促红细胞生成素抑制过氧化氢诱导的肾小管细胞凋亡

目的探讨促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）是否可以抑制过氧化氢（H2O2）诱导的氧化应激和细胞凋亡及其抑制凋亡的相关机制。方法传代培养大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分为正常对照组（NC组）、H1组（1mmol／L H2O2）、H2组（5mmol／LH2O2、E组（H2U＋EPO组）。细胞免疫荧光检测NRK-52E细胞是否表达EPO受体（erythropoietin receptor,EPOR）。荧光探针氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯（CM—H2DCFDA）标记检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平。流式细胞仪AnnexinV-FITC／PI双染法检测细胞凋亡指数。RTPCR检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤／白血病-2（B-cell lymphoma／L eukemia-2,Bcl-2）家族中Bcl-2和BaxmRNA的表达。结果NRK52E细胞表达EPOR。H2O2引起NRK-52E细胞内ROS水平升高,上调BaxmRNA表达、下凋Bcl-2mRNA表达,诱导NRK-52E细胞凋亡。EPO可以抑制H2O2诱导的ROS水平升高、Bcl2mRNA表达下调、BaxmRNA表达上调及NRK-52E细胞凋亡。结论EPO可以缓解H2O2诱导的氧化应激、上调Bcl-2mRNA表达、下调BaxmRNA表达,抑制H2O2诱导的NRK52E细胞凋亡,发挥肾小管细胞保护效应。     

3，4-二羟基苯甲酸乙酯预处理对白蛋白诱导低氧培养肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨脯胺酰羟化酶抑制剂3,4-二羟基苯甲酸乙酯（EDHB）对白蛋白诱导的低氧条件下培养的肾小管上皮细胞（NRK-52E）凋亡的影响。 方法 NRK-52E细胞在以下各组孵育24 h：常氧（5％CO2+空气）组,低氧（1％O2+5％CO2+94％N2）组,常氧+白蛋白（30 g/L）组及低氧+白蛋白（30 g/L）组,观察各组NRK-52E细胞的凋亡情况。然后NRK-52E细胞在以下各组孵育24 h：常氧组、低氧组,低氧+白蛋白（30 g/L）组,低氧+EDHB（500 μmol/L）组,EDHB预处理组（培养细胞中先加入EDHB 500 μmol/L,0.5 h后再加入BSA 30 g/L,低氧培养）,观察EDHB对白蛋白诱导低氧培养NRK-52E凋亡的影响。流式细胞技术检测细胞凋亡;RT-PCR检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax 及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达;Western印迹检测VEGF蛋白表达。 结果 NRK-52E细胞凋亡率在常氧组与低氧组差异无统计学意义 （P > 0.05）,但低氧+白蛋白组细胞凋亡率显著高于常氧+白蛋白组（37.36%±4.95%比25.59%±3.32%,P < 0.05）。低氧+白蛋白组bax mRNA表达显著高于常氧+白蛋白组（P < 0.05）,而bcl-2 mRNA的表达则显著低于常氧+白蛋白组（P < 0.05）。EDHB预处理可显著抑制低氧+白蛋白组细胞凋亡率的增高（P < 0.05）、bax mRNA表达的增高（P < 0.05）以及bcl-2 mRNA表达的降低（P < 0.05）。低氧组NRK-52E细胞VEGF mRNA和蛋白表达显著高于常氧组（P < 0.05）,而低氧+白蛋白组则显著低于低氧组（P < 0.05）。EDHB预处理可显著抑制低氧+白蛋白组细胞VEGF mRNA和蛋白表达的降低（P < 0.05）。 结论 白蛋白和低氧联合刺激可显著增加NRK-52E细胞凋亡,EDHB预处理可改善该病变,可能与其提高VEGF的表达有关。     

血红素加氧酶1对白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨血红素加氧酶1（HO-1）对白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响及其可能机制。 方法 体外培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）为正常对照。白蛋白对照组加去脂的小牛血清白蛋白（BSA）30 g/L共同培养。干预组先加钴卟啉（Cobalt protoporphyrin IX,CoPP,血红素加氧酶1诱导剂）5 μmol/L,0.5 h后再加入BSA 30 g/L,作用24 h。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测CoPP对BSA抑制NRK-52E细胞增殖的影响。细胞免疫荧光染色检测细胞凋亡率。RT-PCR法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax mRNA表达情况。 结果 与正常对照组比较,BSA对细胞增殖具有抑制作用并诱导细胞凋亡,差异有统计学意义（P < 0.05）,而CoPP对BSA引起的细胞毒性作用具有保护作用（P < 0.05）;BSA对照组HO-1 mRNA表达增加（0.44±0.06比0.39±0.05,P < 0.05),差异有统计学意义（P < 0.05）。CoPP预处理后,HO-1 mRNA表达（0.50±0.06）较BSA对照组增加（P < 0.05）。BSA可上调Bax mRNA表达(0.87±0.04比0.67±0.03,P < 0.05）及下调Bcl-2 mRNA的表达（0.25±0.04比0.42±0.02,P < 0.05),当加入CoPP预处理后可抑制上述改变（Bax mRNA：0.75±0.07,Bcl-2 mRNA：0.36±0.03,均P < 0.05）。 结论 BSA可显著增加细胞的凋亡率并直接调控凋亡相关蛋白mRNA的表达,CoPP可抑制上述BSA的作用。HO-1对BSA所致肾小管上皮细胞凋亡具有保护作用,可以抑制细胞凋亡。     

小剂量盐酸水苏碱对过氧化氢所致肾小管上皮细胞凋亡的保护作用

目的：益母草作为一种传统中药常用作多种药剂的组方,其具有抗氧化作用。盐酸水苏碱是益母草的有效成分,本研究旨在探讨盐酸水苏碱对过氧化氢所致肾小管上皮细胞损伤的作用。方法：0.4mmol/L H2O2加入培养的肾小管上皮细胞（NRK52E）,同时观察不同剂量的盐酸水苏碱（14.04mg/L,28.08mg/L,42.12mg/L）对过氧化氢所致肾小管上皮细胞损伤的作用。HE染色观察细胞凋亡与细胞有丝分裂指数及细胞总数。Western blot检测各组细胞Bcl-2、PCNA、HO-1蛋白表达水平。结果：H2O2组细胞其凋亡指数较小剂量盐酸水苏碱＋H2O2组及正常对照组明显升高[（9.57±0.59）vs（5.97±0.68）,P〈0.001;（9.57±0.59）vs（2.6±0.72）,P〈0.001）。H2O2组细胞总数较小剂量盐酸水苏碱＋H2O2组及正常对照组明显减少[（714.33±6）mm^2 vs（929±34.66）mm^2,P〈0.01;（714.33±67）mm^2 vs（978.83±15.89）mm^2,P〈0.01。小剂量盐酸水苏碱对HO-1无影响,中、大剂量盐酸水苏碱可使HO-1表达减少;小剂量盐酸水苏碱可使Bcl-2表达增加。各组PCNA表达及有丝分裂指数无差异。结论：小剂量盐酸水苏碱通过上调Bcl-2蛋白表达保护过氧化氢所致肾小管上皮细胞损伤,减少肾小管上皮细胞凋亡,并非通过减轻氧化应激途径;中大剂量盐酸水苏碱可加重过氧化氢所致的氧化应激状态。     

蛋白酶体抑制剂对肾间质成纤维细胞增殖、凋亡及其相关蛋白的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下的大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）增殖、凋亡及其相关蛋白的影响。 方法 用5 μg/L的TGF-β1作用于NRK-49F。不同浓度（0~5 μmol/L）MG-132预处理NRK-49F细胞后,MTT法检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率;DNA凝胶电泳法观察细胞的凋亡情况;Western印迹检测p53、p27、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的变化。 结果 TGF-β1（5 μg/L）可促进NRK-49F细胞增殖,而MG-132（0.25~5 μmol/L）呈剂量依赖性地抑制这种效应,使细胞生长停滞在G1期。TGF-β1（5 μg/L）单独不能诱导NRK-49F的凋亡（3.880%±0.365%比4.723%±1.582%）,而MG-132（0.10、0.25、0.50、0.75、1.00、2.50 μmol/L）预处理可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡（调亡率分别为8.8％、18.7％、22.8％、31.3％、37.7％、38.9％）。MG-132（2.5 μmol/L）+TGF-β1组及 MG-132（2.5 μmol/L）组在DNA电泳中呈典型的梯状条带现象。Western印迹结果显示,MG-132可剂量依赖性地激活TGF-β1诱导的细胞周期及凋亡相关蛋白p53蛋白表达,促进caspase-3的活性片段产生,Bcl-2表达下调,并能使Bax和p21表达上调,但对p27没有明显的影响。 结论 MG-132可抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞增殖,并促其凋亡。该作用可能与MG-132对细胞周期及凋亡相关蛋白p53、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax的调节有关,提示泛素蛋白酶体抑制剂可能成为将来防治肾间质纤维化的一个潜在的治疗手段。     

姜黄素通过caspase依赖的凋亡途径抑制LNCaP细胞生长

目的探讨姜黄素诱导雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞凋亡过程中caspase途径的作用。方法应用CCK8法检测不同浓度（10、20、30、40、50、60μmol/L）姜黄素作用LNCaP细胞12、24、48h后的细胞生长抑制情况。应用Annexin V/PI双染法检测不同浓度（10、20、40μmol/L）姜黄素作用LNCaP细胞24h后的细胞凋亡情况。应用Western blot检测姜黄素作用LNCaP细胞24h后Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、Cytochrome C凋亡相关蛋白的变化。结果姜黄素对LNCaP细胞的生长有明显的抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;流式细胞术结果显示姜黄素能诱导LNCaP细胞凋亡,10、20、40μmol/L姜黄素作用LNCaP细胞24、48h后细胞凋亡率分别为（6.01±0.95）%、（15.46±1.13）%、（26.13±1.56）%和（11.19±1.74）%、（25.80±2.47）%、（38.72±2.89）%,且呈时间-剂量依赖性（P〈0.05）;同时姜黄素能够降低LNCaP细胞中Bcl-2的表达,上调Bax、Cytochrome C、Cleavedcaspase-3的表达。结论姜黄素能抑制LNCaP细胞的生长,其作用可能是通过线粒体途径诱导其凋亡。     

红细胞生成素对高糖诱导肾小管细胞凋亡的影响

目的 探讨红细胞生成素（EPO）是否可以抑制高糖诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡及其相关机制。 方法 传代培养大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分为正常对照组（NC组）、渗透浓度对照组（OC组）、高糖组（HG组）、高糖+EPO 50 U/ml组（E1组）和高糖+EPO 100 U/ml组（E2组）。免疫荧光检测NRK-52E细胞有无EPO受体（EPOR）表达。Western印迹检测高糖对EPOR表达的影响。流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡指数。荧光探针CM-H2DCFDA检测细胞内活性氧（ROS）的水平。RT-PCR检测bcl-2、bax、capases-3 mRNA的表达。 结果 （1）NRK-52E细胞表达EPOR,且高糖可刺激EPOR表达增加。（2）高糖可诱导NRK-52E细胞凋亡,与葡萄糖相同渗透浓度的甘露醇不能明显诱导细胞凋亡。E1、E2组细胞早、晚期凋亡率显著低于HG组（P < 0.05）。（3）高糖刺激 NRK-52E细胞后,细胞内ROS产生增多,bcl-2 mRNA的表达下调,bax、caspase-3 mRNA的表达上调。EPO可以抑制细胞内ROS的产生,上调bcl-2 mRNA 表达,下调bax、caspase-3 mRNA 表达。 结论 EPO可能通过EPOR的介导,缓解高糖诱导的氧化应激,上调bcl-2 mRNA表达,下调bax、caspase-3 mRNA表达,抑制NRK-52E细胞凋亡。     

白蛋白诱导的肾小管细胞凋亡与丝裂素激活蛋白激酶信号通路

目的 探讨白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡以及诱导凋亡的信号传导机制&#65377; 方法 将培养的大鼠肾小管细胞NRK-52E分别与不同浓度(10&#65380; 20&#65380; 30 mg/ml)的去脂无内毒素牛血清白蛋白(BSA)共同孵育6&#65380; 12&#65380; 18和24 h&#65377;透射电镜&#65380;共聚焦激光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡&#65377;BSA 20 mg/ml刺激NRK-52E细胞15&#65380; 30&#65380; 60和120 min后, Westen印迹测定p38&#65380;氨基末端激酶(JNK)和细胞外信号调节激酶(ERK)活性&#65377;将SB202190(20 μmol/L, p38抑制剂)&#65380;SP600125(10 μmol/L, JNK抑制剂)和PD98059(20 μmol/L, ERK抑制剂)分别与白蛋白和NRK-52E细胞共同孵育24 h后检测细胞凋亡&#65377;结果 白蛋白以时间和剂量依赖方式诱导肾小管细胞凋亡&#65377;白蛋白与NRK-52E细胞共孵育后,p38和JNK活性明显升高,ERK活性显著降低&#65377;SB202190和SP600125可分别抑制白蛋白诱导NRK-52E细胞凋亡,而PD98059促进白蛋白诱导的NRK-52E细胞凋亡&#65377;结论 白蛋白以时间和剂量依赖方式诱导肾小管细胞凋亡,而p38和JNK激活与ERK抑制介导了白蛋白诱导的肾小管细胞凋亡&#65377;     

JNK-c-Jun信号通路下调连接蛋白43的表达引起肾小管上皮细胞转分化

目的 观察c-Jun氨基末端激酶（JNK）-c-Jun通路对连接蛋白43（Cx43）表达的影响及在转化生长因子（TGF）β1诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（TEMT）中的作用。 方法　大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）随机分成3组：对照组、TGF-β1（10 μg/L）组和TGF-β1（10 μg/L）+JNK选择性抑制剂SP600125（50 μmol/L）组。用免疫细胞化学、Western印迹检测JNK、c-Jun、连接蛋白43（Cx43）、上皮细胞标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）和肌成纤维细胞标志物α-SMA的表达。用RT-PCR检测Cx43的mRNA水平。用激光共聚焦显微镜荧光漂白恢复（FRAP）技术检测NRK-52E细胞间通讯功能。 结果 TGF-β1引起肾小管上皮细胞α-SMA、JNK、c-Jun表达上调（均P < 0.05）,Cx43、E-cadherin表达下调（均P < 0.05）,Cx43的mRNA水平下降（P < 0.05）,细胞间通迅功能下降 （P < 0.05）。JNK抑制剂处理后,上述改变明显减轻。 结论 TGF-β1引起肾小管上皮细胞内JNK表达上调,增加c-Jun活性,从而抑制Cx43的表达和降低细胞间通迅功能,导致TEMT。     

依贝沙坦抑制造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡

目的 探讨依贝沙坦在造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用及机制。方法 培养的大鼠肾小管细胞(NRK-52E)分别与不同碘浓度(25、50、100、150 mgI/ml)的安射力(非离子型造影剂)共孵育1 h;安射力(100 mgI/ml)先后刺激NRK-52E细胞0.5、1、2、4 h。与安射力(100 mgI/ml)相同渗透浓度的甘露醇(420 mmol/L)与NRK-52E细胞共孵育1 h作为阳性对照。不同浓度依贝沙坦(0.01、0.1、1 mmol/L)先与NRK-52E细胞共孵育1 h后,安射力(100 mgI/ml)刺激1 h。Hoechst染色和流式AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS)水平。RT-PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA的表达。 结果 安射力呈浓度和时间依赖性诱导NRK-52E细胞凋亡。与安射力相同渗透浓度的甘露醇不能明显诱导细胞凋亡。安射力与NRK-52E细胞共孵育后,细胞内ROS产生增多,Bcl-2 mRNA的表达下调,Bax mRNA的表达上调。依贝沙坦呈浓度依赖性抑制安射力诱导的NRK-52E细胞凋亡、细胞内ROS的产生、Bcl-2 mRNA表达下调及Bax mRNA表达上调。细胞内ROS水平与细胞凋亡呈正相关。 结论 安射力呈浓度和时间依赖性诱导NRK-52E细胞凋亡,此作用与细胞内氧化应激及bcl-2 mRNA表达下调、Bax mRNA表达上调相关。依贝沙坦能抑制上述安射力的作用,呈浓度依赖性抑制NRK-52E细胞凋亡。     

High uric acid induces phenotypic transition of renal tubular cells via PI3K/Akt signaling pathway

Objective To investigate the effect and the mechanism of epithelial-mesenchymal transition (EMT) in renal tubular cells induced by uric acid. Methods Normal rat kidney tubular cell line (NRK-52E) were exposed to different concentrations of uric acid (100, 200, 400, 600, 800 μmol/L UA) for 48 hours to induce EMT. Morphological changes of the NRK-52E cells were examined under an inverted phase contrast microscope. The protein expression of E-cadherin, α-SMA, p-Akt and Akt were detected by Western blotting. The distribution of E-cadherin and α-SMA were detected by immunofluorescence. NRK-52E cells were pretreated by different concentrations of LY294002(0, 2.5, 5, 10, 15 μmol/L), the inhibitor of PI3K/p-Akt signaling pathway, and then processed by uric acid (400 μmol/L) for 48 hours. Western blotting was used to detect the protein expression of p-Akt and Akt. NRK-52E cells were then divided into four groups: normal group (N), uric acid group (UA), LY294002 group (LY), uric acid with LY294002 group (UA+LY). The protein expression of E-cadherin and α-SMA were detected by Western blotting, the distribution of E-cadherin, α-SMA and p-Akt were detected by immunofluorescence. Results There was abundant cellular expression of E-cadherin in unstimulated renal tubular cells whereas its expression was significantly decreased in uric acid-stimulated cells (P＜0.05). In addition, uric acid induced de novo expression of α-SMA in contrast to almost negative staining in untreated cells (P＜0.05). p-Akt were obviously increased in high uric acid group (P＜0.05) and Akt changed not significantly (P＞0.05). NRK-52E cells transformed into elongated fibroblast-like cells from cuboidal clustered epithelial cells. These indicated that uric acid has induced EMT and activated PI3K/p-Akt signaling pathway in NRK-52E cells. However, the above effects of uric acid were abolished when p-Akt was blocked by the PI3K inhibitor (10, 15 μmol/L LY294002), indicated that LY294002 has reversed the trend of EMT. Conclusions High uric acid induces phenotypic transition of renal tubular cells probably via activating PI3K/Akt signaling pathway.     

肾上腺髓质素对缺氧复氧诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)对缺氧复氧(HR)诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡的影响及其机制.方法 体外培养的NRK-52E细胞,随机分为4组:正常对照组、HR组、空质粒+HR组、ADM质粒+HR组.采用Fugene HD转染试剂,将pcDNA3.1-myc-his B空质粒和ADM真核表达质粒分别转染至NRK-52E细胞内,应用免疫细胞化学的方法检测转染效率,转染成功48 h后制作HR模型.锥虫蓝摄取法进行细胞计数并计算细胞存活率,分光光度法检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量评价细胞活力;Annexin V和PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测ADM、Bax、Bcl-2、Fas的mRNA表达;Western印迹法检测活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、8、9(Caspase-3、8、9)的蛋白表达.结果 HR组ADM的表达显著高于正常对照组(P＜0.05).ADM质粒+HR组的ADM表达显著高于空质粒+ HR组(P＜0.05).与正常对照组相比,HR组活细胞计数和细胞存活率显著降低,LDH含量及细胞凋亡率显著升高,Bax、Bcl-2、Fas、活性Caspase-3、8、9表达显著上调,Bax上调更明显,故Bax/Bcl-2升高(均P＜0.05).与HR组相比,ADM质粒+HR组活细胞计数和细胞存活率显著升高,LDH含量及细胞凋亡率显著降低,Bax、Fas、活性Caspase-3、8、9表达显著下调,Bcl-2表达进一步上调,Bax/Bcl-2降低(均P＜0.05).空质粒+HR组和HR组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 ADM在NRK-52E细胞中的高表达可以减轻HR诱导的细胞凋亡,其机制至少部分是通过抑制线粒体通路和死亡受体通路实现的.     

雷公藤甲素对IgA肾病患者外周血单个核细胞炎性反应及凋亡的影响

目的 探讨IgA肾病(IgAN)患者外周血单个核细胞（PBMC）炎性因子分泌及自身凋亡状态,以及雷公藤甲素(TP) 对其调节的相关机制。 方法 取IgAN患者（n=29）及健康人（n=16）外周血,分别通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和硝酸还原酶法（Griess法）检测血浆肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和一氧化氮(NO)表达情况。体外培养IgAN患者PBMC,以不同浓度TP刺激PMBC,四唑盐比色间接法（MTT）检测TP对细胞生长的抑制效应。根据MTT结果,分别分为IgAN患者PBMC组、植物血球凝集素（PHA,10 mg/L,促细胞分裂原）模型组和PHA（10 mg/L）+TP（12.5 μg/L、25 μg/L）处理组。ELISA法检测上清液中TNF-α、IL-6的分泌情况;Griess法检测上清液中NO含量;流式细胞仪分析细胞凋亡率;RT-PCR法、Western印迹法检测PBMC中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱天冬蛋白酶（caspase）-9、caspase-3基因和蛋白表达变化。 结果 IgAN患者血浆TNF-α[（131.57±50.61） ng/L比（30.24±18.93） ng/L,P < 0.01],IL-6[（76.36±25.21） ng/L比（35.08±16.59） ng/L,P < 0.01]和NO[（46.36±12.93） μmol/L比（26.61±10.87） μmol/L,P < 0.01]均显著高于健康人,PBMC凋亡率亦显著高于健康人[（16.88±5.66）%比（8.67±3.87）%,P < 0.01]。TP可抑制IgAN患者PBMC分泌 TNF-α、IL-6 和NO,诱导其凋亡;也可抑制Bcl-2表达,增加Bax、caspase-9、caspase-3表达。 结论 IgAN患者体内PBMC处于高度活化状态,并且凋亡率增高。TP能有效抑制IgAN患者PBMC的炎性活化状态,并可能通过线粒体途径改变Bcl-2蛋白家族抗凋亡因子和促凋亡因子平衡而诱导IgAN患者PBMC凋亡。     

E2F1对H2O2诱导的人乳腺癌细胞凋亡的影响

目的 观察E2F1对H2O2诱导的人乳腺癌细胞MDA-MB435凋亡的影响.方法 通过脂质体法转染目的质粒pcDNA3.1(+)/E2F1进人人乳腺癌细胞株MDA-MB435,筛选稳定表达E2F1的细胞克隆,通过Western blot法鉴定高表达E2F-1的MB435细胞克隆C1、C2和C3,并应用锥虫蓝染色法检测100 μmol/L H2O2处理后细胞的存活率变化.结果 在细胞克隆MB435/E2F1-C1、C2和C3中有高水平的E2F1表达,这些高表达E2F1的肿瘤细胞经100 μmol/L H2O2刺激后细胞存活率(分别为63.4％、54.2％和32.9％)相对于对照组(90.9％)均明显降低,且其降低的水平与E2F1的表达水平成正比,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 E2F1对H2O2诱导的人乳腺癌细胞凋亡有促进作用.     

毛蕊异黄酮对PI3K/Akt信号通路与PC-3细胞凋亡的作用

目的 探究毛蕊异黄酮促进前列腺癌细胞PC-3凋亡的机制.方法 选取0、25、50、100、200μmol/L的毛蕊异黄酮(Calycosin)处理PC-3细胞,并设置溶剂对照(DMSO,二甲基亚砜)组,采用MTT法检测48h后细胞增殖情况;流式细胞术检测0、25、50、100、200 μmol/L48h后细胞凋亡率;Western Blot法检测0μmoL/L组、200μmol/L毛蕊异黄酮组、200μmol/L毛蕊异黄酮+ PI3K特异性抑制剂(Wortmannin)共处理组细胞的Akt、磷酸化的Akt(p-Akt)、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平.结果 MTT实验显示毛蕊异黄酮能够抑制PC-3细胞的增殖,且呈现剂量依赖性(P＜0.05);流式细胞实验显示,0、25、50、100、200μmol/L浓度水平的毛蕊异黄酮处理PC-3细胞48h后的凋亡率分别为(0.1±0.04)％、(6.8±0.6)％、(9.2±0.2)％、(11.5±0.27)％、(59.2±0.36)％(P ＜0.05);Western blot法显示,与0μmol/L组相比,200μmol/L毛蕊异黄酮组p-Akt、Bcl-2表达水平下降(P＜0.05),加入Wortmannin后,二者水平再次下降;与0μmol/L组相比,200μmol/L毛蕊异黄酮组Bax、Caspsse-3表达水平增加(P＜0.05),加入Wortmannin后,二者水平再次增加.结论 毛蕊异黄酮可抑制PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制是下调PI3K/Akt信号通路,启动线粒体诱导的凋亡途径.     

Inhibition of c-Jun N-terminal kinase ameliorates apoptosis induced by hydrogen peroxide in the kidney tubule epithelial cells (NRK-52E)

BACKGROUND: Hydrogen peroxide (H2O2)-induced apoptosis has been shown to be involved in ischemic and toxic tubular damage. Recent studies have revealed that oxidative stress can activate c-Jun N-terminal kinase (JNK), and the oxidative stress-JNK pathway is an important apoptotic pathway of cells exposed to various stresses. The present study was designed to investigate JNK activation and the effects of the JNK pathway inhibition during H2O2-induced apoptosis in kidney epithelial tubule cells (NRK-52E). MATERIALS AND METHODS: NRK-52E cells were treated with 0-500 microM H2O2 and/or 100 microM quercetin (an inhibitor of the JNK pathway). Apoptosis was assessed by flow cytometry analysis and DNA ladder. JNK activity was assessed by the GST-c-Jun (1-169) binding/protein kinase assay. RESULTS: H2O2 induced apoptosis in NRK-52E cells in a concentration-dependent manner, which was demonstrated by the reduced DNA PI staining, externalization of phosphatidylserine and DNA ladder. Apoptosis induced by H2O2 was accompanied by JNK activation and up-regulated JNK activity. Quercetin treatment suppressed the JNK activity and ameliorated apoptosis induced by H2O2. CONCLUSIONS: H2O2 induced apoptosis in NRK-52E cells, which was associated with activation and up-regulation of JNK. Quercetin treatment could decrease JNK activity and ameliorate H2O2-induced apoptosis.