9—顺—维甲酸对非小细胞肺癌CyclinDl、Cdk4表达的影响

目的研究9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌A549、PG、SPC-A1的细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(Cdk4)表达的影响,探讨其抑制非小细胞肺癌生长与影响CyclinD1、Cdk4表达的相关性.方法采用半定量逆转录PCR方法,分析细胞周期因子CyclinD1、Cdk4表达的变化.结果9-顺-维甲酸既可以降低PG、SPC-A1的CyclinD1表达(P＜0.01),又可以降低PG、A549的Cdk4表达(P＜0.01).结论9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌生长的抑制作用,与其调控细胞周期因子CyclinD1、Cdk4的表达密切相关.     

9-顺-维甲酸对人肺鳞癌细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录的影响

目的:检测9-顺-维甲酸(9-cis-RA)处理前后人肺鳞癌细胞株L78、A2的细胞周期调控因子Cy-clinD1、Cdk4转录水平的变化。探讨其抑制肺鳞癌细胞生长的作用机制。方法:采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平的变化。结果:9-cis-RA对两细胞株的细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平均有所降低,且具有统计学意义(P<0.05)。结论:9-cis-RA抑制肺鳞癌细胞株L78、A2增殖的作用机理与其调节细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4的转录有关。     

9-顺维甲酸对人肺癌组织CyclinD1、Cdk4、P16转录的影响

目的：检测9－顺维甲酸（9-cis-RA)处理前后体外培养的人肺癌组织及其对照组织细胞周期蛋白因子CyclinD1、细胞周期蛋白依赖性激酶Ddk4、细胞周期蛋白酶抑制因子P16转录水平的变化，探讨其抑制肺癌组织细胞生长的作用机制。方法：采用半定量逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）分析CyclinD1,Cdk4,P16转录的变化，结果：9-cis-RA既可降低体培养的人肺癌组织Cdk4的转录，又可升高其P16的转录，对肺癌组织和正常肺组织CyclinD1的转录的影响无统计学意义。对正常肺组织Cdk4,P16的转录的影响也无统计学意义。结论：9-cis-RA抑制肺癌组织细胞增殖的作用机理与其调节Cdk4,P16的转录有关。     

ATRA对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其可能的分子机制。方法ATRA处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并运用MTT法检测其生长抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,Western blot检测CDK4、Rb、p-ERK1/2蛋白的表达,荧光定量PCR法检测CyclinD1mRNA水平。结果ATRA具有抑制A549细胞增殖、使细胞周期阻滞于G0/G1期,并下调p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平的作用。结论ATRA可能通过下调A549细胞p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平,使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而影响其DNA的合成,抑制其恶性增殖。     

PI3K/Akt抑制剂对肺癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物联合使用对肺癌细胞A549、SPC-A1化疗效果的影响.方法 将LY294002联合化疗药物作用于肺癌细胞A549、SPC-A1,用MTT法检测单独使用顺铂、紫杉醇及联合PI3K抑制剂LY294002对体外培养的肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物的敏感性,用流式细胞术检测肺癌细胞A549、SPC-A1凋亡率和细胞周期变化.结果 联合LY294002作用后肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物顺铂、紫杉醇敏感性显著增强(P<0.01),且细胞凋亡率显著提高(P<0.01),G0/G1期细胞比例增加,S+G2/M期细胞比例减少(P<0.05).结论 LY294002能有效提高化疗药物顺铂、紫杉醇体外对A549、SPC-A1细胞抑制作用的敏感性,抑制PI3K介导的信号转导通路,显著提高肺癌化疗效果.     

细胞周期调控蛋白在K562细胞的表达及意义

目的：探讨细胞周期调控蛋白CyclinD1,CyclinE,Cdk2,Cdk5在K562细胞增殖和分化时的不同表达。方法：本实验采用Western-Blotting-ECL方法分析了苦参碱作用K562细胞前、后24,48,72h,CyclinD1,CycliE,Cdk2,Cdk5的不同表达。结果：在增殖的K562细胞中,伴随着DNA合成增加,CyclinE和Cdk2保持高表达;而在分化的细胞中,随着DNA合成减少,CyclinD1,Cdk5表达增强。结论：在细胞从增殖向分化途径逆转时,伴随着一些特殊的Cyclin/Cdk表达的改变。     

大鼠C6脑胶质瘤X刀治疗后细胞周期的改变及相关蛋白的表达

目的通过观察大鼠C6脑胶质瘤模型经X射线照射后细胞周期的改变及相关蛋白P16、CyclinD1和Cdk4的表达,探讨辐射对肿瘤的杀伤机制。方法建立大鼠C6脑胶质瘤颅内接种模型,通过免疫组化法检测其经X射线照射后P16、CyclinD1和Cdk4的表达情况及应用流式细胞仪检测其细胞周期的变化。结果肿瘤经X射线照射后,胶质瘤细胞出现G1百分数增多,S期细胞百分数减少,诱导发生了G1阻滞。P16蛋白表达量显著增高,Cyclin D1和Cdk4表达显著下降,与对照组相比具有显著性(P<0.05);且这种变化具有时程效应,即P16蛋白在24h时表达最高,CyclinD1、Cdk4在48h时表达最低。结论辐射可诱导细胞发生G1阻滞,P16、CyclinD1和Cdk4在辐射诱导的G1阻滞中起着重要的作用。     

细胞周期蛋白D1,P63蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨细胞周期蛋白D1(CyclinDl),P63蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义.方法:应用免疫组化EnVision二步法检测71例NSCLC和15例肺良性病变组织中两种基因蛋白的表达.结果:在肺鳞癌、肺腺癌、肺良性病变中CyclinDl的阳性表达率分别为64.3%(18/28),67.5%(27/40)和13.3%(2/15);P63蛋白阳性表达率分别为78.6%(22/28),27.5%(11/40)和26.7%(4/15).有淋巴结转移组CyclinD1和P63阳性率明显高于无淋巴结转移组,P＜0.01;Ⅲ-Ⅳ期CyclinD1表达的阳性率高于Ⅰ-Ⅱ期,P＜0.01.结论:CyclinD1和P63的过表达与肺癌的发生、发展有关.     

胰岛素对人肺腺癌细胞株A549影响的体外研究

目的：探讨用胰岛素提高人肺腺癌细胞A549生长代谢水平及其机制。方法：采用MTT比色法,分析胰岛素对肺腺癌A549细胞代谢的影响,用流式细胞仪作细胞周期分析,用Western Blot印迹方法检测细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果：胰岛素（2.0～32.0mU/mL）可促进人肺腺癌细胞A549的增殖（P〈0.05）,细胞周期结果显示胰岛素（8mU/mL）可使S期细胞增多。Western Blot印迹方法检测结果显示胰岛素（8mU/mL）后CyclinD1的表达明显增强,CyclinA的表达变化不明显。结论：胰岛素能促进人肺腺癌细胞株A549增殖,并且其增殖作用是可逆的。胰岛素主要作用于人肺腺癌细胞株A549细胞的S期。CyclinD1的表达增强在胰岛素促增殖机制中起着重要作用。     

miR-107靶向细胞周期蛋白E1对人非小细胞肺癌A 549细胞功能的影响研究

目的 探讨miR-107对非小细胞肺癌A549细胞功能的影响及可能的靶基因.方法 实验分为脂质体+ miR-107模拟物过表达组(OV-miR-107组)、脂质体+ miR-107抑制模拟物下调组(KD-miR-107组)和脂质体+阴性对照模拟物组(NC组),siRNA的细胞转染分别为siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3.MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞实验检测细胞周期,双荧光素酶报告基因实验检测miR-107下游靶基因,实时定量逆转录PCR和Western blot分别检测下游靶基因mRNA和蛋白表达.结果 miR-107呈时间和剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖(P<0.05);miR-107阻滞更多A549细胞停留在G0G1期,而S期和G2M期占比下降(P<0.05);miR-107结合于细胞周期蛋白E1(CCNE1)的3′-UTR区域246~253 bp位点,并降低CCNE1 mR-NA和蛋白表达(P<0.05);A549细胞中下调CCNE1后,siRNA-2抑制细胞增殖(P<0.05)并阻滞细胞停留在 G0G1期(P<0.05).结论 miR-107靶向调节CCNE1抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖和调控细胞周期.     

靶向IGF-1R的siRNA增强肺癌细胞对Trail诱导凋亡敏感性的研究

目的 研究IGF-1R特异RNA干扰后肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的改变以及其对Trail的敏感性。 方法 化学合成IGF-1R特异siRNA转录模板,与表达载体连接,转染大肠杆菌扩增后提取质粒,酶切鉴定和DNA测序分析。转染A549细胞后筛选稳定表达IGF-1R-siRNA细胞株,FQ RT-PCR、Western blot和免疫组织化学检测IGF-1R基因表达。MTT法和流式细胞仪测定Trail作用前后转染和非转染A549细胞增殖活性和凋亡率。 结果 成功构建IGF-1R-siRNA表达载体并筛选出稳定表达IGF-1R-siRNA单克隆细胞。和空白对照相比IGF-1R蛋白和IGF-1RmRNA表达分别下降79.01%(0.17±0.06 vs.0.81±0.15)(P＜0.01)和76.05%(1.36±0.26 vs.5.68±0.45)(P＜0.01)。免疫组织化学显示IGF-1R表达降低。Trail作用于IGF-1R-siRNA的A549,细胞增殖速度降低(P＜0.05);凋亡率明显增加(P＜0.01)。 结论 IGF-1R-siRNA表达载体具有RNA干扰作用。IGF-1R表达下降后A549细胞增殖速度减慢,对Trail诱导的细胞凋亡敏感性增加。      

STAT3、MRP、LRP在肺腺癌A549及A549/CARP耐卡铂细胞株中的表达及关系的研究

目的:探明STAT3与肺腺癌细胞多药耐药之间的关系.方法:采用免疫组化法测定A549及A549/CARP耐卡铂细胞株中STAT3、LRP、MRP蛋白表达情况.结果:STAT3在A549组、A549/CARP组中阳性细胞数无显著性差异(t=1.519,P＞0.05);LRP、MRP在A549组、A549/CARP组中阳性细胞数有显著性差异(t=3.350,P＜0.01)(t=3.747,P＜0.01);STAT3、LRP、MRP之间表达均无相关性(r=0.061,P＞0.05).结论:STAT3并未直接参与介导肺腺癌的多药耐药性;LRP、MRP均参与了诱导肺腺癌的耐药,但二者之间无相关性;STAT3信号传导途径与LRP、MRP蛋白的激活机制可能无关.     

S100A_4、MMP_9和TIMP_1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:观察S100A4、MMP9和TIMP1在人非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨其与NSCLC的发生、发展、浸润转移的关系。方法:采用免疫组织化学的方法,检测了41例非小细胞肺癌及6例正常肺组织切片中S100A4、MMP9和TIMP1蛋白的表达情况,对NSCLC发生、发展及浸润转移的关系进行分析。结果:在41例NSCLC中、S100A4、MMP9和TIMP1蛋白的阳性表达率分别为70.7%、65.9%和85.4%,与正常肺组织比较有显著性差异(P<0.05)。S100A4的阳性表达率在组织类型,肿瘤大小,淋巴结转移,TNM分期有显著性差异;MMP9的阳性表达率在组织类型,淋巴结转移,病理分级,TNM分期有显著性差异;TIMP1的阳性表达率在腺癌组为100%,在鳞癌组为71.4%,经统计学分析有显著性差异(P<0.05)。S100A4表达与MMP9表达在NSCLC中呈正相关,相关分析有显著性差异(r=0.363,r=0.004)。结论:S100A4蛋白作用于NSCLC发展晚期阶段,与NSCLC的发展、浸润和转移密切相关。MMP9与NSCLC的恶性程度和浸润转移密切相关。腺癌中S100A4、MMP9及TIMP1蛋白阳性表达率均明显高于鳞癌,提示腺癌较鳞癌恶性程度高,易于转移。S100A4与MMP9蛋白在NSCLC中的表达呈正相关,联合检测S100A4和MMP9可为临床评估NSCLC恶性程度提供客观依据,及早发现NSCLC的浸润和转移。     

STAT3在肺腺癌细胞中的活化与肺腺癌发生机制的研究

目的：探讨STAT3,CyclinDl,CyclinB1,Bcl-2蛋白在肺癌发病中的作用。方法：采用Western-blot检测人肺腺癌细胞A549和正常人胚肺细胞HELF中STAT3,CyclinD1,CyclinB1,Bcl-2蛋白的表达。结果：①STAT3,CyclinDl,CyclinB1,Bcl-2蛋白在人肺腺癌细胞A549和正常人胚肺细胞HELF中均呈阳性表达,且二者表达均有统计学意义（P〈0．05）;②在人肺腺癌细胞A549中,STAT3蛋白的表达与CyclinD1,Bcl-2蛋白的表达成线性相关,而与CyclinB1蛋白的表达则无明显相关性。结论：STAT3信号转导通路可能通过对下游靶基因CyclinD1,Bcl-2蛋白的调控在肺癌的发生中起着重要的作用,但其具体机制还有待进一步深入研究。     

Effect of berberine on Cdk9 and cyclin T1 expressions in myocardium of diabetic rats

Objective： To investigate the effect of berberine, one of the main alkaloids of Rhizoma coptidis, on myocardial morphology and the expressions of cyclin-dependent kinase 9 （Cdk9） and cyclin T1 protein in the myocardium of type 2 diabetic rats. Methods： Type 2 diabetes mellitus rats were induced by an injection of 35 mg/kg streptozotocin （STZ） and a high-carbohydrate/high-fat diet for 16 weeks. Diabetic rats were given low-, middle-, high-dose berberine （75, 150, 300 mg/kg）, fenofibrate （100 mg/kg） and rosiglitazone （4 mg/kg） for another 16 weeks, respectively. The myocardium structure was observed with hematoxylin ＆ eosin （H＆E） staining and Cdk9 and cyclin T1 protein expressions were detected by immunohistochemistry. Results： Middle-dose, high-dose berberine improved myocardial hypertrophy and interstitial fibrosis of diabetic rats. Cdk9 and cyclin T1 protein were significantly lower in diabetic myocardium than in control one （P〈0.01）, and middle-dose, high-dose berberine and fenofibrate obviously increased both Cdk9 and cyclin T1 expression to near control level （P〈0.01）. Conclusion： Berberine modulates Cdk9 and cyclin T1 protein expression in diabetic myocardium which may contribute to ameliorate myocardium damage.     

核素介导生长抑素类似物对非小细胞肺癌细胞的体外杀伤作用

目的观察核素介导生长抑素类似物对非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)细胞的体外杀伤作用。方法 MTT法测定核素介导生长抑素类似物对人肺癌细胞A549和SPC-A1增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell侵袭实验验证核素介导生长抑素类似物对肿瘤侵袭的影响。结果 2~6 d内,核素介导生长抑素类似物对A549和SPC-A1细胞的抑制率随时间延长明显增加。经核素介导生长抑素类似物处理48 h后,A549和SPC-A1细胞凋亡率分别为23.1%和22.6%。与对照组相比,核素介导生长抑素类似物处理过的A549和SPC-A1细胞侵入胶原的数量减少了约1/3。结论核素介导生长抑素类似物具有诱导NSCLC细胞凋亡的作用,这可能为NSCLC的放射治疗提供了新的思路。     

LncRNA-BLACAT1调节CyclinD1/CDKN2B轴对非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者癌组织和癌细胞中长链非编码RNA（LncRNAs）BLACAT1的表达特征及其调控机制,阐明BLACAT1在NSCLC发生发展中的作用和临床意义。方法：高通量基因表达数据库（GEO数据库）分析BLACAT1在NSCLC组织的表达特征,Kmplot网站分析BLACAT1表达与NSCLC患者生存预后的联系。qRT-PCR法检测BLACAT1在25例NSCLC患者癌组织和癌旁组织及NSCLC细胞系中的表达情况。将si-NC（阴性对照）和si-BLACAT1（抑制物）转染入NSCLC A549细胞作为si-NC组和si-BLACAT1组,qRT-PCR法分别检测各组A549细胞中BLACAT1 mRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞不同细胞周期细胞百分率,细胞集落生成实验检测各组细胞克隆形成能力,CCK8实验检测各组细胞增殖活性,qRT-PCR和Western blotting法检测各组A549细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B（CDKN2B）mRNA和蛋白表达水平。结果：GEO数据库的NSCLC数据集GSE18842和GSE19804、qRT-PCR法检测以及Kmplot分析,与癌旁组织比较,NSCLC患者癌组织中BLACAT1表达水平明显升高（P< 0.01）;NSCLC患者癌组织中BLACAT1低表达患者的存活时间明显高于BLACAT1高表达患者（P=0.011）。与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞中BLACAT1 mRNA表达水平明显降低（P< 0.05）;与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞周期G₁期细胞百分率增加（P< 0.05）,S期细胞百分率降低（P< 0.05）,细胞克隆形成能力和细胞增殖活性均降低（P< 0.05或P<0.01）;与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞中CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P< 0.05）,而CDKN2B mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P< 0.05或P<0.01）。结论：LncRNA-BLACAT1在NSCLC患者癌组织和癌细胞中表达升高,下调BLACAT1表达可通过调节CyclinD1/CDKN2B轴从而抑制NSCLC A549细胞增殖,BLACAT1可作为NSCLC患者的潜在治疗靶点。     

二氯化钴所致缺氧对A549细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的:探讨CoCl2作用不同时间所致缺氧对体外培养的人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:对肺腺癌细胞A549分别进行常氧和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTT法检测CoCl2作用不同时间所致缺氧对A549细胞增殖的影响;半定量RT-PCR法测定缺氧不同时间HIF-1αmRNA表达水平的变化。AnnexinV-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测CoCl2作用不同时间缺氧肿瘤细胞凋亡情况。结果:CoCl2对A549细胞增殖抑制作用表现出时间依赖性抑制作用。常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1αmRNA的表达,随着CoCl2作用时间的延长,HIF-1αmRNA水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、CoCl2作用4、12、24、48 h组细胞凋亡率分别为(0.60±0.10)%、(1.10±0.10)%、(8.63±0.75)%、(12.80±0.85)%和(19.33±0.80)%。结论:CoCl2对A549细胞具有上调HIF-1αmRNA表达作用,可抑制细胞的增殖和一定的凋亡诱导作用,这些说明HIF-1α可能在肺癌的发展中扮演着重要的作用。     

缺氧诱导因子-1α对肺癌脑转移的作用及其机制的研究

目的探讨缺氧与肺癌细胞释放缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的关系,揭示肺癌脑转移的可能机制。方法建立A549肺癌细胞缺氧模型,缺氧培养A549细胞0.5、2、4、8、12 和24 h（设同时点常氧培养为对照组）后,ELISA法测定A549细胞培养液内HIF-1α质量浓度。Transwell小室构建体外血脑屏障模型,A549细胞培养液缺氧不同时间后,检测体外血脑屏障模型的跨内皮阻抗（TER）变化,以反映体外血脑屏障通透性的改变;计数Transwell下室培养液中的A549细胞数。将缺氧不同时间的A549细胞培养液经尾静脉注入Wistar大鼠,伊文思兰检测动物血脑屏障通透性改变; Western blot 法测定紧密连接相关蛋白Claudin-5在大鼠脑组织中的表达变化。结果与对照组比较,A549细胞缺氧培养2 h后,其细胞培养液内HIF-1α质量浓度增高,体外血脑屏障模型TER减小,穿过Transwell进入下室的缺氧A549细胞数增多（P均＜0.05）,以缺氧8 h时上述作用最明显（P＜0.01）,24 h恢复至对照组水平。在大鼠体内实验中,与同时点对照组比较,尾静脉注入缺氧2 h 的A549细胞培养液后,大鼠脑组织中伊文思兰质量百分比增加,大鼠脑组织中Claudin-5蛋白表达降低（P均＜0.05）,并且以注入缺氧8 h的A549细胞培养液作用最明显（P＜0.01）,注入缺氧24 h的A549细胞培养液则与同时点对照组水平相当。结论缺氧可引起肺癌细胞释放HIF-1α增多。增多的HIF-1α导致血脑屏障紧密连接蛋白Claudin-5表达减少,血脑屏障通透性增大,肺癌细胞转移入脑。     

莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CyclinD1及Cdk6的影响

目的: 观察莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠细胞周期蛋白的影响。方法: 用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。将15只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组,模型组,莫诺苷低、中、高剂量组(30mg·kg-1、90 mg·kg-1、270 mg·kg-1)。利用免疫组化方法检测大鼠患侧海马CyclinD1、Cdk6表达。结果: 与假手术组相比,模型组CyclinD1及Cdk6表达显著增加;但给予莫诺苷治疗后,与模型组相比,莫诺苷中、高剂量能显著降低大鼠CyclinD1及Cdk6的表达。结论: 莫诺苷能通过降低脑缺血再灌注后CyclinD1及Cdk6的表达而发挥神经保护作用。