突触融合蛋白1A和突触小体相关蛋白-25在逆转α细胞高糖毒性中的作用

目的 探讨逆转高糖毒性对α细胞胰高糖素分泌和合成的影响以及可能的机制.方法 在小鼠转基因胰高糖素瘤细胞株(TCl-6)细胞(α细胞株)分别给予5.5 mmol/L(低糖组)和25 mmol/L(高糖组)葡萄糖的培养基培养10 d,25 mmol/L葡萄糖培养5 d/5.5mmol/L葡萄糖培养5d(高糖/低糖组)以及5.5 mmol/L葡萄糖培养5 d/25 mmol/L葡萄糖培养5 d(低糖/高糖组),检测各组细胞胰高糖素分泌及其mRNA的表达别;Western印迹检测持续高糖以及恢复血糖正常后TCl-6细胞突触融合蛋白1A蛋白和突触小体相关蛋白-25(SNAP-25)的表达水平.结果 (1)高糖/低糖组TCl-6细胞胰高糖素比高糖组分泌下降29%[(2.68 ±0.21)ng/mg比(3.74.2.99)ng/mg,P相似文献   

脂联素对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖及粘附分子1表达的影响

目的 探讨脂联素(ADPN)对高糖环境下肾小球系膜细胞(MCs)增殖及细胞间粘附分子1(ICAM-1)表达的影响. 方法 将MCs分为三组:①正常组(5.5 mmol/L葡萄糖),②高糖组(25mmol/L葡萄糖),③ADPN组(25 mmol/L葡萄糖,2.5ug/mlADPN)运用MTT测定(24h,48h,96h)后MCs的增殖情况;再将MCs分为三组:①正常组(5.5mmol/L葡萄糖),②高糖组(25mmol/L葡萄糖),③ADPN组(25mmol/L葡萄糖2.5,5,7.5,10,15,20ug/ mlADPN),作用48小时后运用ELISA法测定各组MCs上清液中ICAM-1的含量. 结果 高糖组抑制细胞增殖,加入ADPN后促进细胞增殖.ICAM-1 在高糖组表达较高,加入低浓度ADPN对于ICAM-1表达影响不大,10～20mg/LADPN组和高糖组相比,ICAM-1的表达下降,差异有统计学差异(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论 低浓度ADPN可以促进MCs增殖;中等以上浓度ADPN可以抑制ICAM-1在MCs的表达.提示ADPN可能通过阻抑ICAM-1表达发挥对DN的保护作用.     

毛蕊花糖苷通过抑制AKT/mTOR通路减轻高糖诱导的HK2细胞凋亡

目的 探讨毛蕊花糖苷(acteosides, Act)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK2)凋亡的影响及其作用机制。方法 采用CCK-8法检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和不同葡萄糖浓度组(33,40,50,60 mmol/L)HK2细胞活性，筛选最佳高糖干预浓度；检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、甘露醇(mannitol, Man)组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、不同浓度Act组(50 mmol/L葡萄糖+25,50,75,100,150,200μmol/L Act)和卡托普利(captopril, Cap)组(50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Cap)HK2细胞活性，筛选最佳Act干预浓度。HK2细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、Act组(50mmol/L 50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Act)、卡托普利组(50 mmol/L...     

高糖对人肾小管上皮细胞肌醇加氧酶表达的影响

目的:研究高糖环境下人近端肾小管上皮细胞肌醇加氧酶(MIOX)的表达.方法:将人近端肾小管上皮细胞株HK-2分组培养,正常对照组培养基含5.5 mmol/L D-葡萄糖,渗透浓度对照组培养基含19.5 mmoL/L甘露醇和5.5 mmoL/L D-葡萄糖,高糖组培养基含25 mmol/L D-葡萄糖.分别于培养12、24、48、72 h后取出爬片,应用免疫荧光细胞化学法检测MIOX蛋白的表达.结果:正常对照组和渗透浓度对照组HK-2细胞胞质MIOX蛋白微弱表达,各时间点表达量差异无统计学意义(P>0.05).高糖组培养12 h时,HK-2细胞MIOX蛋白表达即增高,随培养时间的延长,MIOX蛋白表达量逐渐升高,于48 h达高峰.高糖组MIOX蛋白表达水平较正常对照组升高(P<0.01).结论:高糖能促进人近端肾小管上皮细胞MIOX的表达,从而介导糖尿病患者体内肌醇耗竭.     

红景天苷对高糖条件下血管内皮细胞凋亡和氧化应激的调节作用

目的:研究红景天苷对高糖条件下血管内皮细胞凋亡和氧化应激的调节作用.方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后分组处理,对照组用低糖培养基(5.5mmol/L葡萄糖)处理,高糖组用高糖培养基(33mmol/L葡萄糖)处理,红景天苷组用含有10μg/ml红景天苷的高糖培养基处理.处理24h后,检测细胞凋亡率、凋亡及氧化...     

高糖下肾小球系膜细胞分泌CTGF及LN的变化

目的 观察高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMC)分泌结缔组织生长因子(CTGF),层黏连蛋白(LN)的变化,探讨其在糖尿病肾病中的发病机制.方法 将HMC分为低糖组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)和甘露醇对照组(25 mmol/L甘露醇和5 mmol/L葡萄糖),刺激24,48,72 h后采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC-ELISA)测定培养上清液中CTGF及LN的含量.结果 与低糖组和甘露醇组比较,高糖培养的HMC上清液中CTGF及LN的浓度明显增高(P<0.05).结论 高糖环境下HMC分泌CTGF及LN增加,导致细胞外基质聚集,为糖尿病肾病发病机制提供参考.     

高糖状态下人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤情况以及上皮-间质转化情况评估

目的:研究高糖环境对人视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激损伤情况以及上皮-间质转化的影响。方法:培养人RPE细胞,并分为低糖对照组、高渗对照组、高糖干预组,分别用葡萄糖浓度为5.5mmol/L的DMEM培养基、渗透浓度为60.0mmol/L且葡萄糖浓度为5.5 mmol/L的DMEM培养基、葡萄糖浓度为60.0mmol/L的DMEM培养基处理,24 h后测定细胞中氧化应激分子、细胞凋亡分子以及间质细胞标志分子的含量。结果:高糖干预组细胞中ROS、MDA、3-NT、Nrf2、ARE、Caspase-3、Bax、JNK、c-JUN、α-SMA、Vimentin、N-cadherin的含量均显著高于低糖对照组和高渗对照组,GST、HO-1的含量均显著低于低糖对照组和高渗对照组;低糖对照组和高渗对照组细胞中ROS、MDA、3-NT、Nrf2、ARE、Caspase-3、Bax、JNK、c-JUN、α-SMA、Vimentin、N-cadherin、GST、HO-1的含量无显著性差异。结论:高糖环境能够通过增强RPE细胞的氧化应激反应来启动细胞的凋亡过程以及上皮间质转化过程。     

小檗碱对脂肪细胞糖代谢的影响

目的探讨小檗碱对脂肪细胞糖代谢的影响.方法检测药物处理24h或48h后3T3-L1脂肪细胞对培养液中的葡萄糖消耗量,以2-脱氧-3H-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率. 结果在低糖(5.5mmol/L)和高糖(25mmol/L)培养液中,小檗碱皆有显著的降糖作用,0.1～200μmol/L小檗碱能使葡萄糖的消耗量增加26%～201%,其作用呈剂量效应,10μmol/L小檗碱能明显增强1、100nmol/L胰岛素的降糖作用(P＜0.01).0.1、1、10μmol/L小檗碱使3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖转运率明显增加,50、100μmol/L小檗碱使其葡萄糖转运率明显降低.结论小檗碱能显著增加脂肪细胞的葡萄糖转运和消耗.     

高浓度葡萄糖诱导HepG-2细胞的凋亡及其调控的相关机制

目的 探讨高浓度葡萄糖诱导HepG-2细胞的凋亡及其调控的可能机制.方法 用含不同浓度葡萄糖的DMEM处理HepG-2细胞,分为正常组(糖浓度为5.5 mmol/L)和高浓度葡萄糖组(糖浓度分别为25、40、100、150、200 mmol/L ),采用MTT、Hoechst染色法观察细胞的增殖和凋亡状况; Weste...     

高糖后低糖过程通过ERK1/2信号途径增强H9c2心肌细胞自噬的功能

目的 研究高糖后低糖H9c2心肌细胞自噬活性的影响及ERK1/2在此过程中对自噬的调节作用。方法 用25mmol/L葡萄糖浓度的培养基培养H9c2细胞后用2.5mmol/L葡萄糖浓度培养基处理细胞2h作为低糖组（LG组）,高糖组（HG组）维持25mmol/L的葡萄糖浓度,空白对照组（Con组）维持5.5mmol/L的葡萄糖浓度;低糖组加入ERK抑制剂U0126作为抑制剂组。采用MTT法检测H9c2细胞增殖能力;LDH检测试剂盒检测细胞毒性;Western blot法检测 ERK、p-ERK、LC3、Beclin-1的表达量。结果 与Con组和HG组相比,LG组细胞增殖能力降低,LDH活性增加;与Con组相比,HG组LC3-Ⅱ、Beclin-1表达量升高,p-ERK表达无显著改变;与Con组和HG组相比,LG组p-ERK、LC3-Ⅱ和Beclin-1表达显著增加;而与LG组比较,抑制剂组p-ERK明显降低,同时LC3-Ⅱ、Beclin-1表达以及细胞毒性降低,细胞活力增加。结论 ERK1/2信号途径促进了高糖后低糖过程中H9c2心肌细胞的自噬活性。     

高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞AMPK表达及活性的影响

 目的 观察高糖环境下肾小球系膜细胞AMP活化蛋白激酶（AMPK）表达和活性的变化及这种变化与系膜细胞增殖的关系。  方法 实验分4组：对照组（糖浓度5.6mmol/L）,高糖组（22.0mmol/L）,低浓度5-氨基-4-氨甲酰咪唑核苷（AICAR）组（0.5mmol/L AICAR+高糖）,高浓度AICAR组（1.0mmol/L AICAR+高糖）。观察24h后,应用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR法测定AMPKα1、α2亚单位mRNA水平,Westernblot法测定总AMPKα蛋白及磷酸化AMPKα蛋白水平。  结果 与对照组比较,高糖组细胞增殖趋势明显（P＜0.01）,且S期的细胞百分数增加（P＜0.01）;RT-PCR显示,高糖组AMPKα1、α2亚单位的mRNA水平低于对照组;总AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKα蛋白水平亦较低;特异性AMPK激活剂AICAR可抑制高糖诱导的细胞增殖（P＜0.01）,使S期的细胞百分数下降,并能增强AMPKα1、α2亚单位的mRNA表达水平及总AMPKα蛋白水平和磷酸化AMPKα蛋白水平。 结论  高糖环境下AMPKα1、α2 mRNA表达水平低下,AMPK蛋白的表达及活性降低;高糖诱导的系膜细胞增殖与AMPK表达及活性降低有关。     

硫氢化钠对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞的影响

目的 观察硫氢化钠(NaHS,外源性的H2S供体)对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的作用。方法 以0.125%胰酶和0.01%EDTA灌注法获得HUVECs,分别用5.5mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS及50μmol/L NaHS处理72h,采用MTT法检测各组细胞的存活率,Western blot法检测H2S生成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-Iyase,CSE)的变化。结果 MTT检测表明,25mmol/L葡萄糖组的HUVECs存活率比5.5mmol/L葡萄糖组下降28.37%(P<0.05),而50μmol/L NaHS和25mmol/L葡萄糖共同处理组的细胞存活率比25mmol/L葡萄糖组上升30.3%(P<0.05),50μmol/L NaHS组与5.5mmol/L葡萄糖组无明显差异(P>0.05)。与5.5mmol/L葡萄糖组相比,以25mmol/L葡萄糖处理72h后能使CSE蛋白的表达下降(P<0.05),而25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS 则能改善这种损害作用(P<0.05),CSE蛋白的表达比25mmol/L葡萄糖组增强。结论 高浓度葡萄糖降低人原代脐静脉内皮细胞的生长和存活率,减少CSE蛋白的表达,而NaHS能够减轻高浓度葡萄糖对CSE的作用。     

高浓度葡萄糖刺激脂肪细胞脂肪分解的效应及其机制

目的:研究高浓度葡萄糖刺激脂肪细胞脂肪分解升高血浆游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)水平的效应及其机制,进一步阐明高糖导致胰岛素抵抗的作用机制.方法:以Sprague-Dawley(SD)大鼠附睾原代脂肪细胞为研究对象,设为正常葡萄糖(5mmol/L)对照组和高浓度葡萄糖(25mmol/L)干预组.将细胞孵育一定时间直接或加入异丙基肾上腺素刺激后测定培养基中甘油含量作为评价脂肪分解的指标.脂肪分解数据表示为每升脂肪细胞压积的毫摩尔甘油释放量(mmol/L packed cell volume, mmol/L PCV).用Western blot方法分别检测总的及磷酸化的脂滴包被蛋白(perilipin)含量以及激素敏感性脂肪酶(hormone-sensitive lipase, HSL)和脂肪组织甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase, ATGL)的含量.用酶化学法测定胞浆脂肪分解酶活性.结果:高浓度葡萄糖明显刺激大鼠原代脂肪细胞脂肪分解.将细胞在高糖中孵育24h,甘油累积量从4.4mmol/L PCV增加至6.4mmol/L PCV,即增加1.5倍(P<0.01);30min甘油释放量从0.11mmol/L PCV增加至0.24 mmol/L PCV,即增加2.1倍(P<0.01).高糖刺激脂肪分解的作用从细胞孵育16h开始持续到24h,且25mmol/L葡萄糖的效应较10mmol/L葡萄糖强.高糖明显增加perilipin磷酸化,但不影响该蛋白表达.高糖使胞内脂肪分解酶活性升高1.74倍并显著上调HSL蛋白表达,但不影响ATGL蛋白含量.异丙基肾上腺素刺激的脂肪分解在高糖环境下进一步增强.结论:高浓度葡萄糖通过增加perilipin磷酸化、上调HSL蛋白表达和升高脂肪分解酶活性从而直接刺激脂肪细胞脂肪分解.这提示高浓度葡萄糖单独即可以使FFA从脂肪组织向血浆中释放增加,循环FFA水平升高从而导致胰岛素抵抗.     

淫羊藿通过miR-19a-3p对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨淫羊藿（Epimedium herb,EH）对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及其分子机制。方法以胰岛β细胞RINm5F为研究对象,建立高糖高脂损伤模型,分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖高脂组[25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L棕榈树酸（PA）]、低剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+10 μmol/L EH）和高剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+100 μmol/L EH）,EH处理48 h后,分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平,实时定量PCR（qPCR）检测RINm5F细胞中miR-19a-3p表达。在高糖高脂损伤的RINm5F细胞转染anti-miR-19a-3p或在高剂量EH组细胞转染miR-19a-3p,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果与对照组比较,高糖高脂组第48 h、72 h细胞增殖活性和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平明显下降（P < 0.05）,细胞凋亡率、miR-19a-3p表达量、P21和Bax蛋白表达量提高（P < 0.05）。不同剂量的EH干预可以明显提高高糖高脂环境下的细胞增殖能力和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P < 0.01）,减少细胞凋亡率和P21、Bax蛋白表达量（P < 0.01）,与抑制miR-19a-3p表达作用结果差异无统计学意义（P>0.05）。此外,过表达miR-19a-3p能逆转EH对高糖高脂刺激的RINm5F细胞增殖的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用（P < 0.01）。结论EH通过miR-19a-3p保护高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,提高细胞增殖活性,抑制细胞凋亡。     

Up-regulation of HIF-1α and VEGF Expression by Elevated Glucose Concentration and Hypoxia in Cultured Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Summary： In order to explore the effect of high glucose concentration and high glucose concentration with hypoxia on the production of hypoxia-inducible factor-1α （HIF-1α） and vascular endothelial growth factor （VEGF）, human RPE cells were cultured in 5,56 mmol/L glucose （control group）, 5.56 mmol/L glucose with 150 !a mol/L COCl2 （hypoxic group）, 25 mmol/L glucose （high glucose group） and 25 mmol/L glucose with 150 μmol/L COCl2 （combination group）. RT-PCR was used to detect the expression of HIF-1α and VEGF mRNAs. Western blot analysis was used to measure the levels of HIF-1α and VEGF proteins. Although the small amount of HIF-1α protein was able to be detected in high glucose group but not in control group, there was no significant difference between the expression of HIF-1α mRNA of RPE cells in high glucose group and that of RPE cells in control group. As compared with RPE cells in control group, the mRNA expression and the protein synthesis of VEGF in high glucose group were up-regulated. As compared with RPE cells in hypoxic group, the expression of HIF-1α mRNA of RPE cells in combination group was not different, but the protein synthesis of HIF-1α, the mRNA expression and the protein synthesis of VEGF were more obviously up-regulated. In conclusion, high concentration glucose mainly influence the protein synthesis of HIF-1α of RPE cell, and HIF-1α protein is able to be accumulated in high concentration glucose. Under hypoxia, the HIF-1α protein induced by high concentration glucose is more stable, and the expression of VEGF is obviously increased. It is suggested that high concentration glucose may play a role in retinal neovascularization, especially at ischemia stage of diabetic retinopathy.     

高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞增殖及β-catenin表达的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 用含10% FBS的DMEM培养液体外培养膀胱癌T24细胞,将细胞分为5组:空白组(5.5 mmol/L葡萄糖)、对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖组(10、20、30 mmol/L葡萄糖).采用MTT法及克隆形成实验检测高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞增殖的影响;通过实时定量PCR检测膀胱癌T24细胞β-catenin mRNA的表达水平;通过Western blot法检测高浓度葡萄糖对膀胱癌T24细胞β-catenin蛋白表达的影响.结果 MTT法及克隆形成实验结果显示,高浓度葡萄糖显著促进膀胱癌T24细胞的增殖(P<0.01);Western blot检测结果显示,高浓度葡萄糖促进T24细胞β-catenin蛋白的表达.实时定量PCR检测结果显示,高浓度葡萄糖促进T24细胞β-catenin mRNA的表达.结论 高浓度葡萄糖明显促进膀胱癌T24细胞的增殖,并促进T24细胞β-catenin蛋白和其mRNA的表达,该作用机制可能与β-catenin表达上调有关.     

维生素E对不同糖浓度培养LO2细胞铁代谢相关蛋白表达的影响

目的探讨维生素E对不同浓度葡萄糖培养下LO2肝细胞株铁调节蛋白1(IRP1)、转铁蛋白受体1(TfR1)、转铁蛋白受体2(TfR2)、铁调素(hepcidin)表达的影响。方法 LO2细胞培养基分为5.5,15,25 mmol/L三种葡萄糖浓度。分别在这三种葡萄糖浓度培养中,再分别加入0,0.1,1 mg/L和10 mg/L维生素E。其中0 mg/L维生素E剂量组作为相同葡萄糖浓度组中的对照组。各组培养时间均为24 h。用荧光染色法检测各组细胞活性氧(ROS)水平,用蛋白免疫印迹法检测IRP1、TfR1、TfR2、hepcidin的表达量。结果①相同葡萄糖浓度组与0 mg/L维生素E对照组相比,5.5 mmol/L组添加各剂量维生素E后细胞ROS水平、IRP1、TfR1和TfR2表达没有显著差异(P>0.05);15 mmol/L组和25 mmol/L组中1 mg/L和10 mg/L维生素E组分别与其对照组相比,细胞ROS水平、IRP1、TfR1和TfR2表达分别下降(P<0.01);15 mmol/L和25 mmol/L组中0.1 mg/L维生素E组与相应对照组相比细胞ROS水平、IRP1、TfR1和TfR2表达没有显著差异(P>0.05)。②相同剂量维生素E组内:LO2细胞ROS水平、IRP1、TfR1、TfR2表达量分别随葡萄糖浓度的升高而逐渐升高(P<0.01)。③在各葡萄糖浓度组内,各剂量维生素E组间细胞的hepcidin表达没有显著性差异(P>0.05)。在各剂量维生素E组中,15 mmol/L和25mmol/L葡萄糖组与相应5.5 mmol/L葡萄糖组相比,hepcidin表达显著升高(P<0.01),而15 mmol/L和25 mmol/L组间hep-cidin表达没有显著差异(P>0.05)。结论维生素E能够降低高糖培养下细胞活性氧的含量,缓解IRP1、TfR1、TfR2蛋白表达增加的幅度。hepcidin表达变化并没有受维生素E的影响,提示hepcidin在高糖环境下的表达增加可能不是或不仅仅是受过量ROS的影响。