北京地区人群中人偏肺病毒血清抗体水平的初步调查

目的通过对人类偏肺病毒（hMPV）特异性IgG抗体检测,初步了解北京地区人群中该病毒感染的状况。方法以大肠杆菌表达的hMPV核蛋白（N蛋白）为抗原,用Western-blot检测随机选取的116例血清标本中hMPVN蛋白特异性IgG抗体,以确定表达的hMPVN蛋白的抗原特异性。随后对1996年4月至1997年3月自首都儿科研究所附属儿童医院和北京宣武医院采集的门诊非呼吸道感染患者及正常儿童的体检血清710例进行hMPVN蛋白特异性IgG抗体检测。结果hMPVN蛋白的抗原特异性试验证明表达的hMPV的N蛋白特异性好。本组710份血清中,抗hMPVN蛋白IgG抗体总阳性率为17．2％（122／710）。其中〈1个月的婴儿抗体阳性率为13．2％,1个月～的婴儿中抗体阳性率下降至6．1％,2个月～的婴儿中抗体阳性率降至最低（3．1％）,6个月～的婴儿中抗体阳性率上升至13．9％,在随后的几个年龄段内抗体阳性率维持在13．0％左右,30岁以后的人群中抗体阳性率有所升高,30岁～人群中达28．1％,40岁～人群中达32．3％,≥50岁的人群中达38．5％。结论研究中所应用的hMPVN蛋白的抗原特异性好;抗体的检测结果提示在北京地区的人群中hMPV的感染并不少见,血清抗体阳性率低的年龄组与文献报道感染发生率高的年龄组相符。     

人细小病毒B19感染相关过敏性紫癜患儿的临床特征及治疗

目的探讨人细小病毒B19(简称B19)感染相关过敏性紫癜患儿临床特征及治疗方法。方法采用巢式PCR和ELISA法对75例过敏性紫癜患儿进行B19-DNA及IgM检测;对B19-IgM阳性患儿进行临床特征分析,比较激素和丙种球蛋白的治疗效果。结果1.病例组75例中B19-DNA阳性26例(34.67%),B19-IgM阳性21例(28.0%);健康对照组32例中B19-DNA、B19-IgM阳性各1例(3.13%),两组B19-DNA和B19-IgM阳性率差异均有显著性(P均<0.01)。2.过敏性紫癜患儿临床各型间B19-DNA及B19-IgM阳性率均无显著差异(P均>0.05),B19-IgM阳性患儿中混合型所占比例最大,皮肤型次之。3.激素组和丙种球蛋白组治疗关节肿痛、胃肠道症状、肾损害方面差异均无显著性,但在皮疹消退方面,后者疗效优于前者。4.激素组B19-DNA清除率25.0%,丙种球蛋白组B19-DNA清除率为81.82%,两组清除率具有显著差异(P<0.05)。结论B19可能是导致过敏性紫癜的主要病原体之一;B19感染相关过敏性紫癜患儿临床表现具有多样性;对过敏性紫癜患儿应进行B19病毒检测;应用丙种球蛋白治疗B19感染相关过敏性紫癜可取得良好疗效。     

重庆地区儿童血清偏肺病毒中和活性的研究

目的初步分析重庆地区0～6岁儿童血清人偏肺病毒（hMPV）中和活性及与hMPVILsG抗体水平的关系,为进一步大样本的血清流行病学研究奠定基础。方法0～3岁儿童血清来自因外科疾患住院的儿童,3～6岁儿童血清来自托幼儿童体检血清。采用微量中和实验检测上述血清中hMPV中和活性,分析血清中和活性水平及其与hMPVIgG抗体水平的相关性。结果在抽取的50份血清标本中,此前通过间接酶联免疫吸附试验检测为阴性的8份标本均未显示中和活性,而42份hMPVIgG抗体阳性血清标本中和活性均显阳性,平均中和滴度为1：129。其中0—5个月组中和滴度均值1：160,6～11、12～23、24～35个月和3～6岁组中和滴度均值分别为1：58．9、1：114．9、1：172．8、1：160。血清中抗hMPVIgG水平和中和活性具有显著相关性,r=0．668,但hMPVIgG水平与中和活性并不平行。结论0—6岁儿童血清中多具hMPV中和活性,但其是否足以预防不同亚型hMPV感染尚待进一步研究。     

不同来源标本中B19检测的研究

用巢式PCR技术检测了50例不明原因自然流产胚胎组织中B19DNA，其中25例同时留取静脉血，另25例同时留取产道血送检；结果3种标本中均检出B19DNA，组织中检出率最高，差异无显著性；认为用胚胎组织和（或）产道血代替静脉血诊断胎儿B19感染有很多优点。     

太原市部分人群诺瓦克样病毒血清抗体水平的调查

目的　为了解诺瓦克样病毒在太原市人群中的感染状况。方法　采用间接ＥＬＩＳＡ,分别以重组杆状病毒表达的Ｎｏｒｗａｌｋ （ｒＮＶ） 和Ｍｅｘｉｃｏ （ｒＭＸ） 病毒样颗粒为抗原,对来自太原市的不同年龄人群的３２２ 份血清标本进行了诺瓦克样病毒（ＮＶ） 特异性ＩｇＧ 抗体检测。结果　总检出率为ＮＶ７８．６ ％ ,Ｍｅｘｉｃｏ 病毒（ＭＸ）８２．９ ％ 。不同年龄人群两种型别抗原的抗体检出情况类似：７ ～１１ 个月的阳性率最低,分别为ＮＶ３７．５％ , ＭＸ３１．３％ ;１ 岁时达到ＮＶ４８．１％ ,ＭＸ７０．４ ％ ;２ ～３ 岁时达到ＮＶ６９．２ ％ ,ＭＸ８８．５％ ;４ ～６ 岁后均接近或超过９０％ 。结论　太原市人群中这两种血清型的诺瓦克样病毒感染十分普遍。     

合胞病毒感染后血清中抗F和G蛋白特异性IgG抗体反应

为深入了解婴幼儿呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染后特异性保护抗体的反应，探明ＲＳＶ感染后血清保护性抗体的类型及其相互关系；以表达呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）Ｆ和Ｇ蛋白的重组痘苗病毒为抗原，用间接免疫荧光法检测３３例ＲＳＶ感染后婴幼儿双份血清中抗ＲＳＶ的Ｆ和Ｇ蛋白特异性ＩｇＧ抗体反应。结果表明，１岁以内婴幼儿ＲＳＶ感染后，血清中Ｆ和Ｇ蛋白特异性ＩｇＧ抗体有不同程度的升高，但Ｇ蛋白特异性ＩｇＧ抗体反应明显低于Ｆ蛋白；１岁以后，机体对ＲＳＶ感染的抗Ｆ和Ｇ蛋白特异性ＩｇＧ抗体反应较１岁以前明显增强。说明婴幼儿ＲＳＶ感染后，机体抗ＲＳＶ的Ｆ和Ｇ蛋白特异性ＩｇＧ抗体反应受年龄因素的影响，尤其以Ｇ蛋白更为显著。     

血清与骨髓中细小病毒B19的检测及相关疾病探讨

目的 建立巢式PCR方法进行血清与骨髓标本中细小病毒B19(PVB19)的检测，并比较两者间的差异，进一步探讨某些疾病与PVB19感染的可能关系。方法 对住院治疗的108例血液病患儿、133例正常儿童以及23例成人血液病患者的血清标本应用巢式PCR进行PVB19 DNA检测。108例患儿中有37例同时收集血清与骨髓涂片进行PCR扩增，另外有37例同时应用ELISA方法进行PVBl9特异性IgM检测。结果 ELISA实验中的37例有2例(2／37，5．4％)PVB19特异性IgM阳性。而巢式PCR检测阳性为11例(11／37，29．7％)。血液病患儿PVB19 DNA总阳性率为27．8％，其中ITP患儿中阳性率为26．9％，白血病患儿中阳性率83．3％；成人医院收集的血液标本中阳性率为26．1％；正常儿童中未检测到PVB19 DNA。同时收集了血清与骨髓涂片的37例标本中血清PVB19 DNA阳性率27．0％(10／37)，骨髓涂片总检出率为37．8％(14／37)。结论 巢式PCR方法与ELISA实验比较具有灵敏度高、特异性强的特点，而血清标本的敏感性要低于骨髓标本，在ITP、白血病等患者中PVB19有较高的检出率。     

ELISA法与巢式PCR法诊断人细小病毒B19感染的对比研究

目的探讨酶联免疫吸附(ELISA)法与巢式PCR法诊断人细小病毒B19(简称B19)感染临床价值的差异。方法对55例常见疾病患儿血清同时进行ELISA法检测B19病毒衣壳蛋白抗体IgM及巢式PCR法检测B19-DNA。结果①ELISA法与巢式PCR法检测总阳性率分别为18.18%和30.91%,前者略小于后者,但无显著性差异(P>0.05)。②ELISA法与巢式PCR法相比,总符合率为87.27%。结论①ELISA法是一种较好的诊断B19病毒感染的方法,值得在临床上广泛应用。②两种方法各有优缺点,诊断B19病毒感染时最好同时检测B19-IgM及B19-DNA。     

81例不同疾病患儿人细小病毒B19特异性抗体检测

目的　调查细小病毒B19(humanparvovirusB19,HPVB19)在新疆地区不同疾病患儿中的感染情 况。方法　用ELISA法对2001年8月至2002年12月该院儿科81例住院患儿和来自儿保体检门诊16例健康儿 童(对照组)的血清标本进行了B19 IgM和B19 IgG检测。结果　B19 IgM阳性检出率在特发性血小板减少性紫癜 和再生障碍性贫血最高,分别为44.4%(4/9)和41.2%(7/17)。与对照组相比较差异有显著性(P<0.05),其它 疾病组与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。而B19 IgG的检测结果,疾病组与对照组相比差异无显著性 (P>0.05)。结论　新疆地区特发性血小板减少性紫癜和再生障碍性贫血患儿中有较高的HBVB19感染率。特 发性血小板减少性紫癜和再生障碍性贫血与B19感染关系较为密切。     

Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在先天性巨结肠症和肛门直肠畸形中的表达及意义

目的 研究Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在先天性巨结肠症(Hirschsprung disease,HD)和肛门直肠畸形中(anorectal malformations,ARMs)的表达情况,以期探讨其在HD和ARMs发生发展中的作用.方法 利用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白质印迹(western blot)技术检测HD狭窄肠段和正常肠段肠管组织及ARMs直肠末端(高位、中位和低位组)和死于非胃肠道疾病(正常对照组)患儿各30例中Wnt2、Wnt5b和Wnt9a表达,对其表达进行定位和定量,并比较分析.结果 Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在HD狭窄段肠管中mRNA转录水平的表达分别为(10.19±0.27、10.38±0.19和11.43±0.51),均低于正常段肠管的相应表达水平(18.06±1.07、17.98±1.12、19.99±0.76)(P＜0.05);Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在ARMs高位组中mRNA转录水平的表达分别为(14.27±0.31、13.69±0.45、13.07±0.67),均低于正常对照组(24.98±2.03、26.43±1.77、28.11±1.44)(P＜0.05),中位组和低位组之间mRNA转录水平比较无统计学意义.western b1ot结果显示,Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在HD狭窄段肠管中蛋白表达水平分别为0.19±0.09、0.26±0.07、0.23±0.06,明显低于正常段肠管0.43±0.13、0.57±0.08、0.62±0.06,P＜0.05;Wnt2,Wnt5b和Wnt9a在ARMs高位组中蛋白表达水平分别为0.15±0.11、0.17±0.04、0.13±0.05明显低于正常对照组0.51±0.03、0.63±0.05、0.59±0.05,P＜0.05,而中位组和低位组之间蛋白表达水平无明显差异且与正常对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论 Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在HD狭窄段和ARMs的高位组表达水平减低,可能在先天性消化道畸形的肠道发育中具有重要作用.

Abstract：

Objective To investigate the expressions of Wnt2,WntSb and Wnt9a in tissue samples from the patients with Hirschsprung disease (HD) and anorectal malformations (ARMs).Methods Ninety individuals were recruited in this study,including 30 with HD,30 with ARMs,and 30 controls died of non-gastrointestinal diseases.According to the position of malformations,the 30 ARMs patients were subgrouped into high,intermediate and low ARMs groups.The terminal rectum from the ARMs group and the stenotic and normal appearance intestines from HD patients were collected during operation.The expression levels of Wnt2,Wnt5b and Wnt9a were studied using quantitative Real-time PCR (qRT-PCR) and western blotting.Results In the HD patients,the mRNA of Wnt2,Wnt5b and Wnt9a in stenotic intestine were significantly lower than those in the normal intestine ( the relative quantification of mRNA 10.19 ± 0.27,10.38 ± 0.19,11.43 ± 0.51 vs 18.06 ± 1.07,17.98 ± 1.12,19.99 ± 0.76,P＜0.05).In the ARMs patients,the mRNA of Wnt2,Wnt5b and Wnt9a in high ARMs patients were significantly lower than those in control patients (the relative quantification of mRNA 14.27 ± 0.31,13.69 ± 0.45,13.07 ± 0.67 vs 24.98 ± 2.03,26.43 ± 1.77,28.11 ± 1.44,P＜0.05).No significant difference of the mRNA expression was found between the low ARMs patients and intermediate ARMs patients (P＞0.05).The protein expressions of Wnt2,Wnt5b and Wnt9a in these patients changed in the same manners with what were found in the mRNA studies,in which Wnt2,Wnt5b and Wnt9a were decreased in the stenotic intestine of HD patients and high ARMs patients.Conclusions The expression of Wnt2,Wnt5b and Wnt9a changes in the tissue samples from the patients with HD and ARMs,which may play a role in the pathogenesis of congenital malformation of the alimentary tract.     

Successful use of the new immune-suppressor sirolimus in IPEX (immune dysregulation, polyendocrinopathy, enteropathy, X-linked syndrome)

IPEX (immune-dysregulation, polyendocrinopathy, enteropathy, X-linked) syndrome is an autoimmune disorder with an often lethal outcome in spite of immunosuppressive therapy. We report the successful use of sirolimus in 3 patients with IPEX. The efficacy of sirolimus is probably due to its different mode of action compared to calcineurin-dependent agents.     

人博卡病毒载量与儿童急性下呼吸道感染临床特征相关性研究

目的了解人类博卡病毒(HBoV)在儿童急性下呼吸道感染中的检出情况,并探讨HBoV载量与儿童急性下呼吸道感染临床特征的相关性。方法收集2011年3月至2014年3月因急性下呼吸道感染住院患儿的鼻咽抽吸物(NPAs)1 554份,采用实时荧光定量PCR检测12种RNA病毒和ADV、HBoV 2种DNA病毒,并同时检测HBoV阳性患儿的病毒载量。结果 1 554份标本中1 212份(77.99%)检出病毒,275份(17.70%)HBoV检出阳性。HBoV阳性病例中3岁者占94.9%,男性多于女性。275例HBoV阳性病例中,单一感染45例(16.36%),混合感染230例(83.64%),两者病毒载量的差异无统计学意义(P0.05)。有发热症状的HBoV阳性患儿病毒载量高于无发热者,有喘息症状的病毒载量高于无喘息者,差异均有统计学意义(P0.05)。轻、中、重度组急性下呼吸道感染患儿之间的病毒载量差异无统计学意义(P0.05)。结论 HBoV是儿童急性下呼吸道感染重要病原之一。病毒载量高的患儿,临床更易出现发热、喘息等症状,但疾病严重程度及混合感染与病毒载量之间无显著相关性。     

北京地区青霉素不敏感肺炎链球菌分子流行病学的初步探讨

目的了解北京地区儿童中青霉素不敏感肺炎链球菌（PNSP）的流行状况,阐明其分子流行病学特征。方法以2000-2002年于0～5岁上呼吸道感染儿童鼻咽部分离的63株PNSP冻存标本为研究对象,进行耐药模式分析,以聚合酶链反应（PCR）扩增青霉素结合蛋白（PBP）基因pbpla、pbp2b和pbp2x,分析其限制性片段长度多态性（RFLP）,并进行细菌染色体RFLP脉冲场凝胶电泳（PFGE）比较。结果63株PNSP有61株（96．8％）为多重耐药菌株。pbpla、pbp2b和pbp2x分别有8、9和18种基因型,三者组合的谱型共有30种。63株PNSP的PFGE型共分为35个,其中,9种PFGE型包括菌株≥2株,这9种型共包含37株,占59％,均为多重耐药菌株。与亚洲流行菌株比较,我们发现2株PFGE型可能相关的PNSP分别与亚洲流行菌株越南-19群、新加坡-19群、中国台湾-19群和韩国-19群谱型完全相同。结论北京地区儿童中PNSP的多重耐药状况严峻,克隆传播是PNSP流行的重要因素;已存在与亚洲流行菌株相同的克隆,值得关注。     

婴儿血中四种疱疹类病毒DNA及特异性IgM抗体检测

目的 建立1种能快速区分4种疱疹类病毒DNA的特异性酶切图谱。方法 在疱疹类病毒高度同源序列DNA多聚酶基因中设计1对通用引物,该引物能同时扩增单纯疱疹病毒Ⅰ型与Ⅱ型(HSVⅠ／Ⅱ)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)4种病毒。选择BamHI和BstUI2种内切酶对同一PCR产物进行酶切,建立了能区分4种疱疹类病毒的PCR限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)法。采用PCR-RFLP和ELISA法,对75例怀疑病毒感染的患儿和38名健康儿童的血标本进行上述4种病毒DNA及IgM抗体检测。结果 4种标准病毒株PCR扩增后产物为510～592bp,经酶切后能区分病毒种类,其最小检出量为0．1fg,与乙型肝炎病毒、新型隐球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌和人类基因组：DNA无交叉反应。用该方法检测临床75份血标本,阳性23份,其中CMV、EBV和HSVⅡ感染分别为13、4和5例,HSVⅠ为1例,同时用ELISA法检测该标本,10例阳性,分别为CMV5例、EBV3例和HSVⅡ2例。在38例健康体检儿童的血标本中上述4种病毒DNA及IgM抗体均为阴性。结论 本研究建立的4种疱疹类病毒特异性酶切图谱具有特异敏感,快速准确的特点,能检测到ELISA法不能检测到的疱疹病毒感染。     

2001-2005年北京地区婴幼儿甲型流感病毒感染的研究

目的 通过连续的监测,了解北京地区婴幼儿甲型流感的流行规律。方法 2001年10月—2005年8月,采集门诊和住院急性呼吸道感染患儿的标本7338份,分别经传代狗肾细胞进行病毒分离和（或）间接免疫荧光、血凝抑制试验进行流感病毒型别鉴定,采用RT-PCR方法,扩增甲3型流感病毒流行株的血凝素基因HA1区,进行序列分析。结果 （1）从7338份临床标本中,检出甲型流感病毒347份,总阳性率为4．7％。347份甲型流感病毒中,甲1型48份（13．8％）;甲3型273份（78．7％）;暂时无法鉴定亚型的26份（7．5％）。（2）2001-2004年的流行比较局限在当年10月至次年4月,2004年8月—2005年8月均有甲型流感病毒被检测到,在夏季仍可检测到相当多的甲型病毒,尤其是2005年8月甲3型的阳性率达到14．2％,相当于2003-2004年的流行最高峰。4年中每个流行季节都以甲3型流感病毒的流行为主,只在2001-2002年和2004-2005年的流行季节出现了甲1型流感病毒的流行峰。（3）甲1和甲3型流感病毒在门诊患儿中的阳性检出率均高于住院患儿的阳性检出率。在2003年11月—2005年8月期间的236例甲3型感染患儿中,≤2岁者占46．6％,〉5岁者占14．0％;而31例甲1型感染患儿中≤2岁者只占6．5％,〉5岁者占48．0％。（4）对1998-2005年的甲3型流感病毒血凝素基因HA1区的序列分析显示,每一年的甲3型病毒都会出现位于其抗原决定簇关键位点的氨基酸突变。结论2001年10月—2005年8月,北京地区婴幼儿中有甲1和甲3型流感不同程度的流行,甲3型为优势流行株;2004-2005年北京地区甲型流感呈全年的流行态势;氨基酸序列分析提示,1998-2005年期间甲3型流感病毒的抗原性在持续不断地发生漂移。