取肝脏提取总RNA。用Cy3和Cy5两种荧光物质分别标记阴性对照组和盐酸小檗碱组肝组织cDNA ,制备成探针与表达谱芯片进行杂交 ,获得的荧光信号图像用计算机扫描后进行数据分析 ,计算每点的Cy5和Cy3信号强度比值。结果　在被检测的 4 0 96个基因中 ,盐酸小檗碱组差异表达基因 2 36个 ,与代谢相关的差异表达基因共 32个 ,其中表达上调的代谢相关基因 8个 ,包括大鼠环核苷酸磷酸二酯酶、异柠檬酸脱氢酶 3、心肌黄酶和葡萄糖 6 磷酸酶等。表达下调的代谢相关基因 2 4个 ,包括尿苷二磷酸 葡糖醛酰转移酶、细胞色素P4 5 0 2E1、谷胱甘肽S 转移酶 1、16 α 碳腈孕烯醇酮诱导的细胞色素P4 5 0酶和S 腺苷 L 甲硫氨酸脱羧酶等。结论　小檗碱的降血糖、抗肿瘤作用以及与其他药物的相互作用可能与一系列代谢相关基因的表达变化有关     

小檗碱对糖尿病肾病大鼠nephrin、podocin和α3β1整合素表达的影响

目的观察小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞相关蛋白nephrin、podocin和α3β1整合素蛋白表达的影响,探讨小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及部分机制。方法采用高糖高脂饲料喂养6周,联合低剂量链脲佐菌素诱导糖尿病肾病大鼠模型。随机分为正常对照组、模型组、3个不同剂量(50、100和200 mg·kg-1)小檗碱给药组和依那普利阳性药对照组(1 mg·kg-1)。分别采用免疫组织化学法,油镜(×1 000倍)和高倍镜(×400倍)和Western blot法,观察和检测肾脏足细胞相关蛋白nephrin、podocin及α3β1整合素的分布和表达水平。结果足细胞相关蛋白nephrin、podocin及α3β1整合素蛋白主要分布于足细胞,但分布位置略有差异;与正常对照组相比,模型组大鼠的足细胞相关蛋白nephrin、podocin及α3β1整合素的表达水平明显降低;与模型组相比,小檗碱(100和200 mg·kg-1)给药组明显改善糖尿病肾病大鼠肾脏形态学异常,上调足细胞相关蛋白nephrin、podocin及α3β1整合素的表达水平。结论小檗碱可以缓解糖尿病肾病大鼠肾脏病理异常改变及蛋白尿的产生,这可能与其上调足细胞相关蛋白nephrin、podocin及整合素α3β1的表达相关。     

盐酸小檗碱对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶含量及活性的影响

目的考察盐酸小檗碱对大鼠肝微粒体的蛋白含量、CYP450酶总量和主要CYP450酶亚型(CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C19)活性的影响。方法以溶剂为空白对照灌胃给予盐酸小檗碱250 mg/(kg·d),连续7 d,测定其肝微粒体蛋白含量、CYP450蛋白含量以及CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C19活性。结果与空白对照组比较,盐酸小檗碱给药组大鼠肝微粒体蛋白含量及肝微粒体CYP450含量无明显差异(P>0.05)。盐酸小檗碱给药后,给药组大鼠的平均CYP3A4活性是空白对照组的1/2;而两组之间CYP1A2、CYP2D6和CYP2C19的活性相当。结论盐酸小檗碱对大鼠CYP3A4活性有一定抑制作用,对CYP1A2、CYP2D6和CYP2C19的活性没有影响。     

盐酸小檗碱对人黑色素瘤A375-S2细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

摘要：目的:探讨盐酸小檗碱对人黑色素瘤A375-S2细胞增殖、凋亡以及核因子κB（NF-κB）通路相关蛋白表达的影响。方法:体外培养A375-S2细胞,实验分为对照组（不添加任何药物处理）、盐酸小檗碱高、中、低剂量组(25,50,100μmol·L-1)、阳性对照组(顺铂,0.01 mmol·L-1)。采用CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;免疫印迹法（WB）检测细胞中NF-κB的抑制蛋白α（IκB-α）、p-NF-κB、NF-κB、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase3）蛋白表达情况。结果:与对照组相比,盐酸小檗碱不同剂量组A375-S2细胞增殖抑制率、凋亡率、G1期DNA量、IκB-α、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达均显著升高,p-NF-κB、Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.05）,且盐酸小檗碱高剂量组、阳性对照组与盐酸小檗碱中、低剂量组比较,差异有统计学意义（P<0.05）,高剂量组与阳性对照组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:盐酸小檗碱可明显抑制人黑色素瘤A375-S2细胞增殖并诱导细胞凋亡,其可能与引起细胞周期G1期阻滞及抑制NF-κB信号通路激活有关。     

细胞色素P450 CYP4A的组织和细胞表达特异性

目的确定细胞色素P450 CYP4A在组织和细胞水平表达是否具有特异性。方法采用Western印迹法分析细胞色素P450 CYP4A蛋白在培养的牛肺动脉内皮细胞、平滑肌细胞及牛肾动脉内皮细胞的表达;采用原位杂交法检测细胞色素P450 CYP4A mRNA在大鼠肺支气管内皮和血管内皮细胞的表达;以14C标记的花生四烯酸(AA)作为反应底物,用荧光高效液相色谱法(HPLC)通过检测牛肺动脉内皮细胞催化外源性AA生成20-羟基廿碳四烯酸(20-HETE)的反应,确定肺动脉内皮细胞是否存在细胞色素P450 CYP4A;将肺动脉内皮细胞破碎并用乙酸乙酯萃取,用荧光物质标记萃取物,用荧光HPLC检测内源性20-HETE,从代谢产物水平确定细胞色素P450 CYP4A的功能蛋白质表达。结果①Western印迹法分析结果表明,细胞色素P450 CYP4A蛋白在牛肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞中均有表达,在肺动脉内皮细胞中的表达明显高于平滑肌细胞(积分吸光度值分别为10182±279,5249±167);在牛肾动脉内皮细胞中也有表达,但明显低于肺动脉内皮细胞的表达(积分吸光度值分别为12173±171,17863±207)。②原位杂交结果显示,细胞色素P450 CYP4A mRNA可在大鼠肺支气管内皮细胞和大鼠肺血管内皮均有表达。③用HPLC在牛肺动脉内皮细胞中检测到20-HETE,表明细胞色素P450 CYP4A在肺动脉内皮细胞存在。结论细胞色素P450 CYP4A有其特定的组织和细胞分布,在牛和大鼠肺脏动脉内皮细胞有高表达。     

心血管药物速效救心丸和通心络胶囊对大鼠细胞色素P450酶的影响

目的:观察速效救心丸和通心络胶囊对大鼠药物代谢酶细胞色素P450(CYP450)的影响。方法:给予大鼠试验药物后制备肝及小肠微粒体,CO还原差示光谱法测定肝微粒体CYP450含量,蛋白免疫印迹法检测肝微粒体中CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1、CYP3A和肠微粒体中CYP3A蛋白的表达量。结果:速效救心丸组和通心络胶囊组与空白对照组比较,大鼠肝脏CYP450含量无显著变化(P>0.05);但是West-ern blotting实验对肝脏和肠道中多种CYP450酶表达量测定的结果显示,速效救心丸可诱导肝脏CYP1A2表达,但抑制肝脏CYP2C11和肠道CYP3A表达(P<0.05);通心络胶囊可诱导大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1蛋白表达(P<0.05)。结论:速效救心丸和通心络胶囊对大鼠肝脏CYP450酶总量无影响,但是,在蛋白质水平对特定亚型蛋白的表达量有影响,由此可能引发的药物相互作用不容忽视。     

细胞色素P450基因多态性对药物疗效和安全性的影响

目的：根据细胞色素CYP450基因多态性的分子调控、种族差异及基因多态性对药物疗效和安全性的影响等进行综述。方法：对相关细胞色素P450氧化酶的文献报道进行综合分析与评论。结果：细胞色素P450氧化酶是药物代谢的主要酶系统。人肝脏有20多个CYP450亚家族．细胞色素P450氧化酶的基因具有遗传多态性,该遗传多态性具有明显种族差异。结论：细胞色素P450氧化酶影响药物代谢动力学、药效学和临床使用安全性。     

双环醇对刀豆蛋白A引起肝损伤小鼠肝脏基因表达谱的影响

本实验研究双环醇对刀豆蛋白A(concanavalin A，Con A)静脉注射引起免疫性肝损伤小鼠肝脏基因表达谱变化的影响，探讨双环醇肝保护作用的分子机制。小鼠于注射Con A 26.5 mg·kg^-1前24、 8及1 h分别口服双环醇250 mg·kg^-1。测定血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)及天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)水平，提取小鼠肝脏总RNA，经反转录用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP分别标记制备cDNA探针。将cDNA探针与BiostarM-40S小鼠基因表达谱芯片进行杂交，经ScanArray 4000扫描仪扫描芯片并用GenePix Pro 3.0软件进行分析。双环醇可显著抑制刀豆蛋白A引起的血清ALT和AST升高。与刀豆蛋白A对照组相比，双环醇给药组有287条基因发生差异表达，占芯片基因总数的7.00%。其中166条基因表达量明显下调，121条基因表达量明显上调。表达变化的基因主要涉及代谢与细胞色素P450、应激与炎症凋亡、细胞周期调控、信号传导以及再生等相关功能。双环醇对刀豆蛋白A引起小鼠肝损伤肝脏基因表达谱变化具有一定的影响，此结果对今后深入研究双环醇的肝脏保护作用特点和临床应用具有重要意义。     

抗结核病药物利福平致大鼠肝脏损伤的基因表达谱分析

目的:利用基因芯片技术研究抗结核病药物利福平对大鼠肝脏毒性效应的分子机制。方法:20只Wistar大鼠随机分为对照组和利福平组,每组10只,分别灌胃给予利福平(100 mg.kg-1)和等体积生理盐水,连续14 d。以cDNA微阵列技术研究利福平对大鼠肝脏基因表达谱的影响,根据差异表达基因的生物学功能探讨利福平对大鼠肝脏的毒性机制。结果:利福平组与对照组杂交的表达差异基因共19个,其中上调基因11个,下调基因8个,功能已知基因18条,主要包括一些与肝药酶活性、氧化应激和特异性免疫等相关的基因。结论:利福平可导致大鼠肝脏基因表达谱明显变化。该研究对阐明利福平的肝损伤机制具有十分重要的作用。     

基因芯片技术研究Z24对人HepG2细胞基因表达的影响

目的:利用芯片技术观察Z24对人HepG2细胞基因表达的影响,以探讨其毒性作用的分子机制.方法:不同浓度处理培养的HepG2细胞,H-E染色观察细胞形态;抽提细胞RNA,利用荧光标记ddUTP逆转录制备cDNA探针,与毒理表达谱基因芯片杂交,并对Cy3,Cy5荧光信号做扫描分析.结果:Z24处理实验组细胞呈现凋亡形态;芯片扫描显示在IC20浓度情况下,Z24作用HepG2细胞有15个基因发生显著的变化,其中细胞凋亡通路有关的基因TNFRSF5发生明显上调,与肝功能有关的基因(AKR1C2和INSIG1)发生明显的下调.随Z24浓度的增加,发生改变的基因数增加到244个,其中109个基因发生明显的上调,135个基因发生明显的下调,下调的基因多与细胞增殖调控功能、氨基酸、能量和脂肪代谢有关;而细胞凋亡通路中几个重要关键蛋白(DFFB,CASP6,DR4)的基因明显上调,并且与肝脏有关的基因(INSIG1,PHKA2,HPX)也发生了明显的改变.结论:Z24可以诱导HepG2细胞凋亡,并可能是其产生毒性的重要机制之一;毒性作用的靶器官可能是肝脏.     

小檗碱对胆固醇代谢及肝脏Insig-2基因表达的影响

目的研究小檗碱(berberine,Ber)对高脂模型大鼠胆固醇代谢的影响,并探讨其可能的机制是否与胰岛素诱导基因-2(insulin-induced gene 2,Insig-2)基因表达有关。方法♂清洁级SD大鼠40只,随机分为普食组(Normal diet,ND)、高脂饲料组(High fat diet,HFD)、高脂饲料+洛伐他汀组(Lovastatin diet,LD)、高脂饲料+低剂量小檗碱干预组(Berlow dose diet,BLD)、高脂饲料+高剂量小檗碱干预组(Berhigh dose diet,BHD)。Ber干预18 wk后测定大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等血生化指标的含量。RT-PCR和Western blot技术检测各组大鼠肝脏Insig-2 mRNA和蛋白表达变化。结果Ber干预呈剂量依赖性降低高脂模型大鼠血清TC和LDL-C水平;低剂量Ber明显上调高脂血症大鼠肝脏Insig-2基因mRNA和蛋白表达水平,而高剂量Ber则反馈性下调Insig-2基因mRNA和蛋白的表达。结论Ber干预具有明显的调血脂作用,其机制可能是通过上调肝脏Insig-2基因表达,从而抑制肝脏中胆固醇的合成代谢。     

骨质疏松hub基因筛选验证及互作miRNA预测

目的 筛选老年性骨质疏松症hub基因及其互作的miRNA。方法 从GEO数据库下载GSE35956基因芯片数据集,利用R语言筛选骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞中的差异表达基因（Degs）。利用DAVID数据库对Degs进行GO富集和KEGG通路分析。采用String数据库和Cytoscape软件分析蛋白互作网络,筛选hub基因。通过Targetscan数据库预测与hub基因存在互作关系的miRNA,并通过funrich数据库对预测出的miRNA进行富集分析。提取并培养3～4月龄（青年组）和18～20月龄（老年组）C57BL/6小鼠的骨髓间充质干细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)验证2组小鼠的骨髓间充质干细胞中hub基因表达情况。结果 骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞中共鉴定出982个上调的Degs和99个下调的Degs。Degs主要富集到质膜黏附分子介导的同型细胞黏附和钙离子结合等生物过程,主要参与了神经活性配体-受体相互作用信号通路。PPI互作网络分析筛选出8个核心基因：瘦素（LEP）、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（LCK）、WT1转录因子（WT1）、SRY-Box转录因子10(SO...     

三氧化二砷诱导NB4细胞的基因表达谱改变

目的：研究三氧化二砷在诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化过程中基因表达谱的改变．方法：通过逆转录方法将经过及未经过三氧化二砷处理的NB4细胞mRNA制备成两种探针,应用Cy3和Cy5两种荧光染料分别标记这两种探针,随后与包含1003条待研究人类基因的表达谱基因芯片杂交,通过扫描和计算机软件分析,寻找经三氧化二砷作用后表达有差异的基因．结果：NB4细胞在三氧化二砷(0．5μmol／L)作用后3条基因上调,18条基因下调．1条参与蛋白酶体降解途径的基因显著上调,多条与细胞信号传导、RNA加工及蛋白质合成相关基因下调．结论：PSMB6及ITGBI基因的表达改变可能与NB4细胞的凋亡和／或分化有密切关系．     

氯化两面针碱对人肝癌裸鼠移植瘤基因表达谱的影响

目的检测氯化两面针碱(NC)对人肝癌细胞基因表达情况的影响。方法建立人肝癌HepG2裸鼠移植瘤模型,应用基因芯片技术分析NC治疗肝癌后基因表达谱的改变,应用实时荧光定量PCR(Real time PCR)方法验证基因芯片结果。结果 NC能明显抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长。NC组与生理盐水组比较,差异表达基因共有369个,其中上调基因183个,下调基因186个。与细胞凋亡、细胞周期相关的基因IHPK2、PR48、MTSS1等上调,Bcl 2L2、AMID、RTEL1 CCNT2等下调,Real time PCR结果显示基因表达的改变与芯片研究结果具有一致性。结论差异表达基因涉及细胞增殖与凋亡调控、细胞周期、肿瘤免疫相关、分裂/增殖、DNA损伤/修复等多个方面的功能。NC作用于肝癌的基因调控是一个多基因、多环节、多途径参与的过程。     

Berberine down-regulates the Th1/Th2 cytokine gene expression ratio in mouse primary splenocytes in the absence or presence of lipopolysaccharide in a preventive manner

Berberine is a natural isoquinoline alkaloid. This study investigated the effects of berberine on cytokine gene expression in mouse primary splenocytes in the absence or presence of lipopolysaccharide (LPS) using 4 different experimental models in vitro. The relative expression of the following cytokine genes was determined using a real-time quantitative polymerase chain reaction assay: pro-inflammatory tumor necrosis factor (TNF)-α, anti-inflammatory interleukin (IL)-10, T-helper type 1 (Th1) (IL-2), and Th2 (IL-4) cytokines. The results showed that berberine down-regulated ratios of the relative Th1 (IL-2)/Th2 (IL-4) cytokines expression fold in mouse primary splenocytes in the absence or presence of LPS in a preventive manner. This study suggests that berberine may possess anti-inflammatory potential by shifting the Th1/Th2 balance toward Th2 polarization.     

扶肾方调节各种细胞因子干预腹膜间皮细胞 EMT的实验研究

摘要：目的 探讨扶肾方对大鼠腹膜间皮细胞转化生长因子-β受体Ⅰ（TGF-βRⅠ）、TGF-βRⅡ、Smad泛素化相 关因子2（Smurf2）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、紧密连接蛋白-1（ZO-1）的影响及抑制上皮-间充质转分化（EMT）的作 用机制。方法 原代培养大鼠腹膜间皮细胞,传至第2代并鉴定后,分为空白对照（C）组,含药血清（B）组,模型（T） 组（40 μg/L TGF-β1）,模型+含药血清（T+B）组,模型+MG132（T+M）组。培养24 h后收集细胞和培养液上清液,采用 蛋白印迹法检测Smurf2蛋白水平,qPCR检测各组TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、E-cadherin、ZO-1的mRNA转录水平。结果 与C组比较,T组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1RⅡ mRNA、Smurf2蛋白表达明显上调（P＜0.05）;与T组比较,B组 E-cadherin、ZO-1 mRNA 表达均上调,T+B 组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1RⅡ mRNA 表达均上调,Smurf2蛋白表达下 调,T+M组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1RⅠ mRNA、Smurf2蛋白表达均下调,TGF-β1RⅡ mRNA表达上调（P＜0.05）;与 B组比较,T+B组和T+M组E-cadherin mRNA表达下调,T+M组ZO-1、TGF-β1RⅠ mRNA表达下调（P＜0.05）;与T+B 组比较,T+M组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1R,TGF-β1RⅡ mRNA表达均下调（P＜0.05）。结论 扶肾方抑制大鼠腹膜 间皮细胞EMT可能与上调TGF-βRⅡ mRNA转录,下调Smurf2蛋白含量,促进E-cadherin、ZO-1 mRNA的转录相关。